Bài viết tiến hành nghiên cứu lựa chọn quy trình nhân giống và nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phù hợp; đánh giá khả năng nhân giống, sinh trƣởng, phát triển và năng suất của nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris theo quy trình lựa chọn.
TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ NUÔI TRỒNG NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO (CORDYCEPS MILITARIS) TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC Trịnh Lan Hồng1 TÓM TẮT Nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) đ ợc nghiên cứu ứng dụng quy trình cơng nghệ để ni tr ng theo mơ hình Tr ng Đại học H ng Đức Khả phân lập nhân giống nấm d ợc liệu đ ợc đánh giá tốt với hệ sợi nấm phát triển nhanh, khỏe môi tr ng thạch dịch thể Nấm Đông trùng hạ thảo q trình phát triển có th i gian ơm sợi, hình thành thể thu hoạch t ơng ứng ngày, 22 ngày 56 ngày Nấm thành phẩm thu hoạch có số thể 42 thể/bình với chiều dài đ ng kính t ơng ứng 32,5 mm 2,8 mm, khối l ợng nấm t đạt 23.6 g/bình Mặc dù tỷ lệ hỏng nhiễm nấm mốc t ơng đối cao khoảng 32%, nh ng mơ hình ni tr ng nấm b ớc đầu mang lại hiệu kinh tế với lãi đạt 8.968.000 đ ng Từ khóa: Nấm d ợc liệu, Đơng trùng hạ thảo, phân lập, nhân giống ĐẶT VẤN ĐỀ Đông trùng hạ thảo lồi nấm ý sinh trùng đƣợc sử dụng nhƣ loại dƣợc liệu quý y học cổ truyền Trung Quốc t hàng ỷ nay, chứa nhiều hoạt chất sinh học quý nhƣ nucleosides, cordycepin, adenosine, polysaccharides, ergosterol, mannitol… có giá trị y học cao, có khả ức chế phát triển tế bào ung thƣ, cải thiện sản xuất insulin, kháng viêm, chống oxi hóa tăng hoạt lực tinh trùng Hiện nay, nấm Đông trùng hạ thảo giống Cordyceps có hai lồi đƣợc nghiên cứu nhiều chiết xuất tinh chất có giá trị dƣợc liệu giá trị kinh tế cao Loài thứ Cordyceps sisnensis loại nấm dƣợc liệu có phân bố hạn chế tự nhiên đƣợc ni trồng điều kiện hoang dã, lồi nấm chƣa đƣợc nuôi trồng thành cơng mơi trƣờng nhân tạo, sản lƣợng nấm thu đƣợc hông đáp ứng đủ nhu cầu thị trƣờng Loài thứ hai Cordyceps militaris chứa hợp chất hóa học tƣơng tự nhƣ Cordyceps sinensis nhƣng dễ dàng nuôi môi trƣờng nhân tạo Nấm Đơng trùng hạ thảo nói chung có tự nhiên bị khai thác mức nên để tìm kiếm sử dụng Đơng trùng hạ thảo tự nhiên làm dƣợc phẩm thực phẩm chức tốn khó Mặt khác, ni trồng Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris quy mô lớn mang tính khả thi cao nên việc phát triển nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật nuôi trồng nấm Cordyceps militaris môi trƣờng nhân tạo nhằm tăng quy mô sản xuất, nâng cao suất, chất lƣợng góp phần giảm giá thành sản phẩm đáp ứng nhu cầu thị trƣờng nƣớc chuyển giao công nghệ cho đơn vị sản xuất để đem lại lợi ích kinh tế cho địa phƣơng cần thiết T sở lý luận thực tiễn, tiến hành nghiên cứu ứng dụng quy trình cơng nghệ ni trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Trƣờng Đại học Hồng Đức Khoa Nông - Lâm - Ng nghiệp, Tr 48 ng Đại học ng Đức TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu, địa điểm thời gian nghiên cứu Giống nấm: Chủng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Nguyên liệu nuôi tr ng: Nhộng tằm, gạo lứt, hoai tây, nƣớc d a, giá đỗ, pepton, glucose, cao nấm men, vitamin B1 số khoáng chất Địa điểm nghiên cứu: Khoa Nông - Lâm - Ngƣ nghiệp, Trƣờng Đại học Hồng Đức Th i gian nghiên cứu: T năm 2018 đến năm 2019 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Thu thập, phân tích số liệu thứ cấp lựa chọn qu trình ni tr ng Thu thập tài liệu nƣớc giới có liên quan đến kỹ thuật, phƣơng pháp quy trình nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris T đó, phân tích lựa chọn quy trình kỹ thuật chi tiết nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phù hợp Các môi trƣờng sử dụng: Môi tr ng phân lập nhân giống cấp 1: Pepton (2,5g), Cao nấm men (2,5g); glucose (20g); MgSO4.7H2O (0,5g); KNO3 (0,5g); KH2PO4 (0,25g); Agar (14g); H2O Môi tr ng nhân giống cấp 2: Pepton (5g); Cao nấm men (7,5g); glucose (20g); MgSO4.7H2O (1g); KNO3 (1g); KH2PO4 (0,5g); Dịch chiết khoai tây (14g); vitamin B1 (0,1g); H2O Mơi tr ng sản xuất: 30 g gạo lứt/bình + 50 ml dịch khoáng 2.2.2 Chỉ tiêu ph ơng pháp theo dõi Thời gian ăn lan môi trƣờng thạch (ngày); Thời gian hệ sợi chuyển màu (ngày); Tỷ lệ nhiễm (%); Thời gian ƣơm sợi (ngày); Thời gian hình thành thể (ngày); Thời gian thu hoạch (ngày); Số lƣợng thể (quả thể/bình); Chiều dài thể (mm); Năng suất (g/vụ) 2.2.3 iệu nuôi tr ng Lãi VNĐ = Tổng thu - Tổng chi Tổng thu (triệu đồng/ g = Năng suất x giá bán Tổng chi (triệu đồng/kg) = Các chi phí: Giống, nguyên vật liệu, tiền công 2.2.4 Ph ơng pháp xử lý số liệu Kết thí nghiệm đƣợc xử lý chƣơng trình Microsoft Excel KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu lựa chọn quy trình nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phù hợp T kết nghiên cứu tổng quan thông qua nghiên cứu nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo tác giả ngồi nƣớc, chúng tơi lựa chọn 49 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 đƣợc quy trình nhân giống ni trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Trƣờng Đại học Hồng Đức nhƣ sơ đồ sau: Phân lập nấm C militaris 220C, che tối Nhân giống cấp 220C, che tối Nhân giống cấp 220C, che tối Lắc 140 rpm Cấy giống sản xuất MT: 30g gạo lứt + 40mL dịch khống 22oC, che tối, Cấy 5mL giống/bình Ƣơm sợi 22oC, che tối Tơ nấm phủ ín mơi trƣờng Kích bật thể 16oC, chiếu sáng Độ ẩm 80-90% Nuôi thể 16oC, chiếu sáng Độ ẩm 80-90% Thu hoạch Để tƣơi sấy khô 3.2 Đánh giá khả nhân giống, sinh trƣởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris theo quy trình lựa chọn 3.2.1 Khả phân lập nhân giống nấm Đông trùng hạ thảo C militaris Khả phân lập giống nấm Đông trùng hạ thảo Bảng Sự phát triển nấm C militaris môi trƣờng phân lập Thời gian ngày Đƣờng ính mm Khả phát triển 22,5 10 44,0 15 59,5 +++ 20 70,0 25 Kín Ghi chú: + Yếu, ++Trung bình, +++ Tốt Qua kết bảng cho thấy phân lập nấm Cordyceps militaris nhiệt độ 22oC môi trƣờng phân lập nấm phát triển mạnh, điều cho thấy thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng phù hợp với sinh trƣởng nấm Chỉ sau ngày ni cấy, nấm Cordyceps militaris bắt đầu hình thành khuẩn lạc với ích thƣớc khuẩn lạc tăng dần theo thời gian Quan sát thấy bề mặt khuẩn lạc phồng xốp, nấm chƣa ăn sâu môi trƣờng, mặt sau khuẩn lạc phẳng, có màu trắng Sau 10 ngày ni cấy kết quan sát cho thấy đƣờng kính khuẩn lạc phát triển nhanh, đến ngày 25, bề mặt khuẩn lạc lõm xuống, mặt sau khuẩn lạc mơi trƣờng có sắc tố màu vàng trắng ngà 50 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 Khả nhân giống cấp cấp nấm Đông trùng hạ thảo C militaris Bảng Sự phát triển hệ sợi C militaris môi trƣờng nhân giống cấp Thời gian Thời gian Khả ăn ín chuyển màu Đặc điểm hệ sợi phát triển (ngày) (ngày) Ban đầu hệ sợi màu trắng bề mặt +++ 10 môi trƣờng, dày dai mịn Sau 10 ngày, hệ sợi bắt đầu chuyển sang màu vàng cam Ghi chú: + Yếu, ++ Trung bình, +++ Tốt Mơi trƣờng nhân giống cấp môi trƣờng tƣơng tự môi trƣờng phân lập nấm Qua kết nghiên cứu cho thấy, giống nấm cấp phát triển tốt tƣơng tự nhƣ giai đoạn phân lập giống gốc T vị trí cấy giống ban đầu, hệ sợi bắt đầu ăn lan xung quanh Chỉ sau ngày hệ sợi phát triển mạnh ăn ín bề mặt môi trƣờng ống nghiệm, dày dai, màu trắng bông, bề mặt hệ sợi mịn Sau 10 ngày, hệ sợi bắt đầu chuyển sang màu vàng cam Sau có giống cấp tiến hành nhân giống nấm cấp môi trƣờng dịch thể Bảng Sự phát triển hệ sợi C militaris môi trƣờng nhân giống