Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Phân Đoạn Cao Ethyl Acetate EA4 Của Cây Ruột Gà Dạng Hóng

i  LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian hoàn thành khoá luận tốt nghiệp, em nhận nhiều quan tâm, hướng dẫn từ thầy cô, gia đình bạn bè Với lịng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết-người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quí báu tạo điều kiện thuận lợi giúp em thực khoá luận Cám ơn cô dạy em em chập chững bước vào làm đề tài tốt nghiệp động viên em lúc khó khăn Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy mơn Hố, khoa Hoá trường Đại học Sư Phạm Tp.HCM giảng dạy truyền thụ kiến thức tảng để em vận dụng để góp phần hồn thiện khóa luận Bên cạnh em xin cảm ơn anh, chị phịng thí nghiệm hóa học hợp chất thiên nhiên giúp đỡ em lúc khó khăn, người bạn bên cạnh động viên, chia sẻ niềm vui, nỗi buồn cho em nghị lực để hoàn thành khóa luận Xin chân thành cảm ơn! Tp.HCM, tháng 4, năm 2019 Bùi Thiện Quang ii  DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CÁC TỪ VIẾT TẮT brs Mũi đơn rộng (broad singlet) C Chloroform COSY Tương quan H-H (COrrelation SpectroscopY) d Mũi đôi (doublet) dd Mũi đôi-đôi (doublet of doublet) EA Ethyl Acetate H Hexane HMBC Tương quan H-C qua nhiều nối (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) HSQC Tương quan H-C (Heteronuclear Single Quantum Correlation) J Hằng số ghép (coupling constant) m Mũi đa (multiplet) Me Methanol NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) ppm Phần triệu (part per million) s Mũi đơn (singlet) SKLM Sắc Ký Lớp Mỏng SKC Sắc Ký Cột t Mũi ba (triplet) 1D/2D-NMR chiều/ chiều-phổ Cộng hưởng từ hạt nhân (One/ Two Dimensional-Nuclear Magnetic Resonance) DANH MỤC HÌNH ẢNH iii  STT Tên hình Trang Hình 1.1 Hình ảnh Spermacoce ocymoides Burm.f Hình 3.1 Cấu trúc hợp chất Q1 22 Hình 3.2 Một số tương quan HMBC hợp chất Q1 22 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất Q2 26 Hình 3.4 Một số tương quan HMBC hợp chất Q2 27 Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất so sánh 27 iv  DANH MỤC BẢNG BIỂU STT Tên bảng biểu Trang Bảng 1.1 Thành phần hóa học lồi chi Spermacoce Bảng 2.1 Kết sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate 17 Bảng 2.2 Kết sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 18 Bảng 2.3 Kết sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.3 19 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất 23 Q1 hợp chất so sánh Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất 28 Q2 hợp chất so sánh DANH MỤC SƠ ĐỒ STT Tên sơ đồ Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế cao phân đoạn cô lập hợp chất cao ethyl acetate Ruột gà dạng hóng Spermacoce ocymoides Burm.f Trang 16 v  DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất Q1 Phụ lục 1.1 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục 1.2 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục 1.3 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất Q1 Phụ lục 2.1 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục 2.2 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục Phổ COSY hợp chất Q1 Phụ lục 3.1 Phổ COSY giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục Phổ HSQC hợp chất Q1 Phụ lục 4.1 Phổ HSQC giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục Phổ HMBC hợp chất Q1 Phụ lục 5.1 Phổ HMBC giãn rộng hợp chất Q1 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất Q2 Phụ lục 6.1 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất Q2 Phụ lục 6.2 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất Q2 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất Q2 Phụ lục 7.1 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất Q2 Phụ lục 7.2 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất Q2 Phụ lục Phổ COSY hợp chất Q2 Phụ lục 8.1 Phổ COSY giãn rộng hợp chất Q2 vi  Phụ lục Phổ HSQC hợp chất Q2 Phụ lục 9.1 Phổ HSQC giãn rộng hợp chất Q2 Phụ lục 10 Phổ HMBC hợp chất Q2 Phụ lục 10.1 Phổ HMBC giãn rộng hợp chất Q2 vii  MỤC LỤC   LỜI CẢM ƠN i  DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CÁC TỪ VIẾT TẮT ii  DANH MỤC HÌNH ẢNH ii  DANH MỤC BẢNG BIỂU .iv  DANH MỤC SƠ ĐỒ iv  DANH MỤC PHỤ LỤC v  MỤC LỤC vii  MỞ ĐẦU ix  CHƯƠNG TỔNG QUAN 1  1.1 Mô tả thực vật 1  1.2 Các nghiên cứu dược tính 2  1.2.1.Tác dụng bảo vệ dày 2  1.2.2.Tác dụng kháng viêm 2  1.2.3.Tác dụng kháng ký sinh trùng chống oxi hóa 2  1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học 3  B capitata 3  CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 13  2.1 Hóa chất, thiết bị 13  2.1.1 Hóa chất 13  2.1.2 Thiết bị 13  2.1.3 Phương pháp tiến hành 14  2.1.3.1 Phương pháp phân lập hợp chất 14  2.1.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 14  2.2 Thu hái xử lý mẫu 14  2.3 Điều chế loại cao 14  2.4 Phân lập số chất hữu cao ethyl acetate 15  2.4.1 Phân lập hợp chất hữu phân đoạn EA4 16  2.4.2 Phân lập hợp chất hữu phân đoạn EA4.3 17  viii  CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19  3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất Q1 19  3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất Q2 23  KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 28  TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined.  ix  MỞ ĐẦU Xã hội ngày phát triển, mức sống người ngày nâng cao nên nhu cầu chăm sóc sức khỏe người việc quan trọng hàng đầu Để đáp ứng nhu cầu đó, việc nghiên cứu tìm hợp chất có hoạt tính sinh học cao có lồi cỏ vấn đề quan tâm toàn xã hội Trên tinh thần đó, nhiều quốc gia giới, có Việt Nam, có nhiều cơng trình nghiên cứu xác định thành phần hóa học lập nhiều hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn, chống ung thư…góp phần vào phát triển y học Chi Spermacoce (thuộc họ Rubiaceae) có khoảng 280 loài phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Mỹ, châu Phi, châu Á châu Âu [1,2] Một số lồi chi có vai trò quan trọng y học cổ truyền dùng để điều trị sốt rét, tiêu chảy, vấn đề tiêu hóa, bệnh ngồi da, sốt xuất huyết, nhiễm trùng đường tiết niệu đường hô hấp, đau đầu, viêm mắt nướu răng,…[2] Cây Ruột gà dạng hóng (Spermacoce ocymoides) thuộc chi Spermacoce xuất nhiều tỉnh nước ta: Thừa Thiên-Huế, Đà Nẵng (Tourane), Kon Tum (Đác Glây, Đác Món; Kong Plóng, Tân Lập), Lâm Đồng (Đức Trọng, Bảo Lộc), Đồng Nai (Biên Hòa), Bà Rịa-Vũng Tàu (Núi Dinh) Theo y học cổ truyển, Ruột gà dạng hóng sử dụng chữa đau đầu, nấm da, eczecma, vét loét, hắc lào, Tuy nhiên cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học Ruột gà dạng hóng cịn Chính mà Ruột gà dạng hóng chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao ethyl acetate EA4 Ruột gà dạng hóng” với mong muốn làm rõ thêm thành phần hóa học, từ hiểu thêm tác dụng chữa bệnh đóng góp chứng khoa học có giá trị vào kho dược liệu Y học dân tộc Việt Nam 1  CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật Tên khoa học Spermacoce ocymoides Burm.f Thuộc họ: Cà phê (Rubiaceae), chi: Spermacoce Spermacoce ocymoides Burm.f phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Mỹ, châu Phi châu Á [2] Ở Việt Nam phân bố Thừa Thiên-Huế, Đà Nẵng, Kon Tum (Đác Glây, Đác Món, Kong Plóng, Tân Lập), Lâm Đồng (Đức Trọng, Bảo Lộc), Đồng Nai (Biên Hòa), Bà Rịa-Vũng Tàu (Núi Dinh) Cây có tên khác Borreria ocymoides (Burm.f.) DC [1] Ở Việt Nam biết đến tên gọi Ruột gà dạng hóng Cây Ruột gà loại thảo mộc hàng năm, thân dựng lên nằm sát mặt đất Cây tương đối dễ dàng để phân biệt với lồi khác với hình elip rộng, khơng có lơng với lơng rải rác mạch lề Cây thường hoa từ tháng 3-8 hàng năm Cây thường tìm thấy đồng bằng, đất dọc theo đường, sườn đồi ngoại vi rừng vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới như: Châu Phi nhiệt đới, Mauritius, Ấn Độ, Myanmar, Java, bán đảo Malaysia Philippines [2] Cây Ruột gà dạng hóng có thân mọc sát mặt đất Lá nhỏ, với chiều dài khoảng cm, chiều rộng từ đếm 12 mm Quả dạng nang, mọc từ đài hoa có thuỳ, ln ln nằm đỉnh Hoa có màu trắng, kết thành cụm, đường kính 2.56 mm, cánh hoa dài nhiều so với ống Nhuỵ nhô ra, ngắn nhiều so với cánh hoa [1] Hình 1.1 Hình ảnh Spermacoce ocymoides Burm.f 16  STT Phân đoạn Dung môi giải Khối ly lượng Sắc kí lớp mỏng Ghi (g) EA1 H–EA 4:1 8.36 Nhiều vết kéo vệt Đã khảo sát EA2 H–EA 35:15 10.23 Nhiều vết kéo vệt Đã khảo sát EA3 H–EA 3:2 6.31 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA4 EA–Me 95:5 18.03 Nhiều vết kéo vệt Khảo sát EA5 EA–Me 90:10 7.33 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA6 EA–Me 85:15 4.93 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA7 EA–Me 80:20 4.57 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA8 EA–Me 80:20 6.25 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA9 Me 100% 7.11 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát 2.4.1 Phân lập hợp chất hữu phân đoạn EA4 Kết SKLM phân đoạn EA4 (18.03 g) cho nhiều vết, có vết tách rõ nên phân đoạn EA4 thực SKC sillica gel với hệ dung mơi rửa giải có độ phân cực tăng dần từ EA–Me 95:5, EA–Me 90:10, EA–Me 84:16, EA–Me 80:20 Me 100% Dịch giải ly qua cột hứng vào lọ Theo dõi trình giải ly SKLM Những lọ cho kết SKLM giống gom chung thành phân đoạn Kết thu phân đoạn EA4.1–EA4.6, trình bày bảng 2.2 Bảng 2.2 Kết sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 STT Phân Dung môi đoạn giải ly Trọng lượng Sắc kí lớp mỏng Ghichú (g) EA4.1 EA–Me 95:5 1.32 Vệt dài Chưa khảo sát EA4.2 EA–Me 90:10 1.88 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát EA4.3 EA–Me 84:16 3.92 Nhiều vết, có vết tách rõ Khảo sát 17  EA4.4 EA–Me 80:20 3.21 EA4.5 EA–Me 80:20 2.35 EA4.6 Me 100% 1.24 Nhiều vết, kéo vệt Nhiều vết, kéo vệt Nhiều vết, kéo vệt Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát 2.4.2 Phân lập hợp chất hữu phân đoạn EA4.3 Kết SKLM phân đoạn EA4.3 (3.92 g) cho SKLM nhiều vết, có vết tách rõ nên phân đoạn EA4.3 chọn để SKC sillica gel với hệ dung môi rửa giải EA–Me 80: 20, EA–Me–H2O 80:20:5 EA–Me–H2O 80:20:10 Kết thu phân đoạn EA4.3.1–EA4.3.6, trình bày bảng 2.3 Từ phân đoạn EA4.3.3 (0.61 g) bảng 2.3, tiếp tục SKC silica gel pha đảo nhiều lần với hệ dung môi rửa giải Me–H2O 43:7 thu hợp chất Q1 (14.51 mg) dạng bột màu trắng Từ phân đoạn EA4.3.6 (0.29 g) bảng 2.3, tiếp tục SKC silica gel pha đảo nhiều lần với hệ dung môi rửa giải Me–H2O 40:10 thu hợp chất Q2 (10.88 mg) dạng bột màu trắng Bảng 2.3 Kết sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.3 STT Phân đoạn Dung môi giải ly Trọng lượng Sắc kí lớp mỏng Ghichú (g) EA4.3.1 EA–Me 80:20 0.47 Nhiều vết, kéo vệt Chưa khảo sát EA4.3.2 EA–Me 80:20 0.72 Nhiều vết, kéo vệt Chưa khảo sát EA4.3.3 EA–Me–H2O Nhiều vết, tách Tinh chế thu tương đối hợp chất Q1 0.61 80:20:5 EA4.3.4 EA–Me–H2O 0.31 Nhiều vết, kéo vệt Chưa khảo sát 0.44 Nhiều vết 80:20:5 EA4.3.5 EA–Me–H2O 80:20:10 Chưa khảo sát 18  EA4.3.6 C–Me–H2O 80:20:10 0.29 Nhiều vết, tách Tinh chế thu tương đối hợp chất Q2 19  CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất Q1 Hợp chất Q1 (14.51 mg) thu từ phân đoạn EA4.3 có đặc điểm sau: -Dạng bột màu trắng, tan methanol -SKLM với hệ giải ly C–Me–H2O 86:14:5, không vết đèn UV, dùng acid sulfuric 20% hơ nóng cho vết màu tím đậm -Phổ 1H-NMR (CD3OD, phụ lục 1): độ chuyển dịch trình bày bảng 3.1 -Phổ 13 C-NMR (CD3OD, phụ lục 2): độ chuyển dịch trình bày bảng 3.1 -Phổ COSY (CD3OD, phụ lục 3) -Phổ HSQC (CD3OD, phụ lục 4) -Phổ HMBC (CD3OD, phụ lục 5) Biện luận cấu trúc Phổ 1HNMR xuất tín hiệu cộng hưởng proton olefin H 5.28 (1H, brs, H12), tín hiệu cộng hưởng hai proton anomer H 4.50 (1H, d, 7.5 Hz, H1') H 4.52 (1H, d, 7.5 Hz, H1") Bên cạnh đó, phổ đồ xuất tín hiệu cộng hưởng proton gắn carbon mang oxygen vùng H 4.343.24, tín hiệu nhóm methyl gắn carbon tứ cấp cộng hưởng dạng mũi đơn H 1.30, 1.19, 0.96, 0.96, 0.93 0.87 Phổ 13C-NMR cho thấy hợp chất Q1 có 30 carbon Trong có xuất tín hiệu cộng hưởng hai carbon olefin C 145.4 (C13) 123.6 (C12), hai carbon anomer cộng hưởng δC 106.0 105.2 Bên cạnh cịn có xuất tín hiệu cộng hưởng carbon mang oxygen vùng δC 88.062.2 ppm 20  Với liệu NMR cho phép dự đoán hợp chất Q1 triterpene có khung sườn oleanane có gắn hai phân tử đường Phổ HSQC cho thấy tương quan proton olefin cộng hưởng H 5.28 với carbon olefin cộng hưởng C 123.6, hai proton oxymethylene cộng hưởng H 3.64 H 3.25 tương quan với carbon cộng hưởng C 65.7 (C23) Ngoài cịn có tương quan HSQC khác giúp xác định gắn kết proton carbon tương ứng Phổ HMBC cho thấy tương quan proton olefin cộng hưởng H 5.28 với carbon cộng hưởng C 43.2 (C14), 49.5 (C9) proton nhóm methyl cộng hưởng H 1.19 (H27) cho tương quan với carbon olefin =C< cộng hưởng C 145.4 giúp xác định lại