(Luận văn thạc sĩ) xác định mối liên quan giữa đa hình đơn RS3738423 của gen NPHS2 với chỉ số protein creatinin niệu ở bệnh nhân mắc hội chứng thận hư tiên phát tại bệnh viện nhi trung ương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP rm ac y, VN U KHOA Y DƯỢC ed ici ne ĐÀM VĂN QUÝ XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ht @ Sc ho ol of M ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG Co py rig KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH Y ĐA KHOA HÀ NỘI - 2019 y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Ph arm ac ĐÀM VĂN QUÝ ea nd XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ho ol of M ed ici n ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG Sc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH Y ĐA KHOA t@ Khóa: QH 2013.Y ThS BS Vũ Vân Nga Co py rig h Người hướng dẫn: TS Vũ Thị Thơm HÀ NỘI - 2019 y, VN U LỜI CẢM ƠN arm ac Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Vũ Thị Thơm – Giảng viên Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, người thầy ln hướng dẫn bảo tận tình, cho tơi nhiều ý kiến nhận xét quý báu truyền đạt cho tinh thần học hỏi, làm việc nghiêm túc q trình tơi thực khóa luận nd Ph Tôi xin chân thành cảm ơn ThS.Bs Vũ Vân Nga - Giảng viên Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, người thầy tận tâm giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu, tạo điều kiện thuận lợi sẵn sàng giải đáp thắc mắc để tơi hồn thành khóa luận ed ici n ea Để thực tốt khóa luận này, tơi trân trọng cảm ơn tài trợ Đại học Quốc gia Hà Nội cho đề tài mã số QG.16.23 Trong trình học tập, làm việc thực khóa luận, tơi nhận giúp đỡ thầy cô bạn sinh viên làm việc thực tập Phịng thí nghiệm Bộ mơn Y dược học sở – Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn of M Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm khoa, tồn thể thầy giáo Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội cho tơi kiến thức q báu q trình học tập trường Hà Nội, ngày 06 tháng 05 năm 2019 Co py rig h t@ Sc ho ol Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên, khích lệ tơi lúc khó khăn q trình thực khóa luận Đàm Văn Quý y, VN U DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Base pair (Cặp bazơ nitơ) DNA Deoxyribo Nucleic Acid (Axit Deoxynucleic) dNTP Deoxynucleotide triphosphate EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid (Axit ethylene diamine tetraacetic) FSGS Focal segmental glomerulosclerosis (Xơ hóa cầu thận khu trú phần) HCTH Hội chứng thận hư HCTHTP Hội chứng thận hư tiên phát MCD Minimal Change Disease (Tổn thương tối thiểu) NCBI National Center for Biotechnology Information (Trung tâm Thông tin Công nghệ Sinh học Quốc gia – Mỹ) NC Nhạy cảm KTM Kháng thuốc muộn KTS Kháng thuốc sớm of ho ol Kilobase (= 1000 bp) OD t@ PCR rig h SNP py VPF Optical Density (Mật độ quang) Sc Kb Co M ed ici n ea nd Ph arm ac bp Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) Single nucleotide polymorphism (Đa hình đơn nucleotide) Vascular permeability factor (Yếu tố thấm mạch máu) y, VN U DANH MỤC CÁC BẢNG 19 Bảng 3.1 Giới tính nhóm bệnh nhân 23 arm ac Bảng 2.1 Thành phần chu trình nhiệt PCR nhân dòng exon gen NPHS2 23 Bảng 3.3 Tuổi khởi phát trung bình nhóm bệnh nhân 24 Bảng 3.4 Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen rs3738423 (C>T) exon ba nhóm bệnh nhân 31 nd Ph Bảng 3.2 Tuổi khởi phát trung bình tuổi trung bình 32 Bảng 3.6 Tuổi khởi phát theo alen đột biến rs3738423 exon 32 Bảng 3.7 Protein máu theo alen đột biến rs3738423 exon 33 Bảng 3.8 Albumin máu theo alen đột biến rs3738423 exon 34 Bảng 3.9 Protein niệu theo alen đột biến rs3738423 exon 35 Bảng 3.10 Protein/creatinin niệu theo alen đột biến rs3738423 exon 36 Bảng 3.11 Chỉ số protein máu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon 38 ho ol of M ed ici n ea Bảng 3.5 Phân bố giới theo alen đột biến rs3738423 exon Sc Bảng 3.12 Chỉ số albumin máu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon 40 Bảng 3.14 Chỉ số protein/creatinin niệu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon 41 rig h t@ Bảng 3.13 Chỉ số protein niệu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon py Co 39 y, VN U DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Tế bào podocyte bình thường bệnh lý arm ac Hình 1.2 Gen NPHS2 vai dài nhiễm sắc thể số vị trí 25.2 Hình 1.3 Cấu trúc màng lọc cầu thận Hình 1.4 Một số đột biến gen NPHS2 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph Hình 3.1 Kết giải trình tự đa hình thái đơn rs3738423 (C>T) 11 12 13 30 Biểu đồ 3.1 Phân bố bệnh nhân mắc HCTH theo giới y, VN U DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ 25 Biểu đồ 3.3 Giá trị trung bình albumin máu nhóm bệnh nhân thời điểm 26 Ph arm ac Biểu đồ 3.2 Giá trị trung bình protein máu nhóm bệnh nhân thời điểm nd Biểu đồ 3.4 Giá trị trung bình protein niệu nhóm bệnh nhân thời điểm py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea Biểu đồ 3.5 Giá trị trung bình protein/creatinin niệu nhóm bệnh nhân thời điểm Co 22 27 28 y, VN U Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hội chứng thận hư tiên phát 1.1.1 Khái niệm .3 arm ac 1.1.2 Đặc điểm dịch tễ 1.1.3 Cơ chế sinh bệnh học HCTHTP .4 1.1.4 Tiêu chuẩn chẩn đoán HCTHTP HCTHTP kháng corticosteroid Ph 1.1.5 Điều trị HCTHTP Đa hình di truyền NPHS2 11 ea 1.2 nd 1.1.6 Vai trò số Protein/Creatinin niệu chẩn đoán theo dõi điều trị HCTHTP .10 ici n 1.2.1 Vị trí, cấu trúc, vai trò gen NPHS2 11 1.2.2 Đa hình đơn rs3738423 gen NPHS2 .13 ed CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4 Xử lý số liệu 21 2.5 Đạo đức nghiên cứu 21 ho ol of M 2.1 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 Đặc điểm chung 22 Sc 3.1 t@ 3.1.1 Giới 22 3.1.2 Tuổi 23 Kết cận lâm sàng 25 rig h 3.2 3.2.1 Chỉ số protein máu .25 py 3.2.2 Chỉ số albumin máu .26 Co 3.2.3 Chỉ số protein niệu .27 3.2.4 Chỉ số protein/creatinin niệu .28 Kết tần số phân bố alen tỷ lệ kiểu gen 29 y, VN U 3.3 3.3.1 Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen 29 3.3.2 Liên quan đến giới tính 32 3.3.3 Liên quan đến tuổi khởi phát .32 arm ac 3.3.4 Liên quan đến protein máu 33 3.3.5 Liên quan đến albumin máu 34 3.3.6 Liên quan đến protein niệu 35 3.3.7 Liên quan đến protein/cretinin niệu .36 Ph Mối liên quan đa hình thái đơn rs3738423 với số sinh hóa 37 nd 3.4 3.4.1 Chỉ số protein máu .38 ea 3.4.2 Chỉ số albumin máu .39 ici n 3.4.3 Chỉ số protein niệu .40 3.4.4 Chỉ số protein/cretinin niệu 41 ed KẾT LUẬN 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig h t@ Sc ho ol of PHỤ LỤC M KIẾN NGHỊ .44 y, VN U ĐẶT VẤN ĐỀ ea nd Ph arm ac Hội chứng thận hư tiên phát (HCTHTP) hội chứng cầu thận mạn tính thường gặp trẻ em, đặc trưng thoát protein nước tiểu tổn thương cầu thận Bệnh kéo dài nhiều tháng với đợt triệu chứng bột phát thuyên giảm xen kẽ Tỷ lệ mắc HCTHTP có khác tùy chủng tộc, vùng địa lý giới tỷ lệ trung bình từ đến 16,9/100.000 trẻ em [16] Khó khăn lớn điều trị hội chứng thận hư (HCTH) tình trạng kháng thuốc corticosteroid, chiếm tỷ lệ 10-15% hay 20% gần nửa số bệnh nhân kháng thuốc tiến triển tới suy thận giai đoạn cuối vòng 10 năm, ảnh hưởng lớn đến sức khỏe sống [40, 5] ho ol of M ed ici n Trong chẩn đoán theo dõi hội chứng thận hư xét nghiệm sinh hóa máu nước tiểu đóng vai trị vơ quan trọng Bên cạnh biểu lâm sàng phù, đái máu … nhà lâm sàng ln quan tâm đến số protein máu, albumin máu, protein niệu 24 … Và đặc biệt số protein/creatinin niệu với xác, thuận tiện tin cậy việc đánh giá protein niệu 24 giờ, giúp cho việc chẩn đoán sớm hội chứng thận hư theo dõi điều trị bệnh việc thu thập nước tiểu 24 gặp khó khăn [10, 2] Co py rig h t@ Sc Sự phát triển mạnh mẽ ngành sinh học phân tử đại mở bước ngoặt chẩn đoán điều trị bệnh tật nói chung bệnh cầu thận nói riêng Các nhà khoa học phát podocin, protein đảm nhiệm vai trị chức lọc cầu thận Podocin mã hóa gen NPHS2 gồm exon nằm nhiễm sắc thể số người (1q25-31) [20] Đột biến gen NPHS2 dẫn đến sai lệch cấu trúc podocin, ảnh hưởng đến chức lọc cầu thận, yếu tố dẫn đến HCTH Và đặc biệt đa hình rs3738423 (tên khác S96S hay 288C>T) SNP (single nucleotide polymorphism) vị trí nucleotide 16170 exon gen NPHS2, có liên quan chặt chẽ tới HCTHTP kháng corticosteroid [20] Qua nghiên cứu 97 bệnh nhi mắc HCTHTP, Junli cộng thấy rs3738423 dường có tác dụng bảo vệ y, VN U Bàn luận đa hình thái đơn rs3738423 với số sinh hóa Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac Như vậy, tương tác alen đột biến rs3738423 C>T exon mức độ đáp ứng thuốc corticosteroid khơng có ảnh hưởng lên số protein máu, albumin máu, protein niệu lại có ảnh hưởng lên số protein/creatinin niệu thời điểm vào viện viện Chúng nhận thấy đa hình thái đơn rs3738423 có tác dụng bảo vệ bệnh nhân nhóm NC KTM mà làm giảm protein/creatinin niệu bệnh nhân thuộc hai nhóm Tuy vậy, đa hình thái đơn rs3738423 lại làm tăng protein/creatinin niệu nhóm bệnh nhân KTS Chính điều làm nghĩ đến giả thuyết đột biến vị trí rs3738423 có tác dụng bảo vệ bệnh nhân có đáp ứng thuốc ban đầu, lại làm tình trạng bệnh nhân khơng đáp ứng trở nên xấu Tác dụng đa hình đơn rs3738423 gặp nghiên cứu Junli ơng thấy đa hình bảo vệ bệnh gốc Trung Quốc, tác dụng lại không gặp nhóm bệnh nhân từ phía Bắc phía Đơng Trung Quốc Sự khác biệt khác biệt tần số alen biến thể di truyền miền Bắc miền Nam Trung Quốc [32] 42 y, VN U KẾT LUẬN arm ac Nghiên cứu thực 149 bệnh nhân HCTHTP có 58 trường hợp nhạy cảm corticoid, 56 trường hợp kháng thuốc sớm, 35 trường hợp kháng thuốc muộn điều trị Bệnh viện Nhi Trung Ương từ 09/2015 đến 03/2017, rút kết luận sau: ea nd Ph Đa hình đơn chủ yếu ba nhóm nhạy cảm, kháng thuốc sớm, kháng thuốc muộn CC với tỷ lệ 81,03%, 76,79% 80% Đa hình TT gặp trường hợp, nằm nhóm nhạy cảm kháng thuốc muộn Chính alen C chiếm tỷ lệ cao nhóm với tỷ lệ alen C/T 0,9/0,1 nhóm nhạy cảm, nhóm kháng thuốc sớm 0,88/0,12 nhóm kháng thuốc muộn 0,89/0,11 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n Đa hình thái đơn rs3738423 có tác dụng làm giảm số protein/creatinin niệu nhóm bệnh nhạy cảm kháng thuốc muộn, lại làm tăng số nhóm bệnh nhân kháng thuốc sớm 43 y, VN U KIẾN NGHỊ arm ac Trong khuôn khổ đề tài với cỡ mẫu cịn hạn chế chưa thấy rõ ảnh hưởng mối tương quan đa hình di truyền kiểu gen rs3738423 gen NPHS2 lên số sinh hóa bệnh nhân Có thể tiến hành với cỡ mẫu lớn để khẳng định mối liên quan quần thể bệnh nhân nhi mắc hội chứng thận hư tiên phát Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph Ngồi tiến hành phân tích tương tác SNP khác gen NPHS2 với tình trạng kháng corticosteroid Phân tích tương tác HCTH kháng corticosteroid với gen khác NPHS1, WT1, CD2AP, ACTN4… để xây dựng panel xét nghiệm di truyền hỗ trợ công tác điều trị HCTHTP corticosteroid 44 y, VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Sc Tiếng Anh ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac Phạm Văn Đếm, Nguyễn Thị Quỳnh Hương Nguyễn Thu Hương (2015), "Một số yếu tố dịch tễ lâm sàng Hội chứng thận hư Khoa Thận Lọc máu, Bệnh viện Nhi Trung ương năm 2015", Tạp chí Y học Thực hành, 624(45-53 Phạm Thu Hiền, Trịnh Thị Phương Dung, Trần Thị Chi Mai (2012), "Tiện ích số protein/cretinin nước tiểu đánh giá protein niệu hội chứng thận hư trẻ em", Tạp chí nghiên cứu y học, 80(3), 35-39 Phạm Trung Kiên (2016), Giáo trình Nhi khoa, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Trần Đình Long (2012), Bệnh học thận tiết niệu sinh dục lọc máu trẻ em, Nhà xuất Y học Dương Thị Thúy Nga (2011), Nhận xét kết điều trị hội chứng thận hư tiên phát kháng corticosteroid khoa Thận - Tiết niệu bệnh viện Nhi Trung Ương, Luận văn thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội Trần Hữu Minh Quân, Loan Huỳnh Thoại Quang Nguyễn Ðức (2014), "Đặc điểm hội chứng thận hư kháng steroid bệnh viện Nhi Đồng I", Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 18(4), 80-86 Nguyễn Ngọc Sáng (1987), Nhận xét đặc điểm lâm sàng sinh học qua 52 trường hợp HCTHTP thể kháng thuốc trẻ em, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ nội trú bệnh viện, Đại học Y Hà Nội Nguyễn Ngọc Sáng (1999), Đánh giá hiệu điều trị Methylprednisolon thay đổi miễn dịch trước sau điều trị hội chứng thận hư tiên phát trẻ em, Luận án tiến sĩ y học, Đại học Y Hà Nội Đoàn Thị Thắm (2012), Nhận xét kết điều trị hội chứng thận hư tiên phát, Luận văn thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội Co py rig h t@ 10 Abitbol Carolyn, Zilleruelo Gaston, Frendlich Michael, et al (1990), "Quantitation of proteinuria with urinary protein/creatinine ratios and random testing with dipsticks in nephrotic children", The Journal of pediatrics, 116(2), 243-247 11 Adamson O, Trachtman H and Tejani A (1986), "Urinary protein electrophoresis patterns in childhood idiopathic nephrotic syndrome", The International journal of pediatric nephrology, 7(4), 181-186 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U 12 Akchurin Oleh and Reidy Kimberly J (2015), "Genetic causes of proteinuria and nephrotic syndrome: impact on podocyte pathobiology", Pediatric Nephrology, 30(2), 221-233 13 Audard Vincent, Larousserie F, Grimbert P, et al (2006), "Minimal change nephrotic syndrome and classical Hodgkin's lymphoma: report of 21 cases and review of the literature", Kidney international, 69(12), 2251-2260 14 Bakker Winston W, Van Dael Catharina Ml, Pierik Leonie Jwm, et al (2005), "Altered activity of plasma hemopexin in patients with minimal change disease in relapse", Pediatric Nephrology, 20(10), 1410-1415 15 Banaszak Beata and Banaszak Paweł (2012), "The increasing incidence of initial steroid resistance in childhood nephrotic syndrome", Pediatric Nephrology, 27(6), 927-932 16 Banh Tonny Hm, Hussain-Shamsy Neesha, Patel Viral, et al (2016), "Ethnic differences in incidence and outcomes of childhood nephrotic syndrome", Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 11(10), 1760-1768 17 Bhimma Rajendra, Adhikari Miriam and Asharam Kareshma (2006), "Steroid-resistant nephrotic syndrome: the influence of race on cyclophosphamide sensitivity", Pediatric Nephrology, 21(12), 1847-1853 18 Biswas Arnab, Kumar R, Chaterjee A, et al (2009), "Quantitation of proteinuria in nephrotic syndrome by spot urine protein creatinine ratio estimation in children", Mymensingh medical journal: MMJ, 18(1), 67-71 19 Bouchireb Karim, Boyer Olivia, Gribouval Olivier, et al (2014), "NPHS Mutations in Steroid‐Resistant Nephrotic Syndrome: A Mutation Update and the Associated Phenotypic Spectrum", Human mutation, 35(2), 178-186 20 Boute Nicolas, Gribouval Olivier, Roselli Séverine, et al (2000), "NPHS2, encoding the glomerular protein podocin, is mutated in autosomal recessive steroid-resistant nephrotic syndrome", Nature genetics, 24(4), 349 21 Brenner Barry M, Hostetter Thomas H and Humes H David (1978), "Molecular basis of proteinuria of glomerular origin", New England Journal of Medicine, 298(15), 826-833 22 Caridi Gianluca, Bertelli Roberta, Carrea Alba, et al (2001), "Prevalence, genetics, and clinical features of patients carrying podocin mutations in steroidresistant nonfamilial focal segmental glomerulosclerosis", Journal of the American Society of Nephrology, 12(12), 2742-2746 23 Chang Jei-Wen, Tsai Hsin-Lin, Wang Hsin-Hui, et al (2009), "Clinicopathological features and prognosis of Chinese children with idiopathic nephrotic syndrome between different age groups", European journal of pediatrics, 168(10), 1189-1194 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U 24 Day Clara J, Cockwell Paul, Lipkin Graham W, et al (2002), "Mycophenolate mofetil in the treatment of resistant idiopathic nephrotic syndrome", Nephrology Dialysis Transplantation, 17(11), 2011-2013 25 Ding Wen Y and Saleem Moin A (2012), "Current concepts of the podocyte in nephrotic syndrome", Kidney research and clinical practice, 31(2), 87-93 26 Gbadegesin Rasheed and Smoyer William E (2008), Nephrotic syndrome, Elsevier Inc 27 Glomerulonephritis Kdigo Clinical Practice Guideline For (2012), "Steroidsensitive nephrotic syndrome in children", Kidney International Supplements 2, chapter 3, 163-171 28 Glomerulonephritis Kdigo Clinical Practice Guideline For (2012), "Steroidsensitive nephrotic syndrome in children", Kidney International Supplements 2, chapter 4, 162-176 29 Ha Tae-Sun (2013), "Roles of adaptor proteins in podocyte biology", World journal of nephrology, 2(1), 30 Hahn Deirdre, Hodson Elisabeth M, Willis Narelle S, et al (2015), "Corticosteroid therapy for nephrotic syndrome in children", Cochrane Database of Systematic Reviews, 3) 31 Joshi Bhoomi B, Mistry Kinnari N, Gang Sishir, et al (2017), "Characterization of NPHS2 gene polymorphisms associated to steroid resistance nephrotic syndrome in Indian children", Gene, 628(134-140 32 Junli Huang (2012), Genetics of nephrotic syndrome in singapore pediatrics patients, Doctoral dissertation, National University Singapore 33 Kang Hee Gyung and Cheong Hae Il (2015), "Nephrotic syndrome: what's new, what's hot?", Korean journal of pediatrics, 58(8), 275-282 34 Karle Stephanie M, Uetz Barbara, Ronner Vera, et al (2002), "Novel mutations in NPHS2 detected in both familial and sporadic steroid-resistant nephrotic syndrome", Journal of the American Society of Nephrology, 13(2), 388393 35 Koskimies O, Vilska J, Rapola J, et al (1982), "Long-term outcome of primary nephrotic syndrome", Archives of disease in childhood, 57(7), 544-548 36 Lennon Rachel, Singh Anurag, Welsh Gavin I, et al (2008), "Hemopexin induces nephrin-dependent reorganization of the actin cytoskeleton in podocytes", Journal of the American Society of Nephrology, 19(11), 2140-2149 37 Lombel Rebecca M, Gipson Debbie S and Hodson Elisabeth M (2013), "Treatment of steroid-resistant nephrotic syndrome in children: new guidelines from KDIGO", Pediatric Nephrology, 28(3), 409–414 38 Mccarthy Hugh J, Bierzynska Agnieszka, Wherlock Matt, et al (2013), "Simultaneous sequencing of 24 genes associated with steroid-resistant nephrotic Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U syndrome", Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 8(4), 637648 39 Megremis Spyridon, Mitsioni Andromachi, Mitsioni Artemis G, et al (2009), "Nucleotide variations in the NPHS2 gene in Greek children with steroidresistant nephrotic syndrome", Genetic testing and molecular biomarkers, 13(2), 249-256 40 Mekahli Djalila, Liutkus Aurelia, Ranchin Bruno, et al (2009), "Long-term outcome of idiopathic steroid-resistant nephrotic syndrome: a multicenter study", Pediatric Nephrology, 24(8), 1525-1532 41 Mubarak Muhammed, Lanewala Ali, Kazi Javed Iqbal, et al (2009), "Histopathological spectrum of childhood nephrotic syndrome in Pakistan", Clinical and experimental nephrology, 13(6), 589-593 42 Niaudet Patrick (2004), "Podocin and nephrotic syndrome: implications for the clinician", 15(3), 832-834 43 Pavenstadt Hermann, Kriz Wilhelm and Kretzler Matthias (2003), "Cell biology of the glomerular podocyte", Physiological reviews, 83(1), 253-307 44 Rachmadi Dedi, Melani Ani and Monnens Leo (2015), "NPHS2 gene mutation and polymorphisms in indonesian children with steroid-resistant nephrotic syndrome", Open Journal of Pediatrics, 5(01), 27 45 Reiser Jochen, Von Gersdorff Gero, Loos Martin, et al (2004), "Induction of B7-1 in podocytes is associated with nephrotic syndrome", The Journal of clinical investigation, 113(10), 1390-1397 46 Roy Ranjit Ranjan, Islam Md Rafiqul, Jesmin Tahmina, et al (2013), "Prognostic Value of Biochemical and Hematological Parameters in Children with Nephrotic Syndrome", Journal of Shaheed Suhrawardy Medical College, 5(2), 9598 47 Sadowski Carolin E, Lovric Svjetlana, Ashraf Shazia, et al (2015), "A single-gene cause in 29.5% of cases of steroid-resistant nephrotic syndrome", Journal of the American Society of Nephrology, 26(6), 1279-1289 48 Savin Virginia J, Sharma Ram, Sharma Mukut, et al (1996), "Circulating factor associated with increased glomerular permeability to albumin in recurrent focal segmental glomerulosclerosis", New England Journal of Medicine, 334(14), 878-883 49 Schwarz Karin, Simons Matias, Reiser Jochen, et al (2001), "Podocin, a raft-associated component of the glomerular slit diaphragm, interacts with CD2AP and nephrin", The Journal of clinical investigation, 108(11), 1621-1629 50 Tory Kálmán, Menyhárd Dóra K, Woerner Stéphanie, et al (2014), "Mutation-dependent recessive inheritance of NPHS2-associated steroid-resistant nephrotic syndrome", Nature genetics, 46(3), 299 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U 51 Tryggvason Karl, Patrakka Jaakko and Wartiovaara Jorma (2006), "Hereditary proteinuria syndromes and mechanisms of proteinuria", New England Journal of Medicine, 354(13), 1387-1401 52 Wada Takehiko and Nangaku Masaomi (2015), "A circulating permeability factor in focal segmental glomerulosclerosis: the hunt continues", Clinical kidney journal, 8(6), 708-715 53 Weber Stefanie, Gribouval Olivier, Esquivel Ernie L, et al (2004), "NPHS2 mutation analysis shows genetic heterogeneityof steroid-resistant nephrotic syndrome and lowpost-transplant recurrence", Kidney international, 66(2), 571579 54 Weening Jan J (2004), "Role of the immune system in the pathogenesis of idiopathic nephrotic syndrome", Clinical Science, 107(2), 125-136 55 Wharram Bryan L, Goyal Meera, Wiggins Jocelyn E, et al (2005), "Podocyte depletion causes glomerulosclerosis: Diphtheria toxin–induced podocyte depletion in rats expressing human diphtheria toxin receptor transgene", Journal of the American Society of Nephrology, 16(10), 2941-2952 56 Wong William (2007), "Idiopathic nephrotic syndrome in New Zealand children, demographic, clinical features, initial management and outcome after twelve‐month follow‐up: Results of a three‐year national surveillance study", Journal of paediatrics and child health, 43(5), 337-341 57 Wu Mei‐Chen, Wu Jer‐Yuarn, Lee Cheng‐Chun, et al (2001), "A novel polymorphism (c288C> T) of the NPHS2 gene identified in a Taiwan Chinese family", Human mutation, 17(1), 81-82 58 Yu Zihua, Ding Jie, Huang Jianping, et al (2005), "Mutations in NPHS2 in sporadic steroid-resistant nephrotic syndrome in Chinese children", Nephrology Dialysis Transplantation, 20(5), 902-908 59 Zhu Li, Yu Lei, Wang Chen‐Dan, et al (2009), "Genetic effect of the NPHS2 gene variants on proteinuria in minimal change disease and immunoglobulin A nephropathy", Nephrology, 14(8), 728-734 y, VN U PHỤ LỤC Phụ lục Quy trình tách chiết ADN tổng số sử dụng E.Z.N.A blood DNA Mini Kit Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac Rã đông mẫu máu đá để hóa chất nhiệt độ phịng Lắc ống máu Chuyển 250 µl mẫu vào ống ly tâm vơ trùng Thêm 25 µl OB Protease Solution 250 µl BL Buffer Vortex 10 giây Ủ 65oC 10 phút Chú ý: Sau ủ phút, vortex 15 giây Thêm 260 µl Ethanol 100%, vortex 20 giây Ly tâm 1000 vòng/ phút 15 giây để đảm bảo mẫu khơng dính thành nắp ống Chèn HiBind ADN Mini Column vào Collection Tube 2ml Chuyển toàn mẫu vào cột (để pipet mức 790 µl) Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 10.Bỏ dịch lọc Collection Tube 11.Lắp HiBind ADN Mini Column vào Collletion Tube 2ml 12.Thêm 500 µl HBC Buffer 13.Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 14.Bỏ dịch lọc sử dụng lại Colletion Tube 15.Thêm 700 µl ADN Wash Buffer 16.Ly tâm phút 10.000g 17.Bỏ dịch lọc sử dụng lại Colletion Tube 18.Lặp lại bước 14 đến 16 cho bước rửa thứ với ADN Wash Buffer 19.Ly tâm HiBind ADN Mini Column 14.000 vịng/ phút phút để làm khơ cột 20.Chuyển HiBind ADN Mini Column vào ống ly tâm 2ml 21 Thêm 100 µl Elution Buffer (đã làm ấm đến 65oC) Ủ 65oC phút 22.Ly tâm 14.000 vịng/ phút phút 23.Thêm 50 µl Elution Buffer phút nhiệt độ phòng Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U 24.Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 25.Thu vào bảo quản ADN -20oC y, VN U Phụ lục Quy trình kiểm tra chất lượng ADN thông qua điện di Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac Bước 1: Chuẩn bị gel agarose Pha Agarose bột đệm TAE 1X để đạt nồng độ dung dịch gel agarose 1,5% Đun lò vi sóng cho agarose tan hồn tồn, sau để nguội đến 50 – 60oC đổ vào khay điện di có cài sẵn lược để tạo giếng nhỏ Sau khoảng 30 phút, gel đông, gỡ lược đặt gel vào bể điện di tư nằm ngang Đổ đệm TAE 1X vào bể điện di ngập cách mặt gel 1- mm Bước 2: Tra mẫu ADN Mẫu ADN trộn với ADN dye 6X (chất chứa hai chất nhuộm màu khác nhau: bromophenol xanh xylene cyanol FF để theo dõi trực quan di chuyển gel điện trường, 5µl ADN mẫu 5µl ADN thang chuẩn Lambda/Hind III Marker tra vào giếng Bước 3: Chạy điện di Quá trình chạy điện di tiến hành hiệu điện 70V 60 phút ADN di chuyển từ cực âm sang cực dương Quan sát di chuyển màu để biết dừng điện di Bản gel lấy nhẹ khỏi khuôn soi ghi hình ánh sáng tử ngoại M of ho ol Sc t@ rig h py Co arm ac Ph nd Nguyễn Tường Duy A Hoàng Bá T Hoàng Trường G Nguyễn Thị Thu T Trần Kỳ A Đào Đức N Trần Duy Q Trần Minh K Ngô Mai T Tống Văn Bảo N Lưu Hương G Kiều Thị Hải M Trần Ngọc H Nguyễn Quốc C Nguyễn Vũ Ngọc K Lê Bá Đ Thái Hữu L Vũ Gia L Đỗ Thị H Linh Minh H Phạm Phát L Vũ Đức S Bàn Phúc T Tô Đức T Phạm Thị T Nguyễn Quang K Trần Thị T Lê Tuyền C Vũ Thị T Bùi Quý T Vũ Văn T Vi Thị L Trần Như Q Ngô Minh H Trần Thị T ea 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Mã số Tuổi theo Mã Bệnh án nghiên cứu tháng 6036891 156 1442007 72 14057109 30 13895851 156 14324321 84 1412076 13 12010952 84 13272173 22 1365113 48 10 13014385 84 11 1272332 36 12 10311182 108 13 1441181 19 14 12373036 60 15 15655257 120 16 15048355 48 17 12140932 120 18 1155156 60 19 10188213 180 20 1159764 48 21 1522067 22 1540593 24 23 15013604 60 24 1548717 36 25 13226994 108 26 14263657 22 27 110445724 96 28 9178578 96 29 14549602 156 30 14099239 60 31 1254905 84 32 1456893 120 33 12134331 48 34 14913054 36 35 15047747 156 ici n Họ tên ed STT y, VN U Phụ lục Danh sách bệnh nhân nghiên cứu Giới Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ rig h py Co M of ho ol Sc Ph Nam Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam y, VN U 40 24 72 72 96 36 48 60 60 72 96 84 84 24 84 84 48 27 36 84 36 192 36 156 108 168 108 60 84 96 144 21 36 36 72 19 23 60 36 arm ac 15021680 14201553 8028096 13247781 8178553 15075971 15091226 12420282 12012758 11273228 6149804 1131667 15092824 14098246 15091226 12282569 13017764 14249115 1562488 15959621 1244943 14154999 12288479 13091482 14787434 15098519 