Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Đại Học Quốc Gia Tp.Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ************ NGUYỄN MINH KHANG XÂY DỰNG QUI TRÌNH SẢN XUẤT VÀ BẢO QUẢN CHẾ PHẨM BIFIDOBACTERIA Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2006 – 2008 Mã số ngành: 604280 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng năm 2008 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI VIỆN SINH HỌC NHIỆT ĐỚI TRƯỜNG CAO ĐẲNG KINH TẾ - CƠNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MNH TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP.HỒ CHÍ MINH CƠNG TY CỔ PHẦN VIỆT Á Cán hướng dẫn khoa học: TS HOÀNG QUỐC KHÁNH Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ, TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày….tháng….năm 2008 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only LỜI CẢM ƠN § Trước hết, tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Bách Khoa thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Mơn cơng nghệ sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trường § Đặc biệt cho phép tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy Hồng Quốc Khánh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành luận văn theo cách tốt § Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ thời gian học hết lịng hỗ trợ giúp đỡ tơi thời gian thực tập Tôi xin gởi lời chúc sức khỏe đến tất thầy cô anh chị Tp.HCM, Tháng 08 năm 2008 Nguyễn Minh Khang Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA http://www.foxitsoftware.com For evaluation only CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc TP.HCM, Ngày ….tháng….năm 2008 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGUYỄN MINH KHANG Phái: Nam Sinh ngày: 25/04/1983 Nơi sinh: TPHCM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 03106674 Năm trúng tuyển: 2006 TÊN ĐỀ TÀI: “Xây dựng qui trình sản xuất bảo quản chế phẩm bifidobacteria” NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG • Phân lập chủng vi khuẩn từ nguồn nguyên liệu sữa bột nhập Nestle • Định danh chủng vi sinh vật phân lập phương pháp sinh học phân tử • Xác định điều kiện ni cấy tốt cho phát triển vi khuẩn bifidobacteria • Chọn tối ưu hóa thành phần mơi trường huyết sữa để ni cấy vi khuẩn bifidobacteria • Thử nghiệm sản xuất chế phẩm bifidobacteria dạng bột phương pháp sấy phun NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: Ngày 25 tháng 02 năm 2008 NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: Ngày 30 tháng 06 năm 2008 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH (Học hàm, học vị, họ tên chữ ký) Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội đồng chun ngành thơng qua Ngày….tháng….năm 2008 TRƯỞNG PHỊNG ĐT – SĐH TRƯỞNG KHOA QL NGÀNH Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only xviii TĨM TẮT Bifidobacteria đóng vai trị quan trọng việc nâng cao sức đề kháng người Hơn nữa, bifidobacteria xem phương pháp chữa bệnh probiotic, giúp xây dựng kích thích thể tạo rào chắn miễn dịch để chống tác nhân gây hại: chất gây ung thư, vi khuẩn gây bệnh… Hiện nay, vi khuẩn bifidobacteria ứng dụng phổ biến ngành công nghiệp chế biến sữa, tác động có lợi cho sức khỏe người Các chế phẩm probiotic thị trường nay, hoàn tồn chưa bổ sung vi khuẩn bifidobacteria chi phí để ni cấy lồi vi khuẩn q