Xây dựng quy trình phát hiện đồng thời human papillomavirus (hpv) và lậu khuẩn (neisseria gonorrhoeae) bằng kỹ thuật multiplex pcr

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -oOo - TRẦN ĐĂNG THẮNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HUMAN PAPILLOMAVIRUS (HPV) VÀ LẬU CẦU KHUẨN (NEISSERIA GONORRHOEAE) BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH - 08/2011 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA: KỸ THUẬT HĨA HỌC CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập-Tự do-Hạnh phúc -oOo Tp.HCM, ngày 13 tháng 08 năm 2011 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRẦN ĐĂNG THẮNG Ngày tháng năm sinh: 25/11/1966 Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Phái: Nam Nơi sinh: Tp.HCM MSHV: 09310583 TÊN ĐỀ TÀI: XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HUMAN PAPILLOMAVIRUS (HPV) VÀ LẬU CẦU (NEISSERIA GONORRHOEAE) BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: Thực mục tiêu theo hướng nghiên cứu: Xây dựng qui trình thiết kế kiểm tra khả hoạt động mồi  Đưa qui trình tối ưu, hồn chỉnh từ bước khảo sát ứng dụng qui trình vào mẫu thực tế NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: Tháng năm 2010 NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: Tháng năm 2011 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG CB HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CN BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) KHOA QL CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Đại học Quốc gia TP.Hồ Chí Minh Cán hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG Cán chấm nhận xét 1: - Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại Học Bách Khoa, ĐHQG Tp.HCM ngày 13 tháng 08 năm 2011 Thành phần hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng PGS.TS Nguyễn Thúy Hương TS Lê Thị Thủy Tiên TS Huỳnh Ngọc Oanh TS Phạm S Xác nhận chủ tịch hội đồng đánh giá LV Bộ môn quản lý chuyên ngành sau luận văn sữa chữa (nếu có) Chủ tịch hội đồng đánh giá LV Bộ môn quản lý chuyên ngành LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: PGS TS Nguyễn Thúy Hương, người tận tình hướng dẫn tơi thời gian thực luận văn Cô động viên giúp đỡ lòng tâm huyết người thầy học trị Xin cảm ơn nhiều Thầy cô môn Công nghệ sinh học giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn ThS BS Nguyễn Văn Trương, Giám Đốc BV Hùng Vương, tạo điều kiện tốt nhất, thuận lợi cho thời gian thực luận văn Gia đình người bạn ủng hộ chia khó khăn suốt thời gian qua Cơng Ty Cổ Phần Cơng Nghệ Việt Á, nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thiện luận văn TÓM TẮT LUẬN VĂN - Tên đề tài : XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HUMAN PAPILLOMAVIRUS (HPV) VÀ LẬU CẦU KHUẨN (NEISSERIA GONORRHOEAE) BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR - Học Viên thực hiện: TRẦN ĐĂNG THẮNG - Cán Bộ hướng dẫn: PGS TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG -Thời gian thực hiện: từ tháng năm 2010 đến tháng năm 2011 Đề tài thu kết sau: ▪ Cả hai cặp mồi thiết kế có khả nhân chọn lọc mục tiêu ▪ Hai cặp mồi hoạt động tốt theo tỉ lệ 1:1 phản ứng Multiplex –PCR ▪ Nhiệt độ lai tối ưu cho hai cặp mồi = 50oC ▪ Hai cặp mồi sử dụng cho quy trình hồn tồn đặc hiệu với trình tự mục tiêu, có hiệu nhân cao ▪ Nồng độ ngưỡng mà phương pháp xác định đồng thời hai virus x 103 copies/ml Quy trình ứng dụng để khảo sát 30 mẫu bệnh phẩm thu nhận Bệnh viện Hùng Vương Bệnh Viện Da Liễu Kết thu khả quan, không thấy xuất vạch kí sinh MỤC LỤC Trang Chương 1: MỞ ĐẦU………… Chương 2: TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu bệnh lậu bệnh HPV 2.2 Tác nhân gây bệnh 2.2.1 Vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae 2.2.1.1 Phân loại khoa học 2.2.1.2 Đặc điểm 2.2.1.3 Sinh bệnh học 2.2.1.4 Các yếu tố gây độc 2.2.2 HPV (Human Papilloma Virus) 2.2.2.1 Cấu trúc – Đặc điểm HPV 2.2.2.2 Bộ gene HPV….……………………………………………………… 2.2.2.3 Phân type HPV…………….……………………………………… 12 2.2.2.4 Chu kỳ sống đặc điểm gây bệnh ….……………………………… 13 2.2.2.5 Ung thư cổ tử cung HPV người…… …………………………….16 2.3 Tình hình dịch bệnh HPV bệnh lậu giới nước 21 2.3.1.Tình hình dịch bệnh giới…… ……………………………… 21 2.3.2.Tình hình dịch bệnh nước………………………………………… 23 2.4 Các phương pháp chẩn đoán bệnh bệnh lậu HPV 26 2.4.1 Chẩn đoán lâm sàng 26 2.4.2 Các phương pháp chẩn đốn phịng thí nghiệm ……………………… …27 2.4.2.1 Phương pháp kính hiển vi nhuộm gram ………………………… .27 2.4.2.2 Phương pháp nuôi cấy truyền thống ………………………………… 27 2.4.2.3 Phương pháp miễn dịch ……………………………………………… 27 2.4.3 Các phương pháp sinh học phân tử …………………………………… 28 2.4.3.1 Ligase chain reaction (LCR) ………………………………………… 28 2.4.3.2 Transcription mediated amplification (TMA) ……………………… 28 2.4.3.3 Polymerase chain reaction (PCR) …………………………………… 29 2.4.3.4 Phương pháp MULTIPLEX –PCR ………………………………… .29 2.4.3.5 Kỹ thuật nested PCR……………………………………………………29 2.5 Kỹ thuật real-time PCR ………………………………………………… .30 2.6 Phương pháp giải trình tự ……………………………………………… 32 2.7 Gene porA N gonorrhoeae cặp mồi My09 My11của HPV 33 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 35 3.2 Vật liệu .35 3.2.1 Mẫu 35 3.2.2 Mồi .35 3.2.3 Hóa chất ……………………………………………………………… 35 3.2.3.1 Hóa chất dùng cho tách chiết DNA 35 3.2.3.2 Hóa chất dùng cho phản ứng PCR 36 3.2.3.3 Hóa chất dùng cho điện di .36 3.2.4 Thiết bị dụng cụ 37 3.2.5 Các phần mềm máy tính sử dụng …………………………………… 37 3.3 Phương Pháp ………… 38 3.3.1 Phương pháp xứ lý bảo quản mẫu ……………………………………40 3.3.1.1 Phương pháp thu nhận mẫu 40 3.3.1.2 Phương pháp tiền xử lý bảo quản mẫu 40 3.3.2 Phương pháp tach chiết DNA 40 3.3.2.1 Nguyên tắc 40 3.3.2.2 Các bước tiến hành ……………………………………………………40 3.3.3 Phương pháp kiểm tra mồi lí thuyết .41 3.3.4 Phương pháp PCR 42 3.3.5 Phương pháp điện di gel agarose……………………………… 44 3.3.6 Phương pháp xác định nhiệt độ lai tối ưu mồi …………………… 44 3.3.7 Phương pháp xác định độ đặc hiệu mồi 45 3.3.8 Phương pháp xác định độ nhạy quy trình 46 Chương 4:KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .47 4.1 Kết thiết kế khảo sát đặc tính hệ mồi ………………… 47 4.1.1 Kết thiết kế mồi 47 4.1.1.1 Kết thiết kế mồi cho Neisseria gonorrhoeae ……………… 47 4.1.1.2 Kết thiết kế mồi HPV ……………………………………… ……48 4.1.2 Kết khảo sát đặc tính hệ mồi 48 4.1.2.1 Kết kiểm tra Annhyb mồi 48 4.1.2.2 Kết BLAST kiểm tra tính đặc hiệu mồi 48 4.1.2.3 Chiều dài, nhiệt độ nóng chảy (Tm) %GC 49 4.1.2.4 Cấu trúc thứ cấp .50 4.2 Kết xây dựng quy trình Multiplex- PCR ……………………… …….54 4.2.1 Kết khảo sát hoạt động mồi thực nghiệm ………… …54 4.2.2 Kết khảo sát nhiệt độ lai tối ưu …………………………………… 56 4.2.3 Kết khảo sát độ đặc hiệu hai cặp mồi ……………………… 57 4.2.4 Kết khảo sát độ nhạy quy trình …………………………… 58 4.2.5 Ứng dụng quy trình lên mẫu bệnh phẩm …………………………… …59 4.2.6 Kết giải trình tự khẳng định …………………………………………61 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .64 5.1 Kết luận ……………………………………………………………… … 64 5.2 Đề nghị ……………………………………………………………….…… 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT LCR: Ligase chain reaction PCR: Polymerase chain reaction TMA: Transcription mediated amplification DNA: Deoxyribonucleic acid UV: Untra Violet LOS: Lipopolysaccharide TNF: tumor necrosis factor IARC: International Agency for Research on Cancer ELISA: Enzyme link immunosorbent assay MOMP: major outer membrane protein dNTP: Deoxyribonucleoside triphosphate BLAST: Basic local alignment tool NCBI: National Center for Biotechnology Information IDT: Intergrated Device Technology Tm: Temperature melting (nhiệt độ nóng chảy) Ta: Temperature annealing (nhiệt độ bắt cặp mồi mạch khuôn) 65 Do thời gian có hạn, số lượng mẫu bệnh phẩm chạy theo quy trình thiết lập cịn ít, cần tiến hành khảo sát quy trình với số lượng mẫu lớn để đánh giá xác hiệu quy trình TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thị Ngọc Dung – “Khảo sát liên quan mẹ nhiễm HPV bệnh u nhú quản” – Thời Y Dược học – Bộ IX số Tháng 8-2004- Tr 199-201 Nguyễn Hồng Chương, Nguyễn Trần Minh Lý, Nguyễn Quốc Trực, Nguyễn Chấn Hùng, Hồ Huỳnh Thùy Dương, 2005 Xây dựng quy trình PCR phát Human Papillomavirus (HPV) dịch phết tế bào âm đạo Tạp chí Y học Tp HCM Tập 9, số 1: 49-53 Nguyễn Ngọc Hiếu & Trần Trọng Kính 1995 Phát sớm ung thư cổ tử cung bệnh viện Phụ Sản Hà Nội Y Học Thực Hành -11:74-75 Nguyễn Trọng Hiếu – “Tần suất nhiễm HPV phụ nữ TP HCM” Thời Y Dược học – Bộ IX số Tháng 8-2004- Tr 195-198 Nguyễn Trọng Hiếu – “Tần suất nhiễm HPV phụ nữ TP HCM Hà Nội” Tạp Chí Phụ sản – Số 1-2 Tập Tháng 6-2004- Tr 64-72 Nguyễn chấn Hùng 2004 “Dịch tễ học ung thư” Ung bướu học nội khoa NXB Y học 2004 Tr 16 Nguyễn chấn Hùng 2005 “Cập nhật hiểu biết bệnh ung thư” Y học Thành phố Hồ chí Minh Phụ tập 9* Số 4* 2005 Tr i-xvi Nguyễn Thị Như Ngọc & cs 2002 Nhận định tình hình tỉ lệ nhiễm HPV qua phết tê bào âm đạo bệnh viện Hùng Vương Y Học TP.Hồ Chí Minh- 4:382-4 66 Vũ Thị Nhung 2004 “Nhận xét bước đầu liên quan type HPV (Human Papilloma Virus) tổn thương tiền ung thư- Ung thư cổ tử cung Bệnh viện Hùng Vương” Nội san Sản Phụ Khoa Số Đặc biệt Bình Dương 14-15/7/2004.Trang 170-175 10 Phạm Việt Thanh 2006 “Chương trình tầm soát Human Papilloma Virus” (HPV) ung thư cổ tử cung” Tạp chí Y học thực hành 550 : 13-24 11 Trịnh Quang Diện & Nguyễn Vượng 1999 Phát sớm tổn thương biểu mô ung thư cổ tử cung phương pháp tế bào học Y học thực hành, 11:69-71 12 ĐH Y dược TPHCM, 2004 Virus học NXB ĐH Y dược TPHCM 13.Cao Thị Bảo Vân Nghiên cứu hồn thiện quy trình phát đồng thời Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae mẫu bệnh phẩm người Việt Nam Viện Paster TP HCM, 2006 14 DS.Nguyễn Văn Thục, BS Nguyễn Thu Hương Giám sát N.Gonorrhoeae kháng kháng sinh tp.Hồ Chí Minh 15 P H Van Nghiên cứu chế tạo Multiplex PCR mix phát đồng thời hai tác nhân Chlamydia trachomatis Neissera gonorrhoeae 16 TS.Nguyễn Khắc Viện Bệnh lậu Tài liệu tiếng Anh 17 Anna R.Giuliano, Mary Papenfuss (2001) “Human Papillomavirus Infection at the United States – Mexico Border : Implications for Cervical Cancer Prevention and Control” Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention Vol 10, 1129 –1136, Nov 2001 18 Chris J L Meijer & coll 2000 – “Screening for cervical cancer : should we taest for infection with high risk HPV? – CMAJ 163(5) : 535-538 19 Clavel C., Masure M., Bory JF 1999 Hybrid Capture II- based Human Papillomavirus detection, a sensitive test to detect in routine high grade cervical lession Bristish Journal of Cancer, Vol 80, page 1306-1311 67 20 Cuzick J , Beverley E , Ho L 1999 HPV testing in primary screening of older women Bristish Journal of Cancer Vol 81, page 554-558 21 Ferlay J, Bray F, Pisani P, Parkin DM Globocan 2002 : Cancer incidence, mortality and prevalence worldwide IARC Cancerbase No Version 2.0, IARCPress, Lyon, 2004 22 Gravitt P.E & coll 1998 Genotyping of 27 human papillomavirus types by using L1 consensus PCR products by a single hybridization, reverse line blot detection method J Clin Microbiol 36: 3020-7 23 Gravitt P.E & coll.2000 Improved amplification of genital papillomaviruses J Clin Microbiol 38: 357-61 24 Hart K.W.& coll 2001 Novel method for detection, typing, and quantification of human papillomaviruses in clinical samples J Clin Microbiol 39: 3204-12 25 Harwood C.A & coll.1999 Degenerate and nested PCR : a highly sensitive and specific method for detection of human papillomavirus infection in cutaneous warts J Clin Microbiol 37: 3545-55 26 Hausen, H.z 2000 Papillomavirus infection – a major cause of human cancer Nature Vol 1, page 310 -321 27 Howard W Jones III 1988 ”Cervical Intraepithelial Neoplasia” Novack’s textbook of gynecology p647-648 28 Hyo-Pyo Lee & Sang-Soo Seo 2002 The aplication of human papillomavirus testing to cervical cancer screening Yonsei Medical Journal 43(6) 763-8 28 J Thomas Cox 2005 “Interim guidance on the use of HPV testing combined with cytology in primary cervical screening”.HPV today No 06 April 2005p4-5 29 Jawetz E , Joseph L M , Adelberg E A 1993 Review of Medical Microbiology 30 John T Schiller (2005) “Second-generation HPV vaccines” HPV today No 06 April 2005 p 6-7 68 31 Kailash U & coll 2002- “A simple “paper smear” method for dry collection, transport and storage of cervical cytological specimens for rapid screening ofHPV infection by PCR”- J.Med.Microbiol.51 :606-610 32 Karlsen F & coll 1996 Use of multiple PCR primer sets for optimal detection of human papillomavirus J Clin Microbiol 34: 2095-2100 33 K-U Petry & cs –Inclusion of HPV testing in routine cervical cancer screening for women above 29 years in Germany: results for 8466 patients 2003.Molecular and Cellular Pathology.88(10) : 1570-7 34 Minson A , Nell J , Mecrae M 1994 Viruses and Cancer Cambrigde University 35 Munoz N et al.”The virus” Int J Cancer 2004; 111: 278-285 36 Nelson J.H & coll 2000 A novel and rapid PCR- based method for genotyping human papillomaviruses in clinical samples J Clin Microbiol 38: 688-695 37 Netta S 2005 HPV & Cervical Cancer – prospects for prevention through vaccination Indian Joural Of Medical & Paediatric On Cology Vol 26, No 1, page 20-24 38.Renske DM Steenbergen “Human papillomaviruses and cervical cancerdevelopment” Colposcopy Management options :35- 46 39 Shalini L Kulasingam, James P Hughes, Nancy B Kiviat, Constance Mao, Noel S Weiss, Jane M Kuypers, Laura A Koutsky 2002 Evaluation of Human Papillomavirus Testing in Primary Screening for Cervical Abnormalities The journal of the American Medical Association 288:1749-1757 40 Silvio A Tatti (2003) “Epidemiology of HPV” Colposcopy: Management options 1:1-5 41 Susanne K.Kjaer papillomavirus (HPV) (2002) “Type specific persistence of high risk human as indicator of high grade cervical squamous 69 intraepitheliallesions in young women : population based prospective follow up study” BMJ Volume 325 14 SEPTEMBER 200 2, p 1-7 42 Toshiyuki Sasagawa, Walid Basha (2001) “ High-risk and multiple Human Papillomavirus infections associated with Cervical abnormalities in Japanese women” Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention Vol 10, 45-52 , January 2001 43 Venturoli S , Cricca M , Bonvicini F 2002 HPV DNA Testing by PCR-ELISA & Hybrid Capture II from a sigle cytological spacimen : ancordance & correlation with cytologycal resuld J Clin Virol Vol 25, page 177-195 44 Vernon SD & coll 2000 Comparison of human papillomavirus detection and typing by cycle sequencing, line blotting and hybrid capture J Clin Microbiol 38: 651-5 45 IARC HPV prevalence Surveys, 1993-2004 46 Smith JS, Lindsay L, Hoots B, et al Human papillomavirus type distribution in invasive cervical cancer and high-grade cervical lesions: a meta-analysis update 47 Max Chernesky,1* Gregory G Freund,2 Edward Hook III Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeaeInfections in North American Women by Testing SurePath Liquid-Based Pap Specimens in APTIMA Assays Volume 45, 2007, pages 2434-2438 48 M Pett and N Coleman, Integration of high-risk human papillomavirus: a key event in cervical carcinogenesis, J Pathol 2007; 212: 356–367 Published online 15 June 2007 in Wiley InterScience DOI: 10.1002/path.2192 49 D M Whiley P J Buda J Bayliss L Cover J Bates T P Sloots A new confirmatory Neisseria gonorrhoeae real-time PCR assay targeting the porA pseudogene 50 Stig Ove Hjelmevoll,* Merethe Elise Olsen,* Johanna U Ericson Sollid,† Håkon Haaheim* Magnus Unemo,‡ and Vegard Skogen§ A Fast Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Sensitive and Specific Detection of the Neisseria gonorrhoeae porA Pseudogene 70 51 Anders Strand1, Sonja Andersson2, Ingeborg Zehbe3 and Erik Wilander2 HPV Prevalence in AnalWarts Tested with the MY09/MY11SHARP Signal System Acta Derm Venereol (Stockh) 1999; 79: 226_229 52 http://www.ncbi.nlm.nhi.gov/BLAST/ 53 http://www.sciencedirect.com/ 54 http://www.idtdna.com/analazyer/Applications/OligoAnalyzer/ 55 http://www.prn.org/ / 56 http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoPreview.jsp?ID=2522 57 http://vi.wikipedia.org/wiki 58 http://hpv-web.lanl.gov/ 59.http://www.eurocytology.eu/static/eurocytology/eng/cervical/LP1ContentMcontA1 html ` PHỤ LỤC Phụ lục 1.Kết kiểm tra độ tương đồng trình tự Neisseria gonorrhoeae ClustalX Phụ lục 2.Kết kiểm tra độ tương đồng trình tự HPV ClustalX Phụ lục Kết Blast mồi xuôi mồi ngược Neisseria gonorrhoeae Phụ lục Kết khảo sát Annhyb mồi xuôi mồi ngược Neisseria gonorrhoeae Phụ lục Kết khảo sát Annhyb mồi Neisseria gonorrhoeae Phụ lục Kết Annhyb mồi xuôi mồi ngược HPV Phụ lục Kết khảo sát Annhyb mồi HPV Phụ lục Kết khảo sát Blast mồi xuôi mồi ngược HPV Phụ lục Đánh giá thử nghiệm dùng để phát tác nhân gây bệnh Để đánh giá thử nghiệm dùng để phát tác nhân gây bệnh, áp dụng phịng thí nghiệm, có thơng số cần phải đánh giá, độ nhạy, độ đặc hiệu, độ bền vững, giá trị tiên đoán dương giá trị tiên đoán âm thử nghiệm ▪ Độ nhạy (sensitivity = Se) thử nghiệm tỷ lệ phần trăm cho kết [+] số mẫu bệnh thật Se = a a: bệnh [+] thật a+c c: bệnh [-] giả ▪ Độ đặc hiệu (specificity = Sp) thực nghiệm tỷ lệ phần trăm cho kết [-] số mẫu không bệnh thật Sp = d b: bệnh [+] giả b+d d: bệnh [-] thật ▪ Giá trị tiên đoán dương (positive predictive value = PPV) tỷ lệ xác để kết luận bệnh nhân bị bệnh phần trăm PPV = a a+b ▪ Giá trị tiên đoán âm (negative predictive value = NPV) tỷ lệ xác để kết luận bệnh nhân không bị bệnh phần trăm PPV = d c+d TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA: KỸ THUẬT HĨA HỌC CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập-Tự do-Hạnh phúc -oOo - LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên học viên: TRẦN ĐĂNG THẮNG Ngày tháng năm sinh: 25/11/1966 Nơi sinh: Tp.HCM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 09310583 Phái: Nam 1- TÊN ĐỀ TÀI: Xây dựng qui trình multiplex PCR phát đồng thời HPV Neisseria gonorrhoeae 2- QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: Năm 1999-2004: Sinh viên trường Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Tốt nghiệp chuyên ngành kỹ thuật y học-xét nghiệm Năm 2009- đến nay: Học viên ngành Công nghệ Sinh học trường Đại học Bách khoa Tp Hồ Chí Minh 3- Q TRÌNH CƠNG TÁC: Từ năm 2004 đến công tác Khoa Xét Nghiệm BV Hùng Vương Tp.HCM, ngày 13 tháng 08 năm 2011 Ký tên ... XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HUMAN PAPILLOMAVIRUS (HPV) VÀ LẬU CẦU (NEISSERIA GONORRHOEAE) BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: Thực mục tiêu theo hướng nghiên cứu: ? ?Xây dựng. .. LUẬN VĂN - Tên đề tài : XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HUMAN PAPILLOMAVIRUS (HPV) VÀ LẬU CẦU KHUẨN (NEISSERIA GONORRHOEAE) BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR - Học Viên thực hiện: TRẦN ĐĂNG THẮNG... …53 Sơ đồ 3.1 Sơ đồ tổng quát xây dựng Quy trình Multiplex- PCR phát đồng thời HPV Neisseria gonorrhoeae ………………………………………………… 39 Sơ đồ 4.1 Sơ đồ quy trình phát đồng thời Neisseria gonorrhoeae HPV