NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC

D. NUÔI C Y T BÀO G CẤ Ế Ố ∗ Mu i vô cố ơ ∗ Carbohydrate, acid béo, amino acid ∗ Vitamine ∗ Y u t vi l ngế ố ượ ∗ Huy t thanhế Thành ph n môi tr ng nuôi c yầ ườ ấ 1. Nuôi c y s c pấ ơ ấ  Là quá trình nuôi c y đ c th c hi n tr c ấ ượ ự ệ ự ti p t m nh mô ban đ u đ n khi c y chuy n ế ừ ả ầ ế ấ ề l n th nh tầ ứ ấ  G m các b c: thu nh n mô ồ ướ ậ  tách r i các ờ t bào ế  nuôi c y t bàoấ ế 2. Nuôi c y th c pấ ứ ấ  Là quá trình nuôi c y đ c th c hi n sau l n ấ ượ ự ệ ầ c y chuy n đ u tiênấ ề ầ  G m các b c: lo i b môi tr ng cũ ồ ướ ạ ỏ ườ  r a ử bình/đĩa nuôi  tách các t bào g c bám vào ế ố đáy đĩa  pha loãng các t bào g c b ng môi ế ố ằ tr ng m iườ ớ Thu nh n và nuôi c y t bào g c t t y x ng chu tậ ấ ế ố ừ ủ ươ ộ Đùi chu t v a đ c thu nh nộ ừ ượ ậ R a t y x ng b ng dung d ch ử ủ ươ ằ ị D’MEM và thu nh n huy n phù t ậ ề ế bào Thu nh n x ng đùi chu tậ ươ ộ Lóc b ph n c và th tỏ ầ ơ ị R a l i b ng dung d ch PBSử ạ ằ ị C t b hai đ u x ng đùiắ ỏ ầ ươ Nuôi t bào trong d ng c nuôi phù h pế ụ ụ ợ Pha m u máu thu đ c v i dung d ch PBS/2mM EDTA theo t l 1:1ẫ ượ ớ ị ỉ ệ Dùng pipette hút 15 ml dung d ch Ficoll_Hypaque vào ng ly tâm 50mlị ố Rót nh 30 ml h n h p PBS và máu lên trên l p dung d ch ẹ ỗ ợ ớ ị Ficoll_Hypaque sao cho không làm xáo đ ng b m t ộ ề ặ Ficoll_Hypaque/m uẫ Ly tâm 30’ 1500v\phút, nhi t đ phòngở ệ ộ Tách t bào đ n nhân ra t pha gi aế ơ ừ ữ R a 2-3 l n v i PBS/EDTAử ầ ớ Tái huy n phù t bào trong môi tr ng nuôi c yề ế ườ ấ Thu nh n và nuôi c y t bào g c t máu cu ng r nậ ấ ế ố ừ ố ố • Bi t hóa t bào g cệ ế ố là quá trình bi n đ i t ế ổ ừ t bào g c không có ch c năng chuyên bi t ế ố ứ ệ thành t bào chuyên hóaế . E. Bi t hóa t bào g c.ệ ế ố Nguyên t cắ ∗ Lo i b các tác nhân bi t hóa không đ nh ạ ỏ ệ ị h ng.ướ ∗ C m ng t bào g c bi t hóa thành d ng ả ứ ế ố ệ ạ t bào mong mu n b ng các tác nhân ế ố ằ bi t hóa thích h pệ ợ . ∗ M t s hormone, cytokine, vitamin, các ion ộ ố Ca2+ . ∗ tác đ ng lên t bào làm t bào thay đ i s ộ ế ế ổ ự bi u hi n c a genể ệ ủ Bi t hóa b ng hóa ch tệ ằ ấ ∗ D a vào s t ng tác gi a t bào và ch t ự ự ươ ữ ế ấ n n trong nuôi c y t bào in vitro.ề ấ ế ∗ M i mô khác nhau có thành ph n ch t n n ỗ ầ ấ ề ngo i bào ECM (Extra cellular matrixạ ) c a ủ riêng nó. ∗ B sung ECM thích h p vào nuôi c y in ổ ợ ấ vitro giúp các t bào g c có th bi t hóa ế ố ể ệ thành các t bào mong mu n.ế ố Bi t hóa b ng các ch t n nệ ằ ấ ề . b c: thu nh n mô ồ ướ ậ  tách r i các ờ t bào ế  nuôi c y t bào ế 2. Nuôi c y th c pấ ứ ấ  Là quá trình nuôi c y đ c th c hi n sau l n ấ ượ ự ệ ầ c. a ử bình/đĩa nuôi  tách các t bào g c bám vào ế ố đáy đĩa  pha loãng các t bào g c b ng môi ế ố ằ tr ng m iườ ớ Thu nh n và nuôi c y t bào g c t t y