tốn Trong nghiên cứu này, vi khuẩn bifidobacteria phân lập từ sữa bột nhập Nestle định danh phương pháp PCR Nguồn nguyên liệu rẻ tiền, dễ kiếm bột cheese whey (huyết sữa) sử dụng thí nghiệm ni cấy vi khuẩn bifidobacteria Các nhân tố tăng trưởng ảnh hưởng trực tiếp đến trình sinh tổng hợp tế bào bifidobacteria bao gồm cao nấm men, peptone, glucosamine, cao thịt bò, trytone khống chất có huyết sữa Trong thí nghiệm này, chúng tơi xây dựng qui trình sản xuất cách chọn tối ưu hóa ba nhân tố tăng trưởng: cao nấm men, peptone N – acetyl D Riêng thành phần khác môi trường giữ cố định không đổi Kết thành phần môi trường sau tối ưu Huyết sữa 50 mg ml-1 Peptone 7,2 mg ml-1 Cao nấm men 10,4 mg ml-1 N – acetyl D glucosamine 0,66 mg ml-1 L-cystein 0,5 mg ml-1 Ascorbic acid 2,0 mg ml-1 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only xix Kết hợp với điều kiện nuôi cấy tốt khảo sát, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn bifidobacteria máy lắc ổn nhiệt 37oC, pH 6,8, tốc độ lắc 60rpm sau 18 mật độ tế bào đạt 3,8x109 CFU ml-1 Để sản xuất chế phẩm bifidobacteria, thu nhận sinh khối cách ly tâm dịch khuẩn (5500 vòng/phút, 20 phút), sau rửa lại dung dịch điệm phosphate pH 7,0 Tác nhân vi bao sử dụng whey protein Quá trình sấy phun cài đặc nhiệt độ đầu vào 150oC nhiệt độ đầu dòng sản phẩm đo 98oC Kết cho thấy, sử dụng hàm lượng chất vi bao 20%, hiệu xuất thu hồi đạt 43% tỷ lệ tế bào sống chế phẩm bifidobacteria 9,747x106 CFU g-1 Sau 10 ngày bảo quản tủ mát nhiệt độ 4oC, khả sống tế bào giảm đáng kể 1,28x106 CFU g-1 ngày thứ 20 4,75 x105 CFU g-1 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only ABSTRACT Bifidobacterium play an important role in human heath including the enhancement of body resistance against the diseases There are some experimental evidences that certain bifidobacteria may actually protect the host from carcinogentic caused by intestinal actions flora Bifidobacteria may exert protective intestinal action through various mechanisms and represent promising advances in the fields of prophylaxis and therapy In this study, Bifidobacterium were isolated from the Nestle powdered milk We used the PCR method with different primers (g-Bifid-F and g-Bifid-R) to detect the Bididobacterium genus We dertermined some potential growth factors affecting on their bifidus growth such as yeast extract, peptone and glucosamine Cells concentration were determined by measuring the optical density at 600nm (OD600) The effect of the optimal culture conditions on growth in cheese whey was also evaluated Whey supplemented with N-acetyl-D-glucosamine (0,66 mg ml-1), peptone (7,2 mg ml-1) and yeast extract (10,4 mg ml-1) at pH 6,8 and 37oC serves as an inexpensive medium for the growth of bifidobacteria The productivity of the cell mass was 3,8x109 CFU ml-1 at 18h after inoculation Comparisons of the effect of carrier concentrations revealed the spaydrying at whey proteins 20% (w/w) resulted the highest survival of bifidobacteria Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only vi MỤC LỤC PHẦN TRANG Trang bìa i Trang tựa .ii Lời cảm tạ .iii Tóm Tắt iv Mục lục vi Danh sách bảng xi Danh sách hình xiii Danh sách biểu đồ .xiv Danh sách đồ thị xv Danh sách sơ đồ xvi Danh sách chữ viết tắt .xvii PHẦN 1: MỞ ĐẦU MỞ ĐẦU 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ BIFIDOBACTERIA .3 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái .3 2.1.3 Đặc điểm sinh lý 2.1.4 Đặc điểm di truyền .6 2.1.5 Đặc điểm sinh hóa nhu cầu dinh dưỡng Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only vii 2.1.5.1 Đặc điểm sinh hóa 2.1.5.2 Nhu cầu dinh dưỡng 2.1.5.3 Chuyển hóa sắt 10 2.1.5.4 Chuyển hóa vitamin 10 2.1.5.5 Sản xuất acid amin 10 2.1.5.6 Sản xuất chất kháng sinh kháng khuẩn 10 2.2 ĐẶC ĐIỂM ENZYME VÀ CON ĐƯỜNG CHUYỂN HÓA ĐƯỜNG HEXOSE .11 2.2.1 Đặc điểm enzym 11 2.2.2 Con đường chuyển hoá hexose 11 2.3 SỰ PHÂN BỐ CỦA GIỐNG BIFIDOBACTERIA 13 2.3.1 Tồn ruột người 13 2.3.2 Tồn động vật 15 2.3.3 Trong môi trường xung quanh .16 2.4 ỨNG DỤNG CỦA VI KHUẨN BIFIDOBACTERIA 16 2.4.1 Probiotic 16 2.4.2 Prebiotic 16 2.4.3 Synbiotic .17 2.5 CÁC ỨNG DỤNG CỦA VI KHUẨN BIFIDOBACTERIA .18 2.5.1 Tăng cường hệ miễn dịch .18 2.5.2 Giảm bớt triệu chứng dị ứng lactose 19 2.5.3 Ngăn ngừa bệnh tiêu chảy 19 2.5.4 Ngăn ngừa ưng thu 20 2.5.5 Kháng lại vi khuẩn gây bệnh 20 2.6 PHÂN LẬP VI KHUẨN BIFIDOBACTERIA 21 2.6.1 Môi trường không chọn lọc 22 2.6.2 Các môi trường chọn lọc 22 2.6.3 Môi trường phân biệt .24 2.7 PHÁT HIỆN BIFIDOBACTERIA THEO HÌNH THÁI TẾ BÀO 25 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG pH ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.55599 0.592665 272.76 0.0000 Within groups 0.0304193 14 0.00217281 Total (Corr.) 3.58641 20 Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by pH PH Count Average Variance Standard deviation Minimum 4.5 6.96933 0.000105333 0.0102632 6.958 7.801 0.000097 0.00984886 7.793 5.5 8.04 0.013671 0.116923 7.905 8.146 0.000111 0.0105357 8.135 6.5 8.203 0.000016 0.004 8.199 6.8 8.27067 0.000170333 0.0130512 8.256 7.921 0.001039 0.0322335 7.899 Total 21 7.90729 0.17932 0.423462 6.958 PH Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum -4.5 6.978 -0.770952 20.908 7.812 0.879314 23.403 5.5 8.109 -1.22384 24.12 8.156 -0.299299 24.438 6.5 8.207 -1.41298E-12 24.609 6.8 8.281 -0.940031 24.812 7.958 1.16009 23.763 -Total 8.281 -2.99628 1.45705 166.053 Multiple Range Tests for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by pH -Method: 95.0 percent LSD PH Count Mean Homogeneous Groups -4.5 6.96933 X 7.801 X 7.921 X 5.5 8.04 X 8.146 X 6.5 8.203 XX 6.8 8.27067 X -Contrast Difference +/- Limits -4.5 - *-0.831667 0.0816301 4.5 - 5.5 *-1.07067 0.0816301 4.5 - *-1.17667 0.0816301 4.5 - 6.5 *-1.23367 0.0816301 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 4.5 - 6.8 *-1.30133 0.0816301 4.5 - *-0.951667 0.0816301 - 5.5 *-0.239 0.0816301 - *-0.345 0.0816301 - 6.5 *-0.402 0.0816301 - 6.8 *-0.469667 0.0816301 - *-0.12 0.0816301 5.5 - *-0.106 0.0816301 5.5 - 6.5 *-0.163 0.0816301 5.5 - 6.8 *-0.230667 0.0816301 5.5 - *0.119 0.0816301 - 6.5 -0.057 0.0816301 - 6.8 *-0.124667 0.0816301 - *0.225 0.0816301 6.5 - 6.8 -0.0676667 0.0816301 6.5 - *0.282 0.0816301 6.8 - *0.349667 0.0816301 -* denotes a statistically significant difference 3.3 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG N-ACETYL – D - GLUCOSAMINE ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.201278 0.0402557 64.15 0.0000 Within groups 0.00753067 12 0.000627556 Total (Corr.) 0.208809 17 Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) NONGDO (mg/ml) Count Average Variance Standard deviation Minimum 0.4 7.856 0.001143 0.0338083 7.817 0.6 8.056 0.002473 0.0497293 8.017 0.8 7.876 0.000112 0.010583 7.868 7.786 0.000004 0.002 7.784 1.2 7.757 0.000019 0.0043589 7.752 1.4 7.74367 0.0000143333 0.00378594 7.741 -Total 18 7.84578 0.0122829 0.110828 7.741 NONGDO (mg/ml) Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum -0.4 7.877 -1.2139 23.568 0.6 8.112 0.960645 24.168 0.8 7.888 1.03086 23.628 7.788 -1.41298E-12 23.358 1.2 7.76 -1.15263 23.271 1.4 7.748 1.12932 23.231 -Total 8.112 2.12866 0.642524 141.224 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Table of Means for ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error NONGDO (mg/ml) Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0.4 7.856 0.0144632 7.83372 7.87828 0.6 8.056 0.0144632 8.03372 8.07828 0.8 7.876 0.0144632 7.85372 7.89828 7.786 0.0144632 7.76372 7.80828 1.2 7.757 0.0144632 7.73472 7.77928 1.4 7.74367 0.0144632 7.72138 7.76595 -Total 18 7.84578 Multiple Range Tests for ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) -Method: 95.0 percent LSD NONGDO (mg/ml) Count Mean Homogeneous Groups -1.4 7.74367 X 1.2 7.757 X 7.786 X 0.4 7.856 X 0.8 7.876 X 0.6 8.056 X -Contrast Difference +/- Limits -0.4 - 0.6 *-0.2 0.0445658 0.4 - 0.8 -0.02 0.0445658 0.4 - *0.07 0.0445658 0.4 - 1.2 *0.099 0.0445658 0.4 - 1.4 *0.112333 0.0445658 0.6 - 0.8 *0.18 0.0445658 0.6 - *0.27 0.0445658 0.6 - 1.2 *0.299 0.0445658 0.6 - 1.4 *0.312333 0.0445658 0.8 - *0.09 0.0445658 0.8 - 1.2 *0.119 0.0445658 0.8 - 1.4 *0.132333 0.0445658 - 1.2 0.029 0.0445658 - 1.4 0.0423333 0.0445658 1.2 - 1.4 0.0133333 0.0445658 * denotes a statistically significant difference Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 3.4 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PEPTONE Analysis Summary Dependent variable: LOG Factor: NONGDO Number of observations: 24 Number of levels: ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.546522 0.0780746 118.62 0.0000 Within groups 0.0105308 16 0.000658175 Total (Corr.) 0.557053 23 Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) NONGDO (mg/ml) Count Average Variance Standard deviation Minimum 7.81567 0.0000443333 0.00665833 7.81 3 7.9074 0.00000907 0.00301164 7.9041 8.19 0.000043 0.00655744 8.183 7.895 0.000076 0.0087178 7.885 12 7.81167 0.000785333 0.0280238 7.789 15 7.75167 0.000256333 0.0160104 7.736 18 7.735 0.001197 0.0345977 7.699 21 7.66067 0.00285433 0.053426 7.599 Total 24 7.84588 0.0242197 0.155627 7.599 NONGDO (mg/ml) Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 7.823 0.746586 23.447 7.91 -0.699636 23.7222 8.196 -0.473963 24.57 7.901 -1.15263 23.685 12 7.843 0.889944 23.435 15 7.768 0.132267 23.255 18 7.768 -0.273838 23.205 21 7.693 -1.2204 22.982 Total 8.196 2.34312 1.18166 188.301 Table of Means for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml)with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error NONGDO (mg/ml) Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 7.81567 0.0148119 7.79346 7.83787 3 7.9074 0.0148119 7.8852 7.9296 8.19 0.0148119 8.1678 8.2122 7.895 0.0148119 7.8728 7.9172 12 7.81167 0.0148119 7.78946 7.83387 15 7.75167 0.0148119 7.72946 7.77387 18 7.735 0.0148119 7.7128 7.7572 21 7.66067 0.0148119 7.63846 7.68287 -Total 24 7.84588 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Multiple Range Tests for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) -Method: 95.0 percent LSD NONGDO (mg/ml) Count Mean Homogeneous Groups -21 7.66067 X 18 7.735 X 15 7.75167 X 12 7.81167 X 7.81567 X 7.895 X 3 7.9074 X 8.19 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - *-0.0917333 0.0444061 - *-0.374333 0.0444061 - *-0.0793333 0.0444061 - 12 0.004 0.0444061 - 15 *0.064 0.0444061 - 18 *0.0806667 0.0444061 - 21 *0.155 0.0444061 - *-0.2826 0.0444061 - 0.0124 0.0444061 - 12 *0.0957333 0.0444061 - 15 *0.155733 0.0444061 - 18 *0.1724 0.0444061 - 21 *0.246733 0.0444061 - *0.295 0.0444061 - 12 *0.378333 0.0444061 - 15 *0.438333 0.0444061 - 18 *0.455 0.0444061 - 21 *0.529333 0.0444061 - 12 *0.0833333 0.0444061 - 15 *0.143333 0.0444061 - 18 *0.16 0.0444061 - 21 *0.234333 0.0444061 12 - 15 *0.06 0.0444061 12 - 18 *0.0766667 0.0444061 12 - 21 *0.151 0.0444061 15 - 18 0.0166667 0.0444061 15 - 21 *0.091 0.0444061 18 - 21 *0.0743333 0.0444061 • denotes a statistically significant difference Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 3.5 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG CAO NẤM MEN ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng cao nấm men (mg/ml) Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.430722 0.0615317 1213.44 0.0000 Within groups 0.000811333 16 0.0000507083 Total (Corr.) 0.431533 23 Summary Statistics for Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng cao nấm men (mg/ml) NONGDO (mg/ml) Count Average Variance Standard deviation Minimum 8.09967 0.00000433333 0.00208167 8.098 8.23033 0.0000173333 0.00416333 8.227 8.585 0.000037 0.00608276 8.578 10 8.316 0.000291 0.0170587 8.297 12 8.27233 0.0000303333 0.00550757 8.266 14 8.21967 0.00000933333 0.00305505 8.217 16 8.20867 0.0000123333 0.00351188 8.205 18 8.196 0.000004 0.002 8.194 Total 24 8.26596 0.0187623 0.136976 8.098 NONGDO (mg/ml) Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 8.102 0.914531 24.299 8.235 0.914531 24.691 8.589 -1.18761 25.755 10 8.33 -0.85253 24.948 12 8.276 -1.17948 24.817 14 8.223 0.6613 24.659 16 8.212 -0.299299 24.626 18 8.198 2.82597E-12 24.588 Total 8.589 3.03112 1.95018 198.383 Table of Means for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error NONGDO (mg/ml) Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -4 8.09967 0.0041113 8.0935 8.10583 8.23033 0.0041113 8.22417 8.2365 8.585 0.0041113 8.57884 8.59116 10 8.316 0.0041113 8.30984 8.32216 12 8.27233 0.0041113 8.26617 8.2785 14 8.21967 0.0041113 8.2135 8.22583 16 8.20867 0.0041113 8.2025 8.21483 18 8.196 0.0041113 8.18984 8.20216 -Total 24 8.26596 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Multiple Range Tests for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by hàm lượng peptone (mg/ml) -Method: 95.0 percent LSD NONGDO (mg/ml) Count Mean Homogeneous Groups -4 8.09967 X 18 8.196 X 16 8.20867 X 14 8.21967 XX 8.23033 X 12 8.27233 X 10 8.316 X 8.585 X -Contrast Difference +/- Limits -4 - *-0.130667 0.0123257 - *-0.485333 0.0123257 - 10 *-0.216333 0.0123257 - 12 *-0.172667 0.0123257 - 14 *-0.12 0.0123257 - 16 *-0.109 0.0123257 - 18 *-0.0963333 0.0123257 - *-0.354667 0.0123257 - 10 *-0.0856667 0.0123257 - 12 *-0.042 0.0123257 - 14 0.0106667 0.0123257 - 16 *0.0216667 0.0123257 - 18 *0.0343333 0.0123257 - 10 *0.269 0.0123257 - 12 *0.312667 0.0123257 - 14 *0.365333 0.0123257 - 16 *0.376333 0.0123257 - 18 *0.389 0.0123257 10 - 12 *0.0436667 0.0123257 10 - 14 *0.0963333 0.0123257 10 - 16 *0.107333 0.0123257 10 - 18 *0.12 0.0123257 12 - 14 *0.0526667 0.0123257 12 - 16 *0.0636667 0.0123257 12 - 18 *0.0763333 0.0123257 14 - 16 0.011 0.0123257 14 - 18 *0.0236667 0.0123257 16 - 18 *0.0126667 0.0123257 -* denotes a statistically significant difference Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 3.6 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM TỐI ƯU HĨA THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Variance Check Cochran's C test: 0.236364 ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0418823 0.00598318 137.41 0.0000 Within groups 0.000696667 16 0.0000435417 Total (Corr.) 0.042579 23 Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm Count Average Variance Standard deviation Minimum TN -1 8.33633 0.0000643333 0.00802081 8.328 8.38667 0.0000423333 0.00650641 8.38 3 8.42867 0.0000823333 0.00907377 8.419 8.29767 0.0000493333 0.00702377 8.291 8.33133 0.00000133333 0.0011547 8.33 8.328 0.000048 0.0069282 8.32 8.32967 0.0000303333 0.00550757 8.326 8.29733 0.0000303333 0.00550757 8.291 -Total 24 8.34196 0.00185126 0.0430263 8.291 TN Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum -1 8.344 -0.26265 25.009 8.393 -0.16259 25.16 8.437 -0.457476 25.286 8.305 0.299299 24.893 8.332 -1.22474 24.994 8.332 -1.22474 24.984 8.336 1.17948 24.989 8.301 -1.17948 24.892 Total 8.437 2.02738 0.118796 200.207 Multiple Range Tests for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm -Method: 95.0 percent LSD TN Count Mean Homogeneous Groups -8 8.29733 X 8.29767 X 8.328 X 8.32967 X 8.33133 X 8.33633 X 8.38667 X 3 8.42867 X -Contrast Difference +/- Limits -1 - *-0.0503333 0.0114215 - *-0.0923333 0.0114215 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only - *0.0386667 0.0114215 - 0.005 0.0114215 - 0.00833333 0.0114215 - 0.00666667 0.0114215 - *0.039 0.0114215 - *-0.042 0.0114215 - *0.089 0.0114215 - *0.0553333 0.0114215 - *0.0586667 0.0114215 - *0.057 0.0114215 - *0.0893333 0.0114215 - *0.131 0.0114215 - *0.0973333 0.0114215 - *0.100667 0.0114215 - *0.099 0.0114215 - *0.131333 0.0114215 - *-0.0336667 0.0114215 - *-0.0303333 0.0114215 - *-0.032 0.0114215 - 0.000333333 0.0114215 - 0.00333333 0.0114215 - 0.00166667 0.0114215 - *0.034 0.0114215 - -0.00166667 0.0114215 - *0.0306667 0.0114215 - *0.0323333 0.0114215 -* denotes a statistically significant difference 3.7 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM LEO DỐC Variance Check Cochran's C test: 0.247892 ANOVA Table for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0465336 0.00664766 269.05 0.0000 Within groups 0.000395333 16 0.0000247083 Total (Corr.) 0.046929 23 Table of Means for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error TN Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -1 8.359 0.00286986 8.3547 8.3633 8.36633 0.00286986 8.36203 8.37064 3 8.38067 0.00286986 8.37636 8.38497 8.47533 0.00286986 8.47103 8.47964 8.41233 0.00286986 8.40803 8.41664 8.377 0.00286986 8.3727 8.3813 8.353 0.00286986 8.3487 8.3573 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 8.31667 0.00286986 8.31236 8.32097 -Total 24 8.38004 Summary Statistics for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm TN Count Average Variance Standard deviation Minimum 8.359 0.000016 0.004 8.355 8.36633 0.0000123333 0.00351188 8.363 3 8.38067 0.0000123333 0.00351188 8.377 8.47533 0.0000123333 0.00351188 8.472 8.41233 0.0000323333 0.00568624 8.406 8.377 0.000049 0.007 8.37 8.353 0.000031 0.00556776 8.348 8.31667 0.0000323333 0.00568624 8.312 Total 24 8.38004 0.00204039 0.0451707 8.312 TN Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 8.363 0.0 25.077 8.37 0.299299 25.099 8.384 -0.299299 25.142 8.479 0.299299 25.426 8.417 -0.85253 25.237 8.384 0.0 25.131 8.359 0.553065 25.059 8.323 0.85253 24.95 Total 8.479 1.88396 0.701217 201.121 Multiple Range Tests for mật độ tế bào Log (CFU/ml) by thí nghiệm Method: 95.0 percent LSD TN Count Mean Homogeneous Groups 8.31667 X 8.353 X 8.359 XX 8.36633 X 8.377 X 3 8.38067 X 8.41233 X 8.47533 X -Contrast Difference +/- Limits -1 - -0.00733333 0.00860386 - *-0.0216667 0.00860386 - *-0.116333 0.00860386 - *-0.0533333 0.00860386 - *-0.018 0.00860386 - 0.006 0.00860386 - *0.0423333 0.00860386 - *-0.0143333 0.00860386 - *-0.109 0.00860386 - *-0.046 0.00860386 - *-0.0106667 0.00860386 - *0.0133333 0.00860386 - *0.0496667 0.00860386 - *-0.0946667 0.00860386 - *-0.0316667 0.00860386 - 0.00366667 0.00860386 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only - *0.0276667 0.00860386 - *0.064 0.00860386 - *0.063 0.00860386 - *0.0983333 0.00860386 - *0.122333 0.00860386 - *0.158667 0.00860386 - *0.0353333 0.00860386 - *0.0593333 0.00860386 - *0.0956667 0.00860386 - *0.024 0.00860386 - *0.0603333 0.00860386 - *0.0363333 0.00860386 -* denotes a statistically significant difference 3.8 THỬ NGHIỆM SẤY PHUN TẠO SẢN PHẨM BỘT BIFIDOBACTERIA ANOVA Table for mật độ tế bào ngày thứ by hàm lượng whey protein Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 80.375 40.1875 2247.90 0.0000 Within groups 0.107267 0.0178778 Total (Corr.) 80.4822 whey Count Average Variance Standard deviation Minimum -10% 2.44 0.0021 0.0458258 2.39 15% 5.71 0.0291 0.170587 5.52 20% 9.74667 0.0224333 0.149778 9.58 -Total 5.96556 10.0603 3.17179 2.39 whey Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 10% 2.48 -0.6613 7.32 15% 5.85 -0.85253 17.13 20% 9.87 -0.843545 29.24 Total 9.87 0.191679 -1.04771 53.69 Multiple Range Tests for mật độ tế bào ngày thứ by hàm lượng whey protein -Method: 95.0 percent LSD whey Count Mean Homogeneous Groups -10% 2.44 X 15% 5.71 X 20% 9.74667 X -Contrast Difference +/- Limits -10% - 15% *-3.27 0.267135 10% - 20% *-7.30667 0.267135 15% - 20% *-4.03667 0.267135 -* denotes a statistically significant difference Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only ANOVA Table for mật độ tế bào ngày thứ 10 by hàm lượng whey protein Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 50.6788 25.3394 577.21 0.0000 Within groups 0.2634 0.0439 Total (Corr.) 50.9422 Multiple Range Tests for mật độ tế bào ngày thứ 10 by hàm lượng whey protein -Method: 95.0 percent LSD whey Count Mean Homogeneous Groups -10% 7.02667 X 15% 9.70333 X 20% 12.8333 X -Contrast Difference +/- Limits -10% - 15% *-2.67667 0.418607 10% - 20% *-5.80667 0.418607 15% - 20% *-3.13 0.418607 -* denotes a statistically significant difference Summary Statistics for mật độ tế bào ngày thứ 10 by hàm lượng whey protein