Áp dụng kỹ thuật clea cố định một số enzyme thủy phân carbohydrate báo cáo tổng kết kết quả đề tài khcn cấp trường msđt t kthh 2013 42

MỞ ĐẦU Enzyme chất xúc tác sinh học ý nghĩa cho q trình sinh trưởng, sinh sản sinh vật mà cịn đóng vai trị quan trọng cơng nghệ chế biến thực phẩm, y học, kỹ thuật phân tích cơng nghệ gen bảo vệ môi trường Việc sử dụng enzyme vào sản xuất đem lại hiệu cao Tuy nhiên, vấn đề đặt sử dụng enzyme cho hiệu kinh tế để đưa vào quy trình sản xuất cơng nghiệp Trong enzyme hịa tan khơng có khả tái sử dụng, dễ biến tính tác dụng điều kiện môi trường, lại lẫn tạp vào sản phẩm cuối, enzyme cố định lại giải vấn đề Đồng thời trình cố định enzyme việc lựa chọn phương pháp chaát mang cố định vấn đề phức tạp CLEA - cross-linking enzyme aggregate phương pháp tạo enzyme cố định đơn giản thông qua tay gắn mà không cần giá thể - chất mang, chuyển enzyme dung dịch thành dạng rắn, dễ dàng tái sử dụng ứng dụng sản xuất Trong nghiên cứu thực kỹ thuật liên kết protein- enzyme lại với thông qua phản ứng tay gắn với phân tử protein Những liên kết chéo tổ hợp vật lý tạo trang thái khơng tan, trì siêu cấu trúc khối tập kết đồng thời tang cường hoạt tính xúc tác Nghiên cứu kỹ thuật cố định enzyme CLEA mà không cần chất mang để giảm bớt chi phí tác động chất mang đến hoạt động enzyme cố định Với kỹ thuật cố định đơn giản giảm chi phí sản xuất tính tiện lợi việc thu nhận cố định enzyme nên kỹ thuật CLEA ngày nghiên cứu giới enzyme Tuy nhiên Việt Nam kỹ thuật mẻ, chúng tơi nghiên cứu hướng nhằm tìm enzyme có khả tạo dạng CLEA ứng dụng tạo điều kiện thuận lợi trình nghiên cứu sản xuất enzyme tương lai, cụ thể đề tài thực kỹ thuật CLEA hai đối tương enzyme pectinase glucoamylase thương mại ứng dụng nhiều thực tiễn Mục tiêu nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu trình cố định enzyme theo kỹ thuật CLEA Đồng thời đánh giá hiệu sản phẩm CLEA Với nội dung nghiên cứu: - Khảo sát thực phương pháp CLEA enzyme Pectinex Ultra SPL glucoamylase (AMG) dạng CLEA - Đánh giá khả sử dụng enzyme Pectinex Ultra SPL glucoamylase (AMG) dạng CLEA PHẦN 1: TOÅNG QUAN 1.1- Khái niệm enzyme cố định Enzyme cố định có nhờ gắn enzyme hoà tan lên chất mang đó, nhiều kỹ thuật khác Chuyển từ dạng hoà tan sang dạng không hoà tan (cố định) 1.2- Phương pháp cố định enzyme Hình 1.1 Phương pháp cố định enzyme Là phương thức để gắn loại enzyme lên hay nhiều loại giá thể nhiều phương pháp khác 1.3- Phương pháp cross-linking enzyme aggregates ( CLEA) Sản phẩm phương pháp CLEA enzyme tập hợp lại liên kết chéo enzyme hòa tan sử dụng lại Những năm gần đây, nghiên cứu cho thấy khả xúc tác mạnh enzyme liên kết chéo Những nghiên cứu gọi phương pháp CLEA Hình 1.2: Sự tạo thành CLEA CLEA (Cross-linked enzyme aggregates) có nhiều ưu điểm ứng dụng sản xuất công nghiệp Phương pháp cố định đơn giản, dễ tối ưu hóa, chí phí thấp thời gian ngắn phương pháp có khả ứng dụng cố định nhiều loại enzyme khác nhau, kết hợp tủa thô, ổn định, tái sử dụng với hoạt tính giữ lại cao CLEA kết hợp trình tinh cố định enzyme, thực cố định trực tiếp từ dịch sau lên men loại sinh khối Điều có lợi làm giảm thời gian sản xuất hạ giá thành Có thể áp dụng với nhiều loại enzyme khác nhau, dễ dàng việc thu hồi tái sử dụng enzyme cố định, hạn chế tự phân enzyme tăng ổn định enzyme tiếp xúc với nhiệt hay dung môi hữu Với CLEA cố định không enzyme mà phức hệ nhiều enzyme để xúc tác chuỗi phản ứng Tính chất CLEA Kích thước tính chất quan trọng sản phẩm enzyme cố định ứng dụng vào sản xuất công nghiệp, tác động trực tiếp linh động (mass transfer) thu hồi chất xúc tác enzyme Kích thước phổ biến CLEA từ 5-50µm, sử dụng thu hồi CLEA thích hợp với phản ứng theo mẻ Trái ngược với enzyme cố định chất mang rắn, enzyme cố định bị hoạt tính hồn tồn tượng khuếch tán giới hạn Tuy nhiên, CLEA có cấu trúc siêu lỗ, tránh tượng khuếch tán giới hạn sử dụng phản ứng chuyển hóa sinh học tổng hợp hợp chất hữu Tốc độ khuếch tán bị ảnh hưởng kích thước CLEA, định tỷ số tác nhân tạo liên kết chéo với phân tử enzyme Tương tự, tính chất khác ảnh hưởng đến khả thu hồi, kiểm soát, tái sử dụng, độ bền, tỷ trọng , độ cứng khối CLEA Bảng 1.1: Khả chịu nhiệt enzyme tự CLEA Lý quan trọng khác để cố định enzyme theo kỹ thuật CLEA dễ dàng thu hồi từ môi trường phản ứng phương pháp ly tâm lọc tiếp tục tái sử dụng, kiểm sốt kích thước q trình kết khối kiểm sốt trình lọc CLEA giúp làm đơn giản trình downstream làm giảm tác động chi phí enzyme đến giá thành sản phẩm Bảng 1.2: Các enzyme áp dụng thành công phương pháp CLEA Penicillin acylases Glucose oxidase Aminoacylase Galactose oxidase Pig Liver Esterase Lipases Catalase Nitrilases Alcohol dehydrogenase Galactosidase Formate dehydrogenase Protease (trypsin) R-Oxynitrilase Phytase Pyruvate decarboxylase CLEA có khả tái sử dụng cao Ví dụ enzyme (R)-oxynitrilase–CLEA thu nhận từ Prunus amygdalus xúc tác hydrocyanation o-chlorobenzaldehyde dạng CLEA tái sử dụng mười lần hoạt tính khơng suy giảm 1.4- Enzyme glucoamylase Đặc điểm tính chất enzyme glucoamylase: cắt liên kết 1,4-glucoside 1,6-glucoside, tách phân tử glucose khỏi đầu không khử mạch để tạo glucose Ngoài liên kết α-1,4 α-1,6 glucoside, glucoamylase cịn thủy phân liên kết α-1,2 α-1,3 glucoside - AMG có khả thủy phân hồn tồn tinh bột, glycogen, amylopectin, dextrin, panose, isomaltose, maltose thành glucose mà không cần hổ trợ enzyme khác - Glucoamylase có hoạt lực cao vùng pH 3,5-5,5 nhiệt độ 50°C Nó bền α-amylase bền rượu aceton, khơng bảo vệ Ca2+ - Đa số AMG thuộc enzyme “acid thể hoạt lực tối đa vùng pH 3,55,5 - Nhiệt độ hoạt động tối thích AMG 50-600C Hầu hết AMG bị hoạt tính đun nóng lên 700C 1.5- Enzyme pectinase Enzyme pectinase enzyme xúc tác phân hủy polymer pectin Sự phân hủy pectin tự nhiên thường xảy trái chín Những enzyme có vai trị quan trọng q trình bảo quản trái rau Ngồi cịn ứng dụng nhiều trình chế biến thực phẩm, đặc biệt khả làm nước Việc kiểm sốt hoạt động enzyme pectinase điều chỉnh độ nhớt sản phẩm Ðặc biệt, dạng enzyme cố định sử dụng hiệu có nhiều ưu điểm hẳn dạng enzym hịa tan 1.6- Giới thiệu glutaraldehyde Glutaraldehyde phân tử nhỏ, với hai nhóm andehyde ba góc methyl: HCO-(CH2)3-CHO Các góc –CHO liên kết với phân tử protein mà chúng tiếp xúc, tạo liên kết chéo với protein Hình 1.3: Phản ứng poly glutaraldehyde với góc amino acid phân tử protein PHẦN 2- VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1- Vật liệu hóa chất Dung dịch chế phẩm Pectinex Ultra SPL (enzyme pectinase thương mại) : ‐ hãng Novo – Đan Mạch, 30 - 35oC ‐ Dung dịch AMG 300L: hãng Novo - Đan Mạch, 50°C ‐ Glutaraldehyde 25%, 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS), 3- aminopropyltriethoxysilane (APTES), polyethylenimine (PEI): Merck 2.2- Các phương pháp định lượng ‐ Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry ‐ Xác định hoạt độ glucoamylase theo phương pháp định lượng đường khử DNS - Xác định hoạt độ pectinase theo phương pháp so màu 2.3‐ Phương pháp cố định enzyme Phương pháp cố định enzyme phương pháp CLEA[4]: Cho tỉ lệ thể tích xác định dung dịch enzyme dung dịch glutaradehyde, khoảng thời gian khảo sát cho thêm muối NaCl 30% , để nhiệt độ thích hợp, đem hút chân khơng, cân thu enzyme cố định dạng CLEA ‐ Thông số hiệu suất cố định enzyme dựa vào khả hoạt động enzyme dạng cố định so với enzyme tự với lượng sử dụng ban đầu ‐ Khả tái sử dụng số lần tái sử dụng enzyme cố định đến hoạt tính giảm cịn 50% so với lần đầu 2.4- Nội dung nghiên cứu Khảo sát nồng độ tối ưu tay gắn glutaraldehyde Khảo sát thời gian cố định enzyme tối ưu Khảo sát nhiệt độ cố định enzyme tối ưu Khảo sát khả sử dụng enzyme cố định dạng CLEA PHẦN 3- KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1- Sự cố định AMG theo phương pháp CLEA 3.1.1- Các yếu tố ảnh hưởng đến trình cố định AMG theo phương pháp CLEA 3.1.1.1- Ảnh hưởng nồng độ glutaraldehyde đến khả cố định AMG dạng CLEA Hình 3.1: AMG tủa ( CLEA) dùng NaCl bão hòa glutaraldehyde (a) 18% glutaraldehyde (c) 22% glutaraldehyde (b) 20% glutaraldehyde (d) 24% glutaraldehyde Hình 3.2: Hai mẫu tủa enzyme AMG với glutaraldehyde (18% 20%) sau lọc hút chân không 10 Đồ thị 3.1: Biểu diễn khối lượng hoạt tính AMG cố định ứng với nồng độ glutaraldehyde khác ¾ Nhận xét: - Hoạt tính nồng độ 16% glutaraldehyde cao nhất, lượng tủa thấp nồng độ glutaradehyde 18% - Hoạt tính enzyme giảm dần nồng độ glutaraldehyde tăng lên, nguyên nhân nhóm –CHO glutaradehyde liên kết với nhóm –NH2 phân tử enzyme nhiều tạo nên mật độ dày đặt che tâm hoạt động enyzme, diện tích tiếp xúc enzyme với chất giảm Chọn mẫu có nồng độ glutaradehyde 16% (mẫu cho hoạt tính cao nhất) để tiếp tục khảo sát điều kiện tối ưu cho trình cố định AMG 11 3.1.1.2- Ảnh hưởng thời gian cố định AMG dạng CLEA Đồ thị 3.2: Biểu diễn khối lượng hoạt tính AMG cố định ứng với thời gian cố định khác ¾ Nhận xét: - Kết khảo sát cho thấy thời điểm cho kết hiệu suất cố định (hoạt tính) thấp - Tại thời điểm hoạt tính enzyme cao nhất, thời gian đủ để enzyme liên kết với tay gắn, enzyme có độ hoạt động tốt 3.1.1.3- Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả cố định AMG dạng CLEA Đồ thị 3.3: Biểu diễn khối lượng hoạt tính AMG cố định ứng với nhiệt độ khác 12 ¾ Nhận xét - Kết thực nghiệm cho thấy nhiệt độ 50°C tạo điều kiện enzyme tạo liên kết chéo cao đồng thời enzyme tự có nhiệt độ tối ưu 50°C, nhiệt độ 0°C 70°C, enzyme bị ức chế, trở nên bất hoạt hoạt động nhiệt độ này, dđồng thời enzyme tay gắn không tạo liên kết nhiệt độ 0°C Nhiệt độ cao (60°C, 70°C) làm biến tính enzyme khảo sát, làm thay đổi cấu trúc lòng phân tử, thay đổi cấu trúc tâm hoạt động, làm dần khả xúc tác enzyme cho dù xảy tượng liên kết liên kết enzyme bị biến tính nhiệt nên hiệu suất hoạt tính giảm 3.1.1.4- Q trình cố định AMG có bổ sung polyethylenimine (PEI ) Do hiệu suất cố định không cao nên hỗ trợ thêm tay gắn polyethylenimine Đồ thị 3.4: Biểu diễn khối lượng hoạt tính AMG cố định ứng với lượng PEI khác ¾ Nhận xét: - Hoạt tính mẫu khơng có PEI thấp PEI có tác dụng làm bền thêm liên kết glutaradehyde enzyme - Hoạt tính mẫu có bổ sung 2,5 ml PEI có hoạt tính gần cao hẳn so với mẫu 7,5 10 ml, điều cho thấy cho lượng dư PEI không làm tăng thêm hiệu suất cố định, đồng thời gây tốn hóa chất 13 Nguyên nhân do: PEI tạo nhiều liên kết chéo với Glu, dẫn đến cạnh tranh với enzyme, enzyme tự nhiều khả tiếp xúc với tay gắn, dẫn đến enzyme không tạo liên kết bị thất q trình lọc hút chân khơng, kết hiệu suất cố định enzyme giảm - Trong trình tiến hành: cho dung dịch enzyme glutaraldehyde vào cốc, lắc sau cho dung dịch PEI 2% vào Trường hợp cho PEI vào với glutaraldehyde gốc -CHO phân tử glutaraldehyde liên kết PEI tạo thành tủa rắn trước khơng hịa tan trở lại, (f) Hình 3.3: Anh hưởng lượng PEI đến cố định AMG (a): khơng có PEI (b): 2,5 ml PEI (d): 7,5 ml PEI (e) 10 ml PEI (c): ml PEI (f) Enzyme dạng CLEA nhuộm coomassie blue - Lượng CLEA AMG tạo thành tăng dần màu sắc khối tủa enzyme AMG cố định đậm dần lượng PEI tăng lên Hiệu suất cố định enzyme mẫu có bổ sung 2,5 ml PEI cao Trong trình khảo sát cố định AMG dạng CLEA, kết bảng 3.1, nhận thấy: - Mẫu có nồng độ 16% glutaraldehyde có hiệu suất cố định enzyme cao Hoạt độ enzyme giảm dần nồng độ glutaraldehyde tăng lên, nhóm -CHO glutaraldehyde liên kết với nhóm -NH2 phân tử enzyme tạo nên mật độ dày đặc che tâm hoạt động enzyme, hạn chế diện tích tiếp xúc enzyme với chất 14 - Tại thời điểm hiệu suất cố định enzyme cao - Kết thực nghiệm cho thấy nhiệt độ 500C cho khối lượng tủa hoạt độ enzyme cố định cao nhiệt độ tối ưu enzyme tự do, nhiệt độ mà