Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà camellia sinensis (l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - NGUYỄN HẢI HÀ NGHIÊN CỨU TRÍCH LY POLYPHENOL TỪ TRÀ Camellia sinensis (L.) CHUYÊN NGÀNH Mà SỐ NGÀNH : CÔNG NGHỆ HỮU CƠ : 02.10.04 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, tháng năm 2006 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: TS.PHẠM THÀNH QUÂN Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS TRẦN THỊ VIỆT HOA Cán chấm nhận xét 2: PGS TS NGUYỄN NGỌC SƯƠNG Luận văn bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUÂN VĂN THẠC SĨ, TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng năm 2006 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc Tp.HCM, ngày tháng năm 2006 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên : NGUYỄN HẢI HÀ Ngày tháng năm sinh: 28/10/1981 Nơi sinh : Thanh Hố Chun ngành : CƠNG NGHỆ HỮU CƠ MSHV : 00504105 I.TÊN ĐỀ TÀI Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG ƒ Khảo sát phương pháp so màu dùng để đánh giá hàm lượng polyphenol tổng dịch trích trà ƒ Khảo sát phương pháp xử lý ức chế enzyme có sử dụng vi sóng ƒ Đánh giá lựa chọn giống trà ngun liệu cho q trình trích ly ƒ Khảo sát q trình trích ly polyphenol từ trà phương pháp có hỗ trợ vi sóng ƒ Tinh chế sơ dịch trích, tạo chế phẩm dạng bột ƒ Khảo sát số tính chất thành phần, hoạt tính kháng oxy hóa, kháng khuẩn sản phẩm III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: V HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS PHẠM THÀNH QUÂN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua Ngày tháng năm 2006 PHÒNG ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC KHOA QUẢN LÝ NGÀNH Lời cảm ơn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Phạm Thành Quân, thầy hướng dẫn cho ý tưởng, động lực giúp đỡ tận tình nghiên cứu, xin cảm ơn thầy hội đồng bảo vệ có nhận xét quý báu cho kết Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến chị Trương Ngọc Tuyền hỗ trợ nhiệt tình trình làm thí nghiệm, anh Huỳnh Văn Tiến kết phân tích HPLC, chị Đặng Thị Thanh Bình với ý kiến đóng góp giúp tơi sửa chữa giai đoạn viết bài, đến thầy cô, anh chị mơn CN Hữu cơ, hết lịng ủng hộ giúp đỡ suốt thời gian làm luận văn Xin cảm ơn bạn sinh viên tơi thực đề tài Cảm ơn gia đình, bạn bè động viên hỗ trợ tơi hồn thành luận văn i   TÓM TẮT Trong luận văn này, số nguyên liệu trà vùng trà Bảo Lộc, Lâm Đồng khảo sát để có thơng tin phục vụ cho việc lựa chọn nguyên liệu trích ly polyphenol Các yếu tố liên quan quy trình trích ly polyphenol từ trà phương pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng khảo sát thiết lập Các kết đạt từ thực nghiệm sau: Đánh giá bố phương pháp phân tích so màu, qua đề xuất sử dụng phương pháp Folin-ciocalteu cho q trình phân tích hàm lượng polyphenol tổng dịch trích Xác định điều kiện thực vi sóng q trình ức chế enzyme polyphenol oxidase trà trước trích ly Khảo sát giống trà vùng trà Bảo Lộc, Lâm Đồng lựa chọn giống trà HAT có hàm lượng EGCG catechin tổng cao làm nguyên liệu trích ly Xác định thơng số cho quy trình trích ly polyphenol từ trà phương pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng quy mơ phịng