whey Count Average Variance Standard deviation Minimum 10% 7.02667 0.0186333 0.136504 6.88 15% 9.70333 0.0197333 0.140475 9.57 20% 12.8333 0.0933333 0.305505 12.5 Total 9.85444 6.36778 2.52345 6.88 whey Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 10% 7.15 -0.52802 21.08 15% 9.85 0.299299 29.11 20% 13.1 -0.6613 38.5 Total 13.1 0.156451 -1.02109 88.69 ANOVA Table for mật độ tế bào ngày thứ 20 by hàm lượng whey protein Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3260.93 1630.47 7601.63 0.0000 Within groups 1.28693 0.214489 Total (Corr.) 3262.22 Summary Statistics for mật độ tế bào ngày thứ 20 by hàm lượng whey protein whey Count Average Variance Standard deviation Minimum 10% 5.61667 0.173333 0.416333 5.15 15% 8.74 0.0268 0.163707 8.56 20% 47.4667 0.443333 0.665833 46.9 Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only 407.777 20.1935 5.15 Total 20.6078 whey Maximum Stnd skewness Stnd kurtosis Sum 10% 5.95 -0.914531 16.85 15% 8.88 -0.731065 26.22 20% 48.2 0.746586 142.4 Total 48.2 1.02931 -1.04684 185.47 Multiple Range Tests for mật độ tế bào ngày thứ 20 by hàm lượng whey protein -Method: 95.0 percent LSD whey Count Mean Homogeneous Groups -10% 5.61667 X 15% 8.74 X 20% 47.4667 X -Contrast Difference +/- Limits -10% - 15% *-3.12333 0.925286 10% - 20% *-41.85 0.925286 15% - 20% *-38.7267 0.925286 -* denotes a statistically significant difference Nguyễn Minh Khang Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: NGUYỄN MINH KHANG Phái: Nam Sinh ngày: 25/04/1983 Nơi sinh: Tp.HCM Địa liên lạc: 58/4, tổ 32, khu phố thị trấn Hóc Mơn, Huyện Hóc Mơn, Tp.HCM Điện Thoại nhà: 08-7130330 Di động: 0908598982 QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO ü Năm 2005: Tốt nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh học, Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM ü Năm 2007: Tham dự khóa đào tạo lên men cơng nghiệp, liên kết Trung Tâm Công Nghệ sinh học Viện CIGB (Centro de Ingeniería Genética y Biotechnología) ü Năm 2006 – 2008: Tham dự lớp cao học khóa 2006 – 2008, ngành Công Nghệ Sinh học, Trường Đại học Bách Khoa, Tp.HCM Q TRÌNH CƠNG TÁC ü Từ 09/2005 – 01/2006: Nhân viên KCS phòng kiểm nghiệm Trung Tâm Kiểm Tra Chất Lượng Vệ Sinh An Toàn Thú y Thủy Sản vùng 4, Quận 1, Tp.HCM ü Từ 02/2006 – 09/2006: Phụ trách phận kỹ thuật sản xuất Nấm ăn Nấm dược liệu, Công Ty Cổ Phần Hóc Mơn, Tp.HCM ü Từ 09/2006 đến nay: Giảng viên Khoa Sinh học Ứng dụng, trường CĐ KT – Công Nghệ Tp.HCM Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only DỰ ÁN CHỦ TRÌ ü Từ 08/2007 đến 11/2007: ứng dụng công nghệ sinh học sản xuất meo giống nấm rơm địa bàn Huyện ĐạTẻK, Tỉnh Lâm Đồng ... toàn chưa sản xuất theo qui trình cụ thể Để khắc phục phần vấn đề trên, bước đầu xây dựng qui trình sản xuất bảo quản chế phẩm bifidobacteria Kết nghiên cứu này, sở để sản xuất chế phẩm bifidobacteria,... nghệ sinh học MSHV: 03106674 Năm trúng tuyển: 2006 TÊN ĐỀ TÀI: ? ?Xây dựng qui trình sản xuất bảo quản chế phẩm bifidobacteria” NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG • Phân lập chủng vi khuẩn từ nguồn nguyên liệu sữa... THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM BIFIDOBACTERIA BẰNG PHƯƠNG PHÁP PHUN 50 3.6.1 Sản xuất chế phẩm bifidobacteria phương pháp sấy phun 50 3.6.2 Đánh giá khả sống vi khuẩn sau trình sấy