Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học lá cây Giác đế cuống dài (Goniothalamus gracilipes Ban) họ na (Annonaceae)

Chi Giác đế (Goniothalamus) thuộc họ Na (Annonaceae) chủ yếu phân bố ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Nhiều loài trong chi Giác đế được sử dụng trong y học cổ truyền chữa trị nhiều loại bệnh khác nhau như trị đòn ngã, gãy xương hay làm thuốc bổ, kích thích tiêu hóa.

KHOA HỌC TỰ NHIÊN BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC LÁ CÂY GIÁC ĐẾ CUỐNG DÀI (Goniothalamus gracilipes Ban) HỌ NA (ANNONACEAE) Triệu Quý Hùng, Phạm Thị Thùy Dung, Đỗ Thị Thu Huyền, Hạ Bích Liên, Nguyễn Thị Bình Yên, Lâm Hùng Sơn, Phạm Thị Thanh Huyền Trường Đại học Hùng Vương TÓM TẮT Chi Giác đế (Goniothalamus) thuộc họ Na (Annonaceae) chủ yếu phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Nhiều loài chi Giác đế sử dụng y học cổ truyền chữa trị nhiều loại bệnh khác trị địn ngã, gãy xương hay làm thuốc bổ, kích thích tiêu hóa Các nghiên cứu dược học giới cho thấy loài chi Giác đế xem nguồn thuốc chữa trị ung thư, nhiễm trùng Trong báo thông báo việc phân lập xác định cấu trúc hai hợp chất acid benzoic (1) 7,3¢,4¢-trimethylquercetin (2) từ dịch chiết EtOAc Giác đế cuống dài Từ khóa: Giác đế cuống dài; acid benzoic; 7,3¢,4¢-trimethylquercetin Mở đầu Theo tác giả Võ Văn Chi, chi Giác đế (Goniothalamus) Việt Nam có khoảng 19 lồi, nhiều lồi sử dụng y học cổ truyền để làm thuốc trị đòn ngã, gãy xương, hay làm thuốc bổ, kích thích tiêu hố [1] Cây Goniothalamus gracilipes Ban có tên Tiếng Việt Giác đế cuống dài, loại bụi nhỏ, cao 3-4m, cành cuống non có lơng màu nâu, sau nhẵn; cánh hoa dày, hình trứng, thuôn nhọn đầu; thường mọc rải rác vùng rừng núi đất, độ cao 300m [2] Kết nghiên cứu thành phần hóa học lồi Goniothalamus cho thấy nguồn giàu có hợp chất tự nhiên có nhóm chất alkaloid, acetogenin, styryl lactone, flavonoid [3] Trong báo thông báo việc phân lập hợp chất gồm acid benzoic (1) hợp chất flavonoid 7,3¢,4¢-trimethylquercetin (2) từ dịch chiết EtOAc Giác đế cuống dài Thực nghiệm phương pháp nghiên cứu 2.1 Thiết bị nguyên liệu Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR ghi máy Bruker Avance 500 MHz với TMS chất chuẩn nội Phổ khối lượng (EI-MS) đo máy HP 5989B MS máy sắc ký lỏng ghép khối phổ với đầu dò MSD (LC/MSD Agilent series 1100), sử dụng mode ESI đầu dò DAD Phổ hồng ngoại đo máy hiệu FTIR Impact – 410 Các thiết bị thuộc Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Sắc ký lớp mỏng (TLC) thực mỏng silica gel Merk 60 F254 Sắc kí cột tiến hành với silica gel cỡ hạt 40-63 μm Lá Giác đế cuống dài (Goniothalamus gracilipes Ban) cung cấp Phòng Tổng hợp hữu cơ-Viện Hóa sinh biển,Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Mẫu thực vật thu hái Văn Lang, Đồng Hỷ, Thái Nguyên Mẫu nhà thực vật học Nguyễn Hữu Hiến định tên Mẫu tiêu số VN 0759 lưu giữ Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 2.2 Q trình phân lập dịch chiết EtOAc Giác đế cuống dài Quá trình phân lập chất từ dịch chiết EtOAc Giác đế cuống dài tiến hành Phịng thí nghiệm Hóa học – Trường Đại học Hùng Vương khuôn khổ đề tài nghiên cứu khoa học cấp sở Trường Đại học Hùng Vương năm 2015 Mẫu Giác đế cuống dài khô (3,16 kg) ngâm chiết với dung môi MeOH (5 L) nhiệt độ phòng lần (mỗi lần 24 giờ) Dịch chiết sau Tạp chí Khoa học Cơng nghệ • Số (1) - 2015 39 KHOA HỌC TỰ NHIÊN cất loại dung môi áp suất thấp thu dịch chiết thô Thêm hỗn hợp MeOH nước theo tỉ lệ thể tích 1/1 vào dịch chiết thô chiết dung môi n-hexane, EtOAc; dung môi chiết lần (1 L/lần) Sau cất loại dung môi áp suất thấp thu cặn dịch chiết n-hexane (110 g), EtOAc (197 g) Giác đế cuống dài Khảo sát sắc ký mỏng (TLC) cặn dịch chiết EtOAc (kí hiệu GGLEA) với số hệ dung môi khác EtOAc/nHexane, Acetone/n-Hexane, CH2Cl2/­n-Hexane, EtOAc/ CH2Cl2 Trên sở lựa chọn hệ dung môi EtOAc/n-Hexane để tiến hành chạy cột tổng Tiến hành sắc kí cột silica gel với hệ dung môi EtOAc/n-Hexane gradient (17-50%) phần cặn EtOAc Giác đế cuống dài Hứng hỗn hợp rửa giải bình hứng riêng biệt (80 mL/bình) thu 286 bình Khảo sát TLC hỗn hợp rửa giải gộp hỗn hợp tương tự thu 13 phân đoạn kí hiệu F1-F13 Kết tinh phân đoạn F3 (6,3 g) hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane 1/2 thu 3,4 gam chất (1) dạng tinh thể hình kim màu trắng Tiếp tục kết tinh phân đoạn F8 hệ dung môi CH2Cl2/nHexane 1/1 thu 135 mg chất (2) dạng tinh thể hình kim màu vàng Acid benzoic (1): Tinh thể hình kim màu trắng, đnc 122-123 oC; Rf = 0,47 (EtOAc/n-Hexane 50/50) FT-IR (KBr) νmax (cm -1): 3060-2565, 1682, 1577, 1423, 1291, 1186, 1054, 935, 803, 714, 652, 543, 466 (-)-ESI-MS: m/z 121 [M-H]-; (+)ESI-MS: m/z 123 [M+H]+ (CTPT: C7H6O2) 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,14 (2H, dd, J=1,0; 8,0 Hz, H-2, H-6); 7,62 (1H, t, J=8,0 40 Hình Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập (1), (2) Hz, H-4); 7,49 (2H, t, J=8,0 Hz, H-3, H-5) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ (ppm): 172,3 (C=O); 133,8 (C-4); 130,2 (C-2, C-6); 129,4 (C-1); 128,5 (C-3, C-5) 7,3’,4’-Trimethylquercetin (2): Tinh thể hình kim màu vàng Rf = 0,45 (EtOAc/n-Hexane 50/50) FT-IR (KBr) νmax (cm-1): 3440; 2936; 2838; 2872; 1665; 1601; 1494; 1428; 1351; 1210; 1162; 1039; 792; 607; 494; ESI-MS: m/z 345 [M+H]+ (C18H16O7) 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 12,64 (1H, s, OH); 7,70 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2’); 7,67 (1H, dd, J=2,0; 8,0 Hz, H-6’); 7,04 (1H, d, J=8,5 Hz, H-5’); 6,42 (1H, d, J=2,0 Hz, H-8); 6,35 (1H, d, J=2,0 Hz, H-6); 6,04 (1H, s, OH); 3,98 (3H, s, OMe); 3,87 (3H, s, OMe); 3,86 (3H, s, OMe) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 178,7 (C4); 165,4 (C-7); 162,0 (C-5); 156,7 (C-9); 155,9 (C-2); 148,3 (C-4’); 146,4 (C-3’); 138,8 (C-3); 122,7 (C-1’); 122,5 (C-6’); 114,6 (C-5’); 110,9 (C-2’); 106,0 (C-10); 97,8 (C-6); 92,2 (C-8); 60,2 (OMe); 56,1 (OMe); 55,8 (OMe) Kết thảo luận Từ cặn dịch EtOAc, sau tiến hành sắc kí cột silica gel kết tinh hệ dung môi khác thu hợp chất (1), (2) Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ cộng hưởng từ Tạp chí Khoa học Cơng nghệ • Số (1) - 2015 hạt nhân, phổ khối lượng phổ hồng ngoại Hợp chất (1) phân lập dạng tinh thể hình kim màu trắng Phổ khối phun mù điện tử (-)ESIMS cho pic ion phân tử deproton hóa m/z 121 [M-H]- (+)ESIMS cho pic ion phân tử proton hóa m/z 123 [M+H]+ phù hợp với công thức phân tử C7H6O2 Trên phổ IR có đỉnh hấp thụ đặc trưng cho nhóm chức nmax 3060 cm-1 (OHacid), 1682 cm-1 (carbonyl acid) Phân tích phổ 13C-NMR DEPT (1) cho thấy phân tử có nguyên tử carbon, có nhóm carbonyl acid dC 172,3 (C=O), carbon methin vòng thơm dC 128,5 (C-3 + C-5); 130,2 (C-2 + C-6); 133,8 (C-4) carbon bậc dC 129,4 (C-1) Trên phổ 1H-NMR, xuất tín hiệu proton methin vòng thơm dH 7,49 (2H, t, J=8,0 Hz, H-3 + H-5); 7,62 (1H, t, J=8,0 Hz, H-4) 8,14 (2H, dd, J=1,0; 8,0 Hz, H-2 + H-6) Từ kiện phổ NMR so sánh với tài liệu tham khảo [4] cho phép xác định chất chất (1) acid benzoic Chất (2) phân lập dạng tinh thể hình kim màu vàng Phổ IR cho đỉnh hấp thụ đặc trưng nhóm chức nmax 3440 cm-1 (OH) 1665 cm-1 (C=O) Phổ khối phun mù điện tử (ESIMS) có pic ion phân tử proton hóa m/z 345 [M+H]+ tương ứng với cơng thức phân tử C18H16O7 Phổ 13C-NMR DEPT (2) cho thấy phân tử có 18 nguyên tử carbon có 15 carbon lai hóa sp2 carbon lai hoá sp3 KHOA HỌC TỰ NHIÊN tương ứng với nhóm carbonyl liên hợp dC 178,7, ba nhóm methoxy dC 55,8; 56,1; 60,2; năm nhóm methin vịng thơm nằm khoảng dC 92,2-122,5 carbon bậc Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu proton vịng thơm, có proton tương tác kiểu ABX dH 7,70 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2’); 7,67 (1H, dd, J=2,0; 8,0 Hz, H-6’); 7,04 (1H, d, J=8,5 Hz, H-5’) proton vị trí meta dH 6,42 (1H, d, J=2,0 Hz, H-8); 6,35 (1H, d, J=2,0 Hz, H-6) Tín hiệu OH dH 12,64 đặc trưng cho liên kết cầu hydro nội phân tử vị trí C-5 quan sát thấy phổ 1H-NMR Trên phổ 1H-NMR cịn có tín hiệu singlet nhóm methoxy dH 3,98 (3H, s, OCH3); 3,87 (3H, s, OCH3); 3,86 (3H, s, OCH3) Từ liệu phổ so sánh với tài liệu tham khảo [5], đến kết luận chất (2) 3,5-dihydroxy7,3’,4’-trimethoxyflavon hay 7,3’,4’-trimethylquercetin Kết luận Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết EtOAc Giác đế cuống dài thơng qua q trình sắc ký cột silica gel kết tinh phân lập hợp chất gồm acid benzoic (1) hợp chất flavonoid 7,3¢,4¢-trimethylquercetin (2) Cấu trúc hợp chất khẳng định thông qua kiện phổ cộng hưởng tử hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT; phổ hồng ngoại (IR) phổ khối lượng (ESI-MS) Hai hợp chất acid benzoic (1) 7,3¢,4¢-trimethylquercetin (2) phân lập từ phận công trình nghiên cứu trước tác giả [6] Nhóm nghiên cứu cần tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học Giác đế cuống dài nhằm cung cấp thơng tin đầy đủ thành phần hóa học phận khác loài thực vật Lời cảm ơn : Kết báo thực khuôn khổ Đề tài nghiên cứu cấp sở Trường Đại học Hùng Vương năm 2015 Các tác giả xin cảm ơn Trường Đại học Hùng Vương cấp kinh phí thực đề tài Phịng Tổng hợp hữu cơ-Viện Hóa sinh biển-Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam cung cấp nguyên liệu cho trình nghiên cứu Tài liệu tham khảo [1] Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, Tập 2, tr 1302-1304 [2] Nguyễn Tiến Bân (2000), Thực vật chí Việt Nam, Tập 1, Họ Na-Annonaceae Juss, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 2000, tr 256 – 257 [3] Wiart Ch (2007), “Goniothalamus species: A source of drugs for the treatment of cancers and Bacterial infection”, Evid Based Complement Alternat Med 4(3), 299-311 [4] T Getahun, P Reneela, and A Dekebo (2012), “Isolation and characterization of natural products from Helinus mystachnus (Rhamnaceae)”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, (3), 1756-1762 [5] B.N Chen, G.E Yang, J.K Li, H.J Du, Q.S Li, and Z.M Zhang (2009), “Cytotoxic constituents from Viscum coloratum”, Chemistry of Natural Compounds, 45, 547-549 [6] Triệu Quý Hùng (2014), Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính chống ung thư Giác đế đài to (Goniothalamus macrocalyx Ban) Giác đế cuống dài (Goniothalamus gracilipes Ban) họ Na (Annonaceae) Luận án Tiến sĩ Hóa học Viện Hóa học Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam SUMMARY PRELIMINARY STUDY ON CHEMICAL CONSTITUENTS OF THE LEAVES OF GONIOTHALAMUS GRACILIPES BAN (ANNONACEAE) Trieu Quy Hung, Pham Thi Thuy Dung, Do Thi Thu Huyen, Ha Bich Lien, Nguyen Thi Binh Yen, Lam Hung Son, Pham Thi Thanh Huyen Hung Vuong University Goniothalamus genus belongs to the Annonaceae and is distributed in tropical and subtropical countries Several species of this genus are used in the folk medicine for treatment of different diseases Due to their pharmaceutical interest, the Goniothalamus species are a source of drugs for the treatment of cancers and bacterial infections In this paper, we report the isolation and structural elucidation of two compounds benzoic acid (1) and 7,3¢,4¢-trimethylquercetin (2) from the ethyl acetate extracts of the leaves of this plant Keywords: Goniothalamus gracilipes Ban, benzoic acid; 7,3Â,4Â-trimethylquercetin Tp Khoa hc Cụng ngh ã S (1) - 2015 41 ... từ phận cơng trình nghiên cứu trước tác giả [6] Nhóm nghiên cứu cần tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học Giác đế cuống dài nhằm cung cấp thông tin đầy đủ thành phần hóa học phận khác lồi thực... Chemistry of Natural Compounds, 45, 547-549 [6] Triệu Quý Hùng (2014), Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính chống ung thư Giác đế đài to (Goniothalamus macrocalyx Ban) Giác đế cuống dài (Goniothalamus. .. Giác đế cuống dài (Goniothalamus gracilipes Ban) họ Na (Annonaceae) Luận án Tiến sĩ Hóa học Viện Hóa học Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam SUMMARY PRELIMINARY STUDY ON CHEMICAL CONSTITUENTS