thí nghiệm Thăm dị tinh chế sơ dịch trích, tạo sản phẩm dạng bột có hàm lượng EGCG 35%, catechin tổng 70%, polyphenol tổng 95% Khảo sát số tính chất kháng oxy hóa, kháng khuẩn sản phẩm Kết cho thấy sản phẩm có hoạt tính kháng oxy hóa mạnh so với chất đối chứng (vitamin C, trolox), có tiềm để nghiên cứu ứng dụng   ii   ABSTRACT In this thesis, tea resources in Bao Loc, Lam Dong were investigated to obtain information for selecting a right type of material Experiments were carried out to evaluate involved factors and establish procedure of microwave-assisted extraction method for extracting polyphenols from fresh tea leaves The results were shown as below: Four quantitative spectrometric methods were investigated and Folinciocalteu method was employed to monitor polyphenols content in the extract A procedure for inactivating polyphenols oxidase enzyme in domestic microwave oven was established HAT tea resource, with the highest amount of EGCG and total catechins, was selected as suitable material for extraction Parameters were investigated for microwave-assisted extraction method A simple solvent-based procedure was used to purify the extract Antioxidant and antibacterial activities of polyphenols product were studied and compared with standard antioxidants Polyphenols product demonstrated a strong antioxidant activity but weak antibacterial activity in experiments     iii   MỤC LỤC TÓM TẮT I ABSTRACT II MỤC LỤC III DANH SÁCH CÁC HÌNH - SƠ ĐỒ - BẢNG – ĐỒ THỊ VI DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT X DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT X MỞ ĐẦU XI TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung trà 1.1.1 Sinh thái học trà 1.1.2 Phân bố trà 1.1.3 Thành phần hóa học trà 1.2 Nhóm hợp chất catechin trà 1.2.1 Tính chất hóa lý 1.2.2 Sinh tổng hợp catechin trà 11 1.2.3 Biến đổi sinh học hợp chất nhóm catechin trà trình sản xuất sản phẩm trà truyền thống 13 1.3 Tác dụng sinh học trà nhóm hợp chất catechin 15 1.3.1 Tác dụng dược lý trà 15 1.3.2 Hoạt tính kháng oxy hóa nhóm catechin 17 1.3.3 Ứng dụng khả kháng oxy hóa trà chất trích ly từ trà 20 1.4 Trích ly polyphenol từ trà 20 1.4.1 Lựa chọn chuẩn bị nguyên liệu 21 1.4.2 Phương pháp trích ly 23   iv   1.4.3 Các phương pháp trích ly đại 24 1.4.4 Phương pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng 25 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 30 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 30 2.2 Sơ đồ tiến hành thực nghiệm 30 2.3 Phương pháp thực nghiệm 31 2.3.1 Phương pháp phân tích HPLC 31 2.3.2 Phương pháp so màu 31 2.3.3 Lựa chọn nguyên liệu 35 2.3.4 Phương pháp ức chế hoạt tính enzyme 37 2.3.5 Xác định định tính thành phần chất trà 38 2.3.6 Đánh giá hàm lượng catechin trà nguyên liệu 38 2.3.7 Đánh giá hàm lượng số kim loại mẫu trà 39 2.3.8 Đánh giá phương pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng 39 2.3.9 So sánh phương pháp trích ly khác 41 2.3.10 Quá trình tinh chế sơ sản phẩm 42 2.3.11 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa in vitro 43 2.3.12 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa tiền in vivo – phương pháp MDA 44 2.3.13 Đánh giá khả kháng khuẩn sản phẩm polyphenol 44 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 45 3.1 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng 45 3.1.1 Phương pháp HPLC 45 3.1.2 Phương pháp so màu 47 3.1.3 Đánh giá phương pháp 51   v   3.2 Lựa chọn xử lý nguyên liệu 54 3.2.1 Điều kiện xử lý hoạt tính enzyme 54 3.2.2 Sơ hóa thực vật trà 59 3.2.3 Hàm lượng catechin mẫu trà nguyên liệu 60 3.2.4 Hàm lượng số kim loại có mẫu nguyên liệu trà (Phương pháp AS) 3.3 63 Đánh giá phương pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng 64 3.3.1 Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu : dung môi 64 3.3.2 Ảnh hưởng dung môi trích ly 65 3.3.3 Ảnh hưởng thời gian chiếu sóng, ngun liệu cơng suất lị 68 3.3.4 Ảnh hưởng chất kháng oxy hóa hỗ trợ 71 3.3.5 Hiệu trích ly 72 3.3.6 So sánh phương pháp trích ly khác 73 3.4 Tinh chế sơ đánh giá sản phẩm 74 3.4.1 Quá trình tinh chế 74 3.4.2 Tính chất sản phẩm 75 3.4.3 Đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa in vitro sản phẩm 76 3.4.4 Đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa tiền in vivo sản phẩm (phương pháp MDA) 78 3.4.5 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn sản phẩm 79 KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 PHỤ LỤC PHỤ LỤC   vi   DANH SÁCH CÁC HÌNH - SƠ ĐỒ - BẢNG – ĐỒ THỊ DANH SÁCH CÁC HÌNH  Hình 1.1 Cây trà búp trà Hình 1.2 Cấu tạo khung hợp chất catechin cách đánh số carbon .8 Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo hợp chất catechin trà Hình 1.4 Chu trình sinh tổng hợp tạo thành phenylpropan .11 Hình 1.5 Quá trình phản ứng kết hợp thành mạch chalcone 12 Hình 1.6 Chu trình sinh tổng hợp hình thành hợp chất catechin 12 Hình 1.7 Q trình oxy hóa hợp chất catechin trà 13 Hình 1.8 Biến đổi catechin trình quét gốc tự .19 Hình 1.9 Nguyên tắc gia nhiệt phương pháp thường (a) vi sóng (b) 28 Hình 1.10 Sơ đồ hệ thống trích ly có hộ trợ vi sóng (a) trích ly với sinh hàn hồn lưu lị monomode; (b) trích ly kín lị multimode 29 Hình 2.1 Màu tạo thành từ chất chuẩn tác chất phương pháp 35 Hình 2.2 Trà nguyên liệu sử dụng để trích ly polyphenol 37 Hình 2.3 Sơ đồ lắp ráp dụng cụ trích ly có hỗ trợ vi sóng 40 Hình 2.4 Sơ đồ trích ly phương pháp gia nhiệt thường 41 Hình 3.1 Đường chuẩn C, EC, EGCG, ECG, caffeine .45 Hình 3.2 Phổ HPLC chất chuẩn 46 Hình 3.3 Biến đổi màu trà xay nhuyễn sau khoảng thời gian xử lý khác .55 Hình 3.4 Màu dịch trích trà xử lý khoảng thời gian khác .57 Hình 3.5 Phổ đồ HPLC dịch trích trà 61 Hình 3.6 Màu dịch trích thu dung mơi khác 67 Hình 3.7 Sản phẩm polyphenol trà 74   83   TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Thanh Mai, Nguyễn Thị Hiền, Phạm Thu Thuỷ, Nguyễn Thanh Hằng, Lê Thị Lan Chi, Các phương pháp phân tích ngành cơng nghệ lên men, Đại học Bách Khoa Hà Nội, 2005 Nguyễn Thị Kim Oanh, Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà để ứng dụng vào thực phẩm dược phẩm, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Bách Khoa Tp.HCM, 2004 Đỗ Ngọc Quý, Cây chè Việt Nam : sản xuất, chế biến tiêu thụ, Nhà xuất Nghệ An, 2003 Hoàng Thị Sản, Phân loại thực vật học, Nhà xuất giáo dục, 2003 Lê Thị Hồng Nhan, Nghiên cứu chất màu tự nhiên từ hoè (Sophora Japonica L.) Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Bách Khoa Tp.HCM, 2002 Ngô Văn Thu, Bài giảng dược liệu, BM Dược liệu ĐH Y Dược Tp.HCM, BM Dược liệu ĐH Y Dược Hà Nội, Hà Nội, 1998 Andre Loupy, Trần Kim Quy, Lê Ngọc Thạch, Phương pháp học tổng hợp hữu cơ, Trường Đại học KHTN, 1995 Tống Văn Hằng, Cơ sở sinh hóa kĩ thuật chế biến trà, Tp.HCM, 1985 Irena Vovk, Breda Simonovska, Heikki Vourela, Separation of eight selected flavan–3–ols on cellulose thin layer chromatographic plates, Journal of Chromotography A 1077, p188 – 194, 2005 10 Lawrance Peter Wright, Biochemical analysis for identification of quality in balck tea (Camellia sinensis), Doctoral Thesis, University of Pretoria, South Africa, 2005 Tài liệu tham khảo 84   11 Liang Chen, Zhi Xiu Zhou, Variations of main quality components of tea genetic resources (Camellis sinensis (L.) O.Kuntze) preserved in the China National Germplasm tea repository, Plants food for human nutrition 60, p 31-35, 2005 12 Zohar Kerem, Hilla German-Shashoua, Oded Yarden, Microwave-assisted extraction of bioactive saponins from chickpea (Cicer arietnum L.), J Sci Food Agric 85, 406 – 412, 2005 13 D.I Tsimigiannis, V.Oreopoulou, Free radical scavenging and antioxidant activity of 5,7,3’,4’ – hydroxy substituted flavonoids, Innovative food science and emerging technologies 5, p 523 – 528, 2004 14 Joung Ho Ko, Gyoung Won Kang, You Jin Seo, Won Jo Cheong, C18 attached silica monolith microcolumns made in stainless steel tubing and their application in analysis of flavonoids in green tea extracts, Bull Korean Chem Soc 25, No 10 1589, 2004 15 Jan Wollgast, The contents and effects of polyphenols in chocolate, qualitative and quantitative analys of polyphenols in chocolate and chocolate raw products as well as evaluation of potential implications of chocolate consumption in human health, Doctoral thesis, Jutus Liebig University of Giessen, Germany, 2004 16 Kai On Chu, Chi Chiu Wang, Micheal Scott Rogers, Kwong Wai Choy, Chi Pui Pang, Determination of catechins and catechin gallates in biological fluids by HPLC with colormetric array detection and solid phase extraction, Analytica Chimica Acta 510, p 69 – 76, 2004 17 Lallie C McKenzie, John E Thompson, Randy Sullivan, James E Hutchison, Green chemical processing in the teaching laboratory: a convenient liquid CO2 extraction of natural products, Green Chem 6, p 355 – 358, 2004 Tài liệu tham khảo 85   18 S Azam, N Hadi, N.U Khan, S.M Had, Prooxidant property of green tea polyphenols epicatechin and epigallocatechin-3-gallate: implications for anticancer properties, Toxicology in Vitro 18, p 555–561, 2004 19 Stapleton PD, Shah S, Anderson JC, Hara Y, Hamilton-Miller JM, Taylor PW Modulation of beta-lactam resistance in Staphylococcus aureus by catechins and gallates Int J Antimicrob Agents 23(5), p 462- 467, 2004 20 Xu Jinze, Tea catechins : Epimerization, antioxidant activity and effect on body fatness in rats, Doctoral Thesis, The Chinese University of Hong Kong, 2004 21 Yasi Saffari, S.M Hossein Sadrzedeh, Green tea matabolite EGCG protects membranes against oxidative damage in vivo, Life Sciences 74, p 1513 – 1518, 2004 22 Ashu Gulati, Renu Rawat, Brajinder Singh, S.D Ravindranath, Application of microwave energy in the manufacture of enhanced – quanlity Green tea, Journal of argicutual and food chemistry, 51, p 4764 – 4768, 2003 23 Ayumiko Nakamura, Sumiko Tsuji, Yasuhide Tonogai, Analysis of proanthocyanidins in grape seed extracts, health foods and grape seed oil, Journal of health science 49, p 45 – 54, 2003 24 Begona Bartolome, Veronica Nunez, Maria Monagas, Carmen GomezCondorves, In vitro antioxidant activity of red grape skins, Eur Food Res Technol 218, p 173 – 177, 2004 25 Choi JH, Rhee IK, Park KY, Kim JK, Rhee SJ, Action of green tea catechin on bone metabolic disorder in chronic cadmium-poisoned rats, Life Sci 73(12), p 1479 – 1489, 2003 Tài liệu tham khảo 86   26 Ishizuk H, Eguchi H, Oda T, Ogawa S, Nakagawa K, Honjo S, Kono S, Relation of coffee, green tea and caffeine intake to gallstone in middle-aged Japanese men, Euro J Epidemiol 18, p 401 – 405, 2003 27 Pan T, Jankovic J, Le W, Potential theurapeutic properties of green tea polyphenols in Parkinson’s disease, Drugs aging, 20, p 711-721, 2003 28 Giancarlo Aldini, Kyung-Jin Yeum, Marina Carini, Norman I Krinsky, and Robert M Russell, (-)-Epigallocatechin-(3)-gallate prevents oxidative damage in both the aqueous and lipid compartments of human plasma, Biochemical and biophysical research communications 302, 409–414, 2003 29 Xuejun Pan, Guoguang Niu, Huizhou Liu, Microwave-assisted extraction of tea polyphenols and tea caffeine from green tea leaves, Chemical engineering and processing 42, p 129 – 133, 2003 30 Carmen W Huie, A review of modern sample-preparation techniques for the extraction and analysis of medicinal plants, Anal Bioanal Chem 373, p 23 – 30, 2002 31 Elena N Hristea, Mihaela Hillebrand, Miron T Caproiu, Horia Caldararu, Titus Constantinescu, Alexandru T Balaban, Scavenging the hydroxyl radical by 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl, Arkivoc (II), p 123-132, 2002 32 Hirota Fujikia, Masami Suganumab, Kazue Imaic, Kei Nakachic, Green tea: cancer preventive beverage and/or drug, Cancer Letters 188, p 9–13, 2002 33 Leticia M.Costa, Sandro T Gouveia, Joanquim A.Nobrega, Comparison of heating extraction procedures for Al, Ca, Mg and Mn in tea samples, Analytical sciences Vol.18, p 313 – 318, 2002 34 Lurdes Mira, M.Tereza Fernandez, Marta Santis, Rui Rocha, M.Helena Florencio, Keith R Jennings, Interactions flavonoids with iron and copper Tài liệu tham khảo 87   ions : A mechanism for their antioxidant activity, Free radical research, p 110, 2002 35 N L Rozzi, R.K Singh, Supercritical fluids and the food industry, Comprehensive reviews in food science and food safety, Vol 1, 2002 36 S Gupta, B Saha, A.K Giri, Comparative antimutagenic and anticlastogenic effects of green tea and black tea: a review, Mutation Research 512, 37–65, 2002 37 Conrad Astill, Mark R Birch, Clive Dacombe, Philip G.Humphrey, Philip T Martin, Factors affecting the caffeine and polyphenol contents of black and green tea infusions, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 49, p 5340 – 5347, 2001 38 David T Bailey, Parh L Yuhasz, Bo Lin Zheng, Method for isolation