vị trí nối đơi C12 C13 Bên cạnh, hai proton oxymethylene cộng hưởng H 3.64 (H23a) 3.25 (H23b) cho tương quan với carbon C 84.0 (C3), 48.2 (C5), 43.1 (C4), 14.7 (C24) giúp xác định carbon C23 (C 65.7) mang nhóm OH Một số tương quan HMBC khác thể qua hình 3.2 Phổ COSY cho thấy tương quan proton oxymethine cộng hưởng H 4.34 với proton cộng hưởng H 3.64 (H3), 2.06 (H1a) 2.09 (H1b) giúp xác định carbon C2 mang nhóm OH Từ liệu trên, khung aglycon hợp chất Q1 dự đốn oleanolic acid có mang nhóm OH vị trí C2 C23 Proton H2 có số ghép J = 3.0 Hz giúp xác định OH vị trí C2 định hướng  Tương quan HMBC từ proton anomer δH 4.51 (δC 105.2) đến carbon C3 (δC 84.0) ngược lại tín hiệu proton H3 (H 3.64) cho tương quan với C1' (C 105.2) giúp dự đoán phân tử đường thứ gắn vào khung aglycon vị trí C3 Proton anomer thứ hai δH 4.52 (δC 106.0) tương quan HMBC với carbon cộng hưởng C 88.0 (C3') ngược lại tín hiệu proton H3' (H 3.52) cho tương quan với C1'' (C 106.0) giúp xác định phân tử đường thứ hai gắn vào phân tử đường thứ C3' 21  Kết hợp phổ COSY, HMBC, HSQC giúp xác định phân tử đường thứ có carbon cộng hưởng C 105.2, 74.6, 88.0, 69.4, 77.4, 62.2 (C1', C2', C3', C4', C5', C6') phân tử đường thứ hai có carbon cộng hưởng C 106.0, 74.6, 77.7, 71.2, 67.1 (C1", C2", C3", C4", C5") Dựa vào số ghép J H4' (H 3.46, dd, 9.5, 8.5 Hz) H3" (H 3.37, dd, 9.0, 9.0 Hz) giúp dự đoán phân tử đường thứ glucose phân tử đường thứ hai xylose Từ tất liệu phổ NMR hợp chất Q1 kết hợp so sánh với số liệu phổ nghiệm hợp chất 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-D-glucopyranosyl-2,23dihydroxyoleanolic acid [25] (bảng 3.1) cho thấy có tương đồng Vậy cấu trúc hóa học hợp chất Q1 đề nghị 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-Dglucopyranosyl-2,23-dihydroxyoleanolic acid Hình 3.1 Cấu trúc 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-D-glucopyranosyl-2,23dihydroxyoleanolic acid (Q1) Hình 3.2 Một số tương quan HMBC hợp chất Q1 22  Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất Q1 hợp chất so sánh(*) Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Glc 24 25 26 27 28 29 30 1' 2' 3' 4' 5' 6' Xyl 1" 2" 3" 4" 5" Q1 (CD3OD) C (ppm) H (ppm), J (Hz) 44.4 4.34 (m) 71.2 3.64 (d, 4.0) 84.0 43.1 48.2 18.6 33.9 40.6 49.2 37.5 24.7 5.28 (brs) 123.6 145.4 43.2 28.8 24.1 47.7 2.88 (dd, 14.0, 4.0) 42.8 47.3 31.6 35.0 33.5 3.64 (d, 11.0) 65.7 3.25 (d, 10.5) 0.96 (s) 14.7 1.30 (s) 17.5 0.85 (s) 17.9 1.19 (s) 26.5 182.1 0.93 (s) 24.0 0.96 (s) 33.6 Hợp chất so sánh (*) (pyridine-d5) C (ppm) 44.1 70.8 82.7 42.8 47.5 17.9 32.9 39.8 48.5 36.9 23.9 122.7 144.8 42.2 28.2 23.6 46.6 41.9 46.3 30.9 34.1 33.2 64.8 15.0 17.1 17.4 26.2 180.1 23.7 33.2 4.51 (d, 7.5) 3.48 (dd, 9.0, 7.5) 3.52 (dd, 9.5, 9.0) 3.46 (dd, 9.5, 8.5) 3.44 (m) 3.83 (dd, 12.0, 2.5) 3.72 (dd, 12.0, 4.0) 105.2 74.6 88.0 69.4 77.4 105.5 74.3 87.6 69.3 77.9 62.2 62.1 4.52 (d, 7.5) 3.30 (dd, 9.0, 7.5) 3.37 (dd, 9.0, 9.0) 3.54 (m) 3.93 (dd, 11.5, 5.5) 3.28 (m) 106.0 75.3 77.7 71.2 106.3 75.3 78.2 70.8 67.1 67.4 (*) Hợp chất so sánh: 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-D-glucopyranosyl-2,23dihydroxy-oleanolic acid [25] 