Mục tiêu của luận án nhằm đánh giá mức độ biểu hiện microRNA-21, microRNA-122 huyết tương ở bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B. Phân tích mối liên quan giữa microRNA-21, microRNA122 huyết tương với một số chỉ số lâm sàng, cận lâm sàng và giai đoạn bệnh ở bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐẶNG CHIỀU DƯƠNG NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN MICRORNA-21, MICRORNA-122 HUYẾT TƯƠNG Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ BIỂU MÔ TẾ BÀO GAN NHIỄM VI RÚT VIÊM GAN B Chuyên ngành: Nội khoa Mã số: 9720107 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2020 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI HỌC VIỆN QN Y Cán hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Lĩnh Toàn TS Ngô Tất Trung Phản biện 1: PGS.TS Vũ Văn Khiên Phản biện 2: GS.TS Phan Văn Chi Phản biện 3: PGS.TS Bùi Vũ Huy Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường Học viện Quân y vào hồi:… giờ, ngày tháng…năm 2020 Có thể tìm luận án tại: - Thư viện Quốc gia - Thư viện Học viện Quân y ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mô tế bào gan (UTTBG) đại diện cho 90% ung thư gan nguyên phát, có tỷ lệ mắc đứng hàng thứ 6, tỷ lệ tử vong cao thứ loại ung thư phổ biến giới Tại Việt Nam, UTTBG đứng hàng đầu tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong, 80% có liên quan đến tình trạng nhiễm vi rút viêm gan B Một chiến lược sàng lọc tốt giúp chẩn đốn sớm UTTBG, thường kết hợp siêu âm bụng với AFP Bên cạnh AFP cổ điển, số dấu ấn sinh học khác nghiên cứu áp dụng AFP-L3, DCP… nhiên chưa đạt hiệu mong muốn MicroRNA (miRNA) RNA nội sinh kích thước nhỏ, khơng mã hóa protein, có vai trị then chốt điều hịa biểu gen giai đoạn sau phiên mã Nhiều nghiên cứu giới chứng minh miR-21, miR-122 huyết tương có nguồn gốc từ tế bào khối u gan có giá trị chẩn đốn, tiên lượng, đánh giá đáp ứng điều trị UTTBG Ở Việt Nam, chưa có nhiều nghiên cứu đánh giá biểu miRNA huyết tương bệnh nhân UTTBG nhiễm vi rút viêm gan B Chính vậy, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu biểu microRNA-21, microRNA-122 huyết tương bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B” với hai mục tiêu sau Đánh giá mức độ biểu microRNA-21, microRNA-122 huyết tương bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B Phân tích mối liên quan microRNA-21, microRNA122 huyết tương với số số lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B BỐ CỤC CỦA LUẬN ÁN Luận án gồm 137 trang, đó: đặt vấn đề trang, tổng quan 35 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 20 trang, kết nghiên cứu 45 trang, bàn luận 33 trang, kết luận trang, kiến nghị trang Luận án có 36 bảng, 35 biểu đồ, 10 hình 120 tài liệu tham khảo (15 tài liệu tiếng Việt, 105 tài liệu tiếng Anh) ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Đây cơng trình nghiên cứu Việt Nam tìm hiểu biểu miR-21, miR-122 huyết tương bệnh nhân UTTBG nhiễm vi rút viêm gan B Kết nghiên cứu cho thấy biểu miR21, miR-122 tăng cao huyết tương nhóm UTTBG so với nhóm VGBM NKM trường hợp UTTBG giai đoạn sớm UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml MiR-21, miR-122 có độ nhạy độ đặc hiệu cao AFP chẩn đoán UTTBG với VGBM Trong trường hợp UTTBG giai đoạn sớm, UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml, miR-21, miR-122 có độ xác cao phân biệt UTTBG với VGBM (AUC = 0,848; 0,979); (AUC = 0,806; 0,915), UTTBG với NKM (AUC = 0,894; 0,993); (AUC = 0,935; 0,991) tương ứng Khi phối hợp miR-21, miR-122 với AFP làm tăng hiệu chẩn đoán UTTBG với nhóm VGBM (AUC = 0,868; 0,914) Chưa thấy mối liên quan miR-21, miR-122 huyết tương với tuổi, giới, số triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh BN UTTBG nhiễm HBV Có mối tương quan yếu miR21, miR-122 huyết tương với tải lượng HBV Chương TỔNG QUAN 1.1 MicroRNA MicroRNA (miRNA) RNA nội sinh kích thước nhỏ khơng mã hóa protein, có vai trị quan trọng điều hòa biểu gen MiRNA ngăn chặn dịch mã cách thúc đẩy suy thoái mRNA mục tiêu Các miRNA nhận thấy có tham gia vào trình sửa đổi histone methyl hóa promoter gen MiRNA phát vào năm 1993 Victor Ambors cộng nghiên cứu phát triển giun tròn C elegans, đến năm 2014 có 2588 miRNA người định danh MiRNA đóng vai trị quan trọng q trình sinh lý bệnh lý tế bào, điều hịa tăng sinh, biệt hóa, hay q trình chết tế bào theo chương trình (apoptosis) Trong năm gần đây, mối liên hệ miRNA bệnh gan mạn tính nhận thấy, đặc biệt miR21, miR-122 bệnh lý UTTBG Với tính chất điểm đặc hiệu u, tính lưu thơng tính bền vững dịch thể, miR-21, miR122 nhận thấy ổn định huyết tương lưu trữ nhiệt độ phịng hay nhiệt độ âm Chính vậy, sở khoa học ứng dụng định lượng miR-21, miR-122 huyết tương với khuynh hướng dấu sinh học hữu ích cho chẩn đốn tiên lượng UTTBG 1.2 MicroRNA-21 MicroRNA-21 (miR-21) đoạn RNA ngắn gồm 22 nucleotide, gen miR-21 người nằm nhiễm sắc thể 17 vị trí 17q23.1, gen mã hóa Transmembrane protein 49 (TMEM49) cịn gọi protein màng không bào 49 Phân tử miR-21 trưởng thành cấu tạo 22 nucleotide, miRNA mô tả liên quan đến ung thư Nồng độ cao miR- 21 tìm thấy huyết tương bệnh nhân có khối u ác tính, điều làm cho trở thành dấu sinh học tiềm bệnh lý ung thư MiR-21 có liên quan đến số bệnh ung thư ung thư thực quản, ung thư dày, ung thư đại trực tràng phổ biến UTTBG Các nghiên cứu gần cho thấy miR-21 có biểu tăng cao huyết tương bệnh nhân UTTBG có độ nhạy, độ đặc hiệu cao AFP chẩn đoán UTTBG với bệnh gan mạn tính khơng ung thư Hơn nữa, miR-21 cịn chứng minh có liên quan đến tăng sinh mạch, xâm lấn theo dõi đáp ứng điều trị 1.3 MicroRNA-122 MicroRNA-122 (miR-122) ban đầu xác định mô gan chuột chiếm 72% miRNA phân tích gan Ở người, miR-122 mã hóa gen nhiễm sắc thể 18 vị trí 18q21.31 MiR-122 quy định Rev - Erba alpha, tham gia vào biểu sinh học gen thông qua điều chỉnh biểu nhiều phân tử mRNA mục tiêu MiR-122 thấy có độ đặc hiệu cao cho mô gan Trong trường hợp UTTBG liên quan đến HBV, miR122 ức chế nhân lên vi rút cách nhắm mục tiêu NDRG3 (Nmyc downstream-regulated gene 3), thành viên họ gen Nmyc Nghiên cứu cho thấy hai miR-122 NDRG3 điều trị khả thi cho UTTBG liên quan HBV MiR-122 đại diện cho dấu ấn sinh học chẩn đốn có tiềm phối hợp điều trị UTTBG liên quan HBV Biểu miR-122 phát giảm mạnh mơ khối u gan, lại có biểu tăng cao huyết tương bệnh nhân UTTBG Điều miR-122 chuyển từ mô khối u vào lưu thông máu Nhiều nghiên cứu giới miR-122 có độ nhạy độ đặc hiệu cao chẩn đốn UTTBG, miR-122 cịn thấy có giá trị theo dõi đáp ứng với số phương pháp điều trị UTTBG Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Nhóm bệnh: Gồm 101 bệnh nhân UTTBG có nhiễm HBV điều trị nội trú Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 (TƯQĐ 108) Nhóm chứng: Bao gồm 46 bệnh nhân viêm gan B mạn (VGBM) điều trị nội trú Bệnh viện TƯQĐ 108 103 người khỏe mạnh (NKM) Thời gian nghiên cứu: từ tháng năm 2014 đến tháng năm 2017 