Nghiên cứu chiết tách, phân lập và hoạt tính gây độc tế bào ung thư của hợp chất 6 hydroxy 2,6 dimethyl 2,7 octadienoic acid từ phân đoạn dichloromethane của hoa đu đủ đực

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN ĐỖ NHẬT ANH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, PHÂN LẬP VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT 6-HYDROXY-2,6-DIMETHYL-2,7-OCTADIENOIC ACID TỪ PHÂN ĐOẠN DICHLOROMETHANE CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng - Năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày tháng năm 2020 Tác giả Nguyễn Đỗ Nhật Anh LỜI CẢM ƠN Trên chặng đường bốn năm học đại học Trường Đại Học Sư Phạm – Đại Học Đà Nẵng, để hồn thành tốt mơn học ứng dụng vào thực tiễn phần lớn nhờ dẫn tận tình thầy Bằng biết ơn kính trọng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến khoa Hóa Học thuộc Trường Đại Học Sư Phạm thầy cô khoa tận tình giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thiện đề tài khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, em xin bày tỏ lịng kính trọng sâu sắc đến Đỗ Thị Thúy Vân, người trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ em q trình thực hồn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp Ngồi ra, để hồn thành tốt đề tài khơng thể thiếu đóng góp bạn bè nghiên cứu giúp tạo điều kiện em tìm tịi, nghiên cứu Trong trình thực đề tài, em cố gắng chuẩn bị kiến thức trước tiến hành nghiên cứu Tuy nhiên, điều kiện lực thân hạn chế, chuyên đề nghiên cứu khoa học chắn khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong nhận đóng góp ý kiến nhà trường, thầy cô giáo bạn bè để nghiên cứu em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Bố cục luận văn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CÂY ĐU ĐỦ 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ 1.2.1 Những nghiên cứu thành phần hóa học đu đủ Thế Giới 1.2.2 Những nghiên cứu thành phần hóa học đu đủ Việt Nam 12 1.3 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ 15 1.3.1 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ Thế Giới .15 1.3.1.1 Tác dụng hạn chế sinh sản 15 1.3.1.2 Tác dụng trị giun sán 15 1.3.1.3 Tác dụng gây co thắt tử cung .16 1.3.1.4 Tác dụng kháng nấm, kháng viêm, kháng khuẩn 16 1.3.1.5 Tác dụng trị ung thư .17 1.3.1.6 Tác dụng chống oxi hóa .18 1.3.1.7 Các tác dụng dược lý khác 18 1.3.2 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ Việt Nam .18 1.3.2.1 Tác dụng kháng khuẩn 18 1.3.2.2 Tác dụng trị ung thư .19 1.3.2.3 Công dụng dân gian 21 1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ 22 1.4.1 Phương pháp MTT 22 1.4.2 Phương pháp SRB 23 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 NGUỒN NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 24 2.1.1 Nguồn nguyên liệu 24 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu .24 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật .25 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 25 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 25 2.3 SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC CAO CHIẾT .25 2.4 PHÂN LẬP HỢP CHẤT CP9 TỪ CAO CPD 27 2.5 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT HÓA HỌC 29 2.5.1 Vật liệu .29 2.5.2 Phương pháp nuôi cấp tế bào in vitro .29 2.5.3 Phương pháp thử tác dụng gây độc tế bào ung thư 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT DICHLOROMETHANE 31 3.2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT HÓA HỌC 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 KẾT LUẬN 37 KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CÁC KÍ HIỆU: d : Doublet (NMR) dd : Doublet of doublet (NMR) J(Hz) : Hằng số tương tác (NMR) Rf : Retention factor m : Multiplet (NMR) s : Singlet (NMR) t : Triplet (NMR) ppm : Parts per million (mg/kg) ppb : Parts per billion (µg/kg) δ : Độ chuyển dịch hóa học (NMR) CÁC CHỮ VIẾT TẮT NMR : Nuclear magnetic resonance H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance 13 C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance IC50 : Half maximal inhibitory concentration DMSO : Dimethyl sunfoxide DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC : Heteronuclear Single Quantum Corelation MMT : 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide SRB : Sulforhodamine B UV : Ultraviolet TCA : Trichloroacetic acid CH2Cl2 : Dichloromethane EtOAc : Ethyl acetat MeOH : Methanol EtOH : Ethanol CHCl3 : Chloroform BuOH : Butanol TLC : Thin Layer Chromatography CC : Column Chromatography HEPES : 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid DMEM : Dulbecco's Modified Eagle Medium CP9 : 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoic acid DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Phân loại khoa học đu đủ 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất CP9 hợp chất tham khảo 31 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP9 36 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh đu đủ 2.1 Hoa đu đủ đực bột hoa đu đủ đực 24 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất CP9 từ phân đoạn dịch chiết dichloromethane hoa đu đủ đực 28 3.1 Cấu trúc hóa học (a) tương tác HMBC (b) hợp chất CP9 31 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất CP9 32 3.3 Phổ 13C-NMR hợp chất CP9 33 3.4 Phổ HSQC hợp chất CP9 34 3.5 Phổ HMBC hợp chất CP9 35 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần đây, theo đà phát triển kinh tế, đời sống vật chất tinh thần người dân cải thiện đáng kể Để đáp ứng đủ tốt nhu cầu người dân khơng thể thiếu dược phẩm, thực phẩm chức bổ sung Hiện nay, xu hướng nghiên cứu khoa học phần trở khám phá tài nguyên thiên nhiên thực vật phong phú, nguồn nguyên liệu quý thiên nhiên ban tặng Để trì khai thác tối ưu hóa nguồn nguyên liệu quý đó, người vận dụng kỹ thuật, thiết bị đại vào việc tách hợp chất có phân cách hiệu góp phần mang lại ứng dụng thiết thực đời sống người Ở loại thực vật khác có cơng dụng, hoạt tính khác hợp chất vậy, có hợp chất có hoạt tính cao mang lại hiệu nâng cao giá trị sử dụng có hợp chất khơng có đặc tính ứng dụng Do đó, việc sâu vào nghiên cứu loại tìm chất tạo lợi ích việc làm nhà khoa học Đu đủ (Carica papaya L.) loại trái giàu dinh dưỡng có giá trị kinh tế Đu đủ chín có hàm lượng dinh dưỡng cao, theo phân tích thành phần hóa học, 100g thịt trái chín có chứa 86,6% nước; 12,1% tinh bột; 0,6% protein; 0,3% lipid; lượng 50 calo; 0,7% xơ; 0,5% tro; có nhiều khoáng như: Kali (204mg); Ca (34mg); P (11mg) Đặt biệt đu đủ cung cấp lượng vitamin phong phú: vitamin A (450mg); vitamin C (74mg); vitamin B1 (0,03mg); vitamin B2 (0,04mg); P (0,5mg) [15] Cây đu đủ có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới châu Mỹ Hiện nay, đu đủ trồng nước vùng nhiệt đới, nơi có nhiệt độ bình qn năm khơng thấp 150C Trên giới, vùng trồng xuất đu đủ tiếng Hawaii, đồng thời nơi sản xuất đu đủ lớn Mỹ, cung cấp 60% số tươi cho Mỹ Nhật Bản SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Sơ đồ phân lập hợp chất CP9 (6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoic acid) từ cao chiết dichloromethane trình bày Hình 2.3 Cao dichloromethane (CPD, 52g) Silica gel CC D:M gradient 100:0→0:100 CPD1 (20,6 g) CPD2 (4,0g) CPD3 (2,5g) CPD5 (15,1g) CPD4 (3,5g) Silica gel CC D:M 20:1 CPD4A (0,6g) CPD4B (1,5g) CPD4C (1,1g) Silica gel CC D:E 2:1 CPD4A1 CPD4A2 CPD4A3 CPD4A4 Silica gel CC D:M 10:1 CP9 (10 mg) Hình 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất CP9 từ cao chiết dichloromethane hoa đu đủ đực SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 28 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Hợp chất CP9: 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoic acid - Chất dầu, không màu - Công thức phân tử: C10H16O3, M = 184 - Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): Bảng 3.1 2.5 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT HÓA HỌC 2.5.1 Vật liệu - Hóa chất: L-glutamine, sodium bicarbonate, glucose, HEPES (4-(2-hydroxyethyl)1-piperazineethanesulfonic sulforhodamine B, acid), DMSO sodium 10%, pyruvate, trichloroacetic, fetal 5% bovine acetic serum, acid, tris(hydroxymethyl)aminomethane - Mẫu thử: Chất CP9 - Các dòng tế bào thử nghiệm: A549 (ung thư phổi người), MCF-7 (ung thư vú người) Hep3B (ung thư gan người) GS J M Pezzuto, Trường Đại học Hawaii, Mỹ GS Jeanette Maier, trường Đại học Milan, Italia cung cấp 2.5.