Nghiên cứu một số loài malassezia sp gây bệnh lang ben ở bệnh nhân đến khám tại bệnh viện da liễu trung ương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ========= NGUYỄN THỊ THO NGHIÊN CỨU MỘT SỐ LOÀI MALASSEZIA SP GÂY BỆNH LANG BEN Ở BỆNH NHÂN ĐẾN KHÁM TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƢƠNG LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC HÀ NỘI – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ========= NGUYỄN THỊ THO NGHIÊN CỨU MỘT SỐ LOÀI MALASSEZIA SP GÂY BỆNH LANG BEN Ở BỆNH NHÂN ĐẾN KHÁM TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƢƠNG Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM THẾ HẢI HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực luận văn tốt nghiệp, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ dẫn tận tình Trước tiên, tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc, phịng Tổ chức cán bệnh viện Da liễu Trung ương tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Thế Hải, người thầy hướng dẫn giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Cẩm Vân tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Hữu Sáu, kiến thức quý báu giúp đỡ tuyệt vời thầy giúp thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn cán phòng xét nghiệm Nấm, tập thể khoa Vi sinh, nấm, ký sinh trùng - Bệnh viện Da liễu Trung ương giúp đỡ, động viên khích lệ tơi nhiều suốt thời gian thực luận văn thạc sĩ Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Bộ môn Vi sinh vật học thầy cô thuộc Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội mang đến kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu trường Sau cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, người thân bạn bè ln sát cánh động viên, khích lệ giúp đỡ tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quí báu đó! Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Tho DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT BN : Bệnh nhân KHV : Kính hiển vi M caparae : Malassezia caparae M cuniculi : Malassezia cuniculi M dermatis : Malassezia dermatis M equina : Malassezia equina M furfur : Malassezia furfur M globosa : Malassezia globosa M japonica : Malassezia japonica M nana : Malassezia nana M obtusa : Malassezia obtusa M pachydermatis : Malassezia pachydermatis M restricta : Malassezia restricta M slooffiae : Malassezia slooffiae M sympodialis : Malassezia sympodialis M yamatonensis : Malassezia yamatoensis Malassezia spp : Malassezia species plus P orbiculair : Pityrosporum orbiculair P ovale : Pityrosporum ovale NaOH : Natri hydroxit TB/VT : Tế bào/Vi trƣờng KL : Khuẩn lạc ĐK : Đƣờng kính MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Lịch sử nấm Malassezia bệnh lang ben 1.2 Đặc điểm sinh học Malassezia spp 1.3 Cơ chế gây bệnh 1.4 Một số yếu tố thuận lợi 1.5 Lang ben số biểu bênh lý khác nấm Malassezia 1.5.1 Bệnh lang ben Malassezia 1.5.2 Một số bệnh lý khác nấm Malassezia 10 1.6 Đặc điểm đa dạng phân bố loài Malassezia gây bệnh lang ben 11 1.7 Các phƣơng pháp chẩn đoán Malassezia bệnh lang ben 12 1.8 Tình hình bệnh lang ben nghiên cứu nấm Malassezia gây bệnh lang ben giới Việt Nam 13 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.1.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán 17 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn 17 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 17 2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 17 2.3 Vật liệu nghiên cứu .18 2.3.1 Trang thiết bị, dụng cụ 18 2.3.2 Hóa chất 18 2.3.3 Môi trƣờng 18 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu 19 2.4.2 Cỡ mẫu nghiên cứu .19 2.4.3 Các kỹ thuật nghiên cứu 19 2.5 Các tiêu nghiên cứu 24 2.5.1 Các tiêu đánh giá cho mục tiêu nghiên cứu 24 2.5.2 Các tiêu đánh giá cho mục tiêu nghiên cứu 25 2.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 25 2.7 Các biện pháp hạn chế sai số 26 2.8 Đạo đức nghiên cứu 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28 3.1 Tỷ lệ bệnh lang ben bệnh nhân đến khám 28 3.1.1 Tình hình chung nhiễm bệnh lang ben 28 3.1.2 Phân bố bệnh lang ben theo mùa 29 3.1.3 Phân bố bệnh lang ben theo lứa tuổi bệnh nhân 31 3.1.4 Phân bố bệnh lang ben theo giới tính bệnh nhân 32 3.1.5 Phân bố bệnh lang ben theo nghề nghiệp bệnh nhân 33 3.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học tính đa dạng nấm men Malassezia spp gây bệnh lang ben phân lập đƣợc 34 3.2.1 Kết soi trực tiếp Malassezia kính hiển vi .34 3.2.2 Kết phân loại đánh giá tính đa dạng chủng Malassezia spp phân lập đƣợc từ vẩy da bệnh nhân lang ben 36 KẾT LUẬN 48 HƢỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Tình hình nhiễm bệnh lang ben bệnh nhân nghiên cứu 28 Bảng 3.2 Kết xét nghiệm soi trực tiếp từ vảy da 34 Bảng 3.3 Kết nuôi cấy từ vảy da bệnh nhân lang ben 36 Bảng 3.4 Đặc điểm loài Malassezia môi trƣờng SDA, mDixon 37 Bảng 3.5 Đặc điểm loài Malassezia thạch nghiêng TE CHROMagar Malassezia 37 Bảng 3.6 Đặc điểm sinh hóa lồi Malassezia 38 Bảng 3.7 Tổng hợp kết định danh chủng Malassezia theo loài 41 Bảng 3.8 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo giới .43 Bảng 3.9 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo địa dƣ 44 Bảng 3.10 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo màu sắc dát thƣơng tổn 45 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hoạt động Malassezia vi hệ da ngƣời chế gây bệnh số bệnh da Hình 1.2 Hình ảnh dát trắng (a) dát nâu (b) bệnh lang ben Hình 1.3 Hình ảnh giả sợi nấm vả tế bào nấm men Malassezia soi trực tiếp dung dịch NaOH 20% dƣới kính hiển vi vật kính 40x 13 Hình 3.1 Phân bố bệnh theo mùa năm 29 Hình 3.2 Tình hình bệnh nhân đến khám bệnh theo tháng năm .30 Hình 3.3 Phân bố bệnh lang ben theo tuổi 31 Hình 3.4 Phân bố bệnh theo giới 32 Hình 3.5 Phân bố bệnh theo nghề nghiệp 33 Hình 3.6 Kết thống kê hình thái Malassezia qua soi trực tiếp 35 Hình 3.7 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo nhóm tuổi 42 Hình 3.8 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo vị trí thƣơng tổn 46 Hình 3.9 Phân bố lồi Malassezia theo hình thái kính hiển vi 47 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho ĐẶT VẤN ĐỀ Malassezia spp nấm men thuộc vi hệ da ngƣời động vật máu nóng Cho đến nay, phát đƣợc 14 loài thuộc vi nấm bao gồm: M globosa, M furfur, M dermatis, M sympodialis, M restricta, M obtusa, M slooffiae, M pachydermatis, M equina, M japonica, M cuniculi, M yamatoensis, M nana M caprae Các biểu bệnh lý Malassezia bao gồm: lang ben, viêm da dầu, viêm da địa, viêm nang lông, gàu da đầu… bệnh lang ben thƣờng gặp Bệnh gây ảnh hƣởng tới gần 1% dân số giới nói chung có báo cáo cho thấy số nƣớc có khí hậu nhiệt đới tỷ lệ bệnh lên tới 50% dân số [23] Tại Việt Nam, bệnh lang ben đƣợc miêu tả từ lâu có số nghiên cứu đề cập Theo tác giả Trần Lan Anh, bệnh lang ben chiếm 3,1% số ngƣời đƣợc khám, điều tra tỷ lệ mắc bệnh da xã Vĩnh Phúc, Thanh Trì, Hà Nội [9] Theo Phạm Văn Hiển cộng năm 1995, nghiên cứu đặc điểm bệnh ngồi da cơng ty Thƣợng Đình, Hà Nội tỷ lệ bệnh 3,5% [6] Tại Bệnh viện Da liễu Trung ƣơng, theo Nguyễn Thị Tuyết Mai cộng năm 1998, tỷ lệ bệnh 1,76% tổng số bệnh nhân đến phòng khám [2] Các phƣơng pháp định danh nấm nói chung Malassezia nói riêng chƣa phổ biến Việt Nam Sở dĩ nhƣ Malassezia khó ni cấy chúng không mọc môi trƣờng cấy nấm thông thƣờng mà cần điều kiện đặc biệt Tuy nhiên, việc xác định xác lồi nấm gây bệnh quan trọng, để bác sỹ lựa chọn phác đồ điều trị phù hợp với bệnh nhân Về mặt đại thể, lồi vi nấm Malassezia có đặc điểm khuẩn lạc tƣơng đối giống nhau, nhƣng số đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa có khác biệt chủng Do đó, tìm hiểu đặc tính sinh học phân loại vi nấm Malassezia, từ đƣa phƣơng pháp định danh vi nấm xác cần thiết, phục vụ cho nghiên cứu Có Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho thể thấy, có số cơng trình nghiên cứu bệnh lang ben Việt Nam, phần lớn nghiên cứu cịn mang tính đơn lẻ địa phƣơng Vì tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu số loài Malassezia sp gây bệnh lang ben bệnh nhân đến khám Bệnh viện Da liễu Trung ƣơng” với mục tiêu: Xác định tỷ lệ bệnh lang ben bệnh nhân đến khám Bệnh viện Da liễu Trung ương từ 03/2017 đến tháng 02/2018 Tìm hiểu tính đa dạng lồi nấm men Malassezia gây bệnh lang ben Bệnh viện Da liễu Trung ương từ 03/2017 đến tháng 02/2018 Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho Loài M dermatis 3a 3b 40 20 CrE 60 80 3c 3d Hình 3a: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 3b: Hình thái nhuộm Gram Hình 3c: Khuẩn lạc mơi trƣờng CHROMagar Malassezia Hình 3d: Phản ứng với Tween CremophorEL Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho Loài M sympodialis 4a 4b 40 20 CrE 60 80 4c Hình 4a: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 4b: Hình thái nhuộm Gram Hình 4c: Khuẩn lạc mơi trƣờng CHROMagar Malassezia Hình 4d: Phản ứng với Tween CremophorEL Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho Lồi M restricta 5a 5b Hình 5a: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 5b: Hình thái nhuộm Gram Hình 5c: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 5d: Hình thái nhuộm Gram Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho Lồi M obtusa 6a 6c Hình 6a: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 6b: Hình thái nhuộm Gram Hình 6c: Khuẩn lạc mơi trƣờng mDixon Hình 6d: Hình thái nhuộm Gram Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho PHẢN ỨNG CATALASE Phản ứng Catalase dƣơng tính Phản ứng Catalase âm tính PHẢN ỨNG THẠCH NGHIÊNG TE Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho MẪU BỆNH ÁN BỆNH NHÂN LANG BEN I Thông tin chung: Họ tên: Địa chỉ: Tuổi: 3.Địa dƣ: 4.Ngày vấn:   Nghề nghiệp: - Nông dân - HSSV  - Tự  - CBCNV  - Khác Triệuchứng: * TT bản: Dát thay đổi màu sắc 6.1 Dát hồng 6.2 Dát trắng 6.3 Dát nâu * Cơ  Ngứa - Có 6.4  Cảm giác châm chích - Có 6.5  Bong vẩy cám mỏng - Có 6.6 6.7 Đỏ da Vị trí vùng da hay nhiễm Massezia spp 7.1 Đầu 7.2 Mặt 7.3 Lƣng 7.4 Ngực 7.5 Vai 7.6 Tay 7.7 Chân 7.8 Khác…………… Mức độ bệnh 8.1 Nhẹ  Thời gian bị bệnh 9.1 Dƣới tháng 8.2 Vừa   8.3 Nặng 9.2 Từ 3-6 tháng 10 Tính chất bệnh: 10.1 Bệnh lần đầu     10.2 Tái phát  Dƣơng 9.3 Trên tháng 10.3 Tái nhiễm  Âm   11 Soi đèn Wood AI Kỹ thuật xác định Malassezia gây bệnh lang ben Xét nghiệm trực tiếp 1.1 Lấy bệnh phẩm - Cạo vẩy da Khoa Sinh học Có  - Khơng  Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho  - Băng dính Có 1.2 Hóa chất: NAOH+Blue Black Ink - Sợi nấm - Bào tử nấm - Sợi bào tử nấm 1.3 Nhận định kết 1.3.1 Âm tính 1.3.2 Dƣơng tính Đếm số lƣợng tế bào Nấm men 1.4 Độ tập trung: 1.4.1 Đám 1.4.2 Rải rác Nuôi cấy phân loại 2.1 Nuôi cấy 2.1.1 Đếm số lƣợng khuẩn lạc/ ống cấy……………… 2.1.2 Thời gian mọc…………………………………… 2.2 Định danh loài Malassezia 2.3 Khác * Lƣu ý: Có Hà Nội, Ngày … tháng… năm 20 Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học DANH SÁCH BỆNH NHÂN STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Nguyễn Thị Tho 20 21 Khoa Sinh học Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Khoa Sinh học Nguyễn Thị Tho 22 NC16087 23 NC16021 24 NC16052 25 NC16175 26 NC16279 27 NC16028 28 NC16018 29 NC16013 30 NC16242 31 NC16095 32 NC16132 33 NC16007 34 NC16097 35 NC16053 36 NC16186 37 NC16211 38 NC16231 39 NC16159 40 NC16137 41 NC16145 42 NC16038 43 NC16085 44 NC16182 45 NC16146 46 NC16034 Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Khoa Sinh học Nguyễn Thị Tho 47 NC16069 48 NC16190 49 NC16092 50 NC16142 51 NC16088 52 NC16110 53 NC16014 54 NC16101 55 NC16241 56 NC16063 57 NC16174 58 NC16199 59 NC16180 60 NC16074 61 NC16286 62 NC16156 63 NC16025 64 NC16003 65 NC16043 66 NC16062 67 NC16113 68 NC16217 69 NC16032 70 NC16119 71 NC16187 Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho 72 NC16108 73 NC16094 74 NC16077 75 NC16022 76 NC16040 77 NC16060 78 NC16061 79 NC16123 80 NC16131 81 NC16152 82 NC16213 83 NC16216 84 NC16050 85 NC16161 86 NC16019 87 NC16169 88 NC16041 89 NC16160 90 NC16064 91 NC16093 92 NC16049 93 NC16056 94 NC16116 Khoa Sinh học 95 NC16125 96 NC16121 Khóa 2015-2017 Luận văn thạc sỹ Khoa học Nguyễn Thị Tho 97 NC16042 98 NC16201 99 NC16081 100 NC16178 101 NC16023 102 NC16027 103 NC16205 104 NC16171 105 NC16220 106 NC16176 107 NC16083 108 NC16188 109 NC16200 110 NC16163 111 NC16170 112 NC16172 113 NC16029 114 NC16020 115 NC16065 116 NC16099 117 NC16262 118 NC16194 119 NC16057 120 Khoa Sinh học NC16011 Khóa 2015-2017 ... nghiên cứu bệnh lang ben Việt Nam, phần lớn nghiên cứu cịn mang tính đơn lẻ địa phƣơng Vì tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu số loài Malassezia sp gây bệnh lang ben bệnh nhân đến khám Bệnh viện. .. LUẬN 3.1 Tỷ lệ bệnh lang ben bệnh nhân đến khám 3.1.1 Tình hình chung nhiễm bệnh lang ben Bảng 3.1 Tình hình nhiễm bệnh lang ben bệnh nhân nghiên cứu Số lƣợt Bệnh nhân đến khám Bệnh nhân đƣợc chẩn... ========= NGUYỄN THỊ THO NGHIÊN CỨU MỘT SỐ LOÀI MALASSEZIA SP GÂY BỆNH LANG BEN Ở BỆNH NHÂN ĐẾN KHÁM TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƢƠNG Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC