Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm probiotic nhằm bổ sung vào thức ăn cho tôm hùm nuôi lồng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG TRẦN VŨ ĐÌNH NGUYÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC NHẰM BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO TÔM HÙM NUÔI LỒNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Nha Trang - 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG TRẦN VŨ ĐÌNH NGUYÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC NHẰM BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO TÔM HÙM NUÔI LỒNG Chuyên ngành: Công nghệ sau thu hoạch Mã số: 60 54 10 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS VŨ NGỌC BỘI TS NGUYỄN VĂN DUY Nha Trang – 2013 -i- LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Tác giả luận văn Trần Vũ Đình Nguyên - ii - LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành Đồ án Trước hết xin gửi tới Ban Giám hiệu - Trường Đại học Nha Trang, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ thực phẩm Lãnh đạo Khoa Sau đại học kính trọng, niềm tự hào học tập Trường năm qua Sự biết ơn sâu sắc xin giành cho thầy: TS Vũ Ngọc Bội TS Nguyễn Văn Duy - Trường Đại học Nha Trang tận tình hướng dẫn động viên tơi suốt trình thực luận văn Đặc biệt, xin ghi nhớ tình cảm, giúp đỡ của: ThS Lê Đình Đức - Bộ mơn Cơng nghệ sinh học, thầy cô giáo Bộ môn Công nghệ thực phẩm, cán phịng thí nghiệm Cơng nghệ chế biến Công nghệ thực phẩm, thầy cô giáo Trung tâm Thí nghiệm thực hành - Trường Đại học Nha Trang giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập Trường Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè tạo điều kiện động viên khích lệ tơi vượt qua khó khăn q trình học tập vừa qua Học viên Trần Vũ Đình Nguyên - iii - MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN……………………… i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHƢƢ̃ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu probiotic vi khuẩn Bacillus 1.1.1 Giới thiệu probiotic 1.1.2 Cơ sở khoa học công nghệ probiotic 1.1.2.1 Hệ vi sinh vật đường ruột tác dụng hệ vi sinh vật đến sức khỏe vật chủ 1.1.2.2 Cơ chế hoạt động probiotic 1.1.3 Phân loại probiotic 1.1.4 Probiotic từ vi khuẩn Bacillus 1.2 Ứng dụng chế phẩm probiotic nuôi tôm hùm nuôi trồng thủy sản 10 1.2.1 Tôm hùm 10 1.2.2 Tình hình sản xuất thức ăn phịng trừ dịch bệnh tôm hùm 12 1.2.3 Bệnh Vibriosis tôm hùm động vật thủy sản 13 1.2.4 Ứng dụng probiotic 16 1.2.4.1 Trong y học, chăn nuôi bảo vệ môi trường 16 1.2.4.2 Trong nuôi trồng thủy sản 18 1.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic lĩnh vực ni tơm 20 1.3.1 Quy trình sản xuất chế phẩm probiotic 20 1.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 22 1.3.3 Tình hình nghiên cứu nước 27 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Nguyên vật liệu 29 - iv - 2.1.1 Chủng vi sinh vật 29 2.1.2 Thức ăn tôm hùm dầu mực 29 2.1.3 Hóa chất, mơi trường 29 2.1.4 Thiết bị chuyên dụng 31 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Xác định hoạt tính sinh protease 31 2.2.2 Xác định hoạt tính kháng Vibrio spp gây bệnh tôm hùm 32 2.2.3 Nhuộm Gram tế bào vi khuẩn 32 2.2.4 Định danh vi khuẩn Bacillus 32 2.2.5 Xác định khả sinh trưởng 32 2.2.6 Nuôi cấy thu sinh khối probiotic 33 2.2.7 Bố tríthínghiệm xác định điều kiện ni