Cadmium cảm ứng in virto một số đặc điểm sự chết theo chu trình (apoptosis) ở nguyên bào sợi mô sẹo da người

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN THỊ TƯỜNG VI CADMIUM CẢM ỨNG IN VITRO MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SỰ CHẾT THEO CHU TRÌNH (APOPTOSIS) Ở NGUN BÀO SỢI MƠ SẸO DA NGƯỜI Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số : 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP Hồ Chí Minh, tháng 02 năm 2012 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI VIỆN SINH HỌC NHIỆT ĐỚI TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: TS HOÀNG NGHĨA SƠN Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: - Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ĐHQG Tp HCM ngày….tháng… năm…… LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gởi đến ba mẹ anh chị, người cho đời nghiệp với biết ơn vô vàng Ba mẹ, anh chị ủng hộ cho niềm tin, nghị lực sống, động viên hỗ trợ mặt vật chất lẫn tinh thần Em xin chân thành cảm ơn thầy Hoàng Nghĩa Sơn – viện trưởng viện Sinh Học Nhiệt Đới Tp HCM Thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em thời gian em làm luận văn viện Em xin cảm ơn thầy Em xin cảm ơn anh Lê Thành Long, anh quan tâm, chia sẻ, giúp đỡ dìu dắt em đường tiếp cận khoa học Em xin cảm ơn cô Nguyễn Thúy Hương quan tâm, giúp đỡ em để em hoàn thành tốt đề tài Em xin cảm ơn thầy cô môn công nghệ sinh học truyền đạt kiến thức thời gian em học trường Em xin chân thành cảm ơn anh chị phịng cơng nghệ sinh học động vật, viện Sinh Học Nhiệt Đới Mọi người ln nhiệt tình giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Em xin cảm ơn Thạc sĩ Tô Minh Quân, Khoa Sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Tp Hồ Chí Minh cung cấp nguồn nguyên bào sợi người để em hoàn thành đề tài TÓM TẮT LUẬN VĂN Tên đề tài: : Cadmium cảm ứng in vitro số đặc điểm chết theo chu trình (Apoptosis) ngun bào sợi mơ sẹo da người Học viên thực hiện: NGUYỄN THỊ TƯỜNG VI Cán hướng dẫn: TS HOÀNG NGHĨA SƠN Thời gian thực hiện: Đề tài thu kết sau: Mật độ tế bào sau ngày cảm ứng cadmium với nồng độ 1µM, 10µM, 100µM 26x103 tế bào/đĩa, 16x103 tế bào/đĩa, 8x103 tế bào/đĩa Sự phân mảnh tế bào chất sau ngày: mức độ apoptosis khác nồng độ khác nhau: 1µM, 10µM, 100µM Sự phân mãnh nhân: tế bào cảm ứng cadmium nồng độ 100µM sau ngày có phân mảnh nhân diễn mạnh Cảm ứng biểu số gene liên quan tới apoptosis mức phiên mã: Cadmium ảnh hưởng tới trình biểu gene bcl-2 gene bax mức phiên mã Với nồng độ 10µM cadmium mật độ tế bào sau ngày cảm ứng (98x103 tế bào/đĩa), sau ngày (40.2x103 tế bào/đĩa), ngày (14.8x103 tế bào/đĩa) ngày (2x103 tế bào/đĩa) Mức độ phân mảnh tế bào chất hình thành thể apoptotic diễn mạnh ngày khảo sát thứ với nồng độ 10µM Mức độ phân mảnh nhân: sau ngày với nồng độ 10µM phân mãnh nhân diễn mạnh Kết qua điện di DNA gene cho thấy trình phân mảnh DNA gene diễn mạnh vào ngày thứ thứ Biểu gene kháng apoptosis bcl-2 gene tiền apoptosis bax mức phiên mã SUMMARY The heavy metal cadmium is a common environmental pollutant associated to industrial processes Cadmium can be uptaken to human body by eating, drinking, breathe Cadmium accumulation can produce damage to human For example, Cadmium decreases cell density in some human organs such as ovaries, testis or cadmium can induce disorders of enzyme function in human body In this study, we examined effects of cadmium on human fibroblast during in vitro proliferation The result showed that cell densities were decreased by inducing with medium supplemented cadmium in various concentrations (1µM, 10µM, 100µM) whereas cell density increasing of control group Densities of fibroblast induced 10µM cadmium were examined in days, days, days, days There were no change of cell density was 2-day induced (98x103/dish) comparing to control group (100x103/dish) Cell densities were significantly decreased in 4-day, 6day and 8-day cadmium inducing Cadmium not only reduced cell density also in vitro induced apoptotic cheracterictics of human fibroblast Firtly, cadmium induced cytoplasmic fragement and apoptotic formation of fibroblast whereas long and flat with elongated nucleus morphology of fibroblast in control group To detect morphologic changes in chromatin and nucleus, cadmium induced fibroblast were stained with acridine orange Chromatin condensation was observed in 2-day cadmium induced cells but no nucleus fragment In 4-day, 6-day, 8-day cadmium induced cells, there were not only chromatine condensation but also nucleus fragment Reversed transcription polymerase chain reaction was applied to accessed the transcript expression of bcl-2 (anti-apoptosis gene) and bax (pre-apoptosis gene) The transcript expression of bcl-2 was decreased during cadimium inducing while the transcript expression of bax was increased In control group, bcl-2 transcript expression was higher than bax transcript but this balance in bcl-2 and bax expression was lost in cadmium induced fibroblast leading to apoptosis In conclusion, cadmium can in vitro induce apoptotic characteristics of human fibroblast i MỤC LỤC Mục lục i Danh sách hình iv Danh sách bảng vi Danh mục từ viết tắt vii Chương 1: MỞ ĐẦU Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Da người 2.1.1 Thành phần da 2.1.1.1 Biểu bì 2.1.1.2 Bì 2.1.1.3 Hạ bì 2.1.2 Chức da 2.2 Nguyên bào sợi 2.2.1 Lược sử nghiên cứu nguyên bào sợi 2.2.1.1 Nghiên cứu nguyên bào sợi nước 2.2.1.2 Nghiên cứu nguyên bào sợi giới 2.2.2 Nguồn gốc cấu tạo 2.2.3 Chức nguyên bào sợi 2.2.4 Các nguồn thu nhận nguyên bào sợi 2.2.5 Nguyên bào sợi lão hóa da 2.2.6 Nguyên bào sợi sẹo lồi 2.3 Kim loại Cadmium 10 2.3.1 Khái quát kim loại cadmium 10 2.3.2 Tác dụng cadmium 11 2.4 Sự chết tế bào 12 2.4.1 Định nghĩa 12 2.4.2 Sự khác hoại tử apoptosic 12 ii 2.4.3 Sự chết theo chu trình (Apoptosis) 13 2.4.3.1 Khái niệm 13 2.4.3.2 Đặc điểm tế bào bị apoptosic 14 2.4.3.3 Các đường kích hoạt apoptosis 16 2.4.3.4 Vai trò apoptosis 20 2.4.3.5 Một số phương pháp xác định trình apoptosis 22 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Vật liệu 26 3.1.1 Dụng cụ 26 3.1.2 Thiết bị 27 3.1.3 Hóa chất 28 3.1.4 Mẫu vật 29 3.2 Phương pháp 30 3.2.1 Phương pháp nuôi cấy tế bào 31 3.2.2 Phương pháp giải đông tế bào 31 3.2.3 Phương pháp cấy chuyền 32 3.2.3.1 Phương pháp 32 3.2.3.2 Đánh giá kết 32 3.2.4 Phương pháp tách tế bào enzyme 33 3.2.4.1 Nguyên tắc 34 3.2.4.2 Qui trình 34 3.2.5 Cảm ứng cadmium 35 3.2.5.1 Cảm ứng theo nồng độ 35 3.2.5.2 Cảm ứng theo thời gian 35 3.2.6 Quy trình tách chiết DNA 35 3.2.6.1 Nguyên tắc 35 3.2.6.2 Qui trình 35 3.2.7 Phương pháp đánh giá biểu trình Apoptosic 36 iii 3.2.7.1 Sự phân mảnh tế bào chất 36 3.2.7.2 Sự phân mảnh nhân 36 3.2.8 Đánh gia biểu số gen liên quan tới trình apoptosis mức phiên mã 37 3.2.9 Điện di DNA gene 40 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 4.1 Ảnh hưởng nồng độ cadmium lên nguyên bào sợi người 41 4.1.1 Mật độ tế bào 41 4.1.2 Cảm ứng biểu hình thái apoptosis 42 4.1.2.1 Phân mảnh tế bào chất 42 4.1.2.2 Phân mảnh nhân 44 4.1.3 Cảm ứng biểu số gene liên quan tới apoptosis mức phiên mã 44 4.2 Ảnh hưởng thời gian xử lý cadmium lên nguyên bào sợi người 46 4.2.1 Mật độ tế bào 46 4.2.2 Cảm ứng biểu hình thái apoptosis 48 4.2.2.1 Phân mảnh tế bào chất hình thành thể apoptotic 48 4.2.2.2 Phân mảnh nhân 50 4.2.3 Kết điện di DNA tổng 52 4.2.4 Cảm ứng biểu gene bax bcl-2 mức phiên mã liên quan tới apoptosis 53 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 65 iv DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1: Cấu tạo da người Hình 2.2: Cadmium sulfate octahydrate 11 Hình 2.3: Sự khác hoại tử apoptosis 13 Hình 2.4: Hình thái tế bào xảy apoptosis so sánh với hoại tử 15 Hình 2.5: Sự kích hoạt apoptosis theo đường nội bào 17 Hình 2.6: Sự kích hoạt apoptosis theo đường ngoại bào cảm ứng TRAIL 19 Hình 2.7: Sự kết hợp hai đường apoptosis nội bào ngoại bào 20 Hình 3.1: Nguyên bào sợi sau 24 nuôi 29 Hình 3.2: Sơ đồ tóm tắt qui trình thực 30 Hình 3.3: Sơ đồ qui trình giải đơng tế bào 31 Hình 3.4: Cấu trúc không gian trypsin 33 Hình 3.5: Sơ đồ tách tế bào bắng Trypsin 34 Hình 3.6 : Quy trình nhuộm tế bào với Acridine Orange (AO) 37 Hình 4.1: Biểu đồ mơ tả mật độ nguyên bào sợi người cảm ứng cadmium nồng độ khác sau ngày cảm ứng 42 Hình 4.2: Nguyên bào sợi người cảm ứng cadmium nồng độ khác sau ngày cảm ứng 43 Hình 4.3: Nguyên bào sợi người cảm ứng cadmium nồng độ khác sau ngày cảm ứng chụp kính hiểm vi huỳnh quang sau nhuộm AO 44 Hình 4.4: Kết phân tích RT-PCR 45 Hình 4.5: Biểu đồ mơ tả mật độ ngun bào sợi người cảm ứng cadmium nồng độ 10µM sau ngày, ngày, ngày, ngày 47 Hình 4.6: Sự phân mảnh tế bào chất hình thành thể apoptotic 49 Hình 4.7: Kết nhuộm nhân tế bào 51 v Hình 4.8: Kết đánh giá đứt gãy DNA gene tách từ nguyên bào sợi da người xử lý cadmium 10µM phương pháp điện di DNA tổng Mức độ đứt gãy DNA nguyên bào sợi gia tăng theo thời gian xử lý 52 Hình 4.9: Kết phân tích RT-PCR Sự biểu gene Bcl-2 giảm dần theo thời gian cảm ứng cadmium, biểu gene bax tăng dần theo thời gian cảm ưng Gene beta-actin sử dụng làm chứng 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 Kết luận Mật độ tế bào sau ngày cảm ứng cadmium với nồng độ µM, 10 µM, 100 µM 26x103 tế bào/đĩa, 16x103 tế bào/đĩa, 8x103 tế bào/đĩa Sự phân mảnh tế bào chất sau ngày: mức độ apoptosis khác nồng độ khác nhau: µM, 10 µM, 100 µM Sự phân mảnh nhân: tế bào cảm ứng cadmium nồng độ 100 µM sau ngày có phân mảnh nhân diễn mạnh Cảm ứng biểu số gene liên quan tới apoptosis mức phiên mã: cadmium ảnh hưởng tới trình biểu gene bcl-2 gene bax mức phiên mã Với nồng độ 10 µM cadmium mật độ tế bào sau ngày cảm ứng (98x103 tế bào/đĩa), sau ngày (40.2x103 tế bào/đĩa), ngày (14.8x103 tế bào/đĩa) ngày (2x103 tế bào/đĩa) Mức độ phân mảnh tế bào chất hình thành thể apoptotic diễn mạnh ngày khảo sát thứ với nồng độ 10 µM Mức độ phân mảnh nhân: sau ngày với nồng độ 10 µM phân mảnh nhân diễn mạnh Kết qua điện di DNA gen cho thấy trình phân mảnh DNA gen diễn mạnh vào ngày thứ thứ Biểu gen kháng apoptosis bcl-2 gene tiền apoptosis bax mức phiên mã 10 Kim loại nặng cadmium có khả cảm ứng chết theo chu trình nguyên bào sợi người điều kiện nuôi cấy in vitro 5.2 Kiến nghị Tiến hành đánh giá biểu protein liên quan đến trình apoptosis Kết luận kiến nghị Nguyễn Thị Tường Vi TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Aaronso S.A, Todaro G.J "Development of 3T3- like lines from Balb/c mouse embryo culture: transformtion sussceptibility to SV40", Journal of cell Physiol vol 72: 141-148 1968 Abraham L Kierszenbeum, MD, PhD “Histology and cell biology”, in an introduction to Pathology, Chapter 4, 2002, pp 220–237 Abelardo Lopez Rivas “An apoptotic endonuclease activated either by decreasing pH or by increasing calcium”, Journal of Cell Science, vol 109, pp 2393-2399 1996 Berburg M, Humke S et al “High-dose UVA radiation therapy for localized scleroderma”, J Am Acad Dermatol vol: 36:939-944 1997 Carter R Kettleworth Cell apoptosis research advances New York: Nova Science Publishers, 2007, pp.147-149, 151-152 Celis J.E 1999 Cell biology Academic Press, Harcourt Brace & Company California Chen G, Goeddel DV.”TNF-R1 signaling a beautiful pathway”, Science 296 pp.16341635 2002 Chiu-Po CHAN, Chun-Pin LIN, Mei-Chi Chang, Chi-Chuan HSIEH, Cheng-Chieh HSU, Chien-Liang LIN and Jiiang-Huei JENG),”Effects of Thrombin on the Growth, Protein Synthesis, Attachment, Clustering and Alkaline Phosphatase Activity of Culture Human Periodontal Ligament Fibroblasts”, Proc Natl Sci Counc ROC(B) vol 22, pp.137-143 1998 Cohen, J J “Apoptosis”, Immunol, Vol 14,pp 126 1993 Du Toit, L., Cerin, E., Leslie, E., 2005 “An Account of SpatiallyBased Survey Methods and Recruitment Outcomes of the Physical Activity in Localities and Community Environments (PLACE) Study” Cancer Prevention Research Centre, School of Population Health, The University of Queensland 58 Elinder CG, Kjellstrom T, Lind B, Linnman L, Piscator M, Sundstedt K “Cadmium exposure from smoking ciga-rettes: variations with time and country where purchased”, Environ Res.J vol 32, pp.220–227 1983 Fresney R “Culture of animal cell”.in a manual of basic techniques 3rd edition, New York: Wiley-Liss.1994.pp.150-176 Gaëlle Angenard, Vincent Muczynski, Hervé Coffigny, Catherine Pairault, Clotilde Duquenne, René Frydman, René Habert, Virginie Rouiller-Fabre, and Gabriel Livera “Cadmium Increases Human Fetal Germ Cell Apoptosis”, Environmental Health Perspectives, vol 118, pp 134 – 136,Mar 2010 Gary J Fisher, PH.D., Zengquan Wang, PH.D., Subhash C Datta, PH.D., James Varani, PH.D., Sewon Kang, M.D., and John J.Voorhees, M.D “Pathophysiology of premature skin aging induced by ultraviolet light” New England Journal of Medicine,vol 13, Nov 1997 Gavrieli Y, Sherman Y, Ben-Sasson SA “Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation”, J Cell Biol, vol.119, pp 493–501 1992 Ghazizadeh M, Tosa M, Shimizu H, Hyakusoku H, Kawanami O.“Functional implications of the IL-6 signaling pathway in keloid pathogenesis” J Invest Dermatol, vol.127,pp.98–105, 2007 Gill, T., Tewari, H., Pande, J., “In vivo and in vitro effects of cadmium on selected enzymes in different organs of the fish Barbus conchonius Ham” Comp Biochem Physiol 100C, pp.501 1991 Gulisano M, Pacini S, Punzi T, Morucci G, Quagliata S, Delfno G, “Cadmium modulates proliferation and differentiation of human neuroblasts” J Neurosci Res, vol 87, pp.228–237 2009 Hajdu S.I "The Paradox of Sarcomas" Acta Cytol, vol.24, pp 373-383 1980 59 Hata, T., Y Sano, R Sugawar, A Matsumae,K Kanamori, T Shima, and T Hosni.”Mitomycin, a new antibiotic from Streptomyces I” J Antibiot (Tokyo) vol 9,pp.141-146 1956 Hayes, Andrew Wallace “Principles and Methods of Toxicology” Philadelphia: CRC Press pp 858–861 2007 Hayflick, L and Moorhead, P.S Exp “The serial cultivation of human diploid cell strains" Cell Res Vol 25,pp 585-621.1962 Henson MC, Chedrese PJ “Endocrine disruption by cadmium, a common environmental toxicant with paradoxical effects on reproduction” Exp Biol Med (Maywood), vol.229,pp.383–392.2004 Hou L.T, Yaeger J.A "Cloning and charracterrization of human gingival and periodontal ligament fibroblast" Journal of Periodontol ,vol 64, pp 1209-1218 1993 Hwang P.P., Lin, S.W., Lin, H.C., “Different sensitivities to cadmium in tilapia larvae (Oreochromis mossambicus, Teleostei)”, Arch Environ Contam Toxicol, vol 29,pp 1–7, 1995 Jame C McKenzie, Roberrt M Klein Basic concepts in Cell biology and Histology English: McGraw-Hill/Appleton & Lange, Aug 1999 Keith L.Moore Before we are born – basic embryology and birth Defects Michigan: Saunders, 1983 Kerr J F R., Wyllie A H., Currie A R “Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide – ranging implication in tissue kinetics” Br J Cancer, vol.2, pp 239-57 .1972 Kiefer, M.C., et al “Modulation of apoptosis by the widely distributed Bcl-2 homologue Bak” Nature , vol.374, pp.736-739 1995 60 Kim H, Liu X, Kobayashi T, Kohyama T, Wen FQ, Romberger DJ, Conner H, Gilmour PS, Donaldson K, MacNee W, Rennard SI “Ultrafine carbon black particles inhibit human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction” Am J Respir Cell Mol Biol, vol.28, pp.111-121,Jan 2003 Konishi A, Shimizu S, Hirota J, Takao T, Fan Y, Matsuoka Y, Zhang L, Yoneda Y, Fujii Y, Skoultchi AI, Tsujimoto Y “Involvement of histone H1.2 in apoptosis induced by DNA double-strand breaks”, Cell, vol.19, pp.673-88 Sep 2003 Lasfer M, Vadrot N, Aoudjehane L, Conti F, Bringuier AF, Feldmann G, et al “Cadmium induces mitochondria-dependent apoptosis of normal human hepatocytes”, Cell Biol Toxicol, vol 24,pp.55–62 2008 Leoni G, Bogliolo L, Deiana G, Berlinguer F, Rosati I, Pintus PP, et al “Influence of cadmium exposure on in vitro ovine gamete dysfunction” Reprod Toxicol, vol.16, pp.371–377 2002 Lewis G “Cigarette smoking and cadmium accumulation in man” In Cadmium in the environment Jerome O Nriagu Virginia : Wiley, 1972, pp.682–683 Lu, L., Holmqvist, K., Cross,M., and Welsh,M “Role of the Src homology domaincontaining protein Shb in murine brain endothelial cell proliferation and differentiation” Cell Growth Differ Vol.13, pp.141–148.2002 Luciana Villela Rodrigues, Anilton César Vasconcelos, Uliana Massote Caldeira Brant, “Apoptosis in Pulp Elimination During Physiological Root Resorption in Human Primary Teeth”, Braz Dent J , vol.20, pp.179-185.2009 M Sri Balasubashini, S Karthigayan, ST Somasundaram, T Balasubramanian, R Rukkumani and Venugopal P Menon “FV peptide induces apoptosis in HEp and HeLa cells: an insight into the mechanism of induction”, Journal of Carcinogenesis, pp 5-27.2006 61 Madison, KC "Barrier function of the skin: "la raison d'être" of the epidermis" J Invest Dermatol, vol.121,pp.231–41.2003 Martelli A, Rousselet E, Dycke C, Bouron A, Moulis JM “Cadmium toxicity in animal cells by interference with essential metals” Biochimie, vol 88,pp.1807–1814 2006 Mary K L Collins, Isla J Furlong, Prupti Malde, Rosalia Ascaso, Javier Oliver Maton, Anthea; Jean Hopkins, Charles William McLaughlin, Susan Johnson, Maryanna Quon Warner, David LaHart, Jill D Wright (1993) Human Biology and Health Englewood Cliffs, New Jersey, USA: Prentice Hall ISBN 0-13-981176-1 Meinhard Wlascheka, Wenjian Ma a , Pidder Jansen-Dürr a, b and Karin ScharffetterKochanek “Photoaging as a consequence of natural and therapeutic ultraviolet irradiation—studies on PUVA-induced senescence-like growth arrest of human dermal fibroblasts”,Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, September 2003 Morton H.J."A surverry of commercially available tissue culture Media" Invitro, vol 6,pp 89 1970 Moulin, V., Auger, F., Garrel, D.&Germain, L “Role of wound healing myofibroblasts on reepithelialization of skin” Burns, Vol 26, No 1, pp.3-12 2000 Nasreddine L, Parent-Massin D “Food contamination by metals and pesticides in the European Union” Toxicol Lett, vol.127,pp.29–41.2002 Niewenhuis RJ “Effects of cadmium upon regenerated testicular vessels in the rat” Biol Reprod, vol.23, pp.171–179 1980 Nordberg M, Jin T, Nordberg GF “Cadmium, metallothionein and renal tubular toxicity” IARC Sci Publ, vol.118,pp.293–297.1992 62 Oberhammer F, Bursch W, Tiefenbacher R, Fröschl G, Pavelka M, Purchio T, SchulteHermann R (1993),”Apoptosis is induced by transforming growth factor-beta within hours in regressing liver without significant fragmentation of the DNA” Hepatology, vol.18,pp.1238-1246, Nov 1993 Omaida C.Velazquez, Ruthanne Snyder, Zhao-Jun Liu, Ronald M.Fairman, Meenhard Herlyn “Fibroblast - dependent diferentiation of human microvascular endothelial cells into capillary-like, three-dimensional networks”, FASEB, vol.16, pp.13161318.2002 Ong CT, Khoo YT, Tan EK, Mukhopadhyay A, Do DV, Han HC, Lim IJ, Phan TT “Epithelial-mesenchymal interactions in keloid pathogenesis modulate vascular endothelial growth factor expression and secretion”, J Pathol, Vol.211,pp.95-108 Jan 2007 Paksy K, Rajczy K, Forgacs Z, Lazar P, Bernard A, Gati I, et al “Effect of cadmium on morphology and steroidogenesis of cultured human ovarian granulosa cells” J Appl Toxicol , vol.17,pp.321–327 1997 Piasek M, Laskey JW “Acute cadmium exposure and ovarian steroidogenesis in cycling and pregnant rats” Reprod Toxicol , vol.8,pp.495–507.1994 Reinhart KC, Dubey RK, Keller PJ, Lauper U, Rosselli M “Xenoes-trogens and phytoestrogens induce the synthesis of inhibitory factorby human and bovine oviduct cells” Mol Hum Reprod , vol.5,pp.899–907.1999 Rober F.Morrissey, Yuri I.Prokopenko Sterilization of medical product, Moscow: Polyscience Publications,1991,pp.234-252 S.N Bhatia, U.J Balis, M.L Yarmush, M Toner “Microfabrication of Hepatocyte /Fibroblast co-culture: Role of homotypic cell interaction”, Biotechnol, vol.14,pp.378-387.1998 63 Sandulache VC, Parekh A, Dohar JE, Hebda PA “Feta dermal fibroblasts retain a hyperactive migratory and contractile phenotype under 2- and 3-dimensional constraints compared to normal adult fibroblasts” Tissue Eng, vol.13,pp.27912801 2007 Satarug S, Moore MR “Adverse health effects of chronic exposure to low-level cadmium in foodstuffs and cigarette smoke” Environ Health Perspect, vol.112,pp.1099–1103 2004 Satish L, Lyons-Weiler J, Hebda PA, Wells A “Gene expression patterns in isolated keloid fibroblasts” Wound Repair Regen, Vol.14,pp.463-70 Jul-Aug 2006 Song JJ, Lee YJ "Differential cleavage of Mst1 by caspase-7/-3 is responsible for TRAIL-induced activation of the MAPK superfamily" Cell Signal, Vol.20,pp 892–906, May 2008 Steve M Nguyen, Christopher J Lieven, and Leonard A Levin “Simultaneous Labeling of Projecting Neurons and Apoptotic State”, J Neurosci Methods Vol.161, pp 281–284,2008 Stewart Sell Sterm cell handbook Michigan, US: Humana Press, 2004, pp.221- 228 Stout AP "Sarcomas of the soft parts" Journal of Mo MA Vol.44,pp 329-334 1974 Stücker, M., A Struk, P Altmeyer, M Herde, H Baumgärtl & D.W Lübbers “The cutaneous uptake of atmospheric oxygen contributes significantly to the oxygen supply of human dermis and epidermis” Journal of Physiology Vol.538,pp.985– 994 2002 Takaoka A; Hayakawa, S; Yanai, H; Stoiber, D; Negishi, H; Kikuchi, H; Sasaki, S; Imai, K et al "Integration of interferon-alpha/beta signalling to p53 responses in tumour suppression and antiviral defence”, Nature Vol.424,pp.516-523 Jul 2003 64 Tam PP, Liu WK “Gonadal development and fertility of mice treated prenatally with cadmium during the early organogenesis stages”, Teratology Vol 32,pp.:453– 462.1985 Thompson J, Bannigan J “Cadmium: toxic effects on the reproductive system and the embryo”, Reprod Toxicol, vol 25,pp.304–315.2008 Van Delft M F., Wei A H., Mason K D., Vandenberg C J., Chen L., Czabotar P E., Willis S N., Scott C L., Day C L., Cory S., Adams J M., Roberts A W., Huang D C “The BH3 mimetic ABT-737 targets selective Bcl-2 proteins and efficiently induces apoptosis via Bak/Bax if Mcl-1 is neutralized”, Cancer Cell vol.10, pp 389-99.2006 Vermes, I and Haanan, C (1994) “Apoptosis and programmed cell death in health and disease” Adv Clin Chem 31, 177 Vrsanska S, Nagyova E, Mlynarcikova A, Fickova M, Kolena J “Components of cigarette smoke inhibit expansion of oocyte-cumulus complexes from porcine follicles” Physiol Res, vol 52,pp.383–387.2003 Yang H., Zhu Y.T., Cheng R., Shao M.Y., Fu Z.S., Cheng L., Wang F.M and Hu T,”Lipopolysacchride-induced dental pulp cell apoptosis and the expression of Bax and Bcl-2 in vitro”, Brazilian Journal of Medical and Biological Research, Vol.43, pp 1027-1033, Nov 2010 Zhang W, Jia H “Effect and mechanism of cadmium on the progesterone synthesis of ovaries”, Toxicology, vol 239, PP.204–212.2007 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Trịnh Bình, Đỗ Kính, Phạm Phan Địch 2002 Mơ học Nhà xuất Y học Nguyễn Trí Dũng 2010 Mô học tạng hệ thống Nhà xuất khoa học kỹ thuật PHỤ LỤC Phụ lục Nồng độ Cadmium Bảng số liệu tế bào sau ngày cảm ứng nồng độ khác Bảng giá trị trung bình sai số So sánh thực nghiệm: The differences in the mean values among the treatment groups are greater than would be expected by chance; there is a statistically significant difference (P =