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 2.1.1.1 Nhóm bệnh - Bệnh nhân UTTBG chẩn đoán xác định theo tiêu chuẩn Bộ Y tế Việt Nam năm 2012: + Có chứng giải phẫu bệnh + Hình ảnh điển hình chụp CLVT có tiêm thuốc cản quang CHT có thuốc cản từ + AFP > 400 ng/ml + Hình ảnh điển hình UTTBG chụp CLVT ổ bụng có cản quang CHT có thuốc cản từ + AFP tăng cao bình thường (chưa đến 400ng/ml) + nhiễm vi rút viêm gan B, C - Các bệnh nhân UTTBG có xét nghiệm HBsAg dương tính 2.1.1.2 Nhóm chứng * Bệnh nhân viêm gan B mạn: Chúng lựa chọn bệnh nhân viêm gan B mạn chẩn đoán theo hướng dẫn Bộ Y tế Việt Nam năm 2014 - HBsAg (+) > tháng HBsAg (+) Anti HBc IgG (+) - AST, ALT tăng đợt liên tục tháng - Có chứng tổn thương mô bệnh học tiến triển xác định sinh thiết gan * Người khỏe mạnh: tình nguyện viên hiến máu nhân đạo chưa có tiền sử bệnh lý, có xét nghiệm âm tính với HBV, HCV, HIV (bao gồm test nhanh kỹ thuật NAT: nucleic acid test) 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ - Bệnh nhân UTTBG có xét nghiệm Anti-HCV dương tính - Bệnh nhân UTTBG điều trị: phẫu thuật, nút mạch, đốt nhiệt sóng cao tần, tiêm cồn tuyệt đối hay điều trị với sorafenib - Bệnh nhân có bệnh lý phối hợp: Suy tim nặng, suy hô hấp, xuất huyết tiêu hóa bệnh lý ung thư khác - Bệnh nhân có rối loạn đơng máu nặng: TC < 50 G/L; PT < 50% - Những người không đồng ý tham gia nghiên cứu 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang, có so sánh đối chứng 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu Cỡ mẫu thực theo phương pháp chọn mẫu thuận tiện 2.2.3 Phương tiện nghiên cứu - Máy PCR 9700 máy Realtime PCR 7500 hãng Applied Biosystems Mỹ, đặt khoa Sinh học phân tử, Bệnh viện TƯQĐ 108 2.2.4 Định lượng miR-21, miR-122 Các miR-21, miR-122 định lượng tương đối so với nội chuẩn phương pháp Realtime PCR Lấy 5ml máu tĩnh mạch vào buổi sáng bệnh nhân chưa ăn cho vào ống có chất kháng đơng Ethylenediaminetetra acid (EDTA), mang đến Khoa sinh học phân tử, Bệnh viện TƯQĐ 108 Ly tâm 3000 vòng/phút phút, tách lấy huyết tương để tủ lạnh âm 800c Khi lấy đủ mẫu tiến hành định lượng miR-21, miR-122 2.2.5 Các tiêu nghiên cứu - Tuổi, giới, triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng, đặc điểm u gan, giai đoạn bệnh UTTBG theo BCLC - Biểu miR-21, miR-122 huyết tương nhóm đối tượng nghiên cứu 2.2.6 Phân tích xử lý số liệu - Số liệu xử lý phương pháp thống kê y học, sử dụng phần mềm SPSS 21.0 - Tính tỉ lệ phần trăm, giá trị trung bình, độ lệch chuẩn, trung vị So sánh tìm khác biệt quan sát, xác định giá trị chẩn đoán dấu ấn sinh học đường cong ROC, tính diện tích đường cong (AUC), độ nhạy, độ đặc hiệu Phân tích mối liên quan sử dụng hồi quy logistic, tính “OR” Phân tích tương quan, tính hệ số tương quan “r” 2.2.7 Đạo đức nghiên cứu Nghiên cứu tuân thủ quy định đạo đức nghiên cứu y học Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Nghiên cứu thực Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 từ tháng năm 2014 đến tháng năm 2017 Bao gồm 101 bệnh nhân UTTBG, 46 bệnh nhân VGBM, 103 người khỏe mạnh đủ tiêu chuẩn lựa chọn 3.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu 3.1.1 Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm đối tượng nghiên cứu - Tuổi trung bình BN UTTBG (55,6 ± 12,34), bệnh nhân tuổi 23 tuổi, bệnh nhân lớn 92 tuổi Nam chiếm chủ yếu (93,1%), nữ (6,9%), tỷ lệ nam/nữ ~ 13/1 - Triệu chứng BN UTTBG thường gặp mệt mỏi (63,4%), chán ăn (61,4%), đau tức hạ sườn phải (61,4%), sút cân (47,5%) Triệu chứng toàn thân BN UTTBG hay gặp mạch (14,85%), bàn tay son (11,88%), vàng da củng mạc (10,89%), triệu chứng gặp sốt, phù, xuất huyết da có tỷ lệ ngang (1,98%) Triệu chứng thực thể thường gặp BN UTTBG gan to (21,78%), triệu chứng gặp lách to (6,93%), tuần hoàn bàng hệ cửa chủ (3,96%), khơng bệnh nhân có cổ trướng 11 miR-122 cao độ nhạy độ đặc hiệu miR-21 chẩn đốn nhóm UTTBG với VGBM Biểu đồ 3.7 Đường cong ROC AFP, miR-21, miR-122 nhóm bệnh nhân UTTBG VGBM Nhận xét: Điện tích đường cong miR-21 lớn điện tích đường cong AFP chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Diện tích đường cong miR-122 lớn diện tích đường cong AFP miR-21 có ý nghĩa với (p < 0,05) - Khi phối hợp miR-21 với AFP cho điện tích đường cong tăng lên có ý nghĩa so với miR-21 AFP đơn độc (p < 0,05) - Khi phối hợp miR-122 AFP cho điện tích đường cong tăng cao so với AFP (p < 0,05), chưa tăng có ý nghĩa so với miR-122 (p > 0,05) - Diện tích đường cong miR-21 phối hợp với AFP nhỏ diện tích đường cong miR-122 phối hợp với AFP (p < 0,05) Khi phối hợp miR-21 miR-122 với AFP cho điện tích đường cong tăng lên so với miR-21 phối hợp với AFP (p < 0,05) 12 Biểu đồ 3.12 Đường cong ROC miR-21, miR-122 nhóm bệnh nhân UTTBG NKM Nhận xét: Trong chẩn đốn nhóm bệnh nhân UTTBG NKM, miR-21 có độ nhạy (81,2%), độ đặc hiệu (94,2%); miR-122 có độ nhạy (94,1%), độ đặc hiệu (99,0%) 3.2.2 Biểu miR-21, miR-122 bệnh nhân UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml - Biểu miR-21, miR-122 huyết tương nhóm bệnh nhân UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml tăng cao so với nhóm bệnh nhân VGBM NKM (p < 0,001) Bảng 3.23 Độ nhạy, độ đặc hiệu miR-21, miR-122 chẩn đốn UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml VGBM UTTBG (n = 36) VGBM (n = 46) miR-21 (2-∆Ct) miR-122 (2 -∆Ct ) Điểm Độ nhạy Độ đặc hiệu cắt (%) (%) 0,806 3,62 75,0 78,3 0,915 55,33 80,6 89,1 AUC 13 Nhận xét: Trong chẩn đốn nhóm bệnh nhân UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml VGBM: miR-21 có độ nhạy (75%), độ đặc hiệu (78,3%); miR-122 có độ nhạy (80,6%), độ đặc hiệu (89,1%) Bảng 3.25 Độ nhạy, độ đặc hiệu miR-21, miR-122 chẩn đốn UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml NKM UTTBG (n = 36) NKM (n = 103) miR-21 (2-∆Ct) -∆Ct miR-122 (2 ) Điểm Độ nhạy Độ đặc hiệu cắt (%) (%) 0,935 2,17 83,3 98,1 0,991 8,3 94,4 99,0 AUC Nhận xét: Trong chẩn đoán nhóm bệnh nhân UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml NKM: miR-21 có độ nhạy (83,3%) độ đặc hiệu (98,1%); miR-122 có độ nhạy (94,4%), độ đặc hiệu (99%) 3.2.3 Biểu miR-21, miR-122 bệnh nhân UTTBG giai đoạn sớm - Biểu miR-21, miR-122 tăng cao huyết tương nhóm UTTBG giai đoạn sớm (BCLC: A) so với nhóm VGBM NKM (p < 0,001) Bảng 3.27 Diện tích đường cong AFP, miR-21, miR-122 chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm VGBM Chỉ số Diện tích đường cong (AUC) p AFP (1) 0,617 p1,2 < 0,05 miR-21 (2) 0,848 p1,3 < 0,05 miR-122 (3) 0,979 p2,3 < 0,05 Nhận xét: miR-21, miR-122 có giá trị cao chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm VGBM Diện tích đường cong 14 miR-21, miR-122 lớn diện tích đường cong AFP chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm VGBM (p < 0,05) Bảng 3.28 Diện tích đường cong miR-21, miR-122 chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm NKM Diện tích đường Chỉ số p cong (AUC) miR-21 0,894 miR-122 0,993 p < 0,05 Nhận xét: miR-21, miR-122 có giá trị cao chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm NKM Diện tích đường cong miR122 lớn diện tích đường cong miR-21 chẩn đoán UTTBG giai đoạn sớm NKM (p < 0,05) 3.3 Mối liên quan miR-21, miR-122 với số số lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh bệnh nhân UTTBG Bảng 3.29 Tương quan miR-21, miR-122 với tuổi Tuổi UTTBG miR-21 miR-122 r p r p 0,157 > 0,05 0,163 > 0,05 Nhận xét: Chưa thấy mối tương quan miR-21, miR-122 huyết tương với tuổi nhóm bệnh nhân UTTBG (|𝑟| < 0,3; p > 0,05) 15 Bảng 3.30 Liên quan miR-21, miR-122 với giới miR-21 Giới UTTBG OR p 0,383 0,266 miR-122 (95% CI) 0,071 2,075 OR p 1,391 0,676 (95% CI) 0,295 6,559 Nhận xét: Chưa thấy mối liên quan miR-21, miR-122 huyết tương với giới nhóm bệnh nhân UTTBG (p > 0,05) Bảng 3.33 Tương quan miR-21 với số số xét nghiệm bệnh nhân UTTBG miR-21 Chỉ số Tiểu cầu (G/L) Prothrombin (%) AST (U/L) ALT (U/L) Blirubin TP (µmol/l) Protein TP (g/l) Albumin (g/l) AFP (ng/ml) HBV-DNA{Log(bản sao/ml)} Hệ số tương quan (r) - 0,139 0,102 - 0,037 0,012 - 0,107 - 0,128 0,047 - 0,008 0,502 p > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Nhận xét: Chưa thấy tương quan miR-21 với số lượng tiểu cầu, tỷ lệ prothrombin, hoạt độ enzym gan AST, ALT, nồng độ bilirubin TP, protein TP, Abumin AFP bệnh nhân UTTBG (|𝑟| < 0,3; p > 0,05) Có mối tương quan yếu miR-21 huyết tương với tải lượng HBV (r = 0,502; p < 0,05) 16 Bảng 3.34 Tương quan miR-122 với số số xét nghiệm bệnh nhân UTTBG miR-122 Chỉ số Tiểu cầu (G/L) Prothrombin (%) AST (U/L) ALT (U/L) Blirubin TP (µmol/l) Protein TP (g/l) Albumin (g/l) AFP (ng/ml) HBV-DNA {Log(bản sao/ml)} Hệ số tương quan (r) - 0,051 0,186 - 0,097 - 0,037 - 0,131 - 0,076 0,159 0,004 0,369 p > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Nhận xét: Chưa thấy tương quan miR-122 với số lượng tiểu cầu, tỷ lệ prothrombin, hoạt độ enzym gan AST, ALT, nồng độ bilirubin TP, protein TP, Abumin AFP bệnh nhân UTTBG (|𝑟| < 0,3; p > 0,05) Có mối tương quan yếu miR-122 huyết tương với tải lượng HBV nhóm bệnh nhân UTTBG (r = 0,369; p < 0,05) Bảng 3.35 Liên quan miR-21 với chức gan theo phân loại Child - Pugh, đặc điểm khối u gan giai đoạn bệnh theo BCLC Chỉ số Child - Pugh Số lượng khối u Kích thước khối u Huyết khối TMC Độ biệt hóa tế bào BCLC OR 1,316 0,868 0,883 1,148 1,710 1,092 miR-21 p 0,665 0,733 0,777 0,771 0,141 0,756 (95% CI) 0,379 - 4,565 0,384 - 1,961 0,373 - 2,092 0,453 - 2,913 0,837 - 3,492 0,627 - 1,902 17 Nhận xét: Chưa thấy mối liên quan miR-21 huyết tương với chức gan theo phân loại Child – Pugh, số lượng khối u, kích thước khối u, tình trạng huyết khối tĩnh mạch cửa, độ biệt hóa tế bào giai đoạn bệnh UTTBG theo phân loại BCLC (p > 0,05) Bảng 3.36 Liên quan miR-122 với chức gan theo phân loại Child - Pugh, đặc điểm khối u gan giai đoạn bệnh theo BCLC Chỉ số Child - Pugh Số lượng khối u Kích thước khối u Huyết khối TMC Độ biệt hóa tế bào BCLC OR 1,316 1,031 0,489 0,731 1,219 0,730 miR-122 p 0,665 0,941 0,112 0,511 0,575 0,272 (95% CI) 0,379 - 4,565 0,457 - 2,328 0,202 - 1,182 0,286 - 1,864 0,609 - 2,441 0,416 - 1,280 Nhận xét: Chưa thấy mối liên quan miR-122 huyết tương với chức gan theo phân loại Child – Pugh, số lượng khối u, kích thước khối u, tình trạng huyết khối tĩnh mạch cửa, mức độ biệt hóa tế bào giai đoạn bệnh UTTBG theo phân loại BCLC (p > 0,05) 18 Chương BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu UTTBG xuất lứa tuổi, nhiên có khác tỷ lệ mắc nhóm tuổi khác Trong nghiên cứu chúng tôi, khoảng tuổi mắc UTTBG rộng, BN nhỏ tuổi 23 tuổi, BN lớn 92 tuổi, tuổi trung bình (55,6 ± 12,34), giới nam chiếm chủ yếu (93,1%), nữ (6,9%), tỷ lệ nam/nữ ~13/1 UTTBG thường tiến triển thầm lặng, có biểu triệu chứng giai đoạn muộn, khối u có kích thước lớn suy giảm chức gan kèm theo Kết nghiên cứu cho thấy triệu chứng thường gặp mệt mỏi (63,4%), chán ăn (61,4%), đau tức hạ sườn phải (61,4%), sút cân (47,5%) Triệu chứng thực thể nhiều gan to (21,78%) Nồng độ AFP trung bình nhóm bệnh nhân UTTBG (339,29 ± 574,02) ng/ml, 35,6% BN UTTBG có AFP huyết mức ≤ 20ng/ml Trong nghiên cứu chúng tơi, phần lớn trường hợp có u gan kích thước lớn, kích thước trung bình khối u lớn (7,78 ± 3,41)cm Bệnh nhân có khối u gan kích thước 5cm chiếm (28,71%) Bệnh nhân UTTBG có khối u (64,36%), u gan đa ổ gặp 35,64% 2-3 khối (13,86%), khối (21,78%) Kết tương tự kết nghiên cứu số tác giả ngồi nước, đa phần bệnh nhân UTTBG có khối u gan Xâm lấn mạch máu dấu hiệu thể giai đoạn muộn UTTBG, thể tình trạng lan rộng phá hủy tổ chức ung thư vào mạch máu lân cận tĩnh mạch cửa, tĩnh mạch gan tĩnh mạch chủ dưới… Hình thái xâm lấn mạch máu thể thơng qua hình ảnh huyết khối tĩnh mạch, tỷ lệ huyết khối tĩnh mạch cửa nghiên cứu 19 chúng tơi chiếm 22,77% Độ biệt hóa tế bào yếu tố quan trọng khơng thể thiếu nói đến loại ung thư Trong UTTBG, độ biệt hóa xem yếu tố tiên lượng quan trọng Trong nghiên cứu chúng tôi, bệnh nhân UTTBG có độ biệt hóa tế bào mức độ vừa chiếm đa số (45,55%), biệt hóa cao (24,75%), biệt hóa thấp (9,90%) Khơng xác định độ biệt hóa (19,80%), trường hợp UTTBG loại tế bào sáng BN chọc hút tế bào u gan kim nhỏ Tỷ lệ mức độ biệt hóa tế bào nhóm UTTBG chúng tơi tương đương với nghiên cứu tác giả Thái Doãn Kỳ, Nguyễn Tiến Thịnh Lê Văn Trường Trong nghiên cứu sử dụng hệ thống phân loại BCLC để đánh giá giai đoạn bệnh bệnh nhân UTTBG Kết nghiên cứu cho thấy BN UTTBG giai đoạn trung gian BCLC B chiếm 49,51%, giai đoạn tiến triển BCLC C (34,65%), giai đoạn sớm BCLC A (15,84%), khơng có BN UTTBG giai đoạn muộn BCLC D 4.2 Biểu miR-21, miR-122 bệnh nhân UTTBG Trong kết nghiên cứu chúng tơi, miR-21, miR-122 có biểu tăng cao huyết tương nhóm UTTBG so với nhóm bệnh nhân VGBM người khỏe mạnh với p < 0,001 Biểu cao miR-21 mô ung thư tế bào gan báo cáo từ nhiều năm trước Nghiên cứu Trường Đại Học Ohio Mỹ năm 2007 tác giả Meng F cộng báo cáo biểu tăng cao miR-21 mô ung thư tế bào gan so với mô gan lành người Nghiên cứu tác giả Tomimaru Y cộng (2012) Nhật Bản cho thấy biểu miR-21 tăng cao huyết tương bệnh nhân UTTBG so với nhóm viêm gan mạn người khỏe mạnh với p < 0,0001 Nghiên cứu Trung Quốc báo cáo tháng năm 2017, tác giả Guo X cộng 20 nghiên cứu biểu miR-21 huyết 453 đối tượng bao gồm 175 bệnh nhân UTTBG, 64 bệnh nhân viêm gan B mạn, 78 bệnh nhân xơ gan 136 người khỏe mạnh tình nguyện Kết cho thấy miR21 huyết nhóm UTTBG cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm viêm gan B mạn, xơ gan người khỏe mạnh (p < 0,0001) Báo cáo từ năm 2006 tác giả Kutay H đến từ Đại học Y bang Ohio Mỹ, nghiên cứu thay đổi của miRNA mô gan chuột gây UTTBG thực nghiệm Kết cho thấy miR-122 biểu phong phú mô gan lành, miR-122 giảm nặng mơ gan ung thư Trong giảm biểu mô gan ung thư miR-122 lại nhận thấy tăng lên huyết tương bệnh nhân UTTBG so với người không UTTBG Nghiên cứu 152 đối tượng 70 bệnh nhân UTTBG nhiễm HBV, 48 bệnh nhân viêm gan B mạn khơng có ung thư 34 người khỏe tình nguyện tác giả Qi P cộng (2011) Kết cho thấy biểu miR-122 huyết tương tăng cao có ý nghĩa thống kê nhóm bệnh nhân UTTBG so với nhóm người khỏe mạnh (p < 0,001) viêm gan B mạn (p < 0,05) Tương tự nghiên cứu chúng tôi, nghiên cứu bệnh nhân UTTBG Ấn Độ năm 2019, tác giả Bharali, D cộng thấy biểu miR-21, miR-122 tăng cao có ý nghĩa thống kê nhóm bệnh nhân UTTBG so với nhóm xơ gan, viêm gan mạn người khỏe mạnh với p < 0,05 Khảo sát giá trị miR-21, miR-122 phân biệt chẩn đoán UTTBG với VGBM NKM Kết nghiên cứu chúng tơi cho thấy miR-21, miR-122 có độ nhạy độ đặc hiệu cao Trong đó, diện tích đường cong, độ nhạy độ đặc hiệu miR-122 cao điện tích đường cong, độ nhạy độ đặc hiệu miR-21 chẩn 21 đoán bệnh nhân UTTBG với bệnh nhân VGBM NKM Khơng có vậy, so sánh giá trị chẩn đoán miR-21, miR-122 với AFP qua diện tích đường cong ROC cho thấy diện tích đường cong miR-21, miR-122 lớn điện tích đường cong AFP Kết tương tự kết số tác giả giới thấy miR-21, miR-122 có độ nhạy độ đặc hiệu cao AFP chẩn đốn UTTBG với nhóm đối chứng Khi phối hợp miR-21 với AFP cho điện tích đường cong tăng lên có ý nghĩa so với miR-21 AFP đơn độc p < 0,05 Hay phối hợp miR-122 với AFP cho điện tích đường cong tăng cao so với AFP đơn độc p < 0,05 Kết cho thấy phối hợp miR-21, miR-122 với AFP làm tăng hiệu chẩn đoán AFP bổ trợ cho AFP chẩn đoán UTTBG Hơn nữa, kết nghiên cứu cho thấy biểu miR-21, miR-122 tăng cao huyết tương nhóm bệnh nhân UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml so với nhóm bệnh nhân VGBM người khỏe mạnh p < 0,001 Trong chẩn đốn nhóm UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml với VGBM, diện tích đường cong, độ nhạy, độ đặc hiệu miR-21, miR-122 mức (0,806; 75,0%; 78,3%) (0,915; 80,6%; 89,1%) tương ứng Tương tự, nhóm UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml với nhóm người khỏe mạnh, diện tích đường cong, độ nhạy, độ đặc hiệu miR-21, miR-122 (0,935; 83,3%; 98,1%) (0,991; 94,4%; 99,0%) tương ứng Trong hai trường hợp này, miR-122 có độ nhạy độ đặc hiệu cao so với miR-21 (p < 0,05) Chúng tơi tiến hành khảo sát giá trị chẩn đốn miR-21, miR-122 nhóm bệnh nhân UTTBG giai đoạn sớm (BCLC A) với nhóm chứng bao gồm VGBM NKM Kết cho thấy, miR-21, miR-122 có hiệu 22 cao chẩn đoán UTTBG với VGBM (AUC = 0,848; 0,979), UTTBG với NKM (AUC = 0,894; 0,993) Đặc biệt miR-21, miR-122 có giá trị cao AFP chẩn đốn nhóm UTTBG giai đoạn sớm với nhóm VGBM (p < 0,05) 4.3 Liên quan miR-21, miR-122 với số số lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh bệnh nhân UTTBG Nhằm mục tiêu xem xét yếu tố tuổi giới, tình trạng hủy hoại tế bào gan, mức độ suy gan có tác động đến biểu miR-21, miR-122, khảo sát mối liên quan miR-21, miR-122 với tuổi, giới nhóm bệnh nhân UTTBG Chúng tơi chưa thấy mối liên quan miR-21, miR-122 với tuổi, giới bệnh nhân UTTBG (p > 0,05) Trong nghiên cứu chúng tơi, tình trạng hủy hoại tế bào gan hay biểu suy gan thông qua số sinh hóa, huyết học chưa ghi nhận liên quan đến biểu miR-21, miR-122 huyết tương bệnh nhân UTTBG Có mối tương quan yếu miR-21, miR-122 huyết tương với tải lượng HBV (r = 0,502; r = 0,369; p < 0,05) Tương tự kết nghiên cứu chúng tôi, Waidnamn cộng thấy có mối tương quan yếu miR-122 với tải lượng HBV Trong số nghiên cứu khác Đức Nhật Bản lại khơng nhận thấy có mối liên quan miR-21, miR-122 với tải lượng HBV, điều chứng tỏ mối liên quan tải lượng HBV với miR21, miR-122 chưa thực rõ thống nhất, cần nhiều nghiên cứu với quy mô lớn để làm sáng tỏ vấn đề Kết nghiên cứu chưa thấy mối liên quan biểu miR-21, miR-122 huyết tương với số lượng, kích thước khối u gan, độ biệt hóa tế bào, mức độ bệnh theo phân loại BCLC bệnh nhân UTTBG (p > 0,05) 23 KẾT LUẬN Qua nghiên cứu biểu miR-21, miR-122 huyết tương 101 bệnh nhân UTTBG nhiễm HBV, 46 bệnh nhân viêm gan B mạn điều trị Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 103 người khỏe mạnh tình nguyện hiến máu, rút số kết luận sau Biểu miR-21, miR-122 huyết tương bệnh nhân UTTBG nhiễm HBV - Biểu miR-21, miR-122 tăng cao huyết tương bệnh nhân UTTBG so với bệnh nhân VGBM NKM trường hợp UTTBG giai đoạn sớm UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml (p < 0,001) - MiR-21, miR-122 có hiệu cao AFP chẩn đốn nhóm UTTBG với nhóm VGBM (AUC = 0,763; 0,907), UTTBG với NKM (AUC = 0,920; 0,989) - Trong trường hợp UTTBG giai đoạn sớm, UTTBG có AFP ≤ 20ng/ml, miR-21, miR-122 có độ xác cao phân biệt UTTBG với VGBM (AUC = 0,848; 0,979); (AUC = 0,806; 0,915), UTTBG với NKM (AUC = 0,894; 0,993); (AUC = 0,935; 0,991) tương ứng - Khi phối hợp miR-21, miR-122 với AFP làm tăng hiệu chẩn đốn UTTBG với nhóm VGBM (AUC = 0,868; 0,914) 24 Mối liên quan miR-21, miR-122 huyết tương với số số lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh bệnh nhân UTTBG nhiễm HBV - Chưa thấy mối liên quan miR-21, miR-122 huyết tương với tuổi, giới, số triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn bệnh bệnh nhân UTTBG nhiễm HBV - Có mối tương quan yếu miR-21, miR-122 huyết tương với tải lượng HBV (r = 0,502; r = 0,369; p < 0,05) KIẾN NGHỊ Cần tiếp tục nghiên cứu để xác định rõ giá trị hỗ trợ chẩn đoán UTTBG hai dấu ấn sinh học miR-21, miR-122 huyết tương DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN Đặng Chiều Dương, Phan Quốc Hoàn, Lê Hữu Song, Nguyễn Lĩnh Tồn, Ngơ Tất Trung (2018) Biểu miR-21, miR-122 huyết tương bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm vi rút viêm gan B Tạp chí Y Dược lâm sàng 108, 13 (Số đặc biệt): 53-56 Dang Chieu Duong, Phan Quoc Hoan, Le Huu Song, Nguyen Linh Toan, Ngo Tat Trung (2018) Expression of miR-122 plasma as a biomarker for hepatocellular carcinoma Journal of Military Pharmaco-Medicine, 43, (9): 95-100 Ngo Tat Trung, Dang Chieu Duong, Hoang Van Tong, Tran Thi Thu Hien, Phan Quoc Hoan, Mai Hong Bang, Mai Thanh Binh, Thai Doan Ky, Nguyen Lam Tung, Nguyen Tien Thinh, Vu Viet Sang, Le Thi Phuong Thao, C Thomas Bock, Thirumalaisamy P, Velavan, Christian G Meyer, Le Huu Song, Nguyen Linh Toan (2018) Optimisation of quantitative miRNA panels to consolidate the diagnostic surveillance of HBV-related hepatocellular carcinoma PloS One, 13 (4): e0196081 ... microRNA-122 huyết tương b? ??nh nhân ung thư biểu mô tế b? ?o gan nhiễm vi rút vi? ?m gan B? ?? với hai mục tiêu sau Đánh giá mức độ biểu microRNA-21, microRNA-122 huyết tương b? ??nh nhân ung thư biểu mô. .. tế b? ?o gan nhiễm vi rút vi? ?m gan B Phân tích mối liên quan microRNA-21, microRNA122 huyết tương với số số lâm sàng, cận lâm sàng giai đoạn b? ??nh b? ??nh nhân ung thư biểu mô tế b? ?o gan nhiễm vi rút. .. lượng, đánh giá đáp ứng điều trị UTTBG Ở Vi? ??t Nam, chưa có nhiều nghiên cứu đánh giá biểu miRNA huyết tương b? ??nh nhân UTTBG nhiễm vi rút vi? ?m gan B Chính v? ?y, tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu biểu microRNA-21,