9867548 13754482 11156232 15173540 15216008 13345118 15698321 15201208 14578711 15282015 14020982 15268347 16216630 nd ici n ea 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 70 71 72 73 75 76 ed Nguyễn Đình Q Trần Bích L Phạm Vũ Hoàng A Vương Ngọc Anh Đ Nguyễn Thị Thanh N Nguyễn Ngọc M Vũ Tiến Đ Nguyễn Phương D Lê Chung H Nguyễn Thị Bích D Nguyễn Thị Phương A Đồng Sĩ N Phạm Hoàng A Bùi Thị Mai Ph Nguyễn An K Hoàng Phúc H Nguyễn Vũ Tùng A Đặng Sĩ H Trần Hữu Trung H Phạm Anh V Trần Xuân Q Lù Văn T Ngô Lệ Q Nguyễn Văn Q Nguyễn Thị M Trương Ngọc H Nguyễn Đức A Nguyễn Xuân P Chu Anh Đ Lê Ngọc T Nguyễn Quốc V Bùi Trung H Nguyễn Tuấn D Bùi Trần Trung K Nguyễn Tiến D Phan Hoàng B Nguyễn Trà M Hoàng Ngọc H Lê Hữu T t@ 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 rig h py Co M of ho ol Sc Ph nd ici n Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam y, VN U 11 36 60 168 84 60 84 144 24 36 36 72 84 84 84 48 24 180 84 15 156 24 84 108 24 120 72 108 20 36 120 21 72 72 72 36 168 36 96 arm ac 15418678 12346758 15031374 9654541 9090541 15401660 15283636 15419293 15411255 15127786 15127786 14408549 13148391 10021888 14376414 15429714 15423610 7567891 12091887 14318341 11564534 15893412 8030107 11274618 15443427 15191961 15449964 15448091 15031163 12346758 98756321 150832325 15471902 15466754 9204549 15471981 5093951 12144943 12276423 ea 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 ed Vũ Đặng Lam A Nguyễn Hoàng H Nguyễn Văn T Đinh Ngọc K Nguyễn Tứ M Hà Hải N Nguyễn Thùy L Nguyễn Thị H Nguyễn Đình Khánh N Đỗ Quang T Đỗ Quang M Nguyễn Hoàng L Hoàng Lê Anh T Trịnh Duy T Nguyễn Anh K Lê Ngọc Minh T Đỗ Quang T Đinh Gia L Ma Văn T Nguyễn Hồng T Nguyễn Thị Vân A Nguyễn Hồng L Lê Đình H Nguyễn Thu H Nguyễn Văn T Lê Thanh N Phạm Khánh D Hoàng Xuân T Hà Thùy L Nguyễn Hoàng H Nguyễn Nam K Nguyễn Đức T Nguyễn Thu H Lý Tiến V Kiều Quang H Trần Tiến H Hoàng Minh Đ Trần Xuân Q Ngô Tuấn H t@ 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 Sc ho ol rig h py Co Ph nd ici n Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam y, VN U 72 25 48 48 19 60 72 144 30 10 96 16 96 65 42 108 68 60 96 60 36 48 96 96 60 84 23 144 48 23 41 40 42 72 36 60 arm ac 150468754 15471998 15477328 159632689 15693567 13002230 15048796 15482293 15484670 15472951 15478474 150507512 15339756 1620798 161579878 160064623 130018648 15974873 160003947 150397659 130030728 160088801 160081160 13252878 160082327 1173669 15175177 15842395 160056100 1330728 16121216 130303164 150176067 150398425 16113523 16113262 ea 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 143 144 145 146 147 148 149 151 152 153 154 ed of M Đỗ Văn H Phạm Thị Bảo C Vũ Văn D Lê Ngọc Minh T Lê Phương N Thạch Phúc T Hứa Xuân T Nguyễn Văn T Tạ Bảo L Phạm Huy Nhật M Trần Khánh G Đặng Duy A Hoàng Hải N Nguyễn Thiên  Đào Yến N Tào Minh Đ Lê Quỳnh A Nguyễn Đức D Trương Quang B Đặng Hải N Nguyễn Nhật T Nguyễn Huy H Hoàng Minh Đ Nguyễn Trường T Nguyễn Gia H Trần Đức T Lê Xuân K Hoàng Thị H Nguyễn Huy H Nguyễn Nhật T Vũ Đức M Ngô Văn D Tran Le Bao H Lê Đình H Trần Lê Trí D Vũ Đăng K t@ 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 ... VĂN QUÝ ea nd XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ho ol of M ed ici n ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/ CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI. .. đa hình thái đơn rs3738423 gen NPHS2 bệnh nhân nhi mắc HCTHTP - Xác định mối liên quan đa hình thái đơn rs3738423 với số protein/ creatinine niệu bệnh nhân nhi mắc HCTHTP y, VN U CHƯƠNG TỔNG QUAN. .. hình đơn rs3738423 gen NPHS2 với số protein/ creatinin niệu bệnh nhân mắc hội chứng thận hư tiên phát Bệnh viện Nhi Trung Ương? ?? Ph Mục tiêu: Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd - Xác định