Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Ứng dụng Sắc ký lỏng Kiểm nghiệm PHÂN TÍCH VÙNG DẤU VÂN TAY CỦA OXYTROPIS FALCATE BẰNG UPLC-ESI-MS Ứng dụng Sắc ký lỏng Kiểm nghiệm Nội Dung Chính Tóm tắt, giới thiệu (Abstract, introduction) Ngun liệu - Phương pháp (Material - Method) Kết bàn luận (Result and discussion) Kết luận (Conclusion) Tóm tắt – Giới thiệu • Oxytropis falcate Oxytropis falcate Bunge, thuộc họ Leguminous, chủ yếu phân bố cao nguyên Thanh Hải-Tây Tạng Trung Quốc • Được ghi nhận vào Dược điển Trung Quốc thuốc thảo dược thức (1977) Tóm tắt – Giới thiệu • • Oxytropis falcate Thành phần chính: Flavonoid Có tác dụng chống viêm, giảm đau, chống oxy hóa, kháng khuẩn, chống khối u, hoạt động gây độc tế bào… • Được dùng đơn thuốc cho người Tây Tạng Mông Cổ cho tác dụng bệnh cúm, chứng tăng ham muốn, đau, vết thương, xuất huyết, viêm Thông tin kiểm sốt chất lượng Oxytropis falcate cịn hạn chế Cần phương pháp để xác định kiểm sốt chất lượng Tóm tắt – Giới thiệu • • • • • Phương pháp kiểm soát chất lượng Sắc ký lớp mỏng (TLC) Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Sắc ký khí (GC) Điện di mao quản (CE) Hạn chế Sinh học phân tử (MB) Cần phương pháp để xác định Sự phức tạp thành phần kiểm soát chất lượng hóa học Tóm tắt – Giới thiệu • • Sắc ký dấu vân tay Cung cấp hình thái tích hợp thơng tin hóa học một hệ thống phức tạp Xác định tính xác thực dược liệu Sắc ký lỏng siêu hiệu UPLC • • • Phân tách tuyệt vời Diện tích peak lớn • • Tiêu thụ dung mơi Độ nhạy cao Tốc độ phân tích nhanh Chất lượng O Falcate phân biệt hiệu Nguyên liệu – Phương pháp Máy móc thiết bị • Waters ACQUITY UPLC • Waters ACQUITY Triple Quadrupole-MS/MS trang bị ESI/APCI đa chế độ Z-Spray • Nguồn ion hoạt động chế độ ion dương chế độ âm • Thu thập xử lý liệu thực Masslynx 4.1 TM (waters, milford, MA, USA) phát mảng photodiode Nguyên liệu – Phương pháp Máy móc thiết bị Detector options PDA eλ, PDA, ELS, SQD, Column manager options High temperature, Column heater Column heater/cooler, Column manager Sample manager Binary solvent manager Nguyên liệu – Phương pháp 21 lô O falcate (số S1 - S21)Hóa đượcchất thu thập từ tỉnh Cam nguyên vật Túc, liệu tỉnh Thanh Hải khu tự trị Tây Tạng Trung Quốc ( Bảng 1) Acetonitrile cho sắc ký Bảng Nguồn 21 lô O falcate (Merck Co ,Darmstadt, Đức) Số Nơi thu hái Số Các khác thuộc tích S1 hóa chất Tỉnh Thanh Hải loại phânS8 (CT thuốc thử hóa học Thiên Tân, Trung Quốc) S2 Nơi thu hái Số Nơi thu hái Tỉnh Thanh Hải S15 Tỉnh Thanh Hải Tỉnh Cam Túc S9 Tỉnh Thanh Hải S16 Tỉnh Thanh Hải Nước siêu tinh S3 Tỉnhkhiết Thanh Hải S10 Khu tự trị Tây Tạng S17 Tỉnh Thanh Hải (Shanghai Laikie Instrument Co Ltd., Thượng Hải, Trung Quốc) S4 Tỉnh Cam Trúc S11 Tỉnh Thanh Hải S18 Khu tự trị Tây Tạng S5 Tỉnh Thanh Hải S12 Tỉnh Thanh Hải S19 Tỉnh Cam Túc S6 Tỉnh Thanh Hải S13 Tỉnh Thanh Hải S20 Tỉnh Cam Túc S7 Tỉnh Thanh Hải S14 Tỉnh Thanh Hải S21 Tỉnh Cam Túc Nguyên liệu – Phương pháp Hóa chất nguyên vật liệu Hợp chất tham chiếu Đỉnh 16 (3R, 10S) -10, 2′-dihydroxy-3’, 4′-dimethoxyisoflav-8-ene-7-one 17 Acid cinnamic 22 5,7,2'-trihydroxy-4'-methoxyisoflavone 23 7-hydroxylflavonone 24 isomucronulatol 25 5,7-dihydroxyflavanone 26* 3-phenyl-N- (2-phenylethyl) -2-propenamide 27 2’,4'-dihydroxydihydrochalcon 28 2’,4'-dihydroxychalcone 29 7-methoxyflavanone 30 5-hydroxy-7-methoxyflavanone chiếu (đỉnh 13 Hình trúc hóa họcđược xác định chấtbởi tham 16, 17, 22-30) Phân lậpCấu từ O falcate H NMR, C NMR MS 10 Kết thảo luận Thiết lập phân tích vân tay tương tự UPLC : • Dấu vân tay sắc ký nhấn mạnh giống nhóm thuốc tương đồng phản ánh tính tồn vẹn độ mờ sắc ký Tóm lại, tương đồng khơng đủ thích hợp để phân tích mẫu khác nhau, HCA PCA cần thiết nghiên cứu 25 Kết thảo luận • Phân tích cụm phân cấp HCA HCA phương pháp phân tích hóa học để phân cụm mẫu dựa cấu hình hóa học tương tự, mẫu có đặc điểm tương tự xếp thành cụm để cung cấp sơ đồ hình • Trong nghiên cứu này, HCA thực phần mềm SPSS 16.0 dựa phương pháp Ward sử dụng bình phương khoảng cách Euclide làm thước đo độ tương tự mẫu Cụ thể sau: 26 Kết thảo luận Phân tích cụm phân cấp HCA Nhóm II: S2, S4 (tỉnh Cam Túc) 21 lô mẫu chia thành nhóm Nhóm III: S12, S15 (tỉnh Thanh Hải) Nhóm I: mẫu cịn lại Hình Sơ đồ hình theo cụm thu từ liệu diện tích peak UPLC 21 lồi O.falcate mẫu 27 Kết thảo luận Phân tích cụm phân cấp HCA Kết cho thấy: Chất lượng O falcate không liên quan đến nguồn gốc địa lý, mà cịn liên quan đến mơi trường phát triển, số năm sinh trưởng, mùa thu hoạch yếu tố khác Hình Sơ đồ hình theo cụm thu từ liệu diện tích peak UPLC 21 lồi O.falcate mẫu 28 Kết thảo luận Phân tích thành phẩm PCA PCA cơng cụ hóa học tự động sử dụng rộng rãi để giảm thiểu thơng tin giảm kích thước mẫu, đồng thời đơn giản hóa việc phân tích tính tốn • Nhiều số liên quan ban đầu chuyển thành số tồn diện phân tích PCA • Vùng dấu vân tay sở hữu số lượng lớn đỉnh sắc ký đặc trưng số tương quan đỉnh Đơn giản hóa cách áp dụng PCA, đặc trưng cách giảm tập liệu đa chiều 29 Kết thảo luận Phân tích thành phần PCA Trong nghiên cứu : • Các diện tích peak 30 đỉnh sắc ký phổ biến vùng dấu vân tay phân tích 30 biến • 21 lơ mẫu phân tích phân loại thêm PC ã Tng cng 21 ì 30 ma trn d liệu hình thành 30 Kết thảo luận Phân tích thành phẩm (PCA) -Biểu đồ phân tán PCA hiển thị Hình 6, cung cấp hai thành phần PC1 PC2 Hình Biểu đồ phân tán điểm thu từ PCA 21 lô O.falcate Biểu đồ phân tán điểm cho thấy mẫu thu từ ba nguồn gốc có chất lượng tương tự 31 Kết thảo luận Kết PCA tương ứng với kết thu từ HCA Nó gợi ý chất lượng 21 lơ O falcate tương tự Đồng thời kết PCA HCA xác minh lẫn cung cấp tài liệu tham khảo có giá trị để đánh giá chất lượng O falcate cách khách quan 32 Kết thảo luận Phân tích MS O falcate 11 hợp chất tham chiếu phân lập từ O falcate, áp dụng để tối ưu hóa tham số MS để xác định hợp chất tương ứng Nhiệt độNhiệt phânđộ lậpphân lập: 200, 300, 350, 400 450 độ C Nguồn Nguồn nhiệt nhiệt độ độ: 100, 105, 110, 115, 120, 130 135 độ C DịngDịng khí khử khí (Nitơ) khử (Nitơ): 400, 500, 600, 700, 800, 900 1000 L/h Các thông số thay đổi Điện áp mao quản: Chế độ ion dương: 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3 kV Điện áp mao quản Chế độ ion âm: 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0 kV Điện áp cone Điện áp cone: 10, 15, 25, 30, 35, 40 , 45, 50, 55, 60, 65 V Lưu lượng khí (Nitơ) Lưucone lượng khí cone (Nitơ): 40, 45, 50, 55 60 L/h 33 Kết thảo luận • Phân tích MS O falcate Các thử nghiệm cho thấy chế độ ion dương phù hợp với việc phát 11 hợp chất tham chiếu tốt chế độ ion âm điện áp hình nón ảnh hưởng đáng kể đến q trình ion hóa • Sắc ký đồ UPLC-ESI-MS thể tương quan với sắc ký đồ UPLC-PDA (Hình 7) Hình Sắc ký đồ UPLC-PDA bước sóng 270 nm (a), sắc ký đồ tổng ion loài O.falcate trạng thái ion dương (b) 34 Kết thảo luận Bảng Các đặc trưng 11 đỉnh phổ biến hồ sơ sắc ký phương pháp UPLC – PDA – ESI – MS • Phân tích MS O falcate Ở trạng thái ion dương ESI, ion [M + H] + quan sát, trọng lượng phân tử xác định + dựa thông tin ion [M + H] • Trong tài liệu này, 11 đỉnh phổ biến hồ sơ sắc ký xác định cách so sánh thời gian lưu, phổ tử ngoại trọng lượng phân tử so với hợp chất tham chiếu (Bảng 4) 35 Kết thảo luận Phân tích MS O falcate 36 Hình 8a Phổ khối acid cinnamic (đỉnh 17) Kết thảo luận • Phân tích MS O falcate Phổ khối acid cinnamic (đỉnh 17) 3-phenyl-N- (2-phenylethyl) -2-propenamide (đỉnh 26) Hình 8b Phổ khối 4-phenyl-N-(2-phenylethyl)-2-propenamide (đỉnh 26) 37 Kết luận • UPLC vân tay với độ xác, độ lặp lại, độ ổn định độ đặc hiệu cao để xác định đánh giá chất lượng 21 lơ O falcate • Các thơng tin UPLC cho thấy chất lượng O falcate có liên quan đến yếu tố khác gốc địa lý, môi trường phát triển, năm sinh trưởng, mùa thu hoạch, v.v Phương pháp phát triển nghiên cứu cung cấp tài liệu tham khảo quan trọng để kiểm soát chất lượng O falcate 38 Ứng dụng Sắc ký lỏng Kiểm nghiệm Bài báo: T.J Zhao, J Chen, J.P Shi, Fingerprint analysis of Oxytropis falcate using ultra-performance liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometry (UPLC-ESI-MS), Anal Methods, 2015,7, 6810-6820 39 ... Các đỉnh nên phân bố ổn định Hình Sắc ký dấu vân tay chuẩn Thu sắc ký dấu vân tay chuẩn 22 Kết thảo luận Thiết lập UPLC dấu vân tay phân tích tương tự (SA): Bảng Sự giống dấu vân tay 21 mẫu 23... dấuvân vântay taycủa O O .falcate falcatelàlàđặc đặchiệu hiệu Hình Sắc ký đồ O Kansuensis (A), O melanocalyx (B) and O falcate (C) 20 Kết thảo luận Thiết lập UPLC dấu vân tay phân tích tương... Sắc ký đồ mẫu S21 khác biệt rõ ràng với mẫu khác Hình UPLC dấu vân tay cho 21 lô O falcate 21 Kết thảo luận Thiết lập UPLC dấu vân tay phân tích tương tự (SA): • Các đỉnh chung chọn theo thông