Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu của nghiên cứu là xác định được ảnh hưởng của việc bổ sung các thành phần lòng đỏ trứng gà và caffeine trong môi trường TCG (Tris-Citrate-Glucose) đến hiệu quả bảo tồn tinh của một số giống dê nuôi tại Việt Nam.
Vietnam J Agri Sci 2020, Vol 18, No.10: 870-878 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2020, 18(10): 870-878 www.vnua.edu.vn ẢNH HƯỞNG CỦA MƠI TRƯỜNG PHA LỖNG BỔ SUNG LÒNG ĐỎ TRỨNG GÀ VÀ CAFFEINE ĐẾN CHẤT LƯỢNG TINH DÊ Ngô Thành Trung*, Trần Thị Chi, Vũ Hải Yến, Nguyễn Tuấn Dũng, Trịnh Thị Linh Chi, Sử Thanh Long Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam * Tác giả liên hệ: nttrungcnsh@vnua.edu.vn Ngày nhận bài: 25.05.2020 Ngày chấp nhận đăng: 12.09.2020 TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu xác định ảnh hưởng việc bổ sung thành phần lòng đỏ trứng gà caffeine môi trường TCG (Tris-Citrate-Glucose) đến hiệu bảo tồn tinh số giống dê nuôi Việt Nam Chín dê đực thuộc giống dê Saanen, Boer Alpine (3 dê đực/giống) khai thác tinh âm đạo giả, pha loãng theo tỷ lệ 1:10 môi trường TCG bổ sung 5, 10, 15 20% lòng đỏ trứng gà 0,02; 0,03 0,04g caffeine/lít Tinh pha lỗng bảo quản nhiệt độ 5C 15C Hoạt lực tinh trùng tỷ lệ tinh trùng kỳ hình mẫu tinh đánh giá so sánh sau 24 giờ, 72 120 bảo quản Kết nghiên cứu cho thấy, bổ sung 0,03g caffeine/l môi trường TCG giúp bảo quản tinh dê tốt nhiệt độ Ở nhiệt độ 5C, môi trường TCG bổ sung 10% lòng đỏ trứng gà cho chất lượng tinh bảo quản tốt hơn, sử dụng để dẫn tinh nhân tạo sau 72 bảo quản Ở nhiệt độ 15C, môi trường TCG bổ sung 10% lòng đỏ trứng gà cho chất lượng tinh bảo quản tốt hơn, sử dụng để dẫn tinh nhân tạo sau 24 bảo quản Từ khóa: Tinh dê, mơi trường bảo quản tinh, lịng đỏ trứng, caffeine Effects of adding chicken egg yolk and caffeine in extender on the quality of goat semen ABSTRACT The aims of this study were to assess the effects of adding chicken egg yolk and caffeine in TCG (Tris-CitrateGlucose) extender on the quality of goat semen preserved some goat breeds in Vietnam Semen samples of bucks belonging to goat breeds, including Saanen, Boer and Alpine, (3 bucks/breed) were collected using artificial vagina, then diluted at a ratio of 1:10 with TCG extender added 0%, 5%, 10%, 15%, and 20% chicken egg yolk and 0,02; 0,03 and 0,04g caffeine/l The diluted semen samples were preserved at and 15C, respectively The sperm motility and sperm morphological parameters of the preserved semen samples were assessed and compared after 24h, 72h, and 120h of preservation Results showed that addition of 0,03g caffeine/l in TCG extender gave a better quality of preserved goat semen at both temperatures At 5C, TCG extender added 10% of chicken egg yolk gave a better quality of preserved goat semen and could be used for artificial insemination after 72h of preservation At 15C, TCG extender added 15% of chicken egg yolk resulted in a better quality of preserved goat semen and could be used for artificial insemination after 24h of preservation Keywords: Goat semen, semen extender, egg yolk, caffeine ĐẶT VẤN ĐỀ Đối với nước nhiệt đới Việt Nam dê lồi vật ni có vai trị quan trọng ngành chăn ni Chăn nuôi dê, cừu cung cấp nhiều sản phẩm thiết thực cho xã hội Thịt 870 sữa dê cung cấp dinh dưỡng cho người tiêu dung, đặc biệt trẻ em, người già làm đẹp cho phụ nữ Phân dê quay lại cải thiện độ phì cho đất, làm tăng suất cho trồng; lông, da, sừng móng cừu, dê nguyên liệu phục vụ cho công nghiệp nhẹ; Theo Cục Chăn nuôi, từ Ngô Thành Trung, Trần Thị Chi, Vũ Hải Yến, Nguyễn Tuấn Dũng, Trịnh Thị Linh Chi, Sử Thanh Long năm 2016-2018, đàn dê cừu Việt Nam tăng trưởng 15,45%; sản lượng thịt tăng gần 20% Năm 2018, theo số liệu Tổng cục Thống kê, Việt Nam có đàn dê cừu 2,8 triệu Năm 2019, tốc độ tăng trưởng đàn dê, cừu 15,45%; sản lượng thịt xuất chuồng dê, cừu tăng gần 20% Năm 2019, dịch tả lợn châu Phi xảy ra, Bộ NN&PTNT đạo tái cấu ngành chăn nuôi nhằm khơi tất tiềm ngành chăn nuôi, đó, yêu cầu tăng cấu đàn động vật ăn cỏ Như vậy, nhu cầu giống để đáp ứng việc tăng quy mơ đàn dê địi hỏi lớn Tuy nhiên, theo khảo sát thực tế nhóm tác giả, nay, Việt Nam, việc nhân giống dê chủ yếu thực theo phương thức truyền thống cho nhảy trực tiếp Việc áp dụng thụ tinh nhân tạo dê chưa phổ biến phương thức đem lại hiệu sinh sản cao (Ngoma & cs., 2016; El-Battawy, 2019), tránh tượng cận huyết, giảm nguy lây truyền dịch bệnh qua đường sinh sản, giảm số đực, tăng hiệu sử dụng giống cá thể đực giống chất lượng cao,… Trong thụ tinh nhân tạo dê, hiệu kỹ thuật phụ thuộc nhiều vào kỹ thuật khai thác tinh, bảo quản tinh dẫn tinh (Ngoma & cs., 2016; El-Battawy, 2019) Tinh dê bảo quản nhiệt độ từ 2-15C mơi trường pha lỗng mơi trường sodium citrate - lịng đỏ trứng, mơi trường sodium citrate - fructose - lịng đỏ trứng, mơi trường sữa ngun kem sữa tách bơ) có khơng bổ sung lịng đỏ trứng Trong đó, mơi trường pha lỗng phổ biến môi trường đệm Tris sử dụng hiệu cho tinh dê, tinh cừu tinh thỏ Việc bổ sung số chất vào môi trường bảo quản tinh động vật PVA, PVP, lòng đỏ trứng, chất chống oxy hóa vitamin E, vitamin C, caffeine, almumin huyết bị… có hiệu tốt giúp trì hoạt lực bảo vệ tế bào tinh trùng trình bảo quản (Long, 2003; Kubovicova, 2010; Tabatabaei, 2011 (trên tinh gà); Xuyen, 2004; Mendez, 2012; Sansores, 2011 (trên tinh lợn); Pour, 2013; Asadpour, 2011 (trên tinh dê); Zhao, 2015; Ferdinand, 2014 (trên tinh bò); Sharawy, 2015 (trên tinh chuột)) Trong đó, lịng đỏ trứng gà chứa chất cung cấp lượng cho tinh trùng, cung cấp nguồn protein, lipoprotein giúp bảo vệ màng tế bào tinh trùng, chất lecithin đóng vai trị chất bảo vệ lạnh tinh trùng (Ferrdinand & cs., 2014) Caffeine có tác dụng chống oxy hóa, ngăn ngừa q trình hình thành AMP vịng hay cAMP (cyclic adenosine monophosphate) làm cho tinh trùng hạn chế vận động môi trường bảo quản (Sharma, 1996; Pena, 2003; Xuyen, 2004; Lanzafame, 2009; Lampiao, 2012) Ngồi ra, caffeine cịn có tác dụng bảo vệ màng tinh trùng chúng có mặt môi trường thụ tinh ống nghiệm với vai trị hỗ trợ cho q trình thụ tinh Trên sở đó, nghiên cứu thực với mục tiêu xác định ảnh hưởng việc bổ sung thành phần lòng đỏ trứng gà caffeine môi trường TCG đến hiệu bảo tồn tinh số giống dê nuôi Việt Nam Nghiên cứu đóng góp cho việc sử dụng loại mơi trường có hiệu cao bảo quản tinh dê phục vụ cho thụ tinh nhân tạo áp dụng để đông lạnh tinh dê giúp bảo tồn nhân đàn giống dê Việt Nam PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Các mẫu tinh dê khai thác từ dê đực thuộc giống Saanen, Boer Alpine (3 dê đực/giống) 2.2 Dụng cụ hóa chất thí nghiệm Hóa chất sử dụng cho thí nghiệm gồm DGlucose, KCl, NaCl, Tris, Gentamycine, Caffeine (các hóa chất hãng Merck, Đức), lịng đỏ trứng gà (EY) Máy móc, thiết bị dụng cụ thí nghiệm gồm kính hiển vi, bể ổn nhiệt, tủ bảo ôn, tủ sấy, máy đo pH, cân kỹ thuật cân phân tích, máy khuấy từ, buồng đếm Neubauer 2.3 Nội dung nghiên cứu Nội dung 1: đánh giá so sánh chất lượng tinh nguyên giống dê: dê Boer 871 Ảnh hưởng mơi trường pha lỗng bổ sung lịng đỏ trứng gà caffeine đến chất lượng tinh dê (chuyên thịt), dê Saanen (chuyên sữa), dê Alpine (chuyên sữa) Nội dung 2: Đánh giá ảnh hưởng việc bổ sung lòng đỏ trứng gà (EY) caffeine đến chất lượng tinh bảo quản dạng lỏng nhiệt độ 5C 15C Bố trí thí nghiệm: Nội dung 1: dê đực thuộc giống dê (3 con/giống) khai thác tinh âm đạo giả kết hợp sử dụng thí tình thời điểm động dục, tần suất khai thác ngày/lần, thời gian khai thác tinh từ đến sáng, lặp lại 10 lần Các tiêu chất lượng tinh dịch đánh giá riêng cá thể lấy giá trị trung bình để phân tích so sánh Nội dung 2: dựa vào kết công bố Sharma (1996), Pena (2003), Xuyen (2004), Lanzafame (2009), Lampiao (2012) nghiên cứu vai trò caffein trình thụ tinh lợn người; hiệu việc bổ sung caffeine môi trường pha lỗng tinh lợn, từ đề xuất mức hàm lượng caffeine bổ sung môi trường pha loãng tinh để tiến hành thử nghiệm hiệu bảo quản tinh dê thông qua việc đánh giá tiêu chất lượng mẫu tinh dê bảo quản Mẫu tinh dê đực thí nghiệm trộn để loại bỏ yếu tố khác biệt cá thể giống Mẫu tinh xác định tiêu chất lượng tinh, lượng tinh thu nhận chia cho số lượng mơi trường thí nghiệm nhân đôi cho hai nhiệt độ bảo quản, tinh pha lỗng với mơi trường bảo quản có bổ sung hàm lượng khác caffeine lòng đỏ trứng gà theo bội số pha lỗng 1:10 Thí nghiệm lặp lại lần, tương ứng với lần khai thác tinh với tần suất khai thác ngày/lần Các tiêu chất lượng tinh bảo quản đánh giá sau 24, 72 120 sau pha loãng 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Lựa chọn đực để thai thác tinh Dê đực giống chọn cá thể dê giống thuộc giống dê Boer, dê Saanen dê Alpine, có nguồn gốc lý lịch rõ ràng, khỏe 872 mạnh, kiểu hình đẹp, độ tuổi từ 2-4 tuổi Dê đực giống có đặc điểm đặc trưng cho phẩm giống, thể đặc điểm ngoại hình thể chất vật Dê đực giống chọn bệnh tật, ngực ức nở, chân khỏe, gót cao, khơng có khuyết tật 2.4.2 Pha lỗng bảo quản tinh trùng Sau đưa tinh nguyên vòng 10 phút từ vị trí khai thác tinh tới phịng thí nghiệm, nhanh chóng xác định nồng độ tinh ngun để xác định tỷ lệ pha lỗng: lấy 5µl tinh nguyên cho vào dung dịch NaCl 10%, lắc đều, lấy giọt cho vào phía buồng đếm hồng cầu Neu Bauer → xác định mật độ tinh trùng → tính nồng độ → lượng cần pha vào liều tinh pha lỗng Ủ ấm mơi trường đạt đến trì 34C (ủ 1h30 phút trước pha loãng tinh) Lắc đều, pha tỷ lệ 1:1, sau tăng dần lên tỷ lệ 1:10 Các thao tác q trình pha lỗng phải nhẹ nhàng (tránh gây tổn thương tinh trùng) phải đảm bảo độ phân bố tinh trùng môi trường, tránh lây nhiễm vi sinh vật gây bệnh Chỉ rót mơi trường vào tinh dịch, tuyệt đối khơng làm ngược lại Khi rót phải rót từ từ mơi trường chảy theo thành bình, khơng rót mạnh trực tiếp vào tinh dịch Ghi nhãn hiệu liều tinh gồm thông tin ngày pha lỗng, mơi trường sử dụng, nhiệt độ bảo quản Cân 90 phút nhiệt độ phòng để tinh trùng thích nghi với mơi trường hạ dần nhiệt độ, sau cho lọ tinh pha vào bảo quản tủ bảo ôn 5oC 15oC Trong thời gian bảo quản, hạn chế mở cửa tủ bảo ôn, tránh làm thay đổi nhiệt độ bảo quản ảnh hưởng đến kết thí nghiệm 2.4.3 Xác định pH tinh dịch Sử dụng giấy quỳ xác định pH tinh nguyên, giá trị pH so sánh phương pháp so màu, cần xác định tinh vận chuyển phịng thí nghiệm (trong vịng 15 phút sau thai thác tinh) Việc xác định pH tinh nguyên cần tiến hành nhanh, đảm bảo thời gian tối thiểu thời điểm pha tinh Ngô Thành Trung, Trần Thị Chi, Vũ Hải Yến, Nguyễn Tuấn Dũng, Trịnh Thị Linh Chi, Sử Thanh Long Bảng Kết đánh giá chất lượng tinh giống dê nghiên cứu Giống dê (Mean ± SD) Các tiêu chất lượng tinh Boer Saanen a 1,13 ± 0,08 a 83,2 ± 4,62 a 2,65 ± 0,12 a 2,84 ± 0,06 a 6,85 ± 0,03 a 10,37 ± 0,31 Thể tích tinh dịch (V-ml) 1,32 ± 0,08 Hoạt lực tinh trùng (A-%) 81,8 ± 5,14 Nồng độ tinh trùng (C-tỷ tinh trùng/ml) 2,67 ± 0,09 Tổng số tinh trùng tiến thẳng/lần khai thác (tỷ tinh trùng) 2,83 ± 0,06 pH tinh dịch 6,87 ± 0,04 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K-%) 12,2 ± 0,25 Alpine b 0,95 ± 0,06 a 85,5 ± 3,50 a 2,78 ± 0,04 a 2,89 ± 0,02 a 6,81 ± 0,02 b c a b b b c 14,14 ± 0,37 Ghi chú: n = 10; dòng, giá trị có chữ bên khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê với P