cấy thích hợp 33 2.2.8 Bố trí thí nghiệm xây dựng quy trình lên men quy mô pilot .34 2.2.9 Xác định thơng số q trình đơng khơ 35 2.2.10 Bố trí thí nghiệm xác định chất chống đơng phù hợp cho q trình đơng khô vi khuẩn probiotic 37 2.2.11 Xác định tỷ lệ tế bào sống sau đông khô 38 2.2.12 Xác định hàm lượng ẩm tồn dư 39 2.2.13 Khảo sát tỉ lệ trộn dầu mực vào thức ăn 39 2.2.14 Xử lý thống kê 40 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Nghiên cứu quy trình nuôi cấy vi khuẩn thu sinh khối từ canh trường ni 41 3.1.1 Đánh giá hoạt tính probiotic chủng nghiên cứu .41 3.1.1.1 Xác định hoạt tính sinh protease ngoại bào 41 3.1.1.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn 42 3.1.2 Đường cong sinh trưởng xác định hoạt tính kháng khuẩn theo thời gian 45 3.1.2.1 Đường cong sinh trưởng chủng probiotic nghiên cứu 45 3.1.2.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn theo thời gian 48 3.1.3 Một số đặc điểm sinh học chủng probiotic nghiên cứu 49 3.1.4 Xác định điều kiện thích hợp cho q trình ni cấy chủng vi khuẩn lựa chọn 53 -v- 3.1.4.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng probiotic nghiên cứu 53 3.1.4.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 54 3.1.4.3 Ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 55 3.1.4.4 Ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 56 3.1.4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 57 3.1.5 Xây dựng quy trình lên men 58 3.1.5.1 Xác định pH thích hợp cho trình lên men 58 3.1.5.2 Xác định nhiệt độ thích hợp cho q trình lên men 59 3.1.5.3 Xác định thời gian thích hợp cho q trình lên men 59 3.1.5.4 Đề xuất quy trình lên men 60 3.2 Xây dựng quy trình đơng khơ 61 3.2.1 Xác định quy trình đơng khơ sinh khối vi khuẩn .61 3.2.2 Chất chống đông 63 3.3 Xây dựng quy trình sản xuất sản xuất thử nghiệm chế phẩm probiotic 65 3.3.1 Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm probiotic 65 3.3.2 Sản xuất thử nghiệm chế phẩm 66 3.4 Thử nghiệm sử dụng chế phẩm probiotic phối trộn với thức ăn tôm hùm .67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC 77 - vi - DANH MỤC CHƢƢ̃ VIẾT TẮT OD : Optical Density (Mật độ quang) CFU : Colony Forming Unit FDA : Food and Drug Administration (Cục quản lý thực phẩm dược : phẩm Hoa Kỳ) TCBS : Thiosulphate citrate bile salt agar FCR : Hệ số chuyển đổi thƣƣ́c ăn TSB : Trypton Soy Broth TSA : Trypton Soy Agar APW : Alkaline Peptone Water LB : Lauria Broth GRAS : Generally recognized as safe - vii - DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bệnh gây Vibrio spp nuôi trồng thủy sản 15 Bảng 1.2 Chế phẩm probiotic sử dụng ni tơm, cua, cá, sị hiệu chúng 19 Bảng 3.1 Hoạt tính sinh protease ngoại bào 41 Bảng 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu chủng V1.1 43 Bảng 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu chủng V3.3 43 Bảng 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu chủng DYO5 45 Bảng 3.5 Kết định danh chủng B3.10.2 kít hóa sinh API 50CHB 51 Bảng 3.6 Quy trình đơng khô sinh khối chủng probiotic nghiên cứu 62 Bảng PL.1 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V1.1 chủng probiotic nghiên cứu theo thời gian 77 Bảng PL.2 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V3.3 chủng nghiên cứu theo thời gian 77 Bảng PL.3 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.1 môi trường TSB LB 77 Bảng PL.4 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.2 môi trường TSB LB 78 Bảng PL.5 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.1 môi trường TSB LB 78 Bảng PL.6 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.4 môi trường TSB LB 78 Bảng PL.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 79 Bảng PL.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến chủng nghiên cứu 79 Bảng PL.9 Ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 79 Bảng PL.10 Ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng chủng nghiên cứu .79 Bảng PL.11 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng nghiên cứu .80 Bảng PL.12 Ảnh hưởng pH đến trình lên men thiết bị BioFlo 110 80 Bảng PL.13 Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình lên men thiết bị BioFlo 11081 Bảng PL.14 Tỷ lệ sống chủng B3.7.4 sau đông khô 81 Bảng PL.15 Tỷ lệ sống chủng B3.10.2 sau đông khô 81 Bảng PL.16 Ảnh hưởng dầu mực vào thức ăn bổ sung probiotic thời gian tan môi trường nước biển 82 Bảng PL.17 Áp suất bay theo nhiệt độ 82 - viii - DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ bố tríthínghiệm xác định thơng số đơng khơ tối ưu cho q trình đơng khô vi khuẩn probiotic 37 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định nồng độ chất chống đơng phù hợp cho q trình đơng khơ vi khuẩn probiotic 38 Hình 3.1 Hoạt tính sinh protease ngoại bào chủng probiotic nghiên cứu .41 Hình 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu với chủng V1.143 Hình 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu với chủng V3.344 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn chủng probiotic nghiên cứu với chủng DY05 44 Hình 3.5 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.1 môi trường TSB LB 46 Hình 3.6 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.2 mơi trường TSB LB 46 Hình 3.7 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.1 môi trường TSB LB .47 Hình 3.8 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.4 môi trường TSB LB .47 Hình 3.9 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V1.1 chủng nghiên cứu theo thời gian 48 Hình 3.10 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V3.3 chủng 49 nghiên cứu theo thời gian 49 Hình 3.11 Hình ảnh hình thái khuẩn lạc chủng probiotic nghiên cứu 50 Hình 3.12 Hình ảnh nhuộm Gram tế bào chủng probiotic nghiên cứu 50 Hình 3.13 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 53 Hình 3.14 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến chủng nghiên cứu .54 Hình 3.15 Ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 55 Hình 3.16 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 56 Hình 3.17 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 57 Hình 3.18 Ảnh hưởng pH đến trình lên men 58 Hình 3.19 Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình lên men 59 Hình 3.20 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.2 nuôi thiết bị lên men BioFlo 110 60 Hình 3.21 Sơ đồ quy trình lên men 61 Hình 2.22 Chế phẩm probiotic trước (a) sau đông khô (b) 62 -702 KIẾN NGHỊ 1) Tiếp tục nghiên cƣƣ́u chế khángVibrio chủng probiotic nghiên cứu 2) Thƣƣ̉ nghiệm chế phẩm probioticBio – Lobster đối tượng tôm hùm nuôi lồng 3) Tiếp tục hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm probiotic th ương mại hóa sản xuất chế phẩm cho tơm hùm nuôi lồng giai đoạn giống nuôi thương phẩm -71- DANH MỤC CÁC BÀI BÁO LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Trần Vũ Đình Nguyên, Nguyễn Văn Duy, Vũ Ngọc Bội, 2013 Xác định hoạt tính probiotic điều kiện ni cấy thích hợp chủng Bacillus phân lập tƣƣ̀ tơm hùm bơng, Tạp chí Khoa học công nghệ thủy sản (đã gửi) Nguyễn Văn Duy, Trần Vũ Đình Nguyên, 2013 Sản xuất chế phẩm probiotic đông khô từ Bacillus nhằm bổ sung vào thức ăn ni hải sản Tạp chí Cơng nghệ sinh học (đã gửi) 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 2012 Báo cáo kết thực kế hoạch tháng năm 2012 ngành Nông nghiệp Phát triển nông thôn Bùi Quang Tề, 2009 Nuôi thâm canh tơm đảm bảo an tồn vệ sinh thực phẩm theo mơ hình gaqp, Trung tâm Khuyến nơng khuyến ngư quốc gia, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn Đặng Tố Vân Cầm , 2009 Sƣƣ̉ dụng dòng vi khuẩn có đặc tính Quorum Sensing có khả tích lũy Poly -β-Hydroxybutyrate ương ni ấu trùng tôm -cá biển Viện nghiên cƣƣ́u nuôi trồng thủy sản II Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thủy sản Đỗ Thị Hòa , Bùi Quang Tề , Nguyễn HƣƢ̃u Dũng Nguyễn ThịMuội , 2004, Bệnh học thủy sản, Nhà xuất Nơng nghiệp, Tp Hồ ChíMinh Hiệp hội Chế biến Xuất Thủy sản Việt Nam, 2004 Kỹ thuật nuôi tôm hùm lồng Lại Văn Hùng, 2007 Nghiên cứu nhu cầu dinh dưỡng để sản xuất thức ăn dạng viên nuôi tôm hùm Panulirus ornatus lồng từ giai đoạn giống đến cỡ thương phẩm vùng biển Khánh Hịa, Báo cáo tởng kết đề tài trọng điểm cấp Bộ Lương Đức Phẩm, 1998, Công nghệ vi sinh vật, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Mai Đàm Linh, Đỗ Minh Phương, Phạm Thị Tuyết, Kiều Hữu Ảnh, Nguyễn Thị Giang, 2008 Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn lactic phân lập địa bàn thành phố Hà Nội Tạp chí Khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội 24, 221-226 Nguyễn Đức Hùng, Lê Đình Hùng, Huỳnh Lê Tâm, 2004 Sổ tay kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm thủy sản Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 10 Nguyễn ThịBích Thúy , 1998 Nghiên cứu đặc điểm sinh học nhằm góp phần bảo vệ nguồn lợi tơm hùm vùng ven biển miền Trung Việt Nam, Luận án tiến sĩ khoa học Sinh học, Viện Hải dương học, Nha Trang 12 Phạm Văn Ty, Vũ Nguyên Thành, 2007 Công nghệ sinh học, tập5: Công nghệ vi sinh môi trường, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội trang 129 – 146 13 Tổng cục T hủy sản , 2012 Báo cáo tóm tắt quy hoạch tổng thể phát triển ngành thủy sản Việt Nam đến năm 2020, tầm nhìn 2030 73 14 Trung tâm khuyến nông quốc gia, 2010, Nuôi tôm hùm thương phẩm số biện pháp phịng trị bệnh tơm ni (phần 4) 15 Võ Văn Nha, 2003 Một số đặc điểm sinh học tơm hùm bơng Tạp chí Khoa Học Cơng Nghệ Thủy Sản số 2/2003 Tài liệu tiếng Anh: 16 AOAC, 1990 Official Method of Analysis, 15th ed Arlington, VA: Association of official analytical chemists, 70 17 Balca´zar J.L, 2003 Evaluation of probiotic bacterial strains in Litopenaeus vannamei Final Report, National Center for Marine and Aquaculture Research, Guayaquil, Ecuador 18 Balca´zar S.J, Blas I.D, Ruiz-Zarzuela I, Cunningham D, Vendrell D, Muzquiz J.L, 2006 The role of probiotics in aquaculture Laboratory of Fish Pathology, University of Zaragoza, Miguel Servet 177, 50013 Zaragoza, Spain Veterinary Microbiology 114(3-4): 173-186 19 Bourne D, Hoj L, Webster N, Payne M, Skindersoe M, Givskov M, Hall M, 2007 Microbiological aspects of phyllosoma rearing of the ornate rock lobster Panulirus ornatus Aquaculture 268(1-4): 274-287 20 Chatterjee and Haldar, 2012 Vibrio Related Diseases in Aquaculture and Development of Rapid and Accurate Identification Methods Journal Marine Science Research & Development 2012, S1:002 doi:10.4172/2155-9910.S1-002 21 Chythanya R., Karunasagar I, Karunasagar I, 2002 Inhibition of shrimp pathogenic vibrios by a marine Pseudomonas I-2 strain Aquaculture 208: 1–10 22 Dean D, 2011 Aquaculture in Vietnam: from small-scale integration to intensive production, Brown University Library 23 EPA (United States Environmental Protection Agency), 2003 Bacillus pumilus strain GB 34 (006493) “Fact Sheet” http://www.epa.gov/oppbppd1/biopesticides/ingredients/factsheets/factsheet_006493.htm 24 Farzanfar A, 2006, The use of probiotics in shrimp aquaculture FEMS Immunol Med Microbiol 48(2): 149-58 25 Fuller R, 1992 History And Development Of Probiotics, in: Roy Fuller (Ed.) Probiotics: The Scientific Basis, 1-8, chapman &Hall, London 74 26 Garriques D and Arevalo G, 1995 An evaluation of the production and use of a live bacterial isolate to manipulate the microbial flora in the commercial production of Penaeus vannzamei postlarvae in Ecuador In: Browdy C.L and Hopkins J.S, editors Swimming through troubled water, proceedings of the special session on shrimp farming World Aquaculture Society P 53-59 27 Gibson L.F, Woodworth J, George A.M, 1998 Probiotic activity of Aeromonas media on the Pacific oyster, Crassostrea gigas, when challenged with Vibrio tubiashii 28 Gullian M, Thompson F, Rodrı´guez J, 2004 Selection of probiotic bacteria and study of their immunostimulatory effect in Penaeus vannamei Aquaculture 233: 1–14 29 Gopal S, Otta SK, Kumar S, Karunasagar, Nishibuchi M, Karunasagar L, 2005 The occurrence of Vibrio species in tropical shrimp culture environments; implications for food safety International Journal of Food Microbiology 102(2): 151-9 30 Hansen G.H, 2000 Use of probiotics in marine aquaculture Feed Mix 8: 31 Hubalek Z, 2003 Protectants used in the cryopreservation of microorganisms Cryobiology 46: 205–229 32 Hill, J E; Baiano, J C F, Barnes, A C (2009) Isolation of a novel strain of Bacillus pumilus from penaeid shrimp that is inhibitory against marine pathogens Journal of Fish Diseases 32 (12): 1007–1016 33 Irianto A & Austin B, 2002 Probiotics in aquaculture Journal of Fish Diseases 25: 633–642 34 Jans D 2005 Probiotics in animal nutrition, Booklet.WWW.Fefana.org.pp 4-18 35 Jingjin C, Meili D and Wenlin S, 1997 The application of the Photosynthetic bacteria in the production of the shrimp larva culture Journal of Ocean University of Qingdao 36 Jiravanichpaisal P, Chuaychuwong P and Menasveta P, 1997 The use of Lactobacillus sp as the probiotic bacteria in the giant tiger shrimp (Penaeus monodon Fabricius) Poster session of the 2nd Asia-Pacific marine biotechnology conference and 3rd Asia-pacific conference on algal biotechnology, Phuket, Thailand 37 Khachatourions GG, 1998 Agricultural use of antibiotics and the evolution and transfer of antibiotic-resistant bacteria Canadian Medcical Association journal 159: 1129–1136 75 38 Kosin B, Rakshit S.K, 2006 Microbial and Processing Criteria for Production of Probiotics Food Technol Biotechnol 44 (3): 371–379 39 Kesarcodi-Watson A, Kaspar H, Lategan M J, Gibson L, 2008 Probiotics in aquaculture: The need, principles and mechanisms of action and screening processes 40 Lai Van Hung and Le Anh Tuan (2008), Lobster seacage culture in Viet Nam In: Spiny lobster aquaculture in the Asia-Pacific region (Ed: Kevin C Williams), pp 10-17, Proceedings of an international symposium held at Nha Trang, Vietnam 41 Lara-Flores M, Miguel A, Olvera- Novoa, Beatriz E, Guzman-Mendez, Lopez-Madriet W, 2003 Use of the bacteria Streptococcus faecium and Lactobacillus acidophilus, and the yeast Saccharomyces cerevisiae as growth promoters in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) Aquaculture 216: 193–201 42 Maeda M, and Liao I.C, 1992 Effect of bacterial population on the growth of a prawn larva, Penaeus monodon Aquaculture 21: (25-29) 43 Maeda M, and Liao I.C, 1994 Microbial processes in aquaculture environment and their importance for increasing crustacean production Japan Agricultural Research Quarterly 28(4): 283-288 44 Maqsood S, Prabjeet Singh, Munir Hassan Samoon and Gohar Bilal Wani, 2010 Probiotics and its applications in aquaculture Aquafind http://aquafind.com/articles/probiotics_in_aquaculture.php 45 Moriarty DJW, 1999 Disease control in shrimp aquaculture with probiotic bacteria Proceedings of the 8th International Symposium on Microbial Ecology Atlantic Canada Society for Microbial Ecology, Halifax, Canada pp 237–243 46 Ngo Van Hai, Fotedar R, Buller N, 2007 Selection of probiotics by various inhibition test methods for use in the culture of western king prawns, Penaeus latisulcatus (Kishinouye) Aquaculure 272 (1-4), 231-239 47 Nogami K and Meada M, 1992 Bacteria as biocontrol agents for rearing larvae of the Crab Portunus trituber Culatus Canadian Journal of fisheries and aquatic sciences 4.9: 2373-2376 48 Prabhu NM, Nazar AR, Rajagopal S, Ajmal Khan S, 1999 Use of probiotics in water quality management during shrimp culture Journal Aquaculture in the Tropics 14: 227–236 76 49 Rattanachuay P, Kantachote D, Tantirungkij M , Nitoda T , Kanzaki H, 2010 Inhibition of shrimp pathogenic vibrios by extracellular compounds from a proteolytic bacterium Pseudomonas sp W3 Electronic Journal of Biotechnology 50 Ravi A.V, Musthafa K.S, Jegathammbal G, Kathiresan K, Pandian S.K, 2007 Screening and evaluation of probiotics as a biocontrol agent against pathogenic Vibrios in marine aquaculture Letters in Applied Microbiology 45 (2): 219-223 51 Rengpipat S, Tunyanun A, Fast AW, Puyatiratitivorakul S, Menasveta P, 2003 Enhanced growth and resistance to vibrio challenge in pond-reared black tiger shrimp Penaeus monodon fed a Bacillus probiotic Diseases Of Aquatic Organisms 55: 169–173 52 Rengpipat S, Rukpratanporn S, Piyatiratitivorakul S, Menasaveta P, 2000 Immunity enhancement in black tiger shrimp (Penaeus monodon) by a probiont bacterium (Bacillus S11) Aquaculture, 191: 271–288 53 Siaterlis A, Deepika G and Charalampopoulos D, 2009 Effect of culture medium and cryoprotectants on the growth and survival of probiotic Lactobacilli during freeze drying Department of Food Biosciences, The University of Reading, Berkshire, Reading, UK Letters in Applied Microbiology 48 (3): 295-301 54 Shields J D, 2011 Diseases of spiny lobsters: A review Journal of Invertebrate Pathology 106, page 79–91 55 Sihag R Cvà Sharma P, 2012, The New Ecofriendly Alternative Measures of Disease Control for Sustainable Aquaculture Journal of Fisheries and Aquatic Science Volume 7, Number 2, 72-103 56 Thompson F L, Iida Tand Swings J, 2004 Biodiversity of Vibrios, Microbiology and Molecular Biology Reviews, page 403-431 57 Vaseeharan B and Ramasamy P, 2003 Control of pathogenic Vibrio spp by Bacillus subtilis BT23, a possible probiotic treatment for black tiger shrimp Penaeus monodon Letters in Applied Microbiology 36: 83–87 58 Vine N G, Winston D Leukes and Horst Kaiser, 2006 Probiotics in marine larviculture Federation of European Microbiogical Societies Microbiology Reviews, 59 Zhoujia L, Qing Z and Huaquan Y, 1997 The affect of the probiotics to the shrimp ponds Aquaculture of China 5: 30-31 77 PHỤ LỤC Bảng PL.1 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V1.1 chủng probiotic nghiên cứu theo thời gian STT Kí hiệu chủng 1giờ 2giờ 3giờ 4giờ 5giờ B3.7.4 11 11 12 13 B3.10.2 11 11 B3.7.1 - B3.10.1 - 13 11 (-) khơng có hoạt tính kháng khuẩn Bảng PL.2 Hoạt tính kháng khuẩn chủng V3.3 chủng nghiên cứu theo thời gian STT Kí hiệu chủng 1giờ 2giờ 3giờ 4giờ 5giờ B3.7.4 9 12 B3.10.2 11 15 12 3 B3.7.1 7 12 13 B3.10.1 10 11 13 Bảng PL.3 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.1 môi trường TSB LB Thời gian (h) TSB LB 0,0698 0,0700 0,3156 0,3564 0,7446 0,7400 1,4513 1,7009 1,6984 1,9426 1,8631 2,0599 1,9378 2,0981 2,0523 2,1186 78 Bảng PL.4 Đường cong sinh trưởng chủng B3.10.2 môi trường TSB LB Thời gian (h) TSB LB 0,0704 0,0691 0,4243 0,4869 0,9142 1,0982 1,6428 1,8042 1,8375 1,9179 1,9155 1,9705 1,9778 2,0189 2,0173 2,0724 Bảng PL.5 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.1 môi trường TSB LB Thời gian(h) TSB LB 0,0685 0,0693 0,4201 0,4802 0,9474 1,1436 1,5888 1,8015 1,7987 1,9245 1,9299 2,0120 1,9926 2,0620 2,0853 2,1180 Bảng PL.6 Đường cong sinh trưởng chủng B3.7.4 môi trường TSB LB Thời gian (h) TSB LB 0,0697 0,0682 0,3668 0,3958 0,8395 0,8714 1,5221 1,7492 1,7925 1,9713 1,8872 2,1061 1,9631 2,1951 2,0456 2,2049 79 Bảng PL.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng nghiên cứu Tinh bột sắn Tinh bột bắp Rỉ đường Glucose B3.7.1 0,1090 0,6345 1,1380 1,3098 B3.7.4 0,1217 0,7066 1,2369 0,8968 B3.10.1 0,2273 0,7819 1,8201 1,3680 B3.10.2 0,2001 0,8188 1,6732 1,3350 Bảng PL.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến chủng nghiên cứu Đậu nành Amoni sulfat Pepton B3.7.1 0,0874 0,4366 1,3071 B3.7.4 0,1514 0,9164 0,9013 B3.10.1 0,1451 0,6782 1,3601 B3.10.2 0,0907 0,7107 1,3427 Bảng PL.9 Ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng chủng nghiên cứu 0% 1% 2% 3% 4% 5% B3.10.1 1,6788 1,9654 1,9527 1,7242 1,4187 1,0229 B3.7.4 0,9439 1,8871 1,8455 1,6587 1,0913 0,6429 B3.7.1 1,1773 1,8604 1,8089 1,5920 1,2147 0,7132 B3.10.2 1,1105 1,8672 1,8160 1,5542 1,1141 0,6886 Bảng PL.10 Ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng chủng nghiên cứu pH pH pH pH pH B3.7.1 0,3714 1,5602 1,8553 1,9411 1,8040 B3.7.4 0,3502 1,2999 1,8237 1,9237 1,8308 B3.10.1 0,3749 1,4320 1,8841 1,9513 1,7960 B3.10.2 0,3665 1,4224 1,7311 1,8186 1,6582 80 Bảng PL.11 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng nghiên cứu Tốc độ sinh trưởng OD540 1,8172 Nhiệt độ phịng Kí hiệu chủng B3.10.2 (28-310C) B3.7.4 1,7292 B3.10.1 1,8049 B3.7.1 1,8017 B3.10.2 B3.7.4 1,9927 1,8667 B3.10.1 2,0263 B3.7.1 1,9264 B3.10.2 B3.7.4 2,1073 2,0461 B3.10.1 2,2794 B3.7.1 2,2067 B3.10.2 B3.7.4 2,0051 2,1860 B3.10.1 2,2018 B3.7.1 1,9208 B3.10.2 B3.7.4 1,8246 1,8891 B3.10.1 1,9389 B3.7.1 1,8364 310C 340C 370C 400C Bảng PL.12 Ảnh hưởng pH đến trình lên men thiết bị BioFlo 110 Kí hiệu chủng B3.10.2 pH Tốc độ sinh trưởng OD540 1,5089 1,7925 1,9508 1,6471 81 Bảng PL.13 Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình lên men thiết bị BioFlo 110 pH Tốc độ sinh trưởng OD540 280C 1,9147 310C 2,0869 340C 2,2352 370C 2,1559 400C 1,9077 Kí hiệu chủng B3.10.2 Bảng PL.14 Tỷ lệ sống chủng B3.7.4 sau đông khô Chất chống đơng Tỷ lệ sống sót Lactose 1% 4,31 Lactose 5% 63,08 Lactose 10% 53,85 Mantodextrin 1% 4,77 Mantodextrin 5% 46,15 Mantodextrin 10% 90,77 Glycerol 1% 6,46 Glycerol 5% 8,77 Glycerol 10% 11,38 Mẫu đối chứng 15,08 Bảng PL.15 Tỷ lệ sống chủng B3.10.2 sau đông khô Chất chống đơng Tỷ lệ sống sót Lactose 1% 4,48 Lactose 5% 74,63 Lactose 10% 49,25 Mantodextrin 1% 3,88 Mantodextrin 5% 55,22 Mantodextrin 10% 91,04 Glycerol 1% 4,63 Glycerol 5% 6,42 Glycerol 10% 7,76 Mẫu đối chứng 18,66 82 Bảng PL.16 Ảnh hưởng dầu mực vào thức ăn bổ sung probiotic thời gian tan môi trường nước biển Thời gian Thức ăn Thức ăn + (giờ) probiotic Thức ăn + Thức ăn + Thức ăn + probiotic + probiotic + probiotic + 10ml dầu 20ml dầu 30ml dầu 0,049 0,098 0,092 0,088 0,080 0,059 0,164 0,149 0,197 0,206 0,070 0,218 0,168 0,205 0,201 0,081 0,266 0,187 0,210 0,211 0,091 0,278 0,196 0,218 0,223 Bảng PL.17 Áp suất bay theo nhiệt độ C C C -40 mBar 0,120 -20 mBar 1,030 0 mBar 6,110 C -60 mBar 0,0110 -1 5,620 -21 0,940 -41 0,110 -61 0,0090 -2 5,170 -22 0,850 -42 0,100 -62 0,0080 -3 4,760 -23 0,770 -43 0,090 -63 0,0070 -4 4,370 -24 0,700 -44 0,080 -64 0,0060 -5 4,020 -25 0,630 -45 0,070 -65 0,0054 -6 3,690 -26 0,570 -46 0,060 -66 0,0047 -7 3,380 -27 0,520 -47 0,055 -67 0,0041 -8 3,010 -28 0,470 -48 0,050 -68 0,0035 -9 2,840 -29 0,420 -49 0,045 -69 0,0030 -10 2,560 -30 0,370 -50 0,040 -70 0,0026 -11 2,380 -31 0,340 -51 0,035 -71 0,0023 -12 2,170 -32 0,310 -52 0,030 -72 0,0019 -13 1,980 -33 0,280 -53 0,025 -73 0,0017 -14 1,810 -34 0,250 -54 0,024 -74 0,0014 -15 1,650 -35 0,220 -55 0,021 -75 0,0012 -16 1,510 -36 0,200 -56 0,018 -76 0,0010 -17 1,370 -37 0,180 -57 0,016 -18 1,250 -38 0,160 -58 0,014 -19 1,140 -39 0,140 -59 0,012 ... Nguyễn Văn Duy, định chọn đề tài ? ?Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm probiotic nhằm bổ sung vào thức ăn cho tôm hùm nuôi lồng? ?? Mục tiêu đề tài - Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm probiotic. .. thủy sản Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm probiotic cho đối tượng tơm hùm vấn đề giới Việt Nam Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic sử dụng bổ sung vào thức ăn cho tôm hùm góp phần làm tăng... đề nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic tiếp tục đầu tư nghiên cứu để xây dựng quy trình sản xuất thương mại Những nghiên cứu chế phẩm probiotic cho tơm hùm cịn hạn chế 1.3.3 Tình hình nghiên