cấp Đặc điểm hệ sợi nấm Nấm bắt đầu phát triển bề mặt dịch thể vị trí cấy giống với lƣợng sợi ngắn mỏng, trắng Nấm ăn lan tròn bề mặt dịch thể vị trí cấy giống Nấm ăn lan rộng bề mặt dịch thể tạo thành lớp màng sát thành bình Đồng thời xuất vài huẩn lạc nhỏ dịch thể Xuất nhiều huẩn lạc nhỏ dịch thể 10 Các huẩn lạc hệ sợi phát triển ín mơi trƣờng dịch thể Qua bảng kết thấy, với môi trƣờng dạng dịch thể nấm Cordyceps militaris phát triển nhanh, khỏe Chỉ sau 10 ngày khuẩn lạc hệ sợi phát triển ín lơ lửng mơi trƣờng Khi giống nấm cấp Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris dạng dịch thể đƣa vào cấy giống môi trƣờng sản xuất để nuôi trồng thể nấm dƣợc liệu Cordyceps militaris thành phẩm TT Ngày theo dõi 3.2.2 Khả sinh tr ởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo C militaris Bảng Khả sinh trƣởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris TT Chỉ tiêu theo dõi Tỷ lệ nhiễm (%) Thời gian ƣơm sợi (ngày) Kết theo dõi 32% 09 Ghi Nhiễm mốc xanh đen Hệ sợi trắng bơng dày, mịn lan ín mơi trƣờng Hệ sợi chuyển màu vàng cam Thời gian chuyển màu (ngày) 11 Thời gian hình thành thể (ngày) 22 Thời gian thu hoạch (ngày) 56 Trong q trình ni trồng nấm Đông trùng hạ thảo, đặc biệt giai đoạn ƣơm sợi, nhiễm bệnh tƣợng không mong muốn ảnh hƣởng lớn đến thành công, suất chất 51 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 lƣợng nấm Nấm Đơng trùng hạ thảo bị nhiễm nấm dại bề mặt mơi trƣờng tổng hợp Ngun nhân trình trùng chƣa đảm bảo, thao tác cấy, vệ sinh phòng, dụng cụ nhiễm chéo t thí nghiệm vi sinh khác Cần khắc phục đồng thời yếu tố để giảm đến tối thiểu tỷ lệ nhiễm bệnh góp phần nâng cao hiệu nuôi trồng Tại nghiên cứu này, khả sinh trƣởng phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris đƣợc đánh giá dựa tiêu thời gian ƣơm sợi, thời gian chuyển màu, thời gian hình thành thể thời gian thu hoạch thể nấm Các khoảng thời gian nuôi trồng bƣớc đầu đƣợc xác định t cấy giống với thời gian ƣơm sợi ngày, thời gian hệ sợi nấm chuyển màu vàng cam 11 ngày, thời gian hình thành thể 22 ngày thời gian thu hoạch 56 ngày Kết tƣơng đối tƣơng đồng với nghiên cứu tác giả Nguyễn Thị Minh Hằng Bùi Văn Thắng (2017), Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân Nguyễn Mạnh Hà (2009), Hyun et al (2008) 3.2.3 Năng suất nấm Đông trùng hạ thảo Cord ceps militaris Bảng Năng suất nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris TT Chỉ tiêu theo dõi Kết theo dõi Số bình cho thu hoạch (bình) 68 Số thể bình (quả thể/bình) 42 Chiều dài thể (mm) 32,5 Đƣờng ính thể (mm) 2,8 Khối lƣợng nấm tƣơi bình (g/bình) 23,6 Các yếu tố cấu thành suất nhƣ số lƣợng, chiều dài đƣờng kính thể cơng thức đƣợc thể bảng Các bình ni nấm đƣợc gây sốc nhiệt t 22oC xuống 16oC để kích bật thể, mầm thể bắt đầu xuất phát triển đến số lƣợng thể cuối thời điểm thu hoạch trung bình 42 thể/bình Đồng thời chiều dài đƣờng kính thể nấm tƣơng ứng 32,5 2,8 mm Các yếu tố góp phần tác động đến khối lƣợng nấm tƣơi bình thu hoạch đƣợc với trị số trung bình 23,6 g/bình 3.3 Hiệu ni trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Bảng Hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo C militaris TT Chỉ tiêu Kết theo dõi Số hộp cho thể 68 Khối lƣợng thể bình g 23,6 Giá bán đồng/ g 10.000.000 Tổng thu đồng 16.048.000 Tổng chi 7.080.000 Lãi đồng 8.968.000 T hiệu inh tế mơ hình thí nghiệm, sau hi tính tổng giá trị nấm thu đƣợc chi phí đầu tƣ lãi thu đƣợc 8.968.000 đồng Điều cho thấy thí nghiệm nghiên cứu ứng dụng quy trình công nghệ nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps miliataris Trƣờng Đại học Hồng Đức bƣớc đầu gặp hó hăn định nhƣng thể thành công nuôi trồng loại nấm dƣợc liệu trƣờng nhƣ địa bàn tỉnh Thanh Hóa 52 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 Hình Phịng ni thể nấm trái) Quả thể nấm Đông trùng hạ thảo phải) KẾT LUẬN Qua nghiên cứu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Trƣờng Đại học Hồng Đức chúng tơi có số kết luận sau: Đã lựa chọn đƣợc quy trình nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phù hợp Hệ sợi nấm Đông trùng hạ thảo phát triển môi trƣờng phân lập nhân giống cấp 1, cấp khỏe, tốc độ ăn lan nhanh; Tỷ lệ nhiễm nấm dại tƣơng đối cao 32% với mốc thời gian ƣơm sợi, hình thành thể thu hoạch nấm tƣơng ứng 9,22 56 ngày; Nấm thu hoạch có số thể 42 thể/bình với chiều dài đƣờng kính tƣơng ứng 32,5 mm 2,8 mm, khối lƣợng nấm tƣơi đạt 23,6 g/bình Mơ hình ni trồng nấm bƣớc đầu mang lại hiệu kinh tế với lãi đạt 8.968.000 đồng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] [6] Nguyễn Thị Minh Hằng, Bùi Văn Thắng (2017), Nghiên cứu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) giá thể tổng hợp nhộng tằm, Tạp chí Khoa học Công nghệ lâm nghiệp, 4: 10-16 Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà (2009), Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi môi tr ng nuôi cấy khiết chủng nấm ĐT T Cffrtfaceps miliiaris, (L:Frl http://vafs) Byung - Tae, Cha S.H., et al (2009), Morphological characteristics of Cordyceps sinensis 16 and production of mycelia and exo-biopolymer from molasses in submerged culture, Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 12(1), pp.115-120 Hyun, Keawsompong S., Hanh V.T., Sivichai S., N.L Hywel-Jones (2008), Effect of Temperature on Cordycepin Production in Cordyceps militaris, Thai Journal of Agricultural Science, 42 (4), pp.219-225 Sung J.H., Jones N.L.H., Sung J.M., Luangsa-ard J.J., Shrestha B., Spatafora J.W (2007), Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi, Studies in Mcology, 57, pp.5-59 Zhou X., Gong Z., Su Y., Lin J., Tang K (2007), Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products, Journnal of Pharmacy and Pharmacology, 61, pp.279-291 53 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 APPLICATION OF TECHNOLOGY IN CULTIVATING MEDICINAL MUSHROOMS (CORDYCEPS MILITARIS) AT HONG DUC UNIVERSITY Trinh Lan Hong ABSTRACT Medicinal mushrooms (Cordyceps militaris) were applied the studies technology for cultivation in the model at Hong Duc University Ability to isolate and propagate this medicinal mushroom was great with fast-growing mycelia on both agar and liquid medium The time periods of Cordyceps in incubation, fruiting body forming and harvesting were days, 22 days and 56 days respectively Harvested mushrooms gained the number of fruiting bodies of 42 bodies per box with the length and diameter of 32.5 mm and 2.8 mm respectively, the mass of fresh mushrooms was reached 23.6 g per box Although the rate of mold infection was relatively high, about 32%, however the mushroom farming model initially brought economic efficiency with net interest of 8.968.000VND Keywords: Medicinal mushroom, Cordyceps militaris, isolate, propagate * Ngà nộp bài: 5/7/2019; Ngà gửi phản biện: 1/8/2019; Ngà du ệt đăng: 25/6/2020 54 ... thể nấm Đông trùng hạ thảo phải) KẾT LUẬN Qua nghiên cứu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Trƣờng Đại học Hồng Đức chúng tơi có số kết luận sau: Đã lựa chọn đƣợc quy trình. .. qua nghiên cứu nhân giống nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo tác giả ngồi nƣớc, chúng tơi lựa chọn 49 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 50.2020 đƣợc quy trình nhân giống nuôi trồng nấm. .. nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris theo quy trình lựa chọn 3.2.1 Khả phân lập nhân giống nấm Đông trùng hạ thảo C militaris Khả phân lập giống nấm Đông trùng hạ thảo Bảng Sự phát triển nấm