BÁO CÁO NGHIÊN CỨU CẢI TIẾN KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP TÌM DEMODEX, BÊNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG

BÁO CÁO NGHIÊN CỨU, CẢI TIẾN KỸ THUẬT, XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP ,TÌM DEMODEX, BÊNH VIỆN DA LIỄU, TRUNG ƯƠNG

1 BỘ Y TẾ BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG NGHIÊN CỨU CẢI TIẾN KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM TRỰC TIẾP TÌM DEMODEX Người thực hiện: Chủ nhiệm: TS.Bs Trần Cẩm Vân Thư ký: Hà Nội, tháng năm 2019 CÁC CHỮ VIẾT TẮT BN : Bệnh nhân KHV : Kính hiển vi MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm da Demodex (Demodicidosis) là bệnh da mạn tính, ảnh hưởng vùng mặt, gây nên bởi một loại côn trùng chân khớp ký sinh ở nang lông, tuyến bã ở người và súc vật [1] Bệnh xảy ở khắp nơi thế giới, ty lệ bệnh khác ở từng khu vực, nhiên bệnh có xu hướng gặp nhiều ở các nước nhiệt đới Trên thế giới, theo ước tính Demodex ở người chiếm tỉ lệ cao từ 20- 80 % và 100% ở người già [2] Có loài Demodex ngoại ký sinh ở người, đó là D.folliculorum và D.brevis sống ở nang lông, tuyến bã sử dụng chất béo làm nguồn dinh dưỡng [3] D.folliculorum thường sống ở phần phễu của nang lông, đó D.brevis chui sâu vào tuyến bã và ống bài xuất tuyến bã [4] Demodex có thể tồn tại da người khoẻ mạnh mà không có biểu lâm sàng Tỉ lệ Demodex phát da người khoẻ mạnh ở độ tuổi trung niên và người già khoảng 100% và có độ tập trung thấp [5] Tỉ lệ nhiễm Demodex tăng theo tuổi Demodex ở lứa tuổi đến 20 có khoảng 25%, ở tuổi đến 50 có khoảng 30% và người 90 tuổi gần 100% nhiễm Demodex [6] Để xác định có nhiễm Demodex, có nhiều phương pháp sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn (standardized skin surface biopsy SSSB); soi trực tiếp dưới kính hiển vi (direct microscopic examination DME); tìm Demodex spp ở vẩy da; sinh thiết toàn bộ lớp da; xác định Demodex spp bằng DNA; xác định Demodex spp bằng máy soi da Sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn (SSSB) và soi trực tiếp bằng kính hiển vi (DME) thường sử dụng để xác định mật độ ký sinh trùng Demodex (Dd) Phương pháp SSSB bao gồm nhỏ một giọt chất kết dính cyanoacrylic lam kính, áp bề mặt lam kính mang chất dính lên da, đợi khơ và lấy sau khoảng phút Trước đó, diện tích bề mặt tiêu chuẩn 1cm vẽ lam kính SSSB là một phương pháp lấy mẫu không xâm lấn, qua đó có thể thu thập một phần bề mặt của lớp sừng và nang lông Với SSSB, lấy phần nông lớp sừng của nang lông và Demodex sống ở đó Ngược lại, soi trực tiếp, không thấy các nang lông (đặc điểm quan trọng để phát Demodex) Tuy nhiên, trước chưa có nghiên cứu nào so sánh hai phương pháp này với mối liên quan tới lâm sàng và số lượng ký sinh trùng Để phục vụ tốt cho công tác chẩn đoán và điều trị bệnh nhân, chúng tiến hành: “Nghiên cứu cải tiến kỹ thuật soi trực tiếp Demodex Bệnh viện Da liễu Trung Ương” Mục tiêu: Cải tiến kỹ thuật soi trực tiếp tìm Demodex kỹ thuật sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn (SSSB) So sánh kết soi trực tiếp tìm Demodex kỹ thuật sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn (SSSB) KOH tiêu chuẩn CHƯƠNG TỔNG QUAN Khái niệm Viêm da Demodex (Demodicidosis) là bệnh da mạn tính, ảnh hưởng vùng mặt, gây nên bởi một loại côn trùng chân khớp ký sinh ở nang lông, tuyến bã ở người và súc vật Có loài Demodex ngoại ký sinh ở người, đó là D.folliculorum và D.brevis sống ở nang lông, tuyến bã sử dụng chất béo làm nguồn dinh dưỡng D.folliculorum thường sống ở phần phễu của nang lông, đó D.brevis chui sâu vào tuyến bã và ống bài xuất tuyến bã Đặc điểm Demodex 2.1 Hình thể Demodex spp là một loại ký sinh trùng thuộc: Ngành (phylum) động vật chân đốt (Athropoda); Lớp (class) nhện (Aneachnida); Bộ (oder) ve (Ararina); Ho (family) Demodicidae (Demodicidae); Giống (Genus) Demodex Demodex có khoảng 65 loài, Có loài Demodex ký sinh người là D.folliculorum và D.brevis Demodex spp ký sinh chủ yếu ở nang lông và tuyến bã Đặc biệt vùng da mặt bao gồm má, mũi, cằm, trán, thái dương, mí mắt, lơng mày, da đầu, cổ, tai Những vùng da dầu khác kẻ mũi mơi, vùng xung mắt, và phở biến vùng và giữa ngực và lưng, chúng cũng có thể tìm thấy ở dương vật, mu sinh dục, mông [7] D folliculorum khu trú phổ biến ở vùng mặt, đó D.brevis phổ biến là vùng cổ và ngực Nhiễm D.folliculorum nhiều là D.brevis, sau đó lan rộng khắp thể [8] D.folliculorum trưởng thành có chiều dài 0,3- 0,4 mm và D.brevis có chiều dài ngắn là 0,15-0,2 mm [9] Hai loài có cấu trúc giống nhau, chỉ khác độ dài của đuôi cái ngắn và tròn đực Không thể trông thấy chúng bằng mắt thường, dưới kính kiển vi thì cấu trúc của chúng thấy rõ Nó có hình thái bán suốt, kéo dài thể bao gồm hai đoạn đầu bụng gắn dính khớp Có đơi chân phân đoạn, ngắn dính liền với phần đầu của thể Cơ thể bao phủ bởi các vẩy chúng gắn dính vào nang lơng và phần miệng giớng kim băng để ăn các tế bào da, và các chất dầu nhờn tích tụ các nang lơng Các sinh vật này di chuyển mặt với tốc độ chậm 8-16 mm/giờ chủ yếu vào ban đêm, có ánh sáng chúng di chuyển lùi lại nang lông 2.2 Sinh thái D.folliculorum sống thành cụm, còn D.brevis sống đơn độc Vòng đời của Demodex thường 2-3 tuần Một Demodex cái đẻ từ 15-20 trứng nang lông gần tuyến bã Trứng phát triễn qua giai đoạn: Trứng, ấu trùng, tiền nhộng, nhộng và trưởng thành giai đoạn trứng 12 giờ, giai đoạn ấu trùng 60 giờ, tiền nhộng 36 giờ, nhộng 72 giờ và trưởng thành 60 giờ Mất khoảng 3-4 ngày từ giai đoạn trứng đến tiền nhộng Khoảng ngày từ nhộng phát triễn thành trưởng thành Con trưởng thành sống 5-6 ngày nang lơng Demodex thích sớng mơi trường nóng ẩm và hoạt động mạnh bóng tối Demodex đực trưởng thành rời khỏi nang lông tìm cái, cái trưởng thành còn ở nang lông, Demodex bò lên từ miệng nang lông sang nang lông khác, ở nang lông mới sự thụ tinh bắt đầu.Sự thụ tinh xảy ở miệng nang lông Sau thụ tinh, cái đào hang đến tuyến bã và đẻ trứng ở đó [1] 10 Triệu chứng lâm sàng Demodex có thể tồn tại da người khoẻ mạnh mà không có biểu lâm sàng, nhiên gây bệnh chúng tập trung với số lượng lớn hoặc miễn suy giảm Bệnh nhân viêm da demodex thường khám với các triệu chứng như: Ngứa kèm theo đỏ da, vẩy da, mụn mủ ở nang lông, sẩn đỏ mụn mủ ở da đầu kèm theo rụng tóc từng đám Nhìn chung,bệnh có ba thể bệnh : - Viêm nang lơng dạng vẩy phấn (Pityriasis folliculitis, pityriasis folliculorum) - Viêm da Demodex giống dạng trứng cá đỏ (Rosacea like demodicidosis) - Trứng cá đỏ thể u hạt (Granulomatous rosacea ) 2.1 Viêm nang lông dạng vẩy phấn (pityriasis folliculitis, pityriasis folliculorum) Viêm nang lông dạng vẩy phấn mô tả đầu tiên bởi Aries năm 1930 xảy chủ yếu ở phụ nữ trung niên hoặc già hơn, những người này rửa mặt, sử dụng nhiều kem trang điểm và kem tẩy Biểu bởi đỏ mặt lan toả và có vẩy ở nang lông hoặc da bị xậm màu, nút sừng nhỏ ở nang lông làm cho da mặt lấm tấm giấy ráp Cảm giác chủ quan ngứa và cảm giác nóng bỏng, có cảm giác kiến bò Cạo da chứa lượng lớn Demodex spp Mô bệnh học: Xâm nhập viêm nhiều tế bào Lympho xung quanh các mạch máu ở trung bì, không hình thành u hạt 2.2 Viêm da Demodex giống dạng trứng cá đỏ.(Rosacea –like Demodicidosis) Bệnh nhân có biểu lâm sàng sẩn và sẩn mụn mủ, đỏ da, có vẩy giống trứng cá có những đặc điểm riêng 16 sinh thiết rời kiểm tra bằng kính hiển vi 3.4 Sinh thiết tồn lớp da Sinh thiết toàn bợ nang, nḥm Hematoxilin-Eosine, Soi tìm Demodex spp dưới kính hiển vi với độ phóng đại 40 lần, tìm thấy Demodex spp ở nang lông, xâm nhập viêm Lympho bào xung quanh mạch máu và trung bì nông [4] Phương pháp này sử dụng 3.5 Xác định Demodex spp bằng DNA Dùng kỹ thuật real-Time PCR để phát DNA Demodex spp, sau đó khuếch đại, giải mã xác định loài Demodex [14] 3.6 Xác định Demodex spp bằng máy soi da Xác định Demodex spp bằng máy soi da là phương pháp chẩn đoán hình ảnh ở thượng bì và trung bì nông không xâm lấn, nó phát hiệu quả Demodex spp và đo mật độ của nó [15] 17 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn - Bệnh nhân chẩn đoán lâm sàng bệnh viêm da demodex: trứng cả đỏ, viêm nang lông - Bệnh nhân không giới hạn độ tuổi - Không dùng thuốc diệt ký sinh trùng, bong sừng bạt vảy trước đó tháng - Đồng ý tham gia nghiên cứu 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ - Không đồng ý tham gia nghiên cứu - Bệnh nhân dùng thuốc diệt ký sinh trùng, bong sừng bạt vảy trước đó tháng 2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu  Địa điểm Khoa xét nghiệm Vi sinh- nấm- ký sinh trùng Bệnh viện Da liễu Trung Ương  Thời gian tiến hành Từ tháng 06/2019 đến tháng 10/2019 2.3 Vật liệu, dụng cụ nghiên cứu   - Dụng cụ thăm khám Kính lúp Dermoscopy Vật liệu soi trực tiếp tìm demodex Dung dịch cyanoacrylate 18 - Kính hiển vi quang học thông thường và có chụp ảnh Dung dịch KOH 20% Dung dịch xanh metylen Lam kính, lá kính Giá để lam, lá kính 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu cho mục tiêu 2.4.1.1 Thiết kế nghiên cứu Mô tả cắt ngang 2.4.1.2 Cỡ mẫu Cơng thức tính cỡ mẫu cho mợt ty lệ: n= Z21-α/2 x p (1 − p ) ( pε ) Z1-α/2: Hệ số tin cậy 95% (= 1,96) Zβ: Lực mẫu 80% (= 0,842) n: cỡ mẫu của nhóm người khỏe mạnh p: ty lệ nhiễm Demodex bệnh nhân viêm da có demodex, p= 0,85 ε: giá trị tương đối (= 0,14) Thay vào công thức có: n = 70 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu cho mục tiêu 2.4.2.1.Thiết kế nghiên cứu So sánh giá trị chẩn đoán của phương pháp xét nghiệm 2.4.