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro Các dòng tế bào ung thư người nuôi cấy dạng đơn lớp môi trường nuôi cấy DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) với thành phần kèm theo gồm mM L-glutamine; 1,5 g/L sodium bicarbonate; 4,5 g/L glucose; 10 mM HEPES 1,0 mM sodium pyruvate, bổ sung 10% fetal bovine serum-FBS (Gibco) Tế bào cấy chuyển sau 3-5 ngày với tỉ lệ (1:3) nuôi tủ ấm CO2 điều kiện 37oC, 5% CO2 2.5.3 Phương pháp thử tác dụng gây độc tế bào ung thư Phương pháp thử độ độc tế bào ung thư in vitro Viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỳ (National Cancer Institute – NCI) xác nhận phép thử độ độc tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát chất có khả kìm hãm phát triển tiêu diệt tế bào ung thư điều kiện in vitro Phép thử thực theo phương pháp Monks Phép thử tiến hành xác định hàm lượng protein tế bào tổng số dựa vào mật độ quang học (OD – Optical Density) đo thành phần protein tế bào nhuộm Sulforhodamine B (SRB) Giá trị OD máy đo tỉ lệ thuận với lượng SRB gắn với phân tử protein, lượng tế bào nhiều (lượng SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 29 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân protein nhiều) giá trị OD lớn Phép thử thực điều kiện cụ thể sau: - Chất thử (10 L) pha DMSO 10% (trong nước cất vô trùng) đưa vào giếng khay 96 giếng để có nồng độ sàng lọc 100 g/mL Chất thử có hoạt tính xác định IC50 nhờ dải nồng độ 100; 20; 4; 0,8 g/mL Mỗi nồng độ mẫu thử chuẩn bị thành giếng Trypsin hóa tế bào thí nghiệm để làm rời tế bào đếm buồng đếm để điều chỉnh mật độ cho phù hợp với thí nghiệm - Thêm vào giếng thí nghiệm lượng tế bào phù hợp (190 L môi trường) để chúng phát triển vòng 3-5 ngày - Một khay 96 giếng khác khơng có chất thử có tế bào ung thư (190 L) chuẩn bị thành cột để làm đối chứng ngày Sau giờ, đĩa đối chứng ngày cố định tế bào trichloroacetic acid –TCA Sau giai đoạn phát triển tủ ấm CO2, tế bào cố định vào đáy giếng TCA 30 phút, nhuộm SRB 37 oC Đổ bỏ SRB giếng thí nghiệm rửa lần 5% acetic acid để khơ khơng khí nhiệt độ phòng Cuối cùng, sử dụng dung dịch tris(hydroxymethyl)aminomethane 10 mM để hòa tan lượng SRB bám nhuộm phân tử protein, đưa lên máy lắc đĩa, lắc nhẹ 10 phút sử dụng máy ELISA Plate Reader (Bio-Rad) để đọc kết hàm lượng màu chất nhuộm SRB thông qua phổ hấp thụ bước sóng 515-540 nm Phần trăm tế bào bị ức chế có mặt chất thử xác định thơng qua công thức sau: [OD (chất thử) – OD (ngày 0)] x 100 % Tế bào bị ức chế = 100% [OD (đối chứng âm) – OD (ngày 0)] - Các phép thử lặp lại lần để đảm bảo tính xác Ellipticine (Sigma- Aldrich, Mỹ) nồng độ 10 g/ml; g/ml; 0,4 g/ml; 0,08 g/ml sử dụng làm chất đối chứng dương DMSO 10% sử dụng đối chứng âm Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50% phát triển) xác định nhờ vào phần mềm máy tính TableCurve 2Dv4 (System software Inc., San Jose, California, Mỹ) SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 30 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT DICHLOROMETHANE Hợp chất CP9 phân lập dạng chất dầu không màu Công thức phân tử: C10H16O3, M = 184 HO 10 HO O (a) (b) Hình 3.1 Cấu trúc hóa học (a) tương tác HMBC (b) hợp chất CP9 Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất CP9 hợp chất tham khảo C δC# δCa, b δHa, c (J, Hz) 173,1 169,34 - - 127,83 - 144,0 141,52 6,62 (m) 23,7 23,08 2,11 (m) 40,5 40,61 1,48 (t, 8,0) 73,1 71,29 - 144,5 145,77 5,86 (dd, 11,0; 17,5) 112,3 111,17 4,97 (dd, 2,0; 11,0) 5,16 (dd, 2,0; 17,5) 12,1 12,22 1,70 (s) 10 28,0 27,67 1,16 (s) δC 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoic acid [35], ađo DMSO-d6, b125 MHz, c500 MHz # SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 31 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Phổ 1H-NMR (Hình 3.2) CP9 tín hiệu đặc trưng proton olefinic methine H 6,62 (1H, m, H-3) 5,86 (1H, dd, J = 11,0; 17,5 Hz, H-7), proton methylene vinylene H 5,16 (1H, dd, J = 2,0; 17,5 Hz, H-8a) 4,97 (1H, dd, J = 2,0; 11,0 Hz, H-8b), proton methylene H 2,11 (2H, m, H-4) 1,48 (2H, t, J = 8,0 Hz, H-5), proton methyl H 1,70 (3H, s, H-9) 1,16 (3H, s, H-10) Hình 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất CP9 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 32 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Phổ 13C-NMR (Hình 3.3) HSQC (Hình 3.4) CP9 tín hiệu 10 carbon, có carbon carboxylic acid C 169,34 (C-1), carbon oxymethine C 71,29 (C-6), carbon olefinic methine C 145,77 (C-7) 141,52 (C-3), carbon methylene vinylene C 111,17 (C-8), carbon methylene C 40,61 (C-5) 23,08 (C-4), carbon methyl C 27,67 (C-10) 12,22 (C-9), carbon bậc bốn C 127,83 (C-2) Hình 3.3 Phổ 13C-NMR hợp chất CP9 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 33 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Hình 3.4 Phổ HSQC hợp chất CP9 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 34 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Hình 3.5 Phổ HMBC hợp chất CP9 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 35 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Phổ HMBC (Hình 3.5) CP9 thể tương tác H3-9 (H 1,70) C-1/C-2/C-3; H3-10 (H 1,16) C-5/C-6/C-7 cho phép định vị methyl C9, C-10 Tương tác HMBC H2-5 (H 1,48) C-3/C-4/C-6/C-7 thiết lập diện nhóm methylene C-5 Thêm vào đó, tương tác HMBC H-8 (H 5,16; 4,97) C-6/C-7 xác nhận vị trí nhóm methylene vinylene C-8 Từ liệu phổ thu kết hợp với liệu phổ hợp chất tham khảo tài liệu [35], cho phép khẳng định hợp chất CP9 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7octadienoic acid (Hình 3.1) 3.2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT HÓA HỌC Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro hợp chất CP9 dòng tế bào ung thư người: ung thư phổi A549, ung thư gan Hep3B, ung thư vú MCF-7 trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP9 IC50 (µg/mL) STT Hợp chất A549 MCF-7 Hep3B CP9 78,98 ± 4,64 54,15 ± 5,89 72,25 ± 3,13 Ellipticine 0,43 ± 0,04 0,37 ± 0,03 0,50 ± 0,04 Kết luận: Hợp chất CP9 có hoạt tính gây độc tế bào ung thư dòng tế bào ung thư người A549, MCF-7, Hep3B SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 36 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong trình triển khai thực nghiệm nghiên cứu, đề tài đạt kết sau: - Từ nguyên liệu hoa đu đủ đực ban đầu, phương pháp khác thu cao chiết với dung môi hữu tương ứng: n-hexane, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate - Bằng phương pháp sắc ký cột, sắc ký mỏng phân lập hợp chất tinh khiết kí hiệu CP9 Kết xác định cấu trúc chất tinh khiết phương pháp phổ đại: phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1HNMR, 13 CNMR phổ HSQC, phổ HMBC kết luận hợp chất tinh khiết 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7octadienoic acid - Đã thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP9 dòng tế bào ung thư phổi (A549), ung thư gan (Hep 3B), ung thư vú (MCF-7) Kết thu cho thấy hợp chất CP9 thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư dòng tế bào, cụ thể: A549 với nồng độ IC50 78,98±4,64µg, Hep 3B với nồng độ IC50 72,25±3,13µg MCF-7 với nồng độ IC50 54,15±5,89µg KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu chiết tách, phân lập thêm xác định thành phần hóa học, cấu trúc chất phân lập từ phân đoạn lại dịch chiết dichloromethane hoa đu đủ đực - Thăm dò hoạt tính sinh học khác chất phân lập dịch chiết hợp chất phân lập khác SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 37 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập 1, pp 824-827 [2] Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [3] Đỗ Thị Thảo (2006) “Nghiên cứu xác định khả phòng chống ung thư chất hóa học số thuốc Việt Nam”, Luận án tiến sĩ sinh học [4] Đỗ Thị Thúy Vân (9/2019), ‘‘Nghiên cứu chiết tách phân lập hợp chất hóa học gây độc tế bào ung thư từ dịch chiết Đu đủ đực (Carica Papaya L.)‘‘, Đề tài khoa học công nghệ cấp Đại Học Đà Nẵng, số B2018ĐN03-30 [5] Giang Thị Kim Liên Đỗ Thị Lệ Uyên (2015),“Khảo sát thành phần hoá học số dịch chiết từ hoa Đu đủ đực thu hái Đà Nẵng“,Tạp chí Khoa học Cơng nghệ ĐHĐN; Số 03(88) ; Trang 119 [6] Giang Thị Kim Liên (2019), ‘‘Xác định thành phần hóa học thử nghiệm số hoạt chất sinh học có khả ức chế tế bào ung thư từ hoa Đu đủ đực‘‘, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ ĐHĐ, mã số B2017.DNA.04 [7] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007) ‘‘Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam“, Tạp chí khoa học ĐHQGHN, khoa học tự nhiên công nghệ, (23), pp 130-134 [8] Hồ Thị Hà (2014), “Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ Đu đủ(Carica papaya Linn)”, Luận án tiến sĩ Đại học Bách khoa Hà nội [9] Lê Thị Thảo (2015), ‘‘Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học số dịch chiết hoa Đu đủ đực Đại Lộc, tỉnh Quảng Nam“, Tạp chí Khoa học Công nghệ ĐHĐN [10] Lê Thị Thanh Phương (2017), ‘‘Nghiên cứu phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực thu hái Quảng Nam – Đà Nẵng‘‘, Tạp chí Khoa học Công nghệ ĐHĐN SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 38 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân [11] Nguyễn Ngọc Hòa (2014), Nước đu đủ pha đường, Nxb thực phẩm, TP Hồ Chí Minh [12] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [13] Nguyễn Tường Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khơi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983) “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ‘‘,Tạp chí dược học số [14] Phạm Kim Mãn cộng (2001),“Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung thư“, Tạp chí dược liệu, 6(2+3), pp 58-62 [15] Trần Thế Tục, Đoàn Thế Lư (2004), Cây Đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb lao động xã hội [16] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012) “Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ Đu đủ (carica papaya L.)“, Tạp chí hóa họctập 50 (4A), pp 166-169 Tiếng Anh [17] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (2007) “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from carica papaya L leaf”,Journal of food composition and analysis, vol 20, pp 584-590 [18] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002) “Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Carica papaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”,Journal of Medical Sciences, vol 2.Isuae 2.page 55-58 [19] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and Ayodele O, Soladoye (2008) “Anti - inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”, Inflammopharmacology, 16 (2008), pp 168 – 173 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 39 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân [20] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002) “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, vol 60, pp 873-882 [21] Chung-Shih Tang (1979) “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II”,Phytochemistry, 1979, vol 18, pp 651-652 [22] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965) “Carpaine and pseudocarpaine”, Tetrahedron letters No 24, pp 1907-1916 [23] Gopalakrishnan M, Rajasekharasetty MR., (1978 ), “Effect of papaya(Carica papaya Linn) on pregnancy and estrous cycle in albino rats of Wistar strain”, Indian J Physiol Pharmacol, Jan-Mar;22(1):66-70 [24] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1997), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)glucosamine on Candida albicans growth”, Mycoses, 39, 103-110 [25] He, X., et al (2017) Chemical composition and antifungal activity of Carica papaya Linn seed essential oil against Candida spp Letters in applied microbiology, 64 (5): p 350-354 [26] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008) “Review on nutritional,medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)’’,Natural product radiance, vol 7(4), pp 364-373 [27] Kermanshai R, McCarry BE, Rosenfeld J, Summers PS, Weretilnyk EA, Sorger GJ (2001), “Benzyl isothiocyanate is the chief or sole anthelmintic in papaya seed extracts”,Phytochemistry, Jun; 57(3):427-35 [28] Levecke, B., et al (2014) Cysteine proteinases from papaya (Carica papaya) in the treatment of experimental Trichuris suis infection in pigs: two randomized controlled trials Parasites & Vectors, 7(1): p 255 [29] Lohiya NK, Kothari LK, Manivannan B, Mishra PK, Pathak N, (2000), “Human sperm immobilization effect of Carica papaya seed extracts: an in vitro study”,Asian J Androl Jun;2(2):103-9 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 40 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân [30] Marline Nainggolan and Kasmirul (2015)“Cytotoxicity activity of male Carica papaya L flowers on MCF-7 breast cancer cells”,Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 2015, 7(5):772-775 , ISSN : 0975-7384 [31] Nisa, F.Z., et al.(2017) Anti-proliferation and apoptosis induction of aqueous leaf extract of Carica papaya L on human breast cancer cells MCF-7 Pakistan Journal of Biological Sciences, 2017 20: p 36-41 [32] Okoye, E (2017) Preliminary Pharmaceutical Constituents of Crude Solvent Extracts of Flower and Stalk of Male Carica papaya,2(1): p 20-26 [33] Pathak N,Mishra PK, Manivannan B, Loyhia NK, (2000), “Stertility due to inhibition of sperm motility by oral administration of benzene chromatographic fraction of the chloroform extract of the seeds of Carica papaya in rats”, Phytomedicine, 7, 325-333 [34] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011) “Antibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya”,Journal of Medicinal Plants Research, vol 5(20), pp 5167-5171 [35] Robert L Arslanian, Tara Anderson and Frank R Stermitz (1990), “Iridoid glucosides of Penstemon ambiguous”, Journal of Natural Products, 53(6), pp 1485-1489 [36] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006) “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl - in breast cancer cells line”,Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170 – 176 [37] Stephen Chinwendu Ukpabi Emmanuel O.Chukwu Henry C.Ezikpe Chizaram (2015) “Chemical Composition Of Carica Papaya Flower (Paw-Paw)”, International Journal of Scientific Research and Engineering Studies (IJSRES), Volume Issue 3, ISSN: 2349-8862 [38] Salla S et al.(2016) Antioxidant and apoptotic activity of papaya peel extracts in HepG2 cells Food and Nutrition Sciences, 7(6): p 485-494 SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 41 GVHD: ThS Đỗ Thị Thúy Vân [39] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against Ascaris suum in naturally infected pigs”, J Helminthol Dec;68(4):343-6 [40] Sripanidkulchai B, Wongpanich V, Laupattarakasem P, Suwansaksri J, Jirakulsomchok D, (2001), “Diuretic effects of selected Thai indigenous medicinal plants in rats”, J Ethnopharmacol May;75(2-3):185-90 [41] Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney S., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988), “Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”, Cancer Reseach.48: 4827 – 4833 Website [42] https://tailieu.vn/doc/cong-dung-khac-cua-cay-du-du-1500130.html [43] https://vi.wikipedia.org/wiki/Đu đủ [44] https://vi.wikipedia.org/wiki/Đu đủ#Chữa bệnh với đu đủ [45] https://vi.wikipedia.org/wiki/Họ Đu đủ#Phân loại SVTH: Nguyễn Đỗ Nhật Anh – Lớp 16CHDE Trang 42 ... ung thư Chính lý trên, tơi chọn đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách, phân lập hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất 6- hydroxy- 2, 6dimethyl- 2,7- octadienoic acid từ phân đoạn dichloromethane hoa đu đủ. .. papaya L.) phân tách 11 phân đoạn thử sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào ung thư Kết thử sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư phổi, ung thư gan ung thư vú 11 phân đoạn từ dịch chiết. .. định hợp chất CP9 6- hydroxy- 2 ,6- dimethyl- 2, 7octadienoic acid (Hình 3.1) 3.2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT HĨA HỌC Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư