ĐỖ văn KHÁI NGHIÊN cứu đặc điểm VI học, THÀNH PHẦN HOÁ học và tác DỤNG GIẢI LO âu của cây TRINH nữ móc (MIMOSA DIPLOTRICHA VAR DIPLOTRICHA SAUVALLE) LUẬN văn THẠC sĩ dược học hà nội 2016

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - ĐỖ VĂN KHÁI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI HỌC, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU CỦA CÂY TRINH NỮ MÓC (MIMOSA DIPLOTRICHA VAR DIPLOTRICHA SAUVALLE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - ĐỖ VĂN KHÁI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI HỌC, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU CỦA CÂY TRINH NỮ MÓC (MIMOSA DIPLOTRICHA VAR DIPLOTRICHA SAUVALLE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN QUỲNH CHI HÀ NỘI – 2016 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quỳnh Chi, ThS Phạm Tuấn Anh người cô, người thầy nhiệt tình giúp đỡ, hết lịng bảo trực tiếp hướng dẫn suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, anh chị em kỹ thuật viên môn Dược liệu quan tâm tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn thầy cô môn Dược lý, thầy cô Viện dược liệu tạo điều kiện cho tơi q trình làm đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến tồn thể thầy giáo cán trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giảng dạy, giúp đỡ, mang lại cho kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, xin bày tỏ yêu thương biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên tôi, ủng hộ chỗ dựa tinh thần tơi gặp khó khăn học tập sống Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2016 Học viên Đỗ Văn Khái MỤC LỤC  Trang ĐẶT VẤN ĐỀ 1  CHƯƠNG TỔNG QUAN 3  1.1.2 Đặc điểm thực vật loài Mimosa diplotricha C Wright ex Sauvalle 3  1.1.2.1 Đặc điểm thực vật chi Mimosa L 3  1.1.2.2 Đặc điểm thực vật loài Mimosa diplotricha C Wright ex Sauvalle (Mimosa invisa Mart ex Colla) [4][53][55] 4  1.1.2.3 Đặc điểm thực vật thứ Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle 5  1.1.3 Bộ phận dùng, thu hái chế biến 5  1.1.4 Thành phần hóa học 5  1.1.5 Một số nghiên cứu tác dụng dược lý loài Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle 9  1.1.6 Sử dụng loài Mimosa diplotricha C Wright ex Sauvalle y học cổ truyền 10 1.2 Tổng quan lo âu rối loạn lo âu 10  1.2.1 Định nghĩa, phân loại 10  1.2.2 Thuốc hóa dược sử dụng điều trị rối loạn lo âu 11  1.2.3 Sử dụng dược liệu điều trị rối loạn lo âu 11  CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15  2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 15  2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 15  2.1.2 Hóa chất 15  2.1.3 Thiết bị 16  2.1.4 Động vật thí nghiệm 16  2.2 Nội dung nghiên cứu 17  2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm vi học phần mặt đất Trinh nữ móc 17  2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất Trinh nữ móc 17  2.2.3 Đánh giá độc tính cấp tác dụng giải lo âu dịch chiết nước tồn phần Trinh nữ móc 17  2.3 Phương pháp nghiên cứu 17  2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm vi học phần mặt đất Trinh nữ móc 18  2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất Trinh nữ móc 18  2.3.3 Đánh giá độc tính cấp tác dụng giải lo âu dịch chiết nước toàn phần phần mặt đất Trinh nữ móc 22  CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29  3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất Trinh nữ móc 31  3.2.1 Định tính số nhóm chất hữu dược liệu 31  3.2.4 Phân lập số thành phần từ phân đoạn ethyl acetat 35  3.3 Đánh giá độc tính cấp tác dụng giải lo âu dịch chiết nước tồn phần Trinh nữ móc 40  3.3.1 Đánh giá độc tính cấp Trinh nữ móc 40  3.3.2 Đánh giá tác dụng giải lo âu dịch chiết nước tồn phần Trinh nữ móc 42  3.4 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết nước tồn phần Trinh nữ móc đến hoạt động tự nhiên hành vi khám phá chuột thử nghiệm OFT 43  CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 46  TÀI LIỆU THAM KHẢO 51  DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APA Hiệp hội tâm thần Hoa Kì ( The American Psychiatric Association) BZD BuOH DCM DSM-5TM Benzodiazepin Buthanol Dicloromethan Diagnostic and Statist manual of Mental disoreders ( Fifth edition) DZP EPM Diazepam Mơ hình chữ thập nâng cao (Elevated plus maze) EtOAc Ethyl acetat GABA Gamma amino butyric acid GAD Rối loạn lo âu lan tỏa (Generalized anxiety disorder) Gdl Gam dược liệu (Tính theo dược liệu khơ tuyệt đối) ICD-10 International Classification of Diseases, Tenth Revision LD50 MeOH MS Lethal Dose (Liều 50% động vật thực nghiệm chết) Methanol Mass spectrometry (Khối phổ) NMR Nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) OFT Mơ hình mơi trường mở (Open frield test) PD SIT Rối loạn hoảng sợ (Panic disorder) Mơ hình tương tác xã hội (Social interaction test) SLTT SSRI Số lần trung tâm Ức chế tái thu hồi chọn lọc serotonin (Serotonin selective reuptake inhibitors) TGTT TLC (SKLM) TT WHO YHCT Thời gian trung tâm Sắc ký lớp mỏng Thuốc thử Tổ chức y tế giới (The World Health Organization) Y học cổ truyền DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 3.3 Tên bảng Trang Các loài thuộc chi Mimosa L phân bố Việt Nam Các phản ứng hóa học áp dụng định tính lồi Mimosa 18 diplotricha var diplotricha Sauvalle 31 Kết định tính sơ nhóm hợp chất lồi Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle Kết định tính flavonoid alcaloid phân đoạn 33 loài Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle Dữ liệu phổ NMR hợp chất MD02 37 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất MD03 39 3.5 Bố trí thí nghiệm cho thử độc tính cấp mẫu thử cao Trinh nữ móc Kết khảo sát tác dụng giải lo âu dịch chiết nước toàn phần dược liệu Trinh nữ móc theo mơ EPM 41 Kết khảo sát tác dụng giải lo âu dịch chiết nước toàn phần Trinh nữ móc theo mơ hình OFT 44 2.1 3.1 3.2 3.6 3.7 42 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cơng thức số flavonnoid phân lập từ loài Mimosa diplotricha C Wright ex Sauvalle Loài Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle thu hái Hải Dương Sơ đồ chiết xuất phân đoạn phần mặt đất Trinh nữ móc Mơ hình chữ thập nâng cao Mơ hình mơi trường mở Vi phẫu thân Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle Một số đặc điểm bột phần mặt đất lồi Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle Sắc kí đồ cắn ethyl acetat với hệ dung môi (II) Công thức cấu tạo rutin Công thức cấu tạo quercetin 2.1 2.2 2.3 2.4 3.1 3.2 3.4 3.5 3.6 15 21 25 26 29 30 34 38 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn lo bệnh lý nghiêm trọng, ảnh hưởng tới tâm sinh lý hành vi người bệnh Bệnh có tỷ lệ mắc cao xu hướng ngày gia tăng [20] Hiện nay, phương pháp điều trị rối loạn lo âu chủ yếu phối hợp liệu pháp tâm lý với thuốc giải lo âu (anxiolytics) Hạn chế lớn thuốc có nguồn gốc hóa dược tác dụng phụ, khả lệ thuộc thuốc phản ứng cai thuốc xảy dừng điều trị Vì vậy, sử dụng thuốc sản phẩm có nguồn gốc dược liệu coi hướng tiếp cận bổ sung thay cho thuốc có nguồn gốc hóa dược điều trị rối loạn lo âu [42] Cây Trinh nữ móc có tên khoa học Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle (Họ Đậu Fabaceae) loài mọc hoang với sức sống mạnh mẽ, phát tán rộng rãi nhiều tỉnh nước ta Ở số nước lồi coi lồi xâm thưc có hại cần phải diệt bỏ Cây thường mọc lẫn với loài Trinh nữ (Xấu hổ) Mimosa pudica L loài sử dụng y học cổ truyền nhiều nước để điều trị trường hợp ngủ, suy nhược thần kinh Mặc dù Việt nam, Trinh nữ móc khơng dùng làm thuốc y học cổ truyền số nước, sử dụng với tác dụng trấn an tinh thần Kết nghiên cứu bước đầu cho thấy lồi Mimosa pudica Mimosa diplotricha có tác dụng an thần, giải lo âu Tuy nhiên giới có số nghiên cứu thành phần hóa học Trinh nữ móc, chưa có nghiên cứu nào, đặc biệt Việt nam thành phần hóa học tác dụng làm thuốc loại Do để nghiên cứu sâu theo định hướng tác dụng giải lo âu, nhằm mục đích đưa dược liệu vào sử dụng, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm vi học, thành phần hóa học tác dụng giải lo âu Trinh nữ móc (Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle)” thực với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm vi học phần mặt đất loài Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất diplotricha var diplotricha Sauvalle loài Mimosa Đánh giá độc tính cấp, tác dụng giải lo âu dịch chiết toàn phần phần mặt đất loài Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle MD02-MeOD-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 6.0 170 ppm MD02-MeOD-HMBC ppm 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 5.4 5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 ppm MD02-MeOD-HMBC ppm 65 70 75 80 85 90 95 100 105 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 ppm MD02-MeOD-HMBC ppm 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm 3.013 2.087 2.071 2.059 2.055 2.050 2.046 2.041 7.826 7.822 7.705 7.701 7.688 7.684 7.002 6.985 6.519 6.515 6.264 6.260 12.152 MD03−AcetoneD6−1H Current Data Parameters NAME MD03 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20160921 Time 15.47 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT Acetone NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 128 DW 50.000 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 9.60 usec PL1 0.00 dB SFO1 500.1335009 MHz 10 1.076 1.059 11 1.087 12 1.000 13 1.100 1.050 F2 − Processing parameters SI 32768 SF 500.1300098 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ppm Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: MD02.d Cot 25cm.m Method: Sample Name: MD02 Analysis Info: MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Operator: Page of Print Date: 9/30/2016 3:20:54 PM Acq Date: 9/30/2016 3:17:28 PM Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: MD02.d Cot 25cm.m Method: Sample Name: MD02 Analysis Info: MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Operator: Page of Print Date: 9/30/2016 3:20:22 PM Acq Date: 9/30/2016 3:17:28 PM PHӨ LӨC 5: Dӳ liӋu phә MD03 64 6.264 6.260 6.519 6.515 7.002 6.985 7.705 7.701 7.688 7.684 7.826 7.822 MD03−AcetoneD6−1H Current Data Parameters NAME MD03 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20160921 Time 15.47 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT Acetone NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 128 DW 50.000 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 9.60 usec PL1 0.00 dB SFO1 500.1335009 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 500.1300098 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 1.059 1.076 1.087 1.050 1.100 7.9 7.8 7.7 7.6 7.5 7.4 7.3 7.2 7.1 7.0 6.9 6.8 6.7 6.6 6.5 6.4 6.3 ppm 30.354 30.260 30.200 30.106 30.047 29.953 29.799 29.643 29.490 29.336 104.112 99.136 94.429 123.751 121.436 116.187 115.739 136.729 148.318 146.926 145.801 164.963 162.292 157.745 176.540 206.241 MD03−AcetoneD6−C13CPD Current Data Parameters NAME MD03 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20160921 Time 21.33 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 256 DS SWH 31446.541 Hz FIDRES 0.479836 Hz AQ 1.0420883 sec RG 32768 DW 15.900 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 2.00000000 sec d11 0.03000000 sec DELTA 1.89999998 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 5.80 usec PL1 −1.00 dB SFO1 125.7716224 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 usec PL2 0.00 dB PL12 18.42 dB PL13 22.00 dB SFO2 500.1320005 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 125.7576811 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.00 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 94.429 99.136 104.112 116.187 115.739 121.436 123.751 136.729 148.318 146.926 145.801 157.745 162.292 164.963 176.540 MD03−AcetoneD6−C13CPD Current Data Parameters NAME MD03 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20160921 Time 21.33 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 256 DS SWH 31446.541 Hz FIDRES 0.479836 Hz AQ 1.0420883 sec RG 32768 DW 15.900 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 2.00000000 sec d11 0.03000000 sec DELTA 1.89999998 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 5.80 usec PL1 −1.00 dB SFO1 125.7716224 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 usec PL2 0.00 dB PL12 18.42 dB PL13 22.00 dB SFO2 500.1320005 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 125.7576811 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.00 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 ppm MD03−AcetoneD6−C13CPD &DEPT DEPT90 190 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 DEPT135 CH&CH3 CH2 190 C13CPD 190 MD03−AcetoneD6−C13CPD &DEPT DEPT90 175 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 ppm 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 ppm 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 ppm 170 DEPT135 CH&CH3 CH2 175 C13CPD 175 Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: MD03.d Cot 25cm.m Method: Sample Name: MD03 Analysis Info: MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Operator: Page of Print Date: 9/30/2016 3:14:14 PM Acq Date: 9/30/2016 3:11:29 PM Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: MD03.d Cot 25cm.m Method: Sample Name: MD03 Analysis Info: MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Operator: Page of Print Date: 9/30/2016 3:13:55 PM Acq Date: 9/30/2016 3:11:29 PM ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - ĐỖ VĂN KHÁI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI HỌC, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU CỦA CÂY TRINH NỮ MÓC (MIMOSA DIPLOTRICHA VAR DIPLOTRICHA. .. đưa dược liệu vào sử dụng, đề tài ? ?Nghiên cứu đặc điểm vi học, thành phần hóa học tác dụng giải lo âu Trinh nữ móc (Mimosa diplotricha var diplotricha Sauvalle)? ?? thực với mục tiêu sau: Mô tả đặc. .. 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm vi học phần mặt đất Trinh nữ móc - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu thân Trinh nữ móc - Nghiên cứu đặc điểm bột dược liệu phần mặt đất Trinh nữ móc