23  3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất Q2 Hợp chất Q2 (10.88 mg) thu từ phân đoạn EA4.3 có đặc điểm sau: -Dạng bột màu trắng, tan tốt methanol -SKLM với hệ giải ly CMeH2O 40:10:1, vết đèn UV, dùng với acid sulfuric 20% hơ nóng cho vết màu tím hồng -Phổ 1H-NMR (CD3OD, phụ lục 6): độ chuyển dịch trình bày bảng 3.2 -Phổ 13C-NMR (CD3OD, phụ lục 7): độ chuyển dịch trình bày bảng 3.2 -Phổ COSY (CD3OD, phụ lục 8) -Phổ HSQC (CD3OD, phụ lục 9) -Phổ HMBC (CD3OD, phụ lục 10) Biện luận cấu trúc Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu cộng hưởng proton anomer δH 5.39 (1H, d, 1.0 Hz) 4.43 (1H, d, 7.5 Hz), proton gắn carbon mang oxygen cộng hưởng vùng δH 4.433.20 Ngồi cịn có tín hiệu nhóm methyl gắn carbon tứ cấp δH 1.25, 1.23, 1.08, 1.07, 1.05, 0.94 0.87, có proton nhóm methyl xuất dạng mũi đơi δH 1.23 (d, 6.5 Hz) giúp dự đốn cấu trúc hợp chất Q2 có chứa phân tử đường rhamnose Phổ 13 C-NMR cho thấy hợp chất Q2 có 30 carbon Trong carbon anomer cộng hưởng δC 105.6 101.9, carbon mang oxygen cộng hưởng vùng δC 90.3-62.8 ppm Qua liệu NMR giúp dự đoán hợp chất Q2 triterpene có gắn hai phân tử đường 24  Kết hợp phổ HSQC HMBC cho thấy hợp chất Q2 có carbon olefin tứ cấp δC 150.9 hai carbon >C=O δC 213.0 180.0 ppm Sự biến proton olefin khung triterpene với xuất tín hiệu cộng hưởng carbon olefin >C= δC 150.9 giúp dự đốn hợp chất Q2 có nối đôi dạng >C=C< Tương quan HMBC từ proton hai nhóm methyl cộng hưởng δH 0.86 1.07 đến carbon cộng hưởng δC 90.2 (>CHO); 40.4 (>CCH, C5) giúp xác định hai nhóm methyl vị trí C4 Proton nhóm methyl cộng hưởng δH 1.25 cho tương quan với carbon cộng hưởng δC 150.9 (>C=, C13); 46.3 (>CCC=O), 46.4 (>CC= vị trí C13, nhóm oxo (>C=O) có gắn thêm hai phân tử đường Khi thực SKLM hợp chất Q2 với hệ dung môi CMeH2O 40:10:1 cho vết hấp thu UV giúp dự đốn hợp chất có nối đơi liên hợp Trong khung sườn oleanane, nối đơi >C=C< vị trí C13 C18 độ dịch chuyển hóa học δC hai carbon C13 C18 nằm khoảng 135.6126.3 ppm [26] Khi nối đôi C13 C18 liên hợp với nối đơi >C=O vị trí C19 C13 C18 có độ dịch chuyển hóa học δC 151.1 (C13) 134.2 (C18) [27] Kết hợp so sánh số liệu phổ NMR hợp chất Q2 với số liệu NMR hợp chất 2α,3α-dihydroxy-19-oxo-olean-13(18)-ene-28-oic acid (hợp chất so sánh) cho thấy có tương đồng vịng D, E (bảng 3.2) nên dự đốn hợp chất Q2 có nối đơi vị trí C13 C18 25  Tương quan HMBC từ proton anomer δH 4.43 (δC 105.6) đến carbon C3 (δC 90.2) giúp dự đoán phân tử đường thứ gắn vào khung aglycon C3 Proton anomer thứ hai δH 5.39 (δC 101.9) tương quan với carbon cộng hưởng δC 80.0 (C2') giúp xác định phân tử đường thứ hai gắn vào phân tử đường thứ vị trí C2' Kết hợp phổ COSY, HSQC, HMBC xác định phân tử đường thứ có carbon cộng hưởng δC 105.6, 79.0, 79.5, 72.1, 77.6, 62.8 phân tử đường thứ hai có carbon cộng hưởng δC 101.9, 72.1, 72.2, 74.0, 70.0 18.0 Proton H4' cộng hưởng dạng mũi đôi-đôi với số ghép J=8.5, 8.0 Hz giúp dự đoán H4' nằm vị trí xích đạo phân tử đường thứ βD-glucose Từ liệu NMR trên, cấu trúc hợp chất Q2 đề nghị 3-O-(α-L-rhamnopyranosyl-(12)-β-D-glucopyranosyl)-19-oxo-olean-13(18)ene-28-oic acid Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất Q2 26  Hình 3.4 Một số tương quan HMBC hợp chất Q2 Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất so sánh 27  Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất Q2 hợp chất so sánh(**) Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Glc 1' 2' 3' 4' 5' 6' Rha 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' 6'' Q2 (CD3OD) δH (ppm) (J-Hz) δC (ppm) 35.5 27.4 3.22 (dd, 11.5, 7.5) 90.2 40.3 57.4 18.4 40.4 44.0 52.4 38.3 23.7 28.2 150.9 46.3 29.2 32.7 52.4 1.07 (s) 0.86 (s) 0.94 (s) 0.94 (s) 1.25 (s) 1.08 (s) 1.05 (s) 213.0 46.4 37.5 36.1 28.5 17.1 17.2 18.4 21.2 180.0 25.6 25.0 4.43 (d, 7.5) 3.42 (dd, 9.0, 7.5) 3.49 (dd, 9.0, 8.5) 3.31 (dd, 8.5, 8.0) 3.26 (m) 3.89 (dd, 12.0, 2.0) 3.68 (dd, 12.0, 5.0) 105.6 79.0 79.5 72.1 77.6 62.8 5.39 (d, 1.0) 3.97 (dd, 3.0, 1.5) 3.77 (dd, 10.0, 3.5) 3.40 (dd, 10.0, 9.5) 4.00 (d, 3.5) 1.23 (d, 6.5) 101.9 72.1 72.2 74.0 70.0 18.0 Hợp chất so sánh(**) (pyridine-d5) δC (ppm) 43.4 66.4 79.4 38.9 48.9 18.4 34.7 43.4 51.3 39.1 23.3 27.4 151.1 45.8 28.6 32.2 53.1 134.2 208.0 45.5 36.4 35.2 29.6 22.3 17.7 17.8 21.0 178.4 25.9 24.7 (**) Hợp chất so sánh: 2α,3α-dihydroxy-19-oxo-olean-13(18)-ene-28-oic acid [27] 28  KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Cây Ruột gà dạng hóng Spermacoce ocymoides Burm.f., họ Cà phê (Rubiaceae) thu hái Long An vào năm 2016 định danh TS Đặng Văn Sơn, Viện Sinh học nhiệt đới miền Nam Cây sau thu hái rửa sạch, phơi khơ nhiệt độ phịng, sau đem xay thành bột khơ (10,5 kg) Bột sử dụng phương pháp ngâm dầm để điều chế cao ethanol ban đầu Sau dùng phương pháp chiết lỏng lỏng với n-hexane, ethyl acetate để điều chế loại cao tương ứng Bằng kỹ thuật sắc ký cột, sắc kí lớp mỏng, hai hợp chất với kí hiệu Q1 (14.51 mg), Q2 (10.88 mg) cô lập từ phân đoạn cao ethyl acetate EA4 Bằng phương pháp phổ nghiệm đối chiếu với tài liệu tham khảo, cấu trúc hóa học hai hợp chất nói đề nghị 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-D-glucopyranosyl-2,23-dihydroxyoleanolic acid (Q1) 3-O-(α-L-rhamnopyranosyl-(12)-β-D-glucopyranosyl)-19-oxo-olean13(18)-ene-28-oic acid (Q2) 3-O-β-D-xylopyranosyl-(13)-β-D-glucopyranosyl-2,23-dihydroxyoleanolic acid (Q1) 29  3-O-(α-L-rhamnopyranosyl-(12)-β-D-glucopyranosyl)-19-oxo-olean-13(18)ene-28-oic acid (Q2) Trong phạm vi khóa luận, nghiên cứu phân đoạn EA4 cao ethyl acetate Ruột gà dạng hóng Trong thời gian tới, có đủ điều kiện, chúng tơi tiếp tục khảo sát phân đoạn khác cao ethyl acetate Ruột gà dạng hóng để cô lập thêm hợp chất khác 30  ... vi khóa luận, chúng tơi nghiên cứu phân đoạn EA4 cao ethyl acetate Ruột gà dạng hóng Trong thời gian tới, có đủ điều kiện, tiếp tục khảo sát phân đoạn khác cao ethyl acetate Ruột gà dạng hóng. .. đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao ethyl acetate EA4 Ruột gà dạng hóng? ?? với mong muốn làm rõ thêm thành phần hóa học, từ hiểu thêm tác dụng chữa bệnh đóng góp chứng khoa học có... y học cổ truyển, Ruột gà dạng hóng sử dụng chữa đau đầu, nấm da, eczecma, vét loét, hắc lào, Tuy nhiên cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học Ruột gà dạng hóng cịn Chính mà Ruột gà dạng hóng