Đánh giá tác dụng chống oxy hóa và gây độc tế bào ung thư của cây giổi ( michelia tonkinensis a chev) thu hái tại hòa bình

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  NGÔ THỊ NGỌC THẢO MÃ SINH VIÊN: 1501462 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA VÀ GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CÂY GIỔI (Michelia tonkinensis A Chev) THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  NGÔ THỊ NGỌC THẢO MÃ SINH VIÊN: 1501462 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA VÀ GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CÂY GIỔI (Michelia tonkinensis A Chev) THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Chử Thị Thanh Huyền TS Nguyễn Thế Hùng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội Khoa Dược lí Sinh hóa - Viện Dược liệu HÀ NỘI – 2020 Lời cảm ơn Trong q trình thực hồn thành khóa luận, em may mắn nhận hỗ trợ, giúp đỡ nhiều thầy cơ, anh chị Với tình cảm chân thành, cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tất cá nhân, tập thể tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu đề tài Trước hết em xin gửi tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn Dược học cổ truyền trường Đại học Dược Hà Nội khoa Dược lí – sinh hóa Viện Dược liệu lời chúc sức khỏe lời cảm ơn sâu sắc Đặc biệt em xin gửi lời cảm ơn tới TS Chử Thị Thanh Huyền TS Nguyễn Thế Hùng tận tình hướng dẫn em thời gian thực khóa luận Em xin bày tỏ lịng biết ơn đến tồn thể thầy giáo trường, cán phịng ban, thư viện trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện cho em trình nghiên cứu hoàn thành đề tài Tuy nhiên với điều kiện thời gian kinh nghiệm hạn chế, khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em kính mong nhận lời góp ý, nhận xét thầy để hồn thiện khóa luận làm học, hành trang cho nghiệp sau Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 Sinh viên Ngơ Thị Ngọc Thảo MỤC LỤC Trang bìa Trang bìa phụ Lời cảm ơn MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Giổi Michelia Linnaeus 1.1.1 Phân bố chi Giổi (Michelia L.) 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng sinh học 1.2 Nghiên cứu Giổi 13 1.2.1 Phân loại đặc điểm thực vật 13 1.2.2 Phân bố, sinh thái 14 1.2.3 Thành phần hóa học 15 1.2.4 Tác dụng sinh học 17 1.2.5 Công dụng 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 19 2.1.1 Nguyên vật liệu 19 2.1.2 Hóa chất, dung môi, dòng tế bào 19 2.1.3 Trang thiết bị dụng cụ phịng thí nghiệm 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 20 2.3.2 Phương pháp tạo cao chiết tổng cao phân đoạn mẫu hạt Giổi Michelia tonkinensis A Chev 20 2.3.3 Phương pháp thử tác dụng sinh học 21 2.3.4 Phương pháp xử lí liệu 24 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ 25 3.1 Tạo cao chiết tổng và cao phân đoạn của mẫu hạt Giổi Michelia tonkinensis A Chev 25 3.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư 26 3.2.1 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao chiết Giổi 26 3.2.2 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao chiết hạt Giổi 32 3.3 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa sở đánh giá khả bắt giữ gốc tự DPPH 36 3.3.1 Kết hoạt tính chống oxy hóa sở đánh giá khả bắt giữ gốc tự DPPH cao chiết Giổi 37 3.3.2 Kết hoạt tính chống oxy hóa sở đánh giá khả bắt giữ gốc tự DPPH cao chiết hạt Giổi 39 CHƯƠNG BÀN LUẬN 42 4.1 Về hoạt tính gây độc tế bào ung thư 42 4.2 Về hoạt tính chống oxy hóa 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT A549 B16F10 DCM DMEM Human lung carcinoma (Ung thư phổi người) Mouse skin melanoma (Ung thư da chuột) Dichloromethan Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (Môi trường dùng cho nhiều dòng tế bào khác nhau) DMSO Dimethyl sulfoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol FBS HCT116 IC50 Fetal bovine serum (Huyết tương thai bò) Human colon carcinoma (Ung thư đại trực tràng người) Half-maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) MCF7 Human breast carcinoma (Ung thư vú người) MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide NXB Nhà Xuất Bản pp, tr Trang (page) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số thành phần tinh dầu Giổi Bảng 3.1 Ảnh hưởng phân đoạn cao chiết Giổi lên khả sống tế bào ung thư Bảng 3.2 37 Ảnh hưởng phân đoạn cao chiết hạt Giổi lên khả dọn gốc tự DPPH Bảng 3.8 37 Giá trị IC50 phân đoạn cao chiết Giổi khả bắt giữ gốc tự DPPH Bảng 3.7 34 Ảnh hưởng phân đoạn cao chiết Giổi lên khả dọn gốc tự DPPH Bảng 3.6 32 Giá trị IC50 phân đoạn cao chiết hạt Giổi khả ức chế phát triển tế bào ung thư Bảng 3.5 29 Ảnh hưởng phân đoạn cao chiết hạt Giổi lên khả sống tế bào ung thư Bảng 3.4 27 Giá trị IC50 phân đoạn cao chiết Giổi khả ức chế phát triển tế bào ung thư Bảng 3.3 17 39 Giá trị IC50 phân đoạn cao chiết hạt Giổi khả bắt giữ gốc tự DPPH 39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu Sơ đồ 3.1 Quy trình chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ mẫu hạt Giổi Sơ đồ 3.2 25 Quy trình chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ mẫu Giổi Hình 3.3 22 26 Đường cong sigmoid biểu diễn mối tương quan log (nồng độ) phân đoạn cao chiết Giổi khả ức chế dòng tế bào ung thư Hình 3.4 31 Đường cong sigmoid biểu diễn mối tương quan log (nồng độ) phân đoạn cao chiết hạt Giổi khả ức chế dịng tế bào ung thư Hình 3.5 36 Đường cong sigmoid biểu diễn mối tương quan log (nồng độ) phân đoạn cao chiết Giổi khả bắt giữ gốc tự DPPH Hình 3.6 38 Đường cong sigmoid biểu diễn mối tương quan log (nồng độ) phân đoạn cao chiết hạt Giổi khả bắt giữ gốc tự DPPH 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Thuốc có nguồn gốc từ dược liệu có lịch sử sử dụng lâu đời việc phòng, chữa trị nhiều loại bệnh hứa hẹn nhiều tiềm phát triển thuốc Sự phát triển xã hội phát triển đại dẫn tới phát sinh nhiều yếu tố gây bệnh môi trường ô nhiễm, chất phụ gia thực phẩm, chất có hại mỹ phẩm, thuốc lá, rượu bia, thức ăn nhanh hay căng thẳng thần kinh (stress) Tất yếu tố tác nhân gây gốc tự - xem “sát thủ giấu mặt” gây q trình lão hóa phần lớn bệnh tật nguy hiểm trầm cảm, tăng huyết áp, ung thư, đái tháo đường, Trong ung thư nguyên nhân tử vong thứ toàn giới, chiếm 1/6 ca tử vong - theo thống kê tổ chức y tế giới (WHO) năm 2018 Các thuốc tổng hợp sử dụng rộng rãi lâm sàng điều trị bệnh lý liên quan đến q trình oxy hóa ung thư, gặp phải hạn chế lớn tác dụng không mong muốn Vì vậy, việc tìm kiếm nguồn thuốc thay với hiệu tương tự vượt trội đồng thời gây tác dụng phụ nghiêm trọng hướng nghiên cứu cần quan tâm phát triển Tài nguyên thực vật Việt Nam phong phú đa dạng Chi Giổi (Michelia L.) chi thực vật thuộc họ Ngọc lan (Magnoliaceae), nhiều lồi sử dụng dân gian với tác dụng điều trị ung thư, M champaca Linn người dân Ấn Độ sử dụng để điều trị khối u vùng bụng, M hypoleuca M officinalis Rehd & Wilson điều trị loét ung thư ung thư máu Trung Quốc [39] Nhiều nhà khoa học thực nghiên cứu hoạt tính chống ung thư chống oxy hóa sau phân tích thành phần hóa học loài thuộc chi Michelia nhận thấy tiềm chúng [21], [25], [26], [34], [48], [50] Giổi thuộc chi Michelia, có tên khoa học Michelia tonkinensis, sử dụng dân gian với tác dụng làm thuốc hạ sốt, chữa đau bụng, ăn uống không tiêu ngâm rượu để xoa bóp đau nhức, tê thấp Ngồi hạt Giổi có chứa tinh dầu thơm nên từ lâu người dân tỉnh miền núi phía Bắc sử dụng làm gia vị Trong năm gần đây, Giổi trồng nhiều số địa phương để làm gia vị mang lại giá trị kinh tế cao Tuy nhiên nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lí Giổi cịn hạn chế Hiện có vài nghiên cứu tác dụng dược lý Giổi nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, tác dụng chống viêm [2], [5], [6], [15] Do việc tiến hành thêm nghiên cứu đầy đủ tác dụng sinh học loài Giổi làm tăng giá trị sử dụng lồi Vì tiến hành đề tài “Đánh giá tác dụng chống oxy hóa và gây độc tế bào ung thư của Giổi (Michelia tonkinensis A Chev) thu hái Hòa Bình” với mục tiêu cụ thể sau: - Đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư hạt Giổi - Đánh giá tác dụng chống oxy hóa hạt Giổi 55 Wang H.M., Chen C.Y., Chen C.Y et al (2010), “(-)-N-Formylanonaine from Michelia alba as a human tyrosinase inhibitor and antioxidant”, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 18(14), pp.5241–5247 56 Wang X.Y., Xu M., Yang C.R et al (2011), “Phenylpropanoid glycosides from the seeds of Michelia hedyosperma”, Food Chemistry, 126(3), pp.1039-1043 57 Wu C.C., Wu C.L., Huang S.L., Chang H.T (2012), “Antifungal activity of liriodenine from Michelia formosana heartwood against wood-rotting fungi”, Wood Science and Technology, 46, pp.737–747 58 Yang B.H., Ma Y.Z., Yang L et al (2007), “Study on antimicrobial activity and chemical constituents of essentical oil from the flowers of Michelia figo Spreng.”, Hunan Nong Ye Da Xue Xue Bao, 37(3), pp.337-341 59 Yeh Y.T., Huang J.C., Kuo P.L et al (2011), “Bioactive constituents from Michelia champaca”, Natural Product Communications, 6(9), pp.1251-1252 Phụ lục Phiếu giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu Phụ lục Phân bố cơng dụng số lồi thuộc chi Michelia L Việt Nam STT Tên Việt Nam Tên khoa học Phân bố Công dụng TLTK Tử tiêu/ Hương tiêu Michelia figo Hà Nội, Hà Nam Hoa dùng ướp chè, làm thuốc [1] Giổi nhiều hoa Michelia floribunda Giổi nhẵn/Giổi láng/Giổi nhung Michelia foveolata Giổi xanh Michelia mediocris Giổi chay Michelia masticata Giổi bà/ Giổi lơng Michelia balansae Hà Giang, Gỗ đóng đồ Lào Cai, gia dụng Lâm Đồng Lào Cai,Yên Bái, Sơn La, Gỗ dùng Vĩnh Phúc, xây Quảng Ninh, dựng đóng Nghệ An, đồ mộc Đà Nẵng Lào Cai, Sơn Gỗ dùng La, Thanh xây Hóa, Nghệ dựng, hạt An, Kon dùng làm gia Tum, Gia vị, chữa sốt, Lai, Lâm đau bụng Đồng Hà Giang, Tuyên Gỗ dùng Quang, Bắc xây Kạn, Hịa dựng Bình, Điện Vỏ dùng ăn Biên, Quảng trầu Trị Yên Bái, Hòa Bình, Gỗ làm củi Ba Vì, [1] [4], [1], [3] [4], [1] [4], [3] [4], [3] Tuyên Quang, Thanh Hóa, Quảng Nam Giổi ngọt/Giổi lúa Michelia tonkinensis Yên Bái, Tuyên Quang, Nghệ An, Phú Thọ, Ninh Bình Giổi Sapa Michelia velutina Lào Cai 10 Giổi xanh to Michelia citrata Hà Giang, Gia Lai, Lâm Đồng Giổi na Magnolia grandis Hà Giang, Tuyên Quang 11 Giổi đá 12 Giổi dai/ Gỗ sử dụng xây dựng, đóng đồ xây dựng làm gỗ dán Hạt làm gia vị, làm thuốc [11], [4] [12] Gỗ tốt dùng xây dựng đóng đồ Lá làm gia vị Gỗ dùng xây dựng, trồng làm cảnh bóng mát Hà Giang, Lào Cai, Phú Gỗ dùng Thọ, Vĩnh Michelia xây Phúc, Thanh yunnanensis dựng đóng Hóa, Nghệ đồ mộc An, Kon Tum Michelia Hà Giang, Gỗ dùng [3], [13] [3] [3] [3] Giổi đá 13 14 15 16 Giổi lông nâu Giổi Martin Giổi quản hoa Bạch ngọc lan/Sứ ngọc lan 17 Giổi găng 18 Giổi lông coriacea Michelia fulva Michelia martinii Michelia lacei Hà Giang, Cao Bằng, Huế, Đà Nẵng Hà Giang, Lào Cai, Tuyên Quang, Cao Bằng, Sơn La, Nghệ An, Quảng Bình Hà Giang, Lào Cai Michelia alba Michelia baillonii Michelia braianensis 19 Giổi lụa/ Giổi thơm Michelia odora 20 Giổi tai ngựa Michelia xianianhei Michelia 21 Cao Bằng, Sơn La Quảng Trị xây dựng đóng đồ mộc Gỗ dùng xây dựng đóng đồ mộc Gỗ dùng xây dựng đóng đồ mộc [9], [3] [3], [1] [3] Rễ lợi kinh, vỏ hạ nhiệt, hoa trấn kinh Vỏ giúp hạ nhiệt [1], [4] [1], [4] [1], [4] Quảng Ninh, Nghệ Tĩnh, Nam Định, Ninh Bình, Cao Bằng, Lạng Sơn [1], [9], [4] Điện Biên [10] Hà Giang [14] coriaceae 22 23 Ngọc lan ngà/ Sứ vàng Michelia champaca Đà Lạt Michelia chapaensis Lào Cai Chữa sốt, đau bụng, bệnh phong, bệnh mắt, viêm, gout [4], [38] [1], [4] Phụ lục Cấu trúc hóa học của số hợp chất phân lập từ chi Michelia L Cấu trúc hóa học của số terpenoid phân lập từ chi Michelia L Cấu trúc hóa học của alkaloid phân lập từ chi Michelia L Cấu trúc hóa học của steroid phân lập từ chi Michelia L Cấu trúc hóa học của thành phần hóa học khác phân lập từ chi Michelia L ... đủ tác dụng sinh học loài Giổi làm tăng giá trị sử dụng lồi Vì tiến hành đề tài “? ?a? ?nh giá tác dụng chống oxy h? ?a và gây độc tế bào ung thư cu? ?a Giổi (Michelia tonkinensis A Chev) thu hái. .. compressa, thể tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư tế bào ung thư biểu mơ vịm họng người (NPC-TW01), ung thư biểu mô phổi (NCI-H226), tế bào ung thư máu (Jurkat), ung thư thận (A4 98), ung thư phổi (A5 49)... hái H? ?a Bình? ?? với mục tiêu cụ thể sau: - Đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư hạt Giổi - Đánh giá tác dụng chống oxy h? ?a hạt Giổi CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Giổi Michelia Linnaeus