caffeine –free catechins from green tea, U.S patent 6.210.679, 2001 39 E.Surducan, Camellia Neamtu, V Surducan, Gabiela Nagy, S.Filip, Microwave power assisted sample preparation, extraction studies, Studia Universitatis Babes-Bolyai, Physica, Special Issue, 2001 40 Enrique Cadenas, Handbook of antioxidants, Second edition, www.vnulib.edu.vn/elibrary, Mercel Bekker Incorporated, 2001 41 Karin Schwarz, Grete Bertelsen, Lise R Nissen, Peter T Gardner, Marina I Heinonen, Anu Hopia, Tuong Huynh-Ba, Pierre Lambelet, Donald McPhail, Leif H Skibsted, Lilian Tijburg, Investigation of plant extracts for the protection of processed foods against lipid oxidation Comparison of antioxidant assays based on radical scavenging, lipid oxidation and analysis of the principal antioxidant compounds, Euro Food Res Technol 212, p 319–328, 2001 Tài liệu tham khảo 88   42 Yukihiko Hara, Green tea : Health benefits and applications, www.vnulib.edu.vn/elibrary, Marcel Dekker Incorporated, 2001 43 Angela Monks, Japanese Green Tea, Continued Investigation into Commercial Production and Development in Tasmania, Department of Primary Industries Water and Environment, Tasmania Gorvement, Tasmania, 2000 44 Athula Ekanayake, John Robert Bunger, Marvin Joseph Mohlenkamp, Green tea extract subjected to cation exchange treatment and nanofiltration to improve clarity and color, U.S patent 6.063.428, 2000 45 Ezio Bombardelli, Paolo Morazzoni, Giuseppe Mustich, Polyphenol fractions of tea, the use there of and formulations containing them, U.S patent 6.096.359, 2000 46 John H Weisburger, Tea and health: a historical perspective, Cancer Letters 114, p 315-317, 2000 47 Harsh P Singh, S.D Ravindranath, C Singh, Analysis of tea shoot catechins: Spectrophotometric quantitation and selective visualization on two – dimensional paper chromatograms using diazotized sulfanilamide, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 47, p 1041 – 1045, 1999 48 M.Letellier, H Budzinski, Microwave assisted extraction of organic compounds, Analusis (Wiley – VCH) 27, p 258 -271, 1999 49 Qiong Guo, Baolu Zhao, Shengrong Shen, Jingwu, Jungai Hu, Wenjuan Xin, ERS study on the structure – antioxidant activity relationship of tea catechins and their epimers, Biochimia et Biophysica Acta 1427, p 13-23, 1999 50 Yuko Yoshida, Masaaki Kiso, Tetsuhisa Goto, Efficiency of the extraction of catechins from green tea, Food Chemistry 67, p 429 - 433, 1999 Tài liệu tham khảo 89   51 Yukiaki, Yukihiko Hara, Antimutagenic and anticarcinogenic acitivity of tea polyphenols, Mutation Reasearch 436, p 69 – 97, 1999 52 Yam TS, Hamilton-Miller JM, Shah S The effect of components of tea (Camellia sinensis) on methicillin resistance, PBP2' synthesis, and betalactamase production in Staphylococcus aureus J Antimicrob Chemother 42(2), p 211-216, 1998 53 Z.Y.Chen, P.T.Chan, Antioxidative acitivity of green tea catechins in canola oil, Chemistry and physics of lipids 82, p 163 – 172, 1996 54 G Whittaker, Microwave Chemistry, www.tan-delta.com/microwave.html, 1994 & 1997 55 Terao J Piskula, M Yao Q, Protective effect of epicatechin, epicatechin gallate and quercetin on lipid peroxidation in phospholipid bilayers, Arch Biochem Biophys 308, p 278 – 284, 1994 56 Hemingway, R.W, Larks, Polyphenol plant, Lees G.L, 1992 57 Horrace D Graham, Stabilization of the Prussian Blue color in the determination of polyphenols, J Agric Food Chem 40, p 801 – 806, 1992 58 David N.Evans, Charles L Fairchild, Karl C Hramer, John C Sprill, Gerard J Wansor, Robert W Wood, Process for a non-clouding concentrated tea extract, U.S patent 4.797.293, 1989 59 Yukihiko Hara Shizuoka, Process for the production of tea catechins, US patent 4.613.672, 1986 60 T.A Geissman, The Chemistry of Flavonoid compounds, The Macmillan Company, New York, 1962 61 Maria Teresa Escribano Bailon, Celestino Santos-Buelga, Polyphenols extraction from foods, University of Salamanca, Spain Tài liệu tham khảo 90   62 Material Safety Data Sheet, (+)-Catechin, Hydrate MSDS, (-)- epigallocatechin gallate MSDS, caffeine MSDS, (-)- Epicatechin MSDS, (-)Epicatechin gallate MSDS, (+)-gallocatechin MSDS, www.Sciencelab.com Tài liệu tham khảo PHỤ LỤC TÍNH TỐN Tính tốn kết Các mẫu tiến hành lần, lấy giá trị trung bình, sai số tính theo độ lệch chuẩn SD (standard deviation) n Giá trị trung bình = Trong đó: i =1 i n ⎛ n ⎞ n∑ x − ⎜ ∑ xi ⎟ i =1 ⎝ i =1 ⎠ n(n − 1) n SD = ∑x 2 i xi : giá trị kết n : số thực nghiệm (n = 3) SD : độ lệch chuẩn (standard deviation) Nồng độ polyphenol tổng dịch trích - Phương trình đường chuẩn phương pháp Folin –ciocalteu (Chất chuẩn (+) – catechin, dung mơi ethanol 60o) A = 0.0039C + 0.0398 ỈC= A − 0.0398 0.0039 Trong đó: Phụ lục A : Độ hấp thu đo C : Nồng độ tính tốn từ phương trình hồi quy (μg/ml) Tổng polyphenol thu theo chất khô % chất khô = C.α Vdd 1000.md H Trong đó: C : nồng độ polyphenol tổng tính từ đường chuẩn (μg/ml) α : hệ số pha lỗng mẫu đo Vdd : thể tích dung dịch sau trích ly (ml) mđ : khối lượng nguyên liệu tươi sử dụng trích ly ban đầu (g) H : Độ ẩm (% - đo máy đo độ ẩm Scaltex) Tỉ lệ mg chất kháng oxy hóa/ mg DPPH EC50 (ppm) tính từ đồ thị, ứng với điểm 50% độ hấp thu so với A0 EC (μM) = EC 50( ppm) M AH mg AH = EC50 (ppm) * Vdd mg DPPH = C DPPH VDPPH M DPPH Vdd Trong : M DPPH : khối lượng mol chất kháng oxy hóa DPPH, M DPPH = 394đvc EC (ppm) : Giá trị EC50 tính theo nồng độ ppm EC (μM) : Giá trị EC50 tính theo nồng độ μM MAH : khối lượng mol chất kháng oxy hóa AH Phụ lục Số liệu đường chuẩn Phương pháp Folin-ciocalteu Dung môi nước caát C 22.400 44.800 A 0.099 0.207 SD 0.007 0.003 Đường hồi quy tuyến tính Dung môi ethanol 60o C 24.000 48.000 A 0.122 0.228 SD 0.003 0.003 Dung moâi ethanol 99.5o C 21.000 42.000 A 0.095 0.197 SD 0.001 0.002 Dung moâi methanol C 23.600 A 0.126 SD 0.002 47.200 0.218 0.001 Phương pháp Persian Blue Dung môi nước caát C 44.800 89.600 A 0.192 0.352 SD 0.007 0.003 Đường hồi quy tuyến tính Dung môi ethanol 60o C 48.000 96.000 A 0.142 0.315 SD 0.005 0.006 Phụ lục 89.600 134.400 0.402 0.588 0.003 0.004 y = 0.0042x + 0.0176 R2 = 0.9981 179.200 0.751 0.006 96.000 144.000 0.423 0.609 0.003 0.004 y = 0.0039x + 0.0398 R2 = 0.9982 192.000 0.772 0.006 84.000 126.000 168.000 0.395 0.565 0.742 0.001 0.001 0.002 y = 0.0044x + 0.0121 R2 = 0.9988 94.400 141.600 188.800 0.402 0.622 0.783 0.002 0.011 0.003 y = 0.004x + 0.0292 R2 = 0.998 134.400 179.200 0.515 0.650 0.007 0.010 y = 0.0036x + 0.0296 R2 = 0.9975 224.000 0.845 0.012 144.000 192.000 0.500 0.678 0.014 0.012 y = 0.0035x - 0.0183 R2 = 0.996 240.000 0.804 0.006 Dung moâi ethanol 99.5o C 42.000 84.000 A 0.150 0.300 SD 0.004 0.010 Dung moâi methanol C 47.200 A 0.172 SD 0.005 94.400 141.600 188.800 0.346 0.530 0.699 0.005 0.015 0.005 y = 0.0036x + 0.0123 R2 = 0.9974 Phương pháp VanillinHCl Dung môi nước cất C 22.400 44.800 A 0.046 0.087 SD 0.001 0.003 Đường hồi quy tuyến tính Dung môi ethanol 60o C 24.000 48.000 A 0.086 0.146 SD 0.003 0.005 Dung moâi ethanol 99.5o C 21.000 42.000 A 0.083 0.185 SD 0.005 0.009 Dung moâi methanol C 23.600 A 0.089 SD 0.004 Phụ lục 126.000 168.000 210.000 0.455 0.615 0.774 0.002 0.005 0.008 y = 0.0037x - 0.0101 R2 = 0.9998 47.200 0.179 0.012 89.600 134.400 0.173 0.262 0.011 0.009 y = 0.0034x + 0.0245 R2 = 0.9897 236.000 0.836 0.003 179.200 224.000 0.337 0.424 0.010 0.007 96.000 144.000 192.000 240.000 0.302 0.431 0.551 0.646 0.004 0.007 0.005 0.010 y = 0.0027x + 0.0317 R2 = 0.9943 84.000 126.000 0.340 0.510 0.011 0.001 y = 0.0037x + 0.023 R2 = 0.9965 168.000 210.000 0.661 0.784 0.003 0.008 94.400 141.600 0.355 0.536 0.008 0.003 y = 0.0019x + 0.0046 R2 = 0.9996 188.800 236.000 0.709 0.792 0.004 0.002 Phương pháp Diazotized Dung môi nước caát C 23.600 47.200 A 0.142 0.237 SD 0.003 0.001 Đường hồi quy tuyến tính 70.800 0.342 0.007 141.600 165.200 0.670 0.760 0.001 0.008 Dung moâi ethanol 60o C 24.000 48.000 A 0.136 0.251 SD 0.012 0.001 94.400 118.000 0.448 0.567 0.011 0.009 y = 0.0051x + 0.0149 R2 = 0.9985 72.000 0.380 0.005 144.000 168.000 0.756 0.853 0.002 0.007 Dung moâi ethanol 99.5o C 21.000 A 0.139 SD 0.002 96.000 120.000 0.509 0.638 0.007 0.013 y = 0.005x + 0.0109 R2 = 0.9984 42.000 0.229 0.007 63.000 0.331 0.008 126.000 147.000 0.625 0.718 0.004 0.009 Dung moâi methanol C 23.600 A 0.127 SD 0.006 84.000 105.000 0.429 0.526 0.004 0.011 y = 0.0045x + 0.0316 R2 = 0.999 47.200 0.237 0.009 70.800 0.361 0.011 94.400 118.000 0.485 0.609 0.003 0.005 y = 0.0046x + 0.039 R2 = 0.9999 141.600 165.200 0.722 0.814 0.050 0.002 Kết đo hoạt tính quét gốc tự DPPH Chất Nồng độ (ppm) Thể tích (μl) 20 30 40 50 60 70 Phụ lục Vitamin 276 A 0.621 0.443 0.338 0.269 0.216 0.144 0.025 C (μM) 0.000 1.227 1.840 2.453 3.067 3.680 4.293 Polyphenol 260 A 0.517 0.402 0.284 0.216 0.149 0.056 0.028 C (μM) 0.000 1.156 1.733 2.311 2.889 3.467 4.044 Catechin 236 A 0.592 0.337 0.250 0.195 0.121 0.089 0.068 C (μM) 0.000 1.049 1.573 2.098 2.622 3.147 3.671 PHỤ LỤC PHỔ HPLC ... tăng cường khả phòng bệnh thể 1.4 Trích ly polyphenol từ trà Do đặc điểm hàm lượng polyphenol trà, nên q trình trích ly polyphenol từ trà thường hiểu trích ly nhằm thu sản phẩm nhóm hợp chất... phẩm trà truyền thống trà đen, trà xanh, trà oolong, chưa trọng đến việc phát triển sản phẩm polyphenol từ trà Hiên có đề tài nghiên cứu khả sản xuất polyphenol từ trà Việt Nam, nghiên cứu nguyên... ngành công nghiệp trà Hiện nay, Việt Nam có nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà, chủ yếu tập trung vào phương pháp trích ly thường [2], việc có thêm nghiên cứu phương pháp trích ly khác vi sóng