Đánh giá tác dụng chống oxy hóa của viên nang ak trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - THÁI TẤN NHÃ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA VIÊN NANG AK TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - THÁI TẤN NHÃ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA VIÊN NANG AK TRÊN THỰC NGHIỆM NGÀNH: Y HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 87 20 113 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu trung thực cố vấn người hướng dẫn khoa học Các số liệu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Thái Tấn Nhã MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH - VIỆT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC SƠ ĐỒ MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Các dạng oxy hoạt động, chất chống oxy hóa trạng thái stress oxy hóa thể 1.2 Stress oxy hóa theo quan niệm YHCT 15 1.3 Các gốc tự chất chống oxy hóa theo quan niệm YHCT 16 1.4 Giới thiệu chế phẩm nghiên cứu 17 1.5 Các phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hố 24 1.6 Độc tính cyclophosphamid 27 1.7 Thuốc đối chiếu 29 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Nguyên vật liệu 30 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.4 Phương pháp xử lý thống kê 445 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 Độc tính cấp 46 3.2 Tác dụng chống oxy hóa in vitro viên nang AK 47 3.3 Tác dụng chống oxy hóa in vivo viên nang AK 57 Chương BÀN LUẬN 62 4.1 Độc tính cấp 62 4.2 Hoạt tính chống oxy hóa in vitro thơng qua thử nghiệm DPPH MDA 64 4.3 Hoạt tính chống oxy hóa in vivo 68 4.4 Triển vọng đề tài (khả áp dụng viên nang AK) 70 4.5 Ưu điểm hạn chế đề tài 74 KẾT LUẬN 75 KIẾN NGHỊ 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục 1: Mô hình độc tính cấp Phụ lục 2: Mơ hình in vivo DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CHỮ ĐẦY ĐỦ CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt AK Chế phẩm Bèo hoa dâu, Khổ qua rừng, Nghệ vàng COPD Bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính Dmax Liều cao cho uống qua kim mà không làm chết chuột HTCO Hoạt tính chống oxy hóa IC50 Nồng độ ức chế 50% LD0 Liều tối đa không gây chết súc vật thử nghiệm LD100 Liều tối thiểu gây chết hoàn toàn súc vật thử nghiệm LD50 Liều gây chết 50% súc vật thử nghiệm m Trọng lượng n Số lượng ROS Các dạng oxy hoạt động STT Số thứ tự WHO Tổ chức Y tế giới YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại Tiếng Anh CAT Catalase CCl4 Cacbon tetraclorua CY Cyclophosphamid DNA Acid deoxyribonucleic DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl GSH Glutathion i GPx Glutathion peroxidase IL Interleukin MDA Malondialdehyd MeOH Methanol NAD Nicotinamid adenin dinucleotid NADPH Nicotinamid adenin dinucleotid phosphate SOD Superoxid dismutase TBA Thiobarbituric acid TCA Tricloroacetic acid WHO World Health Organization i DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT Catalase Catalase Carbon tetrachloride Cacbon tetraclorua Chronic obstructive pulmonary Bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính disease Cyclophosphamide Cyclophosphamid Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic Maximum dose Liều cao cho uống qua kim mà không làm chết chuột 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl Glutathione Glutathion Glutathione peroxidase Glutathion peroxidase The half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% concentration Interleukin Interleukin Lethal dose Liều tối đa không gây chết súc vật thử nghiệm Lethal dose 100 Liều tối thiểu gây chết hoàn toàn súc vật thử nghiệm Lethal dose 50 Liều gây chết 50% súc vật thử nghiệm Mass Trọng lượng Malondialdehyde Malondialdehyd Methanol Methanol Number Số lượng Nicotinamide adenine dinucleotide Nicotinamid adenin dinucleotid v Nicotinamide adenine dinucleotide Nicotinamid adenin phosphate phosphate Reactive oxygen species Các dạng oxy hoạt động Superoxide dismutase Superoxid dismutase Thiobarbituric acid Acid thiobarbituric Trichloroacetic acid Acid tricloroacetic World Health Organization Tổ chức Y tế giới dinucleotid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số dạng ROS thể Bảng 1.2 Các hoạt chất tác dụng dược lý theo YHHĐ 21 Bảng 1.3 Các nghiên cứu kết hợp theo YHHĐ 22 Bảng 1.4 Tính vị, quy kinh tác dụng vị thuốc theo YHCT 23 Bảng 2.1 Danh mục thuốc, hóa chất sử dụng nghiên cứu 31 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng nghiên cứu 32 Bảng 2.3 Pha mẫu thử DPPH 36 Bảng 2.4 Bố trí thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan mẫu thử 41 Bảng 3.1 Tỷ lệ tử vong chuột sau uống viên nang AK 72 14 ngày 47 Bảng 3.2 Kết hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH mẫu thử 49 Bảng 3.3 Kết hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH acid ascorbic 50 Bảng 3.4 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào gan viên nang AK 52 Bảng 3.5 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào gan Trolox 53 Bảng 3.6 Kết thử nghiệm MDA tế bào não chuột viên nang AK 54 Bảng 3.7 Kết thử nghiệm MDA tế bào não chuột Trolox 55 Bảng 3.8 Hàm lượng MDA gan chuột sau ngày uống viên nang AK 57 Bảng 3.9 Hàm lượng GSH gan chuột sau ngày uống viên nang AK 59 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 135 Wong Sok Kuan, Chin Kok-Yong, Ima-Nirwana Soelaiman (2020), "Vitamin C: a review on its role in the management of metabolic syndrome" International journal of medical sciences, 17 (11), pp 1625 136 Wu Shu-Jing, Ng Lean-Teik (2008), "Antioxidant and free radical scavenging activities of wild bitter melon (Momordica charantia Linn var abbreviata Ser.) in Taiwan" LWT-Food Science and Technology, 41 (2), pp 323-330 137 Yan Qing (2018), "Stress and Systemic Inflammation: Yin-Yang Dynamics in Health and Diseases" Methods Mol Biol, 1781, pp 3-20 138 Yao Weifeng, Tai Lydia Wai, Liu Yiwei, Hei Ziqing, Li Haobo (2019), Oxidative stress and inflammation interaction in ischemia reperfusion injury: role of programmed cell death Hindawi 139 Younus Hina (2018), "Therapeutic potentials of superoxide dismutase" International journal of health sciences, 12 (3), pp 88 140 Zaeoung Sariga, Plubrukarn Anuchit, Keawpradub Niwat (2005), "Cytotoxic and free radical scavenging activities of Zingiberaceous rhizomes" Songklanakarin J Sci Technol, 27 (4), pp 799-812 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i PHỤ LỤC Phụ lục 1: Mơ hình độc tính cấp Kết nghiên cứu độc tính cấp giai đoạn sơ khởi