Đang tải... (xem toàn văn)
Phân đoạn dịch chiết cloroform từ cây an xoa có tác dụng ức chễ tế bào ung thư mạnh trên các dòng: ung thư biểu bì miệng KB (ICso - 9,22 ụg/ml); ung thư gan Hep G2 (ICso = 15,7ụg/ml[r]
(1)BÀN LUẬN
Như trinh bày trên, viên nang Hồi Xn Hồn có tác dụng nâng cao thề ỉrạng cải thiện tình trạng suy nhược phối hợp vớỉ thuốc ARV bệnh nhân HlV/AiDS, tinh trạng suy nhược gây vệ khí suy làm ngoại tà thừa cớ xâm phạm Cơ thề bị ngoại tà công iâu ngày làm chfnh khí suy giảm, khí huyết bấí túc gây nên Viên nang Hồi Xn Hồn có nguốn gốc từ thuốc "Hữu quy ẩm" sách Cành Nhạc tồn thư có tác dụng bồi bo thận tĩnhìr ơn bổ thận dương làm cho chân âm, chân dương bền vững, dinh vệ điều hịa từ mà ngăn ngừa bách bệnh Đây tác dụng ơn bo thận dương, ơn ấm mệnh mơn hỏa Từ chức tỳ vị cải thiện, khí huyết đầy đù nhờ mà cải thiện thề trạng tỉnh trạng suy nhược, làm cho bệnh nhân thấy đờ mệt mỏi, ăn ngủ tốt, tăng cân Thuốc giúp hạn chế số tác dụng không mong muốn thuoc ARV
KẾT LUẬN
Từ kết qũả nghiên cứu cho phép rút số kết luận sau: (1) Viên nang Hồi Xn Hồn có tác
dụng tăng cường đáp ứng miễn dịch mơ hình thực nghiệm (2) Viên nang Hồi Xn Hồn có íác dụng nâng cao thể trạng cải thiện miễn dịch phổi hợp với ẦRV bệnh nhân HIV/AỈDS (3) Viên nang Hổi Xn Hồn phối hợp với thuốc ARV có tác dụng hạn chế so tác dụng không mong muốn thuốc ARV
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Phạm Thủy Phương, (2011), “Đánh già tốc dụng nâng cao thể trạng thuốc bổ thận trống dương (HXH) bệnh nhân HIV/AIDS", Luận văn toí nghiệp bác sĩ chuyên khoa II, nhd: Trương Việt Binh, Học viện y dược học cổ truyền Việt Nam
2 Đoan Minh Thụy, v ó Mạnh Hùng, Trương v iệ t Bình (2009), “Nghiên cứu độc tỉnh cấp bân trường diễn cùa viên nang HXH thực nghiệm’1, Tạp chí Dược học, số 399, tr 20-24
3 Bọ Ỷ tế (2009), Hướng dẫn chẩn đoàn điều trị HIV/AIDS, Nhà xuất Y học
4 Khoa Y học cổ truyền (2005), Bài giảng Y học cổ truyền, Tập I, Nhà xuất Y học
s Bộ NGHIÊN c ứ u THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG ứ c CHÉ
MỘT SỐ DÒNG TÉ BÀO UNG THỰ CỦA CÂY AN XOA
(Helicteres hirsuta Loureiro) TRÊN THỰC NGHIỆM
Ths Nguyễn Thị Nga;Ths Nguyễn Thị Quyên (bộ m ôn Hóa, trư n g Cao đẳng Y tế Hà Nội) N g i hư ng dan: TS Lê Thị Hải Yến; PGS.TSĨTạ Văn Bỉnh
(trư ng Cao đẳng Ỳ tế Hà Nội) TÓM TẲT
Trong nghiên cứu này, sơ xác định thành phần hóa học cày an xoa (Helicteres hirsuta Loureiro) thu hài Bình Phước có đường khử, terpenoid, coumarín, tanin flavonoid Phân đoạn dịch chiết cloroform từ an xoa có tác dụng ức chễ tế bào ung thư mạnh dịng: ung thư biểu bì miệng KB (ICso - 9,22 ụg/ml); ung thư gan Hep G2 (ICso = 15,7ụg/ml), ung thư phổi LU-1 ỢCsq = 11,2 ụg/mì).Tác dụng ức chế tể bào ung thư vú MCF-7 tương đối yều (ICso = 78,7 ụg/mi).
Từ khóa: an xoa, Helicteres hirsuta Loureiro, ức chế tế bào ung thư.
Research on Chemical Composition and Inhibitory effect some Cancer Cell Lines of Heliteres hirsuta
Lourelro in labo.
Nguyen Thi Nga; Nguyen Thi Q uyen; Le Thi Hai Yen; Ta Van Binh
Hanoi Medical College SUMMARY
This research, we have identified in the extract o f Helicteres hirsuta Lour, from Binh Phuoc - Viet Nam have glucose, terpenoid, coumarin, tanin and flavonoid Segment chloroform extraction from Helicteres hirsute Lour, have the strong effect o f inhibiting some cancer cell: KB (IC50 - 9.22 ụg/ml); (Hep G2 ICso = 15.7ụg/ml); LU-1 (IC50- 11.2ụg/ml), weak effect on MCF-7 (IC50 = 78.7 ụg/ml).
Keyw ords: Helicteres hirsuta Lour.; inhibiting cancer cell; KB; Hep G2; LU-1, MCF-7.
ĐẶT VẮN ĐỀ bệnh viện trị muộn, khiến cho hội Ung thư ià nguyên chữa khỏi bệnh thấp Theo thống kê gần đây, tỷ lệ nhân gây tử vong cao giới, nước ta chữa khỏi bệnh ung ihữ Việt Nam 35% [3Ị thường gặp nhấtTà ung thư: phổi, vú, đại trực tràng, Bên cạnh với việc điều trị ung thư ngoại khoa, dày, gan, tiền liệt tuyến, tổ' cung/cổ từ cung, thực hóa trị, xạ trị , ngày nhiều nhà khoa học quản, bàng quang, u lympho khơng hodgkin, khoang hướng tới tìm kiếm sử dụng thuốc với mục miệng, bệnh bạch cầu, tụy, buồng trứng thận Phần đích phịng, hỗ trợ điều trị ung thư Nhiều dược liệu lớn bệnh nhân ung thư (khoảng 70%) chĩ đến đừợc chứng minh có tác dụng ức chế, tiêu diệt tế
(2)-bào ung thư mạnh như: thơng đỏ, trinh nữ hồng cung, dừa cạn, nghệ vàng, tam thất bắc [2], [5]
Cây an xoa (tổ kén cái, Helicteres hirsuta Lour, thuộc họ Trôm) mọc phổ biến ven rừng, bãi hoang khắp Việt Nam nước châu Á, có tác dụng chữa ung nhọt, tiêu độc [1] gây độc tể bào
I II ị»»Ãl^ ịUl OM MMÂw«rT1 T 11*1 ^A«<« Ả »*v i
l ỉ ( l y I n L í U C I I U l ự u j I uy M i l t o n t s i ì u u c i ) H a y , nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược lý cua Helicteres hirsuta Lour, cịn hạn chế
Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược ly dược iiệu này, mục tiêu đề tài đặt là:
1 Sơ nghiên cứu thành phần hóa học của cây an xoa
2 Đánh giá tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thư an xoa thực nghiệm
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứ u Đổi từợng, địa điểm nghiên cứu
H i /V D ip tl n D KmjAi a f k ) Ị K A)
U Ư Ự i ỳ /7ệ?u\ w a y u u n y w w II111 I n ir w w t U iU ĩ V i 10/2015, GS.TS Phan Kế Lộc - khoa Sinh học - Đại học Quốc gia Hà Nội giám định khẳng định mấu an xoa {Helicteres h irsu te Loureiroj
Dược liệu tươi íoạị bỏ rễ rửa sạch, sấy khô ioo°C trong tủ sấy Xay thành bột thô (40,00g) tiết hành chiết chuân bị mẫu thỉ nghiệm theo sơ đ i
Sơ đ ò 1: Chuẩn bị mẫu thí nghiệm từ dược liệu an xoa Các dịng tế bào ung thư: đạt tiêu chuần quổc tế có
nauồn gốc từ Bảo tàng giống chuẩn Hoa ky (ATCC) gom: Ung thư biểu mô bieu bi miệng KB (CCL -17™); Ung thư gan Hep G2 (HB - 8065™); Ung thư phổi LU-1 (HTB - 57™); ủng thư vú MCF-7 (HTB - 22™)
Nghiên cứu tiến hành mơn Hóa - trường Cao đẳng Y tế Hà Nội phịng Hóa sinh ứng dụng - Viện Hóa học-Viện Khoa học va Cơng nghệ y iệ t Nam
2 Hóa chất, dụng cụ dịng tế bào ung thu*
* Hoá chất, dụng cụ: Tất thuốc thử hóa chát đạt tiêu chuẩn phân íích
- n-hexan; cioroform; methanol; nưởc cất ; gelatin 5%; FeCis 5%; NH3
- Thuốc thử: Fehiing; Dragendoff (KBil4); Bouchardat (l2/KI); Mayer; Diazo (acid sulfanilic); ninhydrin 0,2%
* Dụng cụ: Máy quang phổ Genios Tecan Nhật
3 Phương pháp nghiên cứu
3.1 Sơ nghiên cứu thành phần hóa học an xoa
Các nhóm chất khảo sáí dịch chiết: dung dịch 1; 2; phương pháp hóa học với thuồc thử đặc trưng
3.2 Đành giá tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thư an xoa
* Chuẩn bị thí nghiệm
Các dòng tế bào lưu giữ nỉtơ lỏng, hoạt hóa tri mơi trường dinh dưỡng DMEM (Dulbeccos Modified Eagle Medium) MEME (Minimum Esental Medium with Eagle salt) có bổ sung 7-10% FBS (Fetal Bovine Serum) số ỉhành phần thiết yếu khác Tế bào nuôi điều kiện tiêu chuẩn (5% C 2, độ ẩm 98%, nhiệt độ 37°c, vô trùng tuyệt đoi) cấy chuyển 1-2 iần trước thí nghiệm Tế bào phát triển pha log (logarid - pha có vi khuẩn sinh trưởng phát triển mạnh theo cấp lũy thừa) đưực sử dụng để thử độc tính
*Tién hành thí nghiệm
- Trypsin hóa te bào thỉ nghiệm để làm rời tế bào đếm buồng đếm tế bào! Tiếp đó, pha tế bào mơi trường điều chỉnh mật độ cho phù
(3)-hợp với thí nghiệm (khoảng 3-5x1 o4 tế bào/ml tùy theo dịng tế bào)
_ tht^ : róãu hịa tan dung mơi
DMSO (Dimethyl sulfoxide) vởi nồng độ ban đầu 20 mg/ml Tiến hành pha loãng bước trền đĩa 96 giếng dãy nồng độ từ cao xuống thấp 2564, 640, 160, 40 10 |jg/mỉ Nồng độ chầt thử đĩa thử nghiệm tương ứng 128, 32, 8, 0.5 pg/mi Chấỉ tham chiếu Ểílipticine pha DMSO với nong độ 0,01 mM
- Lấy vào giếng 10 Ịii chất thử chuẩn bị 190 ụl dung dịch íế bào Đối chứng dương thí nghiệm mơi trường có chứa tế bào, đối chứng âm có mơi trường ni cấy Đĩa thí nghiệm ù điều kiện tiêu chuẩn 72 Mỗi giếng thí nghiệm tiếp tục ủ với 10 ụi MTT (3-(4,5- dimethylthiazoi -2-yl)-2,5-diphenyiteỉrazolium) mg/ml 4h Sau ỉóại bỏ mơi trường, tinh thề formaran hòa tan i 00 |JỈ DMSO 100%
- Kết thí nghiệm xác định giá trị OD đo bươc sóng 540 nm máy quang Genios Tecan Thí nghiẹm lặp lại lan
* Phương phấp x lý so liệu: Giá trị IC50 xác định thông qua giá trị % ức chế tế bào phát triển phần mềm máy tĩnh Rawdaia
% ức chế tế bào = (ODchứng (+) - ODmIu thửVíODehứng (+)■— o^chứng {-}) X 100
(Highinh% - 50) X (HighCono - LowCcJ ÍC50 = HighConc -— — - -
-High!nh% * Lowinh%
(Trong đó, Highconc/1-OWconc: chất thử nồng độ cao/chất thử thấp nồng độ thấp; Highinh0/t/L0Winh%: % ức chế nồng độ cao/% ức chế nấng độ thấp).
Kết thí nghiệm ià giá trị trung bỉnh lan lặp lại thí nghiệm ± độ lêch chuẩn (SD) [4],[6]
KẾT QÙẢ VÀ BÀN LUẬN
1 Sơ nghiên cứu thành phần hóa học của
cây an xoa
Kết sơ nghiên cứu thành phần hóa học nhóm chất an xoa phương pháp hóa học thể bảng
Bảng 1: Kết qua xác định thành phần hóa học cùa an xoa
TT
Nhóm chất Kết định tính dung dịch Kết luận sơ
1
1 Đường khử - Phản ứng Fehiinq
++ - ++ ++ Có
2 Terpinoid - Phản ớỉig với
H2S04đặc
+ + Có
3 Aicaloid
- Phân ứng Mayer - Phản ứng Dragendorff - Phản ứng Bouchardàt
Không
4 Coumarin
~ Phản ứng Diazo -Phản ứng mờ vịng
iacíon
++■ ++ + Có
5 Tanin
Phản ứng với FeC!3 5% Phản ứng qeíatin 5%
+ + Có
6 Acid amin
TT ninhydrin - - - - Không
7 F!avonoid
-Phản ứng Cyanidin -Phản ứnq với NH,
++ ++ + Có
Ghi chú: Dung dịch 1: dung môi methanol; dung dịch 2: dung môi n-hexan; dung dịch 3: dung môi cioroform; dung dịch 6: dung mơi nước
Định tính phương pháp hóa học, chúng tơi phát có nhóm chất hóa học mẫu nghiên cứu là: đường khử; terpinoid; coumarin, tanin flavonoid
2 Đánh giá tác dụng ức chế tế bào ung thư
của dịch chiết an xoa
Để' đánh giá tác dụng ức chế tế bào ung thư phân đoạn chiết an xoa, chủng tiến hành nghiên cứu mẫu thử với tế bào ung thư biểu bl miệng Kết nghiên cứu thể bảng
Bang 2: Tác dụng ức chế tế bào ung thư biểu bì miệng KB (CCL-17™)
STT Tên mẫu thử Giá trĩ ICsoÍMq/nii)
1 Mâu I >128
2 Mâu II 9,22
3 Mấu 111 66,56
4 Chất tham khảo: Eiliptỉcine
0,28
Mau II cắn thu phân đoạn chiết cloroform có giá trị IC50 = 9,22(ụg/ml) đáng quan tâm Vì theo phương pháp đánh giá tác dụng ức chế tế bào ung ỉhư giá trị IC50 s 20 ụg/ml (với dịch chiết thô) IC50 20 ụM (với chất sạch) đừợc đanh giá co hoạt tính gảy độc tế bào đáng quan tâm, có khả ức chế hoạc diẹt tế bào ung thư[4],[6]
Nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Young-Won Chin cộng [7] xác định với cấn chiết cloroform từ Helicteres hirsuta Lour, có tác dụng ức chế tế bào ung thư tuyến tiền liệt người ià IC50 = 9,1 ụglmì Tác giả xác định dịch chiết tù’ thân an xoa có lignan la (±)pĩnoresinol; (±)syringaresinol; (-)-boehmenan; (- )boehmenan H (±)trans - dihydrodiconiferyl alchol Trong chất: (±)pinoresínoi; (-)-boehmenan (-) boehmenan H có tác dụng ức chế tế bào ung thư mạnh dòng ung thư phổi, ung thư tuyến tiền liệt, ung thư vú ung thư nội mạc tĩnh mạch rốn
Các lignan có kha tan nước, methanol, tan tốt doroform khơng tan n-hexan Vì phần cân chiết cloroform có tác dụng ửc chế tể bào ung thư biểu bì mạnh (IC50 = 9,22|jg/ml) nghiên cứu ià phù hợp với nghiên cứu công bố[7|
Chúng tiếp tục nghiên cứu tác dụng ức chế tế bào ung thư mằu II dòng tề bào ung thư gan; ung thư phổi ung thư vú., kết thể bảng
(4)-Bảng 3: Kết thử hoạt tính độc tế bào ung thư dịch chiết an xoa
STT Tên mẫu Giá trị IC5o(Mg/ml)
Hep G2 Lu-1 MCF-7
1 Mẫu E! 15,7 11,2 78,7
2 Chất tam chiếu: Ellipticine
0,25 0,36 0,5
Kết qua nghiên cứu cho thấy dịch chiết cioroform Helicteres hirsuta Lour, có tác dụng ức chế mạnh tế bào ung thư gan Hep G2 (IC50 = 15,7 |jg/ml) tế bào ung thư phoi Lu-1 (ỈC50 = 11,2 ụg/mi) Tuy nhiên tế bào ung thu’ vú MCF-7 tác dụng ức che dịch chiết yếu (ỈC50 = 78,7|jg/ml) Điều !ý giải dịch chiết chúng tơi cịn thơ nên xác định tác dụng ức chế tể bảo ung thư vú có kết thấp, khác với nghiên cứu Young-Won Chin cộng phân lập chất tinh khiết ià (±)pinoresinol thân Helicteres hirsuta Lour, có IC50 = 1,7|jg/ml[7]
Nghiên cứu phần làm sáng tỏ việc sử dụng an xoa Helicteres hìrsuta Lour, dân gian với mục đích hỗ trợ điều trị ung thư gan, nhiên cần phải có nghiên cửu sâu
KẾT LUẬN
Mâu cây* an xoa chúng tơi thu hái Bình Phước vào tháng 10 năm 2015 cờn gọi tổ kén cái, tên khoa học Helicteres hirsuta Lour
- Sơ nghiên cứu thành phần hóa học, chủng tơi xác định dịch chiết an xoa có chứa đường khử, terpenoid, coumarin, tanin flavonoid
- Phân đoạn chiết cloroform từ an xoa có tác dụng ức chế mạnh tế bào ung thư biểu bì IC50 = 9,22(Ịjg/ml); ung thư gan ICso = 15,7(Mg/nil); ung thư phổi IC50 = 11,2(pg/ml) tác dụng yếu tể bào ung thư vú MCF-7 IC50 = 78,7ụg/mí
KIẾN NGHỊ
Kết quà nghiên cứu bước đầu cho thấy dịch chiết từ an xoa (Helicteres hirsuta Lour.) có tác dụng ức chế tế bảo ung thư biểu bì, ung thư gan ung thư phổi nồng độ thấp (ICso = 9,22 - 15,7 ụg/ml) đáng quan tâm VI chung kiến nghị can tiếp tục có
những nghiên cứu sâu thành phần hóa học, tác dụng dược lý an xoa để góp phần phát triển dược iiệu nước nhà
TÀ! LIỆU THẢM KHÀO
[1].Võ Văn Chi (2013),
Tư điển cày thuốc việt nam, tập (bộ mới), Nhà
VI l ố t h ả n V h r t r t r a n n Ị D Ị Ị
(2 rĐ ô T ấ a ợ T (2 Ỗ l4 )!
Những thuốc vị thuốc Việt Nam (In lần thứ 18), Nhà xuất Hồng Đức, Hà Nội.
[3] Hoàng Thùy (2013),
Phương pháp phât sớm bệnh ung thư, Nhà xuất Thời đại
[4].Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney s., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988),
“Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor ceil lines”, Cancer Reseach Voi.48:4827-4833.
[5] Savithramma Naturu, Yugandhar Pulicherla, Bhumi Gaddala (2014),
“ A Review on medicinal plants as a potential source for cancer”, International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, Volume 26(1), May-Jun 2014, pages 235-248
[6] Tim Mosmann (1983),
“Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assay”, Journal o f immunological methods, Vol 65: 55- 63
[7}.Young-Won Chin illiam p Jones, Ismail Rachman, Soedarsono Riswan, Leonarđus B.s Kardono, Hee-Byung Chai, Norman R Farnsworth, Geoffrey A Cordell, Steven M Swanson, John M Cassady and A Douglas Kinghorn; (2006),
“Cytotoxic lignans from the stems of Helicteres hirsuta collected in Indonesia”, Phytotherapy Research, Volume 20 Issue January 2006, pages 62-65
ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA BÀI THUÓC “TỨ VẬT TIÊU PHONG ẢM” TRONG ĐIÊU TRỊ VIÊM DA CƠ ĐỊA
Nhóm nghiên cứu: Nguyễn Thị Phượng
(Thạc sỹ, Bác sỹ, Bộ môn Da liễu, Học viện Y Dược học co truyền Việt Nam)
Nhóm hướng dẫn: TS.Đồn Minh Thụy (Bộ mơn Ngoại YHCT, Học viện Y Dược học cồ truyền v iệ t Nam)
ís Đương Minh sớn (Bệnh viện Y học cổ truyền Trung ương) TÓM TÁT
Mục tiêu: Đánh già tác dụng thuốc số số lâm sàng cận lâm sàng bệnh viêm da địa
(VDCĐ).
ĐỔI tượng phương pháp nghiên cửu: 40 bệnh nhân chần đoán VDCĐ giai đoạn bốn cấp yà mạn
tính theo tiêu chuẩn Hanifin Rajka 1980, tuổi từ 12 trử lên Bệnh nhân tham khẳm lâm sang theo y học đại y học cổ truyền, đành giá mức độ bệnh theo thang điểm SCORÁD, xét nghiệm công thức màu trước sâu điều trị Thời gián uống thuốc 30 ngày.