phát hiện đột biến gen glucose 6 phosphat dehydrogenase trong hồng cầu người ở một số dân tộc phía bắc việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGHIÊM THỊ THANH NGA PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GEN GLUCOSE-6-PHOSPHAT DEHYDROGENASE TRONG HỒNG CẦU NGƢỜI Ở MỘT SỐ DÂN TỘC PHÍA BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGHIÊM THỊ THANH NGA PHÁT HIỆN CÁC ĐỘT BIẾN GEN GLUCOSE-6-PHOSPHAT DEHYDROGENASE TRONG HỒNG CẦU NGƢỜI Ở MỘT SỐ DÂN TỘC PHÍA BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8.72.02.08 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Thị Tuyên TS Đào Thị Mai Anh HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Tun – Trưởng phịng cơng nghệ sinh học - Viện Hàn Lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam TS Đào Thị Mai Anh - giảng viên Đại Học Dược Hà Nội Hai cô người hướng dẫn tận tình, dìu dắt, dạy bảo tơi từ bắt đầu làm đề tài hướng dẫn để tơi hồn thành luận văn Cô không trang bị cho kiến thức kinh nghiệm chun mơn q báu, mà cịn ln tạo điều kiện để tơi học hỏi khơng ngừng, phấn đấu hồn thiện thân Tơi bày tỏ lòng biết ơn tới TS.BS Quách Xuân Hinh - Bệnh Viện Quân Y Trung ương 108 Bác sĩ người giúp đỡ tận tình cho tơi việc tổ chức tạo điều kiện cho việc lấy máu số dân tộc Sự giúp đỡ quý báu hỗ trợ cho tơi hồn thành nội dung nghiên cứu đề tài Tôi xin cảm ơn cán phịng cơng nghệ sinh học Enzym – Viện Cơng Nghệ Sinh Học - Viện Hàn Lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam, người tạo điều kiện hỗ trợ trang thiết bị kỹ thuật trinh thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô môn Hóa sinh trường Đại học Dược Hà Nội, người giúp đỡ tơi q trình học tập làm đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, người ln động viên tơi vượt qua khó khăn suốt chặng đường Hà Nôi, ngày tháng năm 2020 Học viên Nghiêm Thị Thanh Nga MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Glucose-6-phosphat dehydrogenase 1.1.1 Danh pháp 1.1.2 Cấu trúc 1.1.3 Cơ chế hoạt động 1.1.4 Vai trò G6PD hồng cầu người 1.1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến G6PD 1.2 Bệnh thiếu hụt G6PD 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Dịch tễ 1.2.3 Cơ sở di truyền học 10 1.2.4 Cơ chế bệnh sinh 12 1.2.5 Biểu lâm sàng 12 1.2.6 Phân loại 14 1.2.7 Điều trị phòng bệnh 16 1.3 Các phương pháp xác định đột biến gen G6PD 16 1.4 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 19 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 20 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 21 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 21 2.1.3 Cỡ mẫu 21 2.1.4 Hóa chất 22 2.1.5 Thiết bị dụng cụ 24 2.2 Nội dung nghiên cứu phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 24 2.2.2 Các phương pháp sử dụng nghiên cứu đề tài 26 2.3 Đạo đức nghiên cứu 33 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Kết sàng lọc tình trạng thiếu hụt G6PD số dân tộc phía Bắc Việt Nam 35 3.1.1 Kết sàng lọc thiếu hụt G6PD kĩ thuật tạo vòng Formazan bán định lượng 35 3.1.2 Mức độ thiếu hụt enzym G6PD số dân tộc xác định phương pháp đo hoạt độ enzym 36 3.2 Phát đột biến gen trường hợp thiếu hụt G6PD kĩ thuật PCR- MPTP 37 3.2.1 PCR – MPTP tìm đột biến gen G6PD 37 3.2.2 Kết đọc trình tự tìm đột biến gen G6PD 43 3.2.3 Phát đột biến gen G6PD Việt Nam 46 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 48 4.1 Về tình trạng thiếu hụt G6PD số dân tộc phía bắc Việt Nam 48 4.2 Về phát đột biến gen trường hợp thiếu hụt G6PD kĩ thuật PCR- MPTP 50 KẾT LUẬN 54 KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ADN deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic CI Chlorfrom Isoamyl Chlorfrom Isoamyl dNTP Deoxyribonucleotid triphosphate Deoxyribonucleotid triphosphat EDTA Ethylen diamin tetraacetic acid Axit etylenediaminetetraacetic G6P Glucose – – phosphate Glucose – – phosphat G6PD Glucose - - phosphate dehydrogenase Glucose–6–phosphat dehydrogenase GSH Glutathion Glutathion dạng khử GSSG Oxidized glutathione Glutathion dạng oxi hóa GPx Glutathion peroxidase Glutathion peroxidase PCRMPTP PCR using Multiplex Tandem forward PCR đa mồi xuôi song song Primer NADP+ Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NADP + dạng oxy hóa NADPH Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate dihydro NADPH dạng khử PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại gen RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic mRNA messenger RNA ARN thông tin WHO World Health Orrganization Tổ chức Y tế giới EDTA Ethylen diamin tetraacetic acid Axit Ethylen diamin tetraacetic TE Tris EDTA Tris EDTA TBE Tris borate EDTA Tris borat EDTA TAE Tris acetate EDTA Tris acetat EDTA DANH MỤC BẢNG BIỂU STT Tên bảng Trang Bảng 1.1: Một số thuốc cần tránh cho bệnh nhân thiếu hụt G6PD Bảng 1.2: Một số dạng đột biến phổ biến 11 Bảng 1.3: Phân loại thiếu hụt G6PD 15 Bảng 2.1: Hóa chất sử dụng nghiên cứu đề tài 22 Bảng 2.2: Bảng dung dịch đệm nghiên cứu đề tài 23 Bảng 2.3: Các thiết bị dụng cụ nghiên cứu 24 Bảng 2.4: Trình tự mồi exon 2, exon 11-12 gen G6PD 31 Bảng 2.5: Trình tự mồi exon 2, exon 11-12 gen G6PD d ng cho phản ứng PCR-MPTP 32 Bảng 3.1: Tỷ lệ thiếu hụt G6PD dân tộc nghiên cứu 34 10 Bảng 3.2: Mức độ thiếu hụt G6PD dân tộc nghiên cứu 35 11 Bảng 3.3: Hoạt độ G6PD đối tượng có kết âm tính dương tính [++], [+++] 36 12 Bảng 3.4: Các dạng đột biến gen G6PD exon 2, 9, 11, 12 nghiên cứu 41 13 Bảng 3.5: Các dạng đột biến gen G6PD số dân tộc nghiên cứu 41 DANH MỤC HÌNH VẼ STT Tên hình Trang Hình 1.1: Sự chuyển dạng cấu trúc G6PD Hình 1.2: Cấu trúc G6PD dạng dimer Hình 1.3: Phản ứng Glucose-6-phosphate Dehydrogenase Hình 1.4: Cơ chế phản ứng G6PD 5 Hình 1.5: Vai trị G6PD hồng cầu 6 Hình 1.6: Bản đồ phân bố bệnh thiếu hụt G6PD giới Hình 1.7: Vị trí nhiễm sắc thể X phân bố đột biến tg trình tự mã hóa gen G6PD 10 Hình 2.1: Nội dung nghiên cứu 25 Hình 2.2: Cơ chế phản ứng MTT tạo thành vịng Formazan 26 10 Hình 2.3: Nguyên tắc phản ứng Formazan 26 11 Hình 2.4: Sản phẩm vòng Formazan khay 40 mẫu 28 12 Hình 3.1: Ảnh sản phẩm điện di ADN PCR xác định exon bệnh nhân thiếu hụt G6PD 38 13 14 15 Hình 3.2: Kết sản phẩm điện di PCR- MPTP xác định đột biến Gaohe exon mẫu bệnh nhân thiếuhụt G6PD Hình 3.3: Sản phẩm điện di ADN PCR exon mẫu bệnh nhân thiếu hụt G6PD Hình 3.4: Kết sản phẩm điện di PCR- MPTP xác định đột biến Viangchan exon mẫu bệnh nhân thiếu hụt G6PD 38 39 39 16 17 18 Hình 3.5: Sản phẩm điện di ADN PCR exon 11-12 bệnh nhân thiếu hụt G6PD Hình 3.6: Sản phẩm điện di PCR-MPTP xác định đột biến Silent exon 12 (A) exon 11 (B) mẫu bệnh nhân thiếu hụt G6PD Hình 3.7: Kết đọc trình tự exon người thiếu hụt G6PD 40 41 43 19 Hình 3.8 : Kết đọc trình tự exon người thiếu hụt G6PD khơng có đột biến 44 20 Hình 3.9: Kết đọc trình tự exon người thiếu hụt G6PD có đột biến Viangchan 45 21 Hình 3.10: Kết đọc trình tự exon 11-12 người thiếu hụt G6PD có đột biến Silent 46 22 Hình 3.11: Kết đọc trình tự exon 11-12 mẫu người thiếu hụt G6PD có đột biến Namoru 47 ĐẶT VẤN ĐỀ Glucose - - phosphat dehydrogenase enzym oxy hóa khử, đóng vai trị then chốt q trình chuyển hóa glucose theo đường hexose monophosphat hồng cầu Con đường tạo lượng không đáng kể lại đảm bảo hai chức quan trọng cung cấp ribose cho trình sinh tổng hợp acid nucleic tạo NADPH, chất khử vô quan trọng Trong hồng cầu người, chất tham gia vào trình chống lại tác nhân oxy hóa, loại bỏ H2O2, giúp bảo vệ màng hồng cầu bền vững, bảo vệ cấu trúc hemoglobin, cấu trúc enzym có hồng cầu để trì sống cho tế bào hồng cầu Chính vậy, thể thiếu hụt enzym này, hồng cầu bị phá hủy gặp tác nhân oxy hóa Thiếu hụt G6PD bệnh lý enzym hồng cầu hay gặp người đặc biệt hay gặp nhóm dân tộc sống vùng sốt rét lưu hành [1,6,8] Trên giới có 400 triệu người mắc bệnh thiếu hụt G6PD [65], chiếm 1/10 dân số giới [31] Cơ sở di truyền học bệnh thiếu hụt G6PD đột biến xảy gen mã hóa G6PD Gen nằm nhánh dài, v ng 2, băng nhiễm sắc thể giới tính X (Xq28), khơng có alen tương ứng nhiễm sắc thể Y nên gặp nhiều nam nữ Với phát triển công nghệ sinh học, trình tự exon hay tồn trình tự gen G6PD xác định, đồng thời phương pháp PCR, MPTP – PCR, giải trình tự…các đột biến gen G6PD liên tục tìm Năm 2016 giới có 217 đột biến gen G6PD xác nhận có 31 đột biến đột biến [28] Trong số 54 nhóm dân tộc Việt nam, tình trạng thiếu G6PD tương đối phổ biến dân tộc điều tra [1,6,7] Nghiên cứu G6PD mức độ phân tử bắt đầu cịn chưa nhiều chưa hồn chỉnh [34,46] Việc bổ sung liệu tần suất thiếu hụt KẾT LUẬN Sau q trình nghiên cứu chúng tơi rút kết luận: - Đã khảo sát tình trạng thiếu hụt G6PD thuốc số dân tộc phía Bắc Việt Nam 1800 đối tượng cho thấy tỉ lệ thiếu hụt G6PD 7,5% Tỉ lệ thiếu hụt G6PD dân tộc Mường, Kinh, Hà Nhì, Thái phía Bắc Việt Nam có khác biệt: tỷ lệ thiếu hụt G6PD người Mường cao chiếm 16,8%, người Hà Nhì 7%, người Thái 5% người Kinh chiếm tỉ lệ thiếu hụt 2,95% - Trong nhóm dân tộc Kinh, Mường, Hà Nhì, Thái tìm thấy biến thể Viangchan, Gaohe, Silent với tỉ lệ Viangchan chiếm 29%, silent chiếm 17% Gaohe chiếm 8,8% Phát đột biến gen G6PD lần đầu tìm thấy Việt Nam: đột biến Namoru exon 11 có biến đổi nucleotid TC, dẫn đến biến đổi acid amin TyrHis 54 KIẾN NGHỊ Tiếp tục tìm kiếm đột biến Namoru dân tộc Việt Nam Sử dụng kĩ thuật PCR- MPTP tìm kiếm phát đột biến Việt Nam 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Trần Thị Chính, et al (2003), “Phát thiếu hụt G6PD phân tích dạng đột biến số trường hợp thuộc dân tộc Kinh, Mường, Raclei Tày Hà Nội, Hịa Bình, Khánh Hịa”, Tạp chí nghiên cứu y học, T23(3): p 99-104 Ngô Trường Giang, Quách Xuân Hinh, Trần Thị Chính (2008) “Triển khai phương pháp để sàng lọc tìm điểm đột biến bệnh nhân thiếu hụt G6PD Viện Quân Y 108”, Hội nghị khoa học Hóa sinh Y Dược 08/2008, tr 17-21 Quách Xuân Hinh (2002), Nghiên cứu thiếu hụt G6PD hồng cầu người tìm dạng đột biến gen liên quan, Luận văn thạc sĩ Y Học, Học Viên Quân Y Nguyễn Nghiêm Luật (2001), chuyến hóa Glucid, Hóa sinh, NXB y học, tr 273-318 Phạm Thị Lý (1998), “nghiên cứu so sánh thông số động học trọng lượng phân tử G6PD hồng cầu người, thỏ, chuột”, luận án tiến sĩ y học, Đại học Y HN Đoàn Hạnh Nhân(1999), “Điều tra thiếu men G6PD hồng cầu số dân tộc sống vùng sốt rét lưu hành miền Bắc Việt Nam”, Báo cáo khoa học Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, NXB khoa học kỹ thuật: p 203-209 Nguyễn Thị Ngọc Phượng cs (2002), “Tầm