Lượng Chuột Trọng thuốc lượng (g) n uống (g) Kết cục 01 20.3 0,111 Sống sau 01 24 cho uống 02 21.9 0,12 Sống sau 01 24 cho uống 03 19.1 0,105 Sống sau 01 24 cho uống 04 21.4 0,117 Sống sau 01 24 cho uống Chuột 01 03 mổ sau chết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ii Kết nghiên cứu độc tính cấp giai đoạn xác định Chuột Trọng Lượng n lượng (g) uống 01 22.5 0.118 Sống sau 01, 24 72 quan sát 02 18.6 0.098 Sống sau 01, 24 72 quan sát 03 22.4 0.118 Sống sau 01, 24 72 quan sát 04 23.0 0.121 Sống sau 01, 24 72 quan sát 05 24.5 0.128 Sống sau 01, 24 72 quan sát 06 20.6 0,51 Sống sau 01, 24 72 quan sát 07 21.2 0.108 Sống sau 01, 24 72 quan sát 08 19.4 0.102 Sống sau 01, 24 72 quan sát 09 20.5 0.108 Sống sau 01, 24 72 quan sát 12 18.6 0.098 Sống sau 01, 24 72 quan sát 13 23.6 0.124 Sống sau 01, 24 72 quan sát 14 18.9 0.099 Sống sau 01, 24 72 quan sát Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Kết cục Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iii Chuột đực 02 05 mổ sau chết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iv Tim 13 Rt Gan Lách Thận Chuột 13 14 mổ sau chết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i Phụ lục 2: Mơ hình in vivo Chứng sinh lý Trọng lượng Hàm lượng OD OD MDA GSH (nM/g STT MDA Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 23 23 0,116 1,025 38,52 6528,69 22 23 0,086 1,067 28,25 6795,35 22 23 0,103 1,250 34,07 7957,22 22 23 0,107 1,040 35,44 6623,93 22 23 0,079 1,119 25,85 7125,50 25 28 0,086 0,935 28,25 5957,28 24 26 0,086 1,064 28,25 6776,31 24 27 0,099 1,240 32,70 7893,73 23,00 24,50 0,095 1,093 31,414 6957,253 0,42 0,005 0,038 1,561 241,236 TB SEM 0,76 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ii (CY-) Silymarin 0,1 g/kg Trọng lượng Hàm lượng OD OD MDA GSH (nM/g STT MDA Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 23 24 0,116 0,999 38,52 6363,62 23 26 0,138 1,017 46,05 6477,90 24 26 0,081 1,113 26,53 7087,41 21 23 0,079 1,093 25,85 6960,43 21 24 0,125 1,205 41,60 7671,52 22 24 0,107 0,924 35,44 5887,44 22 25 0,125 1,301 41,60 8281,02 23 24 0,107 0,924 35,44 5887,44 TB 22,33 24,50 0,108 1,059 36,38 6827,08 SEM 0,49 0,50 0,010 0,040 2,54 299,26 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iii (CY-) viên AK Trọng lượng liều g/kg Hàm lượng OD OD MDA STT MDA GSH (nM/g Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 22 22 0,128 1,041 42,63 6630,28 22 22 0,116 0,931 38,52 5931,89 23 24 0,111 1,145 36,81 7290,58 24 25 0,129 0,933 42,97 5944,58 23 29 0,122 0,983 40,57 6262,04 22 28 0,106 0,912 35,09 5811,26 22 30 0,091 0,923 29,96 5881,09 22 35 0,090 0,954 29,62 6077,91 TB 22,50 26,88 0,112 0,978 37,02 6228,70 SEM 0,27 1,59 0,005 0,028 1,84 178,12 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iv (CY-) viên AK Trọng lượng liều 0,5 g/kg Hàm lượng OD OD MDA MDA GSH (nM/g STT Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 22 26 0,124 1,054 41,26 6712,82 24 24 0,126 0,931 41,94 5931,89 22 22 0,115 1,201 38,18 7646,12 22 22 0,110 0,969 36,46 6173,15 22 26 0,099 0,914 32,70 5823,95 22 27 0,073 0,938 23,80 5976,33 22 27 0,085 1,070 27,90 6814,40 22 29 0,107 0,924 35,44 5887,44 TB 22,25 25,38 0,105 1,000 34,71 6370,76 SEM 0,25 0,89 0,007 0,036 2,24 226,00 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh v (CY-) viên AK Trọng lượng liều 0,25 g/kg Hàm lượng OD OD MDA MDA GSH (nM/g STT Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 22 24 0,118 0,957 39,20 6096,96 22 25 0,117 0,934 38,86 5950,93 22 22 0,127 0,988 42,28 6293,78 23 24 0,117 0,930 38,86 5925,54 22 28 0,061 1,083 19,69 6896,94 22 28 0,052 0,928 16,61 5912,84 22 25 0,139 0,995 46,39 6338,22 22 30 0,109 0,959 36,12 6109,66 22,13 25,75 0,105 0,972 34,75 6190,61 0,13 0,011 0,018 3,79 115,84 TB SEM 0,94 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh vi Bệnh lý (CY+) Trọng lượng Hàm lượng OD OD MDA MDA GSH (nM/g STT Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 22 23 0,224 0,507 75,50 3239,90 23 23 0,222 0,820 74,81 5227,15 22 27 0,225 0,863 75,84 5500,15 23 30 0,271 0,707 91,59 4509,71 23 28 0,184 0,733 61,80 4674,78 22 29 0,170 0,725 57,01 4623,99 22 24 0,198 0,748 66,59 4770,02 22 23 0,176 0,715 59,06 4560,50 TB 22,38 25,88 0,209 0,727 70,27 4638,27 SEM 0,18 1,04 0,012 0,037 4,05 234,77 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh vii (CY+) Silymarin liều 0,1 g/kg Trọng lượng STT Hàm lượng OD MD A OD MDA GSH (nM/g Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 24 24 0,106 1,250 35,09 7957,22 23 23 0,096 1,235 31,67 7861,99 24 26 0,090 0,911 29,62 5804,91 24 24 0,097 0,852 32,01 5430,31 22 26 0,111 0,975 36,81 6211,24 22 28 0,088 1,218 28,93 7754,05 22 26 0,102 0,993 33,72 6325,53 24 28 0,084 1,305 27,56 8306,42 TB 23,00 25,29 0,097 1,062 31,93 6956,46 SEM 0,40 0,75 0,004 0,074 1,12 398,45 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh viii (CY+) viên AK liều g/kg Trọng lượng Hàm lượng OD OD MDA MDA GSH (nM/g STT Hàm lượng GSH (nM/g protein) N1 N7 22 24 0,153 0,810 51,19 5163,66 24 24 0,105 1,080 34,75 6877,89 23 23 0,117 0,892 38,86 5684,27 23 26 0,092 0,765 30,30 4877,95 23 29 0,148 0,855 49,47 5449,36 24 31 0,098 0,947 32,36 6033,47 22 23 0,094 0,969 30,99 6173,15 22 25 0,093 0,829 30,64 5284,29 TB 22,88 25,63 0,113 0,893 37,32 5693,01 SEM 0,30 1,03 0,009 0,036 3,01 228,40 protein) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ix (CY+) viên AK liều 0,5 g/kg Trọng lượng OD OD MDA GSH STT Hàm lượng Hàm lượng MDA GSH N1 N7 24 24 0,165 0,807 55,30 5144,61 22 24 0,160 0,781 53,58 4979,53 22 23 0,122 0,722 40,57 4604,94 22 23 0,187 0,687 62,83 4382,73 23 28 0,120 0,779 39,89 4966,84 23 24 0,158 0,772 52,90 4922,39 22 27 0,146 0,839 48,79 5347,78 22 26 0,156 1,020 52,21 6496,95 TB 22,50 24,88 0,152 0,801 50,76 5105,72 SEM 0,27 0,67 0,008 0,035 2,69 225,17 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (nM/g protein) (nM/g protein) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh x (CY+) viên AK liều 0,25 g/kg Trọng lượng Hàm lượng Hàm lượng OD OD MDA GSH MDA GSH (nM/g (nM/g protein) protein) STT N1 N7 22 23 0,161 0,727 53,93 4636,69 22 22 0,146 0,721 48,79 4598,59 23 24 0,139 0,653 46,39 4166,86 23 23 0,144 0,642 48,11 4097,02 23 28 0,149 0,876 49,82 5582,69 24 28 0,170 0,623 57,01 3976,39 22 26 0,137 0,907 45,71 5779,51 23 24 0,143 0,761 47,76 4852,55 TB 22,75 24,75 0,149 0,739 49,69 4711,29 SEM 0,25 0,82 0,004 0,037 1,37 237,26 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn