Xác định một số đường hóa học và chất bảo quản trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  ***** ***** BÙI THỊ MINH THÚY XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐƢỜNG HÓA HỌC VÀ CHẤT BẢO QUẢN TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  ***** ***** BÙI THỊ MINH THÚY XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐƢỜNG HÓA HỌC VÀ CHẤT BẢO QUẢN TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CHUYÊN NGÀNH: HĨA PHÂN TÍCH MÃ SỐ: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM THỊ NGỌC MAI Hà Nội – 2014 LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Thị Ngọc Mai, Bộ mơn Hóa phân tích - Khoa Hóa - Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên Hà Nội giao đề tài tận tình hƣớng dẫn tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn Ths.Vũ Thị Trang, CN Đinh Viết Chiến, ban lãnh đạo cán Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc Gia tạo điều kiện giúp đỡ q trình triển khai nghiên cứu đề tài Tơi xin gửi lời trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng sau đại học thầy giáo, cô giáo Khoa Hóa học - Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội tận tình dạy dỗ, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành nội dung học tập thực đề tài thuận lợi Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Sở Y tế Thái Bình, Ban lãnh đạo toàn thể cán Khoa Xét nghiệm - Trung tâm Y tế Dự phịng Thái Bình tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè bên cạnh động viên hai năm học tập trình làm luận văn Hà Nội, ngày tháng năm Học viên Bùi Thị Minh Thúy MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.Giới thiệu chung chất bảo quản 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Axit benzoic Axit sorbic .3 1.2 Giới thiệu chung đƣờng hóa học 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại: 1.2.3 Acesulfam-K, Aspartam, Saccarin 1.3 Tình hình sử dụng chất bảo quản, đƣờng hóa học thực phẩm 1.4 Giới hạn tồn dƣ tối đa hàm lƣợng chất thực phẩm .10 1.5 Tổng quan phƣơng pháp phân tích 11 1.5.1 Các phƣơng pháp giới 11 1.5.2 Các phƣơng pháp xu hƣớng nghiên cứu nƣớc .15 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng, nội dung mục tiêu nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tƣợng mục tiêu nghiên cứu 17 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Nguyên tắc chung HPLC 18 2.2.2 Pha tĩnh HPLC 19 2.2.3 Pha động HPLC 20 2.2.4 Các loại detector HPLC 20 2.2.5 Một số đại lƣợng đặc trƣng HPLC 22 2.2.6 Phân tích định tính định lƣợng HPLC 23 2.3 Hóa chất dụng cụ dùng nghiên cứu 24 2.3.1 Hóa chất 24 2.4 Chuẩn bị dung dịch hóa chất 25 2.4.1 Pha dung dịch chuẩn gốc 25 2.4.2 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc chất phân tích 100 µg/ml .25 2.4.3 Pha thuốc thử 25 2.4.4 Pha dung dịch đệm 26 2.5 Mẫu phân tích 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Tối ƣu hóa điều kiện chạy sắc ký lỏng cao áp (HPLC) .27 3.1.1 Lựa chọn cột tách 27 3.1.2 Xác định bƣớc sóng phát cho chất phân tích sử dụng detector PDA 27 3.1.3 Khảo sát pH pha động 29 3.1.4 Khảo sát nồng độ dung dịch đệm pha động 30 3.1.5 Khảo sát tốc độ pha động 32 3.1.6 Khảo sát thành phần pha động 34 3.1.7 Khảo sát chƣơng trình gradient pha động 36 3.2 Tối ƣu qui trình xử lý mẫu 39 3.2.1 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến trình thủy phân 41 3.2.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến trình thủy phân 42 3.3 Đánh giá phƣơng pháp phân tích 43 3.3.1 Độ phân giải 43 3.3.2 Lập đƣờng chuẩn 44 3.3.3 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp 46 3.3.4 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) 47 3.3.5 Kết chƣơng trình thử nghiệm thành thạo tiêu axit benzoic axit sorbic 50 3.4 Ứng dụng phân tích mẫu thực tế 50 3.4.1.Kết phân tích mẫu (có đánh giá độ thu hồi) 51 3.4.2 Kết phân tích mẫu giám sát 53 KẾT LUẬN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC 62 MỤC LỤC BẢNG Bảng 1.1 Thông tin chung chất bảo quản Bảng 1.2 Thơng tin chung đƣờng hóa học Bảng 3.1 Ảnh hƣởng pH pha động tới thời gian lƣu chất phân tích .29 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ pha động tới thời gian lƣu chất phân tích 31 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng tốc độ pha động đến thời gian lƣu chất phân tích 33 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng tốc độ pha động đến độ phân giải 34 Bảng 3.5 Thời gian lƣu số chất bảo quản đƣờng hóa học 35 thành phần pha động khác 35 Bảng 3.6.Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất thủy phân chất phân tích .41 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thời gian đến hiệu suất thủy phân chất phân tích 42 Bảng 3.8 Độ phân giải pic liền kề 44 Bảng 3.9 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ 45 Bảng 3.10 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng chất phân tích 47 Bảng 3.11 Diện tích pic hỗn hợp chất nghiên cứu 48 mức thêm chuẩn khác 48 Bảng 3.12 Kết độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp 49 Bảng 3.13 Độ thu hồi chất mẫu nƣớc mắm 51 Bảng 3.14 Độ thu hồi chất mẫu ô mai 52 Bảng 3.15 Độ thu hồi chất mẫu nƣớc mắm, mẫu ô mai .52 Bảng 3.16 Kết phân tích số mẫu ruốc thịt lợn 53 phát có sử dụng natribenzoat 53 Bảng 3.17 Kết phân tích số mẫu mai phát có sử dụng 54 natribenzoat, saccarin 54 MỤC LỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ hệ thống sắc ký lỏng 18 Hình 2.2 Sơ đồ detector Diode array 21 Hình 3.1 Sắc đồ tách đƣờng hóa học chất bảo quản cột Anion, nhiệt độ 40 C 27 Hình 3.2 Phổ hấp thụ Aspartam, Axit benzoic, Axit sorbic, Acesulfam K ,saccarin.28 Hình 3.3 Ảnh hƣởng pH pha động tới thời gian lƣu chất phân tích 29 Hình 3.4 Ảnh hƣởng nồng độ pha động tới thời gian lƣu chất phân tích 31 Hình 3.5 Sắc đồ khảo sát chất phân tích với nồng độ pha động NaH2PO4 5mM (pH=8,2) bƣớc sóng 210nm 31 Hình 3.6 Sắc đồ khảo sát chất phân tích với tốc độ dịng pha động 32 1,5 ml/phút bƣớc sóng 210nm 32 Hình 3.7 Sắc đồ khảo sát chất phân tích với tốc độ dòng pha động 33 1,2 ml/phút bƣớc sóng 210nm 33 Hình 3.8 Sắc đồ khảo sát chất phân tích với tốc độ dịng pha động 33 1,0 ml/phút bƣớc sóng 210nm 33 Hình 3.9 Sắc đồ khảo sát chất phân tích 20 µg/ml với thành phần pha động đệm NaH2PO4 : ACN = 95:5 bƣớc sóng 210nm 35 Hình 3.10 Sắc đồ khảo sát chất phân tích theo chƣơng trình gradient 36 Hình 3.11 Sắc đồ khảo sát chất phân tích theo chƣơng trình gradient 37 Hình 3.12 Sắc đồ khảo sát chất phân tích theo chƣơng trình gradient 37 Hình 3.13 Sắc đồ khảo sát chất phân tích theo chƣơng trình gradient 38 Hình 3.14 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất thủy phân 41 Hình 3.15 Ảnh hƣởng thời gian đến hiệu suất thủy phân 42 Hình 3.16 Sắc đồ hỗn hợp chất 50 µg/ml bƣớc sóng 210nm 44 Hình 3.17 Đƣờng chuẩn Aspartam theo diện tích pic 45 Hình 3.18 Đƣờng chuẩn Axit Sorbic theo diện tích pic 45 Hình 3.19 Đƣờng chuẩn Axit Benzoic theo diện tích pic 45 Hình 3.20 Đƣờng chuẩn Acesulfam-K theo diện tích pic 45 Hình 3.21 Đƣờng chuẩn Saccarin theo diện tích pic 46 Hình 3.22 Sắc đồ phân tích mẫu nƣớc mắm thêm dung dịch chuẩn 51 axit sorbic, axit benzoic, acesulfam-K 51 Hình 3.23 Sắc đồ phân tích mẫu mai thêm dung dịch chuẩn 52 Aspartam, Acesulfam-K, Saccarin 52 DA Ace-K Acesu ACN Aceto AOAC Assoc Asp Aspar A.Ben Axit B A.Sor Axit S BYT Bộ Y CE Điện d HPLC High-p INS Intern KPH Không LOD Giới h LOQ Giới h PDA Photod Sac Saccar TCVN Tiêu c UPLC Sắc ký UV-VIS Quang Từ kết thu đƣợc nhận thấy phƣơng pháp HPLC sử dụng cột anion với detector PDA phù hợp cho việc xác định đồng thời hàm lƣợng axit benzoic, axit sorbic, acesulfam K, aspartam, saccarin thực phẩm Phƣơng pháp công cụ hữu hiệu để tra, kiểm định chất lƣợng sản phẩm phục vụ lĩnh vực an toàn thực phẩm bảo vệ sức khỏe ngƣời tiêu dùng TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2010)- QCVN 4-12:2010/BYT ngày 22/12/2010-Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm-chất bảo quản Bộ Y tế (2010)- QCVN 8-12:2010/BYT ngày 25/5/2010-Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm-chất tổng hợp Bộ Y tế (2012)- Thông tƣ số 27/2012/TT-BYT ngày 30/11/2012 Bộ Y tế, Thông tư hướng dẫn việc quản lý phụ gia thực phẩm Nguyễn Thuần Anh (2012), “Thận trọng sử dụng sản phẩm có chứa Aspartam”, Tạp chí thuốc sức khỏe, số 447, tr.14-15 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Lê Hoàng (2006), Xác định phụ gia thực phẩm phương pháp sắc lý lỏng hiệu cao, Luận văn thạc sĩ khoa học, Khoa Hóa học, Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2011), Các phương pháp tách , Tài liệu dùng cho học viên cao học, Bộ mơn Hóa Phân Tích, Khoa Hóa Học, trƣờng đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội TCVN 6428:2007, Xác định hàm lượng axit benzoic - Phương pháp quang phổ TCVN 8122:2009, Xác định hàm lượng axit benzoic axit sorbic - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10 TCVN 8471:2010, Thực phẩm-Xác định acesulfame-K, aspartame saccharin- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 11 Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình mơn học Thống kê Hóa phân tích 12 Nguyễn Duy Thịnh (2004), Các chất phụ gia dùng sản xuất thực phẩm, Bài giảng sử dụng cho học viên cao học ngành công nghiệp thực phẩm Trƣờng Đại học Bách khoa Hà nội, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm 13 Viện kiểm nghiệm ATVSTP Quốc Gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội TIẾNG ANH 14 Agata Zygler, Andrzej Wasik, Jacek Namies´nik, (2009), “Analytical methodologies for determination of artificial sweeteners in foodstuffs”, Trends in Analytical Chemistry, Vol 28, No 9, page 1082-1102 15 Agata Zygler & Andrzej Wasik & Agata Kot-Wasik & Jacek Namieśnik (2011), “Determination of nine high-intensity sweeteners in various foods by highperformance liquid chromatography with mass spectrometric detection”, Anal Bioanal Chem, 400, page 2159–2172 16 Ana Beatriz Bergamo, José Alberto Fracassi da Silva, Dosil Pereira de Jesus (2011), “Simultaneous determination of aspartame, cyclamate, saccharin and acesulfame-K in soft drinks and tabletop sweetener formulations by capillary electrophoresis with capacitively coupled contactless conductivity detection”, Food Chemistry 124, page 1714–1717 17 C.M Lino, A Pena, (2010), “ Occurrence of caffeine, saccharin, benzoic acid and sorbic acid in soft drinks and nectars in Portugal and subsequent exposure assessment”, Food Chemistry, 121, page 503508 18 E Cubuk Demiralay, G.Oăzkan,&, Z.Guzel-Seydim (2006), Isocratic Separation of Some Food Additives by Reversed Phase Liquid Chromatography”, Chromatographia, 63, page 91-96 19 Fatma Turak , Mahmure Üstün Özgür , and Abdürrezzak Bozdogan (2009), “PLS-UV Spectrophotometric Method for the Simultaneous Determination of Ternary Mixture of Sweeteners (Aspartame, Acesulfame-K and Saccharin) in Commercial Products”, Innovations in Chemical Biology, p.305-311 20 J.F Garc´ıa-Jim´enez, M.C Valencia, L.F Capit´an-Vallvey, (2007), “Simultaneous determination of antioxidants, preservatives and sweetener additives in food and cosmetics by flow injection analysis coupled to a monolithic column”, Analytica Chimica Acta, 594, page 226–233 21 Li Xiu-Qin, Ji Chao, Yong Wei, Ling Yun, Yang Min-Li, Chu Xiao-Gang (2008), “UPLC-PDAD Analysis for Simultaneous Determination of Ten Synthetic Preservatives in Foodstuff”,Chromatographia, 68, page 57–63 22 Maja SERDAR and Zorka KNEŽEVIĆ,(2011),“Determinatinon of artificial sweeterners in beverages and special nutritional products using high performance liquid chromatography”, Arh Hig Rada Toksikol 2011;62:169-173 23 Miguel A Cantarelli , Roberto G Pellerano , Eduardo J Marchevsky , José M Camiña a, (2009), “Simultaneous determination of aspartame and acesulfame-K by molecular absorption spectrophotometry using multivariate calibration and validation by high performance liquid chromatography”, Food Chemistry, 115, page 1128–1132 24 Natalia E Llamas & María S Di Nezio & Miriam E Palomeque & Beatriz S Fernández Band (2008), “Direct Determination of Saccharin and Acesulfame-K in Sweeteners and Fruit Juices Powders”, Food Anal Methods, 1:43–48 25 N Dossi, R Toniolo, S Susmel, A Pizzariello, G Bontempelli (2006), “Simultaneous RP-LC Determination of Additives in Soft Drinks”, Chromatographia, 63, page 557-562 26 Qing-Chuan Chen, Jing Wang, (2001), “Simultaneous determination of artificial sweeteners, preservatives,caffeine, theobromine and theophylline in food and pharmaceutical preparations by ion chromatography”, Journal of Chromatography A, 937, page 57–64 27 Richard A Frazier, Elizabeth L Inns, Nicolo Dossi, Jennifer M Ames, Harry E Nursten (2000), “Development of a capillary electrophoresis method for the simultaneous analysis of artificial sweeteners, preservatives and colours in soft drinks”, Journal of Chromatography A, 876, page 213–220 28 Tenghao Liu & Zi-Tao Jiang & Rong Li & Jin Tan (2013), “Simultaneous Determination of Cyclamate, Acesulfame,and Aspartame in Beverages by Titania-Based RP-HPLC”, Food Anal Methods, DOI 10.1007/s12161-0139762-x 29 Yan Zhua, Yingying Guoa, Mingli Ye, Frits S James (2005), “Separation and simultaneous determination of four artificial sweeteners in food and beverages by ion chromatography”, Journal of Chromatography A, 1085, p.143–146 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số sắc đồ khảo sát tối ƣu hóa điều kiện sắc ký 1.Khảo sát pH pha động (Chuẩn hỗn hợp chất 20 µg/ml) 50 mAU 210nm,4nm (1.00) 20 Ace-K/47.537/484652 30 Sac/77.282/1995 720 Asp/5.327/468492 40 10 0 10 A.Ben/15.341/12842 mAU mAU A.Ben/15.808/14171 210nm4nm (1.00) -10 10 Tại pH = 9,5 Khảo sát nồng độ pha động (Chuẩn hỗn hợp chất 20 µg/ml)-Pha động: 90 % NaH2PO4 (pH= 8,2) 10% ACN mAU 210nm4nm (1.00) 35 30 25 20 Asp/5.229 A.Sor/12.699 15 10 0.0 10.0 5.0 Nồng độ pha động NaH2PO4 mM mAU 50 210nm4nm (1.00) 45 40 A.Sor/10.323 35 30 25 20 15 10 0.0 5.0 10.0 A.Sor/6.662 mAU 5.0 Nồng độ pha động NaH2PO4 7,5 mM 0.0 A.Sor/6.086 mAU 5.0 Nồng độ pha động NaH2PO4 10 mM Khảo sát thành phần pha động (chuẩn hỗn hợp chất 20 µg/ml) mAU 80 210nm,4nm (1.00) 70 Asp/5.216 60 50 40 30 20 10 -10 0.0 Thành phần pha động: 90 % NaH2PO4 5mM - 10% ACN mAU 210nm4nm (1.00) 50 40 Asp/4.929 20 A.Sor/9.849 30 10 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 Thành phần pha động: 85 % NaH2PO4 5mM - 15% ACN mAU 210nm,4nm (1.00) 100 75 Asp/4.270 25 A.Sor/8.265 50 -25 0.0 Thành phần pha động: 80 % NaH2PO4 5mM - 20% ACN Phụ lục 2: Sắc đồ khảo sát điều kiện tối ƣu xử lý mẫu 1.Khảo sát nhiệt độ ảnh hƣởng đến trình thủy phân mAU 125 100 Asp/6.960/635381 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân nhiệt độ 40 C mAU 125 100 Asp/6.962/636515 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân nhiệt độ 50 C mAU 125 100 Asp/6.966/620736 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân nhiệt độ 60 C mAU 100 Asp/6.939/604622 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân nhiệt độ 70 C mAU 125 100 Asp/6.959/609739 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân nhiệt độ 80 C 2.Khảo sát thời gian ảnh hƣởng đến trình thủy phân m A(1.00 U) 150 210 n m n m Asp/6.471/272275 A.Sor/11.377/558499 125 100 10.0 7.5 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân 10 phút mAU ( 210nm4nm 125 100 Asp/6.474/271327 75 50 25 -25 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân 20 phút mAU 150 (1.00) 210nm4nm 125 Asp/6.458/286215 A.Sor/11.430/588584 100 75 50 25 7.5 -25 10.0 5.0 Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân 30 phút mAU (1 00 210nm4nm ) 150 125 Asp/6.482/277209 75 50 25 -25 5.0 7.5 A.Sor/11.393/587309 100 S ắ c Asp/6.476/274573 A.Sor/11.392/563693 (1 0) đ p h â Sắc đồ phân tích mẫu n thủy phân 50 phút t í 150 c h m ẫ u Asp/6.471/278585 mAU ( 210nm4nm -25 5.0 t h ủ y Sắc đồ phân tích mẫu thủy phân 60 p phút h â n t r o n g p h ú t mAU 150 210nm4nm 125 100 -25 5.0 Phụ lục 3: Một số sắc đồ phân tích mẫu thực (mẫu giám sát) mAU 30 25 20 15 10 -5 -10 0.0 Sắc đồ phân tích mẫu ruốc thịt lợn-Hà Nam mAU 50 225nm4nm (1.00) 30 20 10 A.Ben/18.025/681142 40 0.0 Sắc đồ phân tích mẫu ruốc thịt lợn-Hà mAU 25 20 15 10 -5 0.0 Sắc đồ phân tích mẫu mai quất-Hà Nội Phụ lục 4: Kết đánh giá tiêu axit benzoic, axit sorbic chƣơng trình kiểm nghiệm liên phịng ... đƣờng hóa học chất bảo quản thực phẩm Áp dụng phƣơng pháp để xác định số đƣờng hóa học chất bảo quản số mẫu thực phẩm CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.Giới thiệu chung chất bảo quản 1.1.1 Định nghĩa Chất bảo. .. dụng thực phẩm, tiến hành nghiên cứu đề tài:? ?Xác định số đường hóa học chất bảo quản thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)? ?? với mục tiêu: Xây dựng phƣơng pháp xác định đồng thời số. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  ***** ***** BÙI THỊ MINH THÚY XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐƢỜNG HÓA HỌC VÀ CHẤT BẢO QUẢN TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO