Nghiên cứu này tiến hành nhằm mục tiêu xác định đột biến khảng thuoc thứ phát T790M trên gen EGFR ờ 'bệnh nhân ung thự phổi không tế bào nhỏ có dấu hiệu kháng thuốc điều trị đích.Kỹ [r]
(1)MÓI LIÊN QUAN GIỮA KIẺU GEN SNP309GG - MDM2 VÀ NGUY C UNG THƯ PHỔI
Báo cáo viên: ThS.BSNT Trần Khánh Chi (Bộ m ôn H o s in h , Trường Đại h ọ c Y H Nội) Giáo viên hướng dẫn: TS.BS Trần Huy Thịnh (Bộ m ơn Hố sinh, Trường Đ ại h ọ c Y H Nội) TĨM TẮT
Đặt vấn đề: Protein MDM2 đóng vai trị quan trọng quố trình sinh trưởng chết theo chương trình cửa tế bào thơng qua tương tàc với[protein p53 Đa hỉnh thái nucleoỉid đơn (Single Nucleotide Polymorphism- SNP) tạ[ vị trí 309 vởi biến đồi T>G gen MDM2 đuực tăng mức độ MDM2 RNA prvtein MDM2 cố dẫn đến ung thư phổi Mục tiêu nghiên cứu: xác định nguy mắc ung thư phổi Hên quan đền SNP 309 T>G gen MDM2 Đối tượng nghiên cứu: 227 bệnh nhân chần đoán xác đĩnh ung thư phổi nguyên phát Trung tâm Hô hấp, Trvng tâm Y học hạt nhân Ung bướu - Bệnh viện Bạch Mai 297 người không mắc ung thư phổi đuực phân tích số đặc điểm lâm sàng xác định SNP 309 T>G gen MDM2 liên quan đến nguy gây ung thư phổi Kết quả: kiểu gen SNP 309GG gen MDM2làm gia tăng nguy ung thư phồi 1,6 lần với OR-1,6; 95%CI=1,10-2,41 nguy ung thư phổi không tế bào nhỏ 1,58 lần với OR=1,58; % C M ,04-2,41
nguy ung thư phổi ung thư phổi khơng tế bào nhỏ theo mơ hình gen lặn, kết hợp với hút thuốc /á nguy cơ mắc ung thư phổi cao 2,21 lần.
Từ khóa: Gen MDM2, SNP 309 T>Ggen MDM2, ung thưphỗi. SUMMARY
MDM2 309 GG POYMORPHISM AND RISK OF LUNG CANCER
Tran Khanh Chi, Tran Huy Thinh (Hanoi Medical University) Background: The MDM2 protein plays an important role in regulating cell proliferation and apoptosis via interaction with p53 protein Single nucleotide polymorphism (SNP) located in nucleotide 309 T> G MDM2 gene has been shown to be related to lung cancer Purposes: this study was conducted to identify the correlation between the MDM2 SNP309 and lung cancer risk Materials and method: 227 patients were diagnosed with lung cancer in the Respiratory Center, Nuclear Medicine and Oncology Center-Bach Mai hospital and 279 controls patients were selected to analyze clinical features and the association o f MDM2-SNP309 with lung cancer risk Results: the 309GG genotype was associated with a significantly increased risk o f lung cancer (OR=1.6; 95%CI=1.10-2.41),adenocarcinoma (OR=1.58; 95%CI-1.04-2.41) in recessive model The person with 309GG genotype, who were also smoking, had 2.21 fold higher risk o f lung cancer (95%CI = 1.31-2.73) Conclusion: the 309 GG genotype is associated with increasing lung cancer risk and adenocarcinoma in recessive model (OR =
1.6, 95%CI =1.1- 2.41) and the 309GG genotype with smoking further increases lung cancer risk (OR=2.21; 95%CI = 1.31-2.73),
Keywords: MDM2 gene, MDM2-SNP 309 T>G, lung cancer.
ĐẶT VÁN ĐẺ đường ubiquitin hoá [4][5][6] Nhiều nghiên cứu tính
Ung thư phổi (UTP) bệnh lý ác tính vởi tỷ lệ đa hình thái gen MDM2 ghi nhận SNP quan trọng mắc 1,8 triệu người (12,9%) 1,6 triệu người nằm vị trí 309 - SNP309 (rs2279744), (19,4%) tử vong hàng năm giới [1] Tuy nhiên, biến đổi từ nucleotid T thành nucieotid G chế bệnh sinh UTP chưa hoàn toàn sáng tỏ, chứng minh làm tăng lực hoạt hóa phiên mã UTP thực thách thức cho y tế toàn Sp1 dẫn đến biểu mức độ cao hớn mRNA cầu có Việt Nam.Bên cạnh yếu tố nguy vả protein MDM2, gây ức chế côn đường tín hiệu hút thuốc lá.hiện nhà khoa học tập p53 [7] Đa hình thái chì liên quan đến trung nghiên cứu vai trị kiểu gen việc xác nhiều loại ung thư đỏ có UTP Tuy nhiên, kết định cá thể nhạy cảm với ung thư Nghiên cứu quồ nghiên cứu giới chưa khẳng định sâu lĩnh vực có íhể giúp hiểu biết sâu quán quần thể nghiên cứu khác nhau, nguy UTP gen nhạy cảm Đề tài tiển hành với mục tiêu: Xác định
Nghiên cứu tập trung vào gen MDM2, yếu tố nguy mắc ung thư phổi liên quan đến SNP309 T>G điều hồ âm tính protein p53 - protein có vai trị áp gen MDM2.
chế ung thư đường tín hiệu p53 [2][3Ị Gen ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u MĐM2 nằm nhảnh dài nhiễm sắc thể sổ 12 Đối tipợng nghiên cứu
vị trí băng vùng 14 đến vùng 15 Protein MDM2 227 mẫu 'máu cùa bệnh nhân UTP nguyên phát gắn trực tiểp với protein p53 ức chế hoạt tính Trung tâm Hơ hấp, Trurig tâm Y học hạt nhân vồ Ung chung, đồng thời MDM2 cịn thúc ổẩy q trình bướu - Bệnh viện Bạch Mai, chẩn đoán xác định giáng hoá protein p53 tế bào thông qua mô bệnh học
(2)279 mẫu máu cùa nhóm chứng không mắc loại ung thư, tươnc; ứng tuổi giới với nhóm bệnh
2 Hóa chẫit
Hoá chất dùng nghiên cứu cung cấp hãng QIAGEN, Sigma, Fermentas!
3 Phương pháp nghiên cứu
Tách chiết DNẢ tong số từ mẫu máu theo phương pháp sử dụng enzyme protease K phenol: chloroform: isoamyl alcohol
Xác định kiểu gen SNP309 gen MDM2 phương pháp RFLP-PCR (Restriction Fragment Length Polymorphism - PCR):
Khuếch đại vùng gen SNP309 gen MDM2 phương pháp PCR, sử dụng cặp mồi đặc hiệu:
F: 5’-CGCGGGAGTTCAGGGTAAAG-3' R: 5-CTGAGTCAACCTGCCCACTG-3’
Phân íích RFLP: Đoạn gen nghiên cứu chứa trinh tự nhận biết enzym M spAIỈ (CCGịCTG) vị trí SNP309 Binh thường vị trí SNP309 cùa gen MDM2 T, khơng chứa vị trí nhận bỉếỉ enzym MspAli, đoạn gen khuếch đại không bị cắt giữ nguyên kích ỉhước 157bp, tượng ứng với kiểu
MspAli, đoạn gen bị cắt tạo cốc đoạn DNA có kích thước 48 bp 109 bp, tương ứng VỚI kiều allele G (mutant type-GG)
4 Xử Ịý sổ lieu
Sử dụng phần mềm SPSS 20.0, tính ỉốn tỷ suất chênh OR, 95%CI, khác biệt có ý nghĩa íhống kê p < 0,05
5 Đạo đức nghiên cứu
Đề ìài đâ íhơng qua Hội đồng Đạo đức
Trường Đại học Y Hà Nội Bệnh nhân hoàn toàn tự nguyện tham gia vào nghiên cứu Bệnh nhân có quyền rúí lui khỏi nghiên cứu khơng đồng ý tiếp tục tham gia vào nghiên cứu Các thông tin cá nhân đảm bảo bí mật
KẾT QUẢ
1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu
Đặc điểm
Nhóm ung thư phổi ■ n = 227
Nhóm chứng n = 279 p n{%) n<%) Tuổi (năm) 60,27 ± 9,07 61,17 ±
11,99 0,18 Giới NamNữ 169 (74,4) 194(69,5) 0,23
58 (25,6) 85 (30,5)
Mô bệnh
học
UTP không tế íế bao
nhỏ
UTBM
tuyến 181 (79,8) UTBM vảy 13(5,7) UTBM loại
khác 10(4,4) UTP tê bào nhỏ 23(10,1)
Hút thuốc Có 121 (53,3) 111 Í39.8) 0,03 Khơng 106 (46,7) 168 (60,2)
Nhận xéí:
Tuổi trung binh cùa nhóm bệnh 60,27±9,07 khơng khác biệì với tuồi nhóm chứng 61,17 ± 11,99 Tỷ lệ nam/nữ 2,91/1
Ung thư biểu mơ tuyến chiếm ìỷ lệ cao typ mô bệnh học
Tỷ lệ hút thuốc nhóm bệnh íà 53,3% cao có ý nghĩa so với nhóm chứng (p=0,03)
Khơng gặp nữ giới hút thuốc írong nghiên cứu
2 Kết phân tích PCR-RFLP SNP309 T>G gen MDM2
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
157 bp “ 109 bp »48 bp
Hình 1: Hình ảnh điện dĩ sản phầm cắt đoạn gen MDM2 mang SNP309T>G enzym MspAli
Kiếu gen.dị hợp tử TG
Nhận xét: Sản phẩm cắt đoạn gen MDM2 mang gen đồng hợp tử G/G gồm băng DNA có kích thước SNP309 enzym M spAli gồm đoạn DNA co 109 bp 48 bp (giếng 2,4,6, 7, 10, 11) Mầu mang
(3)kiểu gen dị hợp tử T/G gồm băng DNA có kích thước 157bp, 109 bp 48 bp (giếng 3, 9)
Bang 2: Tần sổ kiểu gen SNP309 T>G gen
Kiểu gen
Ung thư phổi (n = 227)
Nhỏm chứng
(n - 279) OR (95%CI)
n % n %
TT 60 26,4 65 23,3 (Reference)1,00 TG 102 44,9 158 56,6 0,7(0,46-1,08) GG 65 28,6 56 20,1 1,26 (0,76-2,08) AlenT 222 48,9 288 51,6
Alert G 232 51,1 270 48,4 GG với
rr+TG
TT+TG 162 71,4 223 79,9 (Reference)1,00 GG 65 28,6 56 20,1 1,6(1,10-2,41) GG+TG với
TT
, TT 60 26,4 214 76,7 1,00
(Reference) GG+TG 167 73,6 65 23,3 0,85(0,26-1,27) Nhận xét:
- Kiểu gen dị hợp tử SNP 309TG chiếm tỷ lệ cao nhất nhỏm bệnh nhóm chứng.
- SNP 309GG làm tăng nguy mắc UTP 1,6 lần theo mơ hình gen lặn
Bảng 3: Tân sổ kiểu gen SNP 309 T>G gen MDM2 nguy mắc ung thư phổi liên quan đến
Nhóm OR GG/TT (95%CI) OR TG fiT (95%C!) OR GG/TG+TT (95%C!) OR GG+TG/TT (95%CỈ) Giởi Nam 1,28 (0,71-2,29) 0,7 (0,42-1,16) 1,6 (1,01-2,61) 0,86 (0,53-1,38) Nữ 1,19 (0Í45-3.15) 0,7 (0,32-1,61) 1,5 (0,67-3,35 0,83 (0,38-1,8) GPB UTBM không tế bào nhỏ 1;3 (0,77-2,17) 0,74 (0,48-1,16) 1,58 (1,04-2,41) 0,89 (0,58-1,35) UTBM tế bào nhỏ 1,02 (0,35-2,98) 0,41 (0,15-1,14) 1,74 (0,68-4,44) 0,57 (0,23-1,4) Hút thuốc Có 1,89 (0,9-3,96) 1,05 (0,54-2,03) 1,83 (1,02-3,27) 1,3 (0.7-2.4) Không 0,78 (0,38-1,59) 0,5 (0,28-1,89) 1,23 (0,67-2,24) 0,37 (0,53-1,98) GG hút thuốc
OR = 2,21 (95%CI = 1,31-2,73)
tăng nguy mắc UTPỞ nam giới UTP không tế bào nhỏ 1,6và 1,58 lần theo mơ hình gen lặn
Hút thuốc iá làm tăng nguy mắc UTP 1,83 lần theo mơ hình gen lặn SNP 309GG gen MDM2
Người mang kiểu gen SNP 309GG có hút thuốc tăng khả mắc UTP 2,21 lần
BÀN LUẬN
Tuổi trung bình nhóm bệnh nhân UTP nghiên cứu íà 60,27±9,07 khơng khác biệt với tuổi nhóm chứng ià 61,17 ± 11,99 (p=0,18).Kết qua phù hợp với ghi nhận cùa sổ nghiên cứu nước.Theo Ngô Quý Châu cộng (2012), tuổi trung binh bệnh nhân UTP 58,9 ± 8,6 [8] Kết nghiên cứu cho thấy tĩ lệ nam /nữ 2,91/1 phù hợp với đặc điểm dịch tễ học UTP nam nhiều nữ [1]
Kết nghiên cứu ghi nhận kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG làm gia tăng nguy mẳc UTP 1,6 lần so với kiểu gen kết hợp SNP 309TT TG (OR=1,6; 95%CI=1,1-2,41; mơ hình gen íặn) Kết phù hợp với nghiên cứu người miền Bắc Trung quốc Xu Wang cộng công bố năm 2014 ghi nhận tỷ lệ mắc UTP cao nhóm người mang kiều gen SNP 309GG so với TG+TT (p=0;043); đồng thời Xu Wang không thấy mối liên quan tính đa hỉnh SNP 309 gen MDM2 với nguy mắc UTP theo mơ hình gen trội nguy mắc UTP nói chung[9j.Gui cộng năm 2009 ghi nhận kiểu gen SNP 309GG gen MDM2 íàm tăng nguy mắc UTP người châu Ả với OR = 1,34; 95% Cl = 1,01—1,79 [7j
Phân tích mốir liên quan SNP 309 gen MDM2 với thói quen hút thuốc cho thấy gia tăng khả mắc UTP 2,21 lần người kĩẻu gen GG có hút thuốc lá.Điều phù hợp với nghiên cứu giới chứng minh hút thuốc ĩà yểu tố ngụy dẫn đến UTP người có kiểu gen SNP 309GG hút thuốc ỉá làm nguy mắc UTP cao gấp lần Tuy nhiên, kết thu từ nghiên cứu tráỉ ngược với công bố Wenwu He cộng năm 2012 ghi nhận nguy mắc UTP tăng người không hút thuốc mang kiểu gen GG (OR=1,328; 95% Cl= 1,119-1,575) [10] Điều gợi ý tương tác phức tạp kiểu gen nhạy cảm ung thư vởi yểu tố nguy khác qũa trình phát sinh phát triền ung thư cần nghiên cứu sâu ve chế bệnh học phân tử
Phân tích mối liên quan cùa SNP309 gen MĐM2 VỚI typ mô bệnh học, nghiên cứu ghi nhận kiểu gen GG làm tăng khả mắc UTP không tế bào nhỏ 1,58 lần Sun Ha Park cộng năm 2006 công bố kiểu gen SNP 309GG gen MDM2 làm tăng nguy ung thư biểu mô tuyến 1,91 lần (OR = 1,91, 95% Cl = 1,16— 3,14) [11] Chúng tơi tiến hành phân tích tìm mốỉ liên quan SNP 309 gen MDM2 theo giới ghi nhận gia tăng nguy mắc UTP có ý nghĩa nhóm namgiới theo mơ hình gen ịặn (OR=1,6; 95%CI=1,01-2,61) Kết ngược với nghiên cứu Wenwu He cộng năm 2012 ghi nhận nguy mắc UTP tăng nữ giới mang kiểu gen GG (OR-1,282; 95% Ci= 1,062-1,548) [10] Cơ chế để giải thích khác biệt chưa rỗ ràng, có khả liên quan đến receptor
(4)estrogen ảnh hường đến điều hoà biểu gen MDM2 Việc nghiên cứu sâu chế bệnh sinh UTP mối liên quan tương tác kiểu gen với yếu tố nguy khốc đưa hieu biết toàn diện, giúp dự phịng, tiên lượng cải thiện chất lượng điều trị cho bệnh nhân UTP nói riêng ung thư nói chung
KẾT LUẬN
Kết nghiên cứu ghi nhận kiểu gen đòng hợp tử SNP 309GG gen MDM2 làm tăng nguy ung thư phổi nguyên phát 1,6 lần (OR = 1,6; 95%CI =1,1 - 2,41), ung ỉhư phổi không tế bào nhỏ 1,58 lần 1,6 lần nam giới theo mô hinh gen lặn (OR=1,6; 95%CI=1,01-2,61).Kiểu gen SNP 309GG gen MDM2 kết hợp hút thuốc ỉá làm tăng nguy mắc ung thư phổi 2,21 lần (OR = 2,21; 95%Ci = 1,31-2,73)
LƠI CÀM ƠN _
Nghiên cứu thực với hỗ trợ kinh phí từ nhiệm vụ Quỹ gen cấp Nhà nước “Đánh giả đặc điềm di truyền người Việt Nam" Nhóm nghiên cứu trân trọng cảm ơn Trung tâm Hô hấp, Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu - Bệnh viện Bạch Mai, Trung tâm Gen-Protein thuộc Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ trinh nghiên cứu
TÀI LIẾU THAM KHẢO
1 Jacques Ferlay, Isabelle Soerjomataram, Rajesh Dikshit et a! (2015) Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012 Int J Cancer, 136: E359-E386
2 Ryan K M , Phillips A.C., Vousden K.H (2001) Regulation and function of the p53 tumor suppressor protein, CurrOpin Ceil Biol, 13(3): 332-7
3 Zamzami N., Kroemer G (2005) p53 in apoptosis control: an introduction, Biochem Biophys Res Commun, 331(3), 685-7
4 Wu H, Leng RP (2011) UBE4B, a ubiquitin chain assembly factor, is required for MDM2-mediated p53 polyubiquitination and degradation Cel! Cycle, 10: 1912- 1915
5 iwkuma T., Lozano G (2003) MDM2, an introduction, Molecular Cancer Research, 1(14): 993- 1000
6 Moll U.M., Petrenko o (2003) The MDM2-p53 interaction, Molecular Cancer Research, (14): 1001-8
7 Gui X.H., Qiu L.X., Zhang H.F ei al (2009) MDM2 309 T/G polymorphism is associated with lung cancer risk among Asians, European journal of cancer, 45:2023-26
8 Ngô Quý Châu, Lê Hoàn, Nguyễn Thanh Phương (2012) “Nghiên cứu đặc điễm iâm sàng cận lâm sàng ung thư phổi nguyên phái di sọ não íại Trung tâm Hơ hấp- Bệnh viện Bạch Mai”, Tạp chí Y học Lâm sàng, 68: 30-34
9 Xu Wang, Lina Jin, Jiuwei Cui (2014).Mouse double minute-2 homoiog (MOM2)-rs2279744 polymorphism associated with lung cancer risk in a Northeastern Chinese population Thoracic Cancerô: 91-96
10 VVenwu He, Jianxiong Long, Lei Xian cs (2012).MDM2 SNP309 polymorphism is associated with iung cancer risk in women: A meta-analysis using METAGEN, Experimental and therapeutic medicine, 4: 569-576
11 Park S.H., Choi J.E., Kim E.J cs (2006) MDM2 309T>G polymorphism and risk of lung cancer in a Korean population, Lung cancer, 54,19-24
PHÁTHIỆN ĐỘT BIẾN T790M THỨ PHÁT TRÊN GEN EGFR Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHÔNG TÉ BÀO NHỎ
KHÁNG THUỐC ĐIẺU TR| ĐÍCH
Người thự c hiện: Trần Quốc Đạt
(Nghiên cứu viên - TT nghiên cứu Gen-Protein Trường ĐH Y Hà Nội)
Cán hướng đẫn: PG STS Trần Vân Khánh
(Bộ môn Bệnh học phân tử - Khoa K ỹ thuật Y học, Trường ĐH Y Hà Nội Trung tâm nghiên cứu Gen-Protein Trường ĐH Y Hà Nọi)
TÓM TÁT
Liệu pháp điều trị ung thư trúng đích (targeted cancer íherapy) đời trở thành bước tiến vượt bậc việc điều trị ung thư phổi khơng tế bào nhỏ Liệu pháp có hiệu rơ rệt nhóm bệnh nhẩn đuực xác định có đột biến đâp ứng với thuốc ức chế hoạt tỉnh tymsine kinase (TKI - tyrosine kinase inhibitor) EGFR (đột biển LREA exon 19 L858R exon 21) Tuy nhiên, sau khoảng 10-20 tháng điều trị, đa số bệnh nhân ung thư phổi xuất tình trạng kháng thuốc th ứ phát s ự phát sinh m ột sổ biển đ ổ i cấp độ phàn 'tử khối U,
trong xuất đột biến T790M thuộc exon 20 gen ẼGFR chiếm đa số trường hợp Nghiên cứu tiến hành nhằm mục tiêu xác định đột biến khảng thuoc thứ phát T790M gen EGFR 'bệnh nhân ung thự phổi khơng tế bào nhỏ có dấu hiệu kháng thuốc điều trị đích.Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp kỹ thuật Scorpions ARMS (Scorpions-Amplification Refractory Mutation System) với độ nhạy caođuực áp dụng đề xác định đột biến Kết cho thấy phát 5/11 (45%) bệnh nhân có đột biến khàng thụềc T790M exon
o n t r A r , s t A o U t u ể L ! Í L Ỉ - J n J ' í -
thiệu ca lâm sàng điển hình tượng kháng thuổc TKI.
Từ khóa: Ung thư phổi không tế bào nhố, EGFR, khống TKI, đột biển thứ phát T790M.