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 19 * Cỡ mẫu tính theo cơng thức thử nghiệm lâm sàng của Tổ chức Y tế Thế giới: {Z 1−α / 2 P(1 − P) + Z β P1 (1 − P1 ) + P2 (1 − P2 ) n1 = n2 = ( P1 − P2 ) } Z1-α/2: Hệ số tin cậy 95% (= 1,96) Zβ: Lực mẫu 80% (= 0,842) n1: cỡ mẫu của nhóm sử dụng kỹ thuật sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn n2: cỡ mẫu của dụng KOH tiêu chuẩn P1: ty lệ bệnh nhân có xét nghiệm dương tính nhóm sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn là 90% P2: ty lệ bệnh nhân có xét nghiệm dương tính nhóm KOH tiêu chuẩn : ước lượng 70% P1 + P2 P= Với p1 = 0,9, p2 = 0,7, cỡ mẫu tính là n1 = n2 = 30 Trên thực tế một số lý khách quan và để đảm bảo cỡ mẫu nghiên cứu chúng chọn 60 bệnh nhân cho nhóm nghiên cứu 2.4.1.3 Phân chia nhóm nghiên cứu Chúng tiến hành chia ngẫu nhiên 120 bệnh nhân thành nhóm: nhóm gồm 60 bệnh nhân sử dụng kỹ thuật sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn; nhóm gồm 60 bệnh nhân lấy bệnh phẩm sử dụng kỹ thuật KOH tiêu chuẩn 2.4.3 Các kỹ thuật nghiên cứu 20  Kỹ thuật sinh thiết bề mặt da tiêu chuẩn + Kỹ thuật lấy bệnh phẩm: - Vị trí vùng mặt: giữa cung mày, mi mắt, mũi, rãnh mũi má, má, cằm và xung quanh miệng Ngoài còn có lưng, ngực, da đầu, - Lấy mợt giọt keo cyanoacrylate nhỏ lên lam kính, áp nhẹ lên bề mặt da cần sinh thiết ( chú ý tránh khơng để keo dính vào mắt ) - Sau 30 giây đến phút ( để keo khô ) kéo nhẹ lam kính Trên bề mặt lam kính mang theo một lớp da sinh thiết - Nhỏ lên giọt hồn hợp (KOH 20%: Xanh Methylen = 1:2), đậy lam kính - Quan sát dưới kính hiển vi * Lưu ý: - Thời gian từ lấy mẫu đến đánh giá không quá giờ - Đối với BN bị viêm da dầu, hoặc BN dùng thuốc, mỹ phẩm, vẩy da dầu nhiều, cần lau bớt lớp vẩy bên ngoài rồi mới tiến hành cạo để lấy bệnh phẩm + Làm tiêu bản: - Nhỏ – giọt KOH 20% : Xanh Methylen lên lam kính có bệnh phẩm sinh thiết - Đậy lamen, có thể soi ln + Nhận định kết quả: Dùng vật kính 10X để xác định: - Demodex gây bệnh ở người có loài: D.folliculorum và D.brevis khác ở chiều dài thể - Demodex trưởng thành, thể chia làm phần rõ rệt: Đầu (có đôi râu, ở giữa là miệng để bám và hút thức ăn); Ngực (Có đôi chân ngắn đối xứng nhau); Đuôi (Có dạng ống, bên chứa đầy các hạt và không bào) - Đánh giá độ tập trung của Demodex: 21 o Nếu độ tập trung của Demodex >= con/vi trường có độ phòng đại thấp(100): Demodex là tác nhân gây bệnh o Nếu độ tập trung của Demodex < con/vi trường có độ phòng đại thấp(100): Demodex chưa hẳn là tác nhân gây bệnh - Ngoài tiêu bản ta có thể thấy ấu trùng, nhộng hoặc trứng của Demodex - Có thể thấy cả loài Demodex tiêu bản  Kỹ thuật KOH tiêu chuẩn - Xác định mợt vùng da kích thước cm - Sử dụng kỹ thuật nặn để lấy toàn bộ chất bã xét nghiệm - Mẫu thu được chuyển đến một giọt KOH 10% và phủ bằng lamen - Soi trực tiếp tìm ký sinh trùng Demodex dưới kính hiển vi quang học (× 40, × 100) Chẩn đoán viêm da Demodex số lượng ký sinh trùng nhiều cm2 2.5 Các tiêu nghiên cứu 2.5.1 Đặc điểm chung - Tuổi: theo nhóm tuổi: 0-9 ,10-19, 20-29, 30-39, 40-49, 50 - Giới: Nam, nữ 2.5.2 Các tiêu đánh giá - Thời gian trả kết quả xét nghiệm của phương pháp SSSB và KOH tiêu chuẩn - Kết quả xét nghiệm của phương pháp SSSB và KOH tiêu chuẩn: dương tính, âm tính - Ảnh hưởng của phương pháp SSSB và KOH tiêu chuẩn nhận định kết quả kính hiển vi - Kết quả sớ lượng ký sinh trùng Demodex của phương pháp SSSB và KOH tiêu chuẩn 2.6 Các biện pháp hạn chế sai số 22 Để loại trừ các sai số có thể xảy ra, nghiên cứu này đã thực các biện pháp sau: - Thiết kế nghiên cứu chặt chẽ, các công cụ thu thập số liệu là các biểu mẫu chuẩn bị đầy đủ, chi tiết Các kỹ thuật xét nghiệm đều thực theo thường quy tại các phòng xét nghiệm chuẩn thức quốc gia của bệnh viện Da liễu Trung Ương - Các thuật toán thống kê thường dùng y học cũng đã sử dụng tối đa để loại trừ các sai số ngẫu nhiên 2.7 Phương pháp xử lý số liệu - Dữ liệu về mẫu nghiên cứu xử lý bằng phần mềm SPSS 23.0 - Thớng kê mơ tả: tính theo tần số tỉ lệ %, và trình bày dưới dạng bảng biểu - Thớng kê phân tích: - Dùng phép kiểm định bình phương và RR ở mức ý nghĩa 5%, khoảng tin cậy (KTC) 95% để đo lường sự khác biệt các mối liên hệ của kết quả nghiên cứu - Sử dụng test Fisher với các giá trị nhỏ - Dùng phép kiểm One-way-ANOVA để so sánh trung bình 2.8 Đạo đức nghiên cứu Nghiên cứu không vi phạm y đức vì tất cả người bệnh đều hỏi ý kiến và đồng ý tham gia nghiên cứu, các thủ thuật khám, lấy bệnh phẩm đều không xâm hại đến người bệnh Đây cũng là các xét nghiệm thường quy áp dụng hàng ngày ban lãnh đạo bệnh viện phê duyệt Các thông tin thu nhận từ người bệnh đều giữ bí mật, người bệnh tham gia nghiên cứu và đến khám thời gian nghiên cứu (nếu có nhu cầu) hướng dẫn các kiến thức đúng về phòng tránh nhiễm nấm cũng thăm khám đầy đủ đúng quy trình 23 2.9 Hạn chế đề tài Xét nghiệm trực tiếp diện tích cm2 cho biết xác sớ lượng và mật độ demodex đủ để gây bệnh Tuy nhiên, lần đầu tiên áp dụng còn nhiều hạn chế lựa chọn vùng da xét nghiệm, các bước kỹ thuật tiến hành 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Bảng 3.1 Phân bố bệnh theo tuổi SSSB Phương pháp Giới 0-9 10-19 20-29 30-39 40-49 >50 Tổng số Tuổi trung bình KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 X ± SD (min-max) P Bảng 3.2 Phân bố bệnh theo giới SSSB Phương pháp Giới Nam Nữ Tổng số P KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 Bảng 3.3 Phân bố bệnh theo địa dư SSSB Phương pháp Địa dư Thành thị Nông thôn n KOH tiêu chuẩn % n % 25 Tổng số P 60 100 60 100 3.2 Kết xét nghiệm phương pháp SSSB KOH tiêu chuẩn Bảng 3.4 Thời gian trả kết xét nghiệm phương pháp SSSB KOH tiêu chuẩn SSSB Phương pháp Kết < 30 phút 30 - 60 phút 60 - 90 phút Tổng sớ Thời gian trung bình X ± SD (min-max) Tổng số P KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 26 Bảng Ảnh hưởng nhận định hình thái kính hiển vi phương pháp băng dính dao cùn SSSB Phương pháp Kết Dễ dàng Khó khăn Tổng số P KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 Bảng 3.6 Kết soi trực tiếp phương pháp SSSB KOH tiêu chuẩn SSSB Phương pháp Kết Dương tính Âm tính Tổng số KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 P Bảng 3.7 Kết nhận định số lượng Demodex phương pháp SSSB KOH tiêu chuẩn SSSB Phương pháp Kết Tổng số KOH tiêu chuẩn n % n % 60 100 60 100 Nhận xét: KẾT LUẬN 27 - 28 KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Trung Triệu Nguyên, Chương Nguyễn Văn,Quang Huỳnh Hồng (2013), Viêm da gây ngứa và dị ứng một loài ký sinh trùng nhỏ thuộc nhóm chân khớp Demodex spp lây truyền từ động vật sang người xetnghiemmau.com Milton M Hom, Mastrota Katherine M.,Schachter Scott E (2013), Demodex:Clinical Cases and Diagnostic Protocol, Optometry and Vision Science, 90(7), 198-205 Enginyurt O, U Karaman, F Cetin et al (2015), The Prevalence of Demodex Species and Its Relationship With the Metabolic Syndrome in Women of Malatya Province, Turkey, Jundishapur J Microbiol, 8(10), e24322 Baima B,M Sticherling (2002), Demodic idos is R evis ited, Acta Derm Venereol, 823-6 Murillo N, J Aubert,D Raoult (2014), Microbiota of Demodex mites from rosacea patients and controls, Microb Pathog, 71-7237-40 Mario Gutierrez (2011), Demodex infestation requires immediate, aggressive treatment by doctor, patient, Primary Care Optometry News Arasiewicz Hubert , Szilman Piotr,Brzezińska-Wcisło Ligia (2015), Demodex folliculorum in rosacea based on a modified standardized skin surface biopsy, Postępy Nauk Medycznych, 3177-180 Parvaiz Anwar Rather,Hassan Iffat (2013), Human Demodex Mite: The Versatile Mite of Dermatological Importance, PMC Gao Y Y, A Di Pascuale M, W Li et al (2005), High prevalence of Demodex in eyelashes with cylindrical dandruff, Invest Ophthalmol Vis Sci, 46(9), 3089-3094 10 Raoufi-Nejad K, SalkhordehN, G Sarrafian et al (2012), Non-invasive skin surface biopsy: an easy technique to detect Demodex folliculorum, Research in Pharmaceutical Sciences, 7(5) 11 Askin U,D Seckin (2010), Comparison of the two techniques for measurement of the density of Demodex folliculorum: standardized skin surface biopsy and direct microscopic examination, Br J Dermatol, 162(5), 1124-1126 12 Longo C, G Pellacani, C Ricci et al (2012), In vivo detection of Demodex folliculorum by means of confocal microscopy, Br J Dermatol, 166(3), 690-692 13 Bộ Y Tế (2013), Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Vi sinh Y học, Kcb.com, 695-700 14 Ferreira D, N Sastre, I Ravera et al (2015), Identification of a third feline Demodex species through partial sequencing of the 16S rDNA and frequency of Demodex species in 74 cats using a PCR assay, Vet Dermatol, 26(4), 239-e253 15 Sattler E C, T Maier, S Hoffmann V et al (2012), Noninvasive in vivo detection and quantification of Demodex mites by confocal laser scanning microscopy, Br J Dermatol, 167(5), 1042-1047 Trung Triệu Nguyên, Chương Nguyễn Văn,Quang Huỳnh Hồng (2013), Viêm da gây ngứa và dị ứng một loài ký sinh trùng nhỏ thuộc nhóm chân khớp Demodex spp lây truyền từ động vật sang người xetnghiemmau.com Milton M Hom, Mastrota Katherine M.,Schachter Scott E (2013), Demodex:Clinical Cases and Diagnostic Protocol, Optometry and Vision Science, 90(7), 198-205 Enginyurt O, U Karaman, F Cetin et al (2015), The Prevalence of Demodex Species and Its Relationship With the Metabolic Syndrome in Women of Malatya Province, Turkey, Jundishapur J Microbiol, 8(10), e24322 Baima B,M Sticherling (2002), Demodic idos is R evis ited, Acta Derm Venereol, 823-6 Murillo N, J Aubert,D Raoult (2014), Microbiota of Demodex mites from rosacea patients and controls, Microb Pathog, 71-7237-40 Mario Gutierrez (2011), Demodex infestation requires immediate, aggressive treatment by doctor, patient, Primary Care Optometry News ... hoặc 16 sinh thiết rô i kiểm tra bằng kính hi n vi 3.4 Sinh thiết t n lớp da Sinh thiết toa n bộ nang, nhuộm Hematoxilin-Eosine, Soi tìm Demodex spp dươ i kính hi n vi vơ i đợ phóng... mạnh bóng tô i Demodex đực trưởng thành rơ i kh i nang lông tìm ca i, ca i trưởng thành co n ở nang lông, Demodex bò l n từ miệng nang lông sang nang lông khác, ở nang lông mơ i sự... mẫu nghi n cứu chúng ch n 60 bệnh nh n cho nhóm nghi n cứu 2.4.1.3 Ph n chia nhóm nghi n cứu Chúng t i tiê n hành chia ngẫu nhi n 120 bệnh nh n thành nhóm: nhóm gồm 60 bệnh nh n sử