enzyme hoạt động cao trạng thái cấu trúc phần tử enzyme dễ dàng liên kết với tạo dạng CLEA - Và hiệu suất cố định glucoamylase không cao so với enzyme khác Bảng 3.1: Tóm tắt kết số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất cố định AMG theo phương pháp CLEA Nồng độ glutaraldehyde Glutaraldehyde (%) 15 16 17 18 19 Khối lượng enzyme cố định (g) 13,82 16,76 16,96 17,58 15,79 Hiệu suất cố định enzyme (%) 1,47 2,77 2,40 1,18 0,87 Thời gian cố định Thời gian cố định (giờ) Khối lượng enzyme cố định (g) 16,59 21,27 21,58 18,70 20,59 Hiệu suất cố định enzyme (%) 2,75 4,15 4,14 4,40 4,15 40 50 60 70 - Yếu tố nhiệt độ Nhiệt độ(0C) Khối lượng enzyme cố định (g) 22,65 22,81 23,47 23,29 Hiệu suất cố định enzyme (%) 4,68 5,59 1,39 0,99 2,5 7,5 Yếu tố PEI (polyethylenimine) PEI (2%) (ml) (*) 10 Khối lượng enzyme cố định (g) 20,81 25,82 27,61 31,55 33,77 Hiệu suất cố định enzyme (%) 5,19 6,21 6,09 5,40 5,50 (*) Thể tích dd PEI 2% cho vào 100 ml hỗn hợp dd enzyme glutaraldehyde 15 B A Hình 3.4 Hình ảnh chụp SEM (Scanning Electron Microscopy) AMG dạng CLEA ( A: x 1µm; B x 100nm) 3.1.2- Khảo sát khả sử dụng AMG dạng CLEA 3.1.2.1- Ứng dụng AMG dạng CLEA hệ thống liên tục Đánh giá hiệu sử dụng AMG CLEA với lượng sử dụng 0,5g thực qua hệ thống phản ứng liên tục với tốc độ bơm: 10 vòng/ phút, 500C, 10 phút lấy mẫu lần, đồng thời chúng tơi có so sánh để đánh giá khả liên Lượng glucose (ug/ml) kết bền PEI 1600 1400 1200 Mẫu có PEI 1000 Mẫu PEI 800 600 400 200 10 30 50 70 90 110 Thờ i gian (phú t) 130 150 170 Đồ thị 3.5: Lượng glucose tạo thành theo thời gian thủy phân tinh bột AMG cố định dạng CLEA 16 Nhận xét: - Mẫu AMG cố định khơng có sử dụng PEI sau 10 phút phản ứng họat độ giảm nhanh, lượng glucose tạo thành giảm gần 40% - Đối với mẫu AMG cố định có PEI hoạt độ khơng thay đổi suốt 80 phút liên tục Điều cho thấy liên kết enzyme bền có mặt PEI 3.1.2.2- Phương pháp theo mẻ: Thực phản ứng theo hệ thống mẻ: 0,5g AMG dạng CLEA cho mẻ chứa 100ml tinh bột 5% với thời gian phản ứng giờ, ngày/1 mẻ Đồ thị 3.6: Khả tái sử dụng AMG cố định dạng CLEA Khi khảo sát khả tái sử dụng, chúng tơi có nhận xét sau: - Hoạt độ enzyme gần không giảm đơi cịn tăng lần tái sử dụng từ 1- - Mẫu có bổ sung PEI cho kết tốt nhất, thủy phân lượng lớn chất (gấp đôi so với mẫu khơng có PEI) Việc sử dụng thêm tay gắn polyethylenimine (PEI) cho chế phẩm AMG cố định có hoạt độ cao tái sử dụng nhiều lần so với dùng 'tay gắn' glutaraldehyde 17 3.2- Sự cố định Pectinex theo phương pháp CLEA 3.2.1- Các yếu tố ảnh hưởng đến cố định Pectinex theo phương pháp CLEA 3.2.1.1- Ảnh hưởng nồng độ glutaraldehyde đến khả cố định Pectinex dạng CLEA Hình 3.5: Các mẫu Pectinex cố định glutaraldehyde PEI (1%) (1) Glutaraldehyde 14% (2) Glutaraldehyde 16% (3) Glutaraldehyde 18% (4) Glutaraldehyde 19% Đồ thị 3.7: Biểu diễn khối lượng hoạt tính Pectinex cố định ứng với với nồng độ glutaraldehyde khác 18 ¾ Nhận xét: - Sau cố định enzyme pectinase, tủa hình thành khơng có độ cứng, khơng tạo thành khối rắn cố định AMG, không tạo thành khối tủa, màu sắc tủa tương tự AMG - Hiệu suất cố định enzyme pectinase cao so với AMG (hiệu suất cố định mẫu AMG tối ưu 4%, petinase theo khảo sát bước đầu trên, hiệu suất đạt đến 9,55%) 3.2.1.2- Ảnh hưởng thời gian cố định Pectinex dạng CLEA Đồ thị 3.8: Biểu diễn khối lượng hoạt tính Pectinex cố định ứng với thời gian cố định khác Nhận xét: Theo cách xử lý số liệu chọn thời gian giờ, tái sử dụng dạng CEA lại nhanh chóng tan trở lại , h chưa đủ thời gian để thực liên kết bên phân tử enzyme với 19 3.2.1.3- Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả cố định Pectinex dạng CLEA Đồ thị 3.9: Biểu diễn khối lượng hoạt tính Pectinex cố định ứng với nhiệt độ khác Nhận xét: Qua đồ thị thấy rõ yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng lớn đến khả cố định hình thành dạng CLEA, nhiệt độ 500C thích hợp để cấu trúc enzyme phù hợp cho việc liên kết chéo phân tử với qua tay gắn Qua bảng số liệu tóm tắt q trình cố định Pectinex dạng CLEA trình bày bảng 3.2, rút kết luận sau: Quá trình thực cố định enzyme pectinase nồng độ glutaradehyde 17 % 500C thời gian thích hợp với hiệu suất cố định enzyme khoảng 25% Chúng tơi nhận xét q trình cố định Pectinex dạng CLEA sau: - Ở nhiệt độ phịng khơng tạo enzyme dạng CLEA - Thời gian cố định dung dịch dạng huyền phù không tạo khối liên kết dạng CLEA 20 Bảng 3.2: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng cố định Pectinex theo phương pháp CLEA Nồng độ glutaraldehyde Glutaraldehyde (%) 14 Khối lượng enzyme cố định (g) 1,97 Hiệu suất cố định enzyme (%) 15 16 17 18 19 2,46 2,17 1,95 1, 73 1,53 5,32 10,98 14,47 25,52 22,36 23,72 2,00 2,01 Thời gian cố định Thời gian (giờ) Khối lượng enzyme cố định (g) 1,97 Hiệu suất cố định enzyme (%) - - - - - - 25,43 25,61 26,50 Yếu tố nhiệt độ Nhiệt độ(0C) 40 Khối lượng enzyme cố định (g) 2,23 Hiệu suất cố định enzyme (%) 50 60 2,46 2,40 3.68 27.48 3.95 3.2.2- Tái sử dụng Pectinex cố định dạng CLEA Đồ thị 3.10: Khả tái sử dụng Pectinex dạng CLEA 21 Pectinex cố định dạng CLEA có khả tái sử dụng lần giảm 50% hoạt độ, so với cơng trình tác giả Sohel Dahal [6] cố định Pectinex kỹ thuật CLEA tái sử dụng lần 3.3- Ứng dụng phối hợp hai enzyme CLEA xử lý nước Từ khối lượng 50g ban đầu củ thợm, xay lấy dịch lọc định mức thu 100ml dịch quả, đem xử lý loại enzyme: 5g AMG CLEA 2g Pectinex CLEA, thu kết sau Bảng 3.4: Khả tái sử dụng hai enzyme cố định dạng CLEA phối hợp xử lý nước Dung dịch củ Dung dịch thơm Số lần sử Hàm lượng Độ đục Hàm lượng Độ đục dụng đường tăng (g) (∆OD600nm) đường tăng (g) (∆OD600nm) Ban đầu 0,61 0,750 3,57 0,935 Lần 1.66 0.638 1.40 0.590 Lần 1.86 0.641 1.36 0.581 Lần 1.60 0.605 1.29 0.526 Lần 1.38 0.183 1.22 0.530 Lần 1.33 0.052 1.08 0.289 Lần 0.29 0.043 0.20 0.255 Nhận xét: Qua kết bảng 3.4 nhận thấy hàm lượng đường tăng thêm đồng thời độ đục giảm dần qua sau lần sử dụng chế phẩm enzyme dạng CLEA để xử lý nước củ nước thơm Đến lần thứ lượng đường tăng ko đáng kể Và qua hình 3.6 thấy rõ dung dịch có xử lý enzyme CLEA dung dịch khơng có enzyme 22 2 THƠM Củ Hình 3.6: Hai enzyme cố định dạng CLEA phối hợp xử lý nước (1: khơng có enzyme, 2: có enzyme) 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Điều kiện cố định AMG dạng CLEA với nồng độ glutaraldehyde 16 % kết hợp PEI 500C, thời gian hiệu suất cố định enzyme đạt 6,21% lần tái sử dụng lần có PEI , kích thước CLEA khoảng 0,2-0,8um Cố định Pectinex dạng CLEA với glutaraldehyde 17%, 500C giờ, hiệu suất cố định enzyme 27,48%, đạt lần tái sử dụng Sự phối hợp enzyme AMG CLEA Pectinex CLEA làm tăng lượng làm dịch Chúng tiếp tục nghiên cứu bước đầu thu kết cố định enzyme thu nhận từ vi sinh vật theo kỹ thuật CLEA ứng dụng Đây kỹ thuật cố định trọng, nghiên cứu tìm loại ‘tay gắn’ khác ngồi glutaradehyde để nâng cao hiệu cố định mở rộng ứng dụng cố định enzyme theo kỹ thuật CLEA nhiều lĩnh vực Tp.HCM, ngày 20 tháng năm 2014 Tp.HCM, ngày tháng năm 2014 Chủ nhiệm đề tài TL HIỆU TRƯỞNG (Ký ghi rõ họ tên) PHỊNG KHCN&DA Huỳnh Ngọc Oanh 24 TÀI LIỆU THAM KHAÛO [1] Sohel Dahal, Aparna Sharma, Munishwar Nath Gupta (2007), “A multipurpose immobilized biocatalyst with pectinase, xylanase and cellulase activities”, Chemistry Central Journal, Vol 1, pp.16 [2] Gordon F Bickerstaff (1997), Immobilization of Enzymes and Cells, Humana press Inc, Totowa, New Jersey pp 61-61; 261–275; 309-317 [3] John A Kiernan (2000), “Formaldehyde, formalin, paraformaldehyde and glutaraldehyde: What they are and what they do”, Department of Anatomy & Cell Biology, The University of Western Ontario, London, Canada N6A 5C1, Microscopy Today 00-1, pp 8-12 (2000) [4] Roger A Sheldon, Rob Schoevaart, and Luuk M van Langen (2006), “Immobilization of enzymes and cells”, Methods in Biotechnology- Humana Press., Vol 1, pp 31-45 [5] Sheldon A R A., Schoevaart A R., Van Langen L M (2005), “Cross-linked enzyme aggregates (CLEA): A novel and versatile method forenzyme immobilization (a review)”, Biocatalysis and biotransformation ISSN 1024-2422, Vol 23, (3-4), pp 141-147 25 ...thực kỹ thu? ?t CLEA hai đối t? ?ơng enzyme pectinase glucoamylase thương mại ứng dụng nhiều thực tiễn Mục tiêu nghiên cứu đề t? ?i: Nghiên cứu trình cố định enzyme theo kỹ thu? ?t CLEA Đồng thời... phương pháp có khả ứng dụng cố định nhiều loại enzyme khác nhau, k? ?t hợp t? ??a thô, ổn định, t? ?i sử dụng với ho? ?t tính giữ lại cao CLEA k? ?t hợp q trình tinh cố định enzyme, thực cố định trực tiếp t? ??... bước đầu thu k? ?t cố định enzyme thu nhận t? ?? vi sinh v? ?t theo kỹ thu? ?t CLEA ứng dụng Đây kỹ thu? ?t cố định trọng, nghiên cứu t? ?m loại ‘tay gắn’ khác ngồi glutaradehyde để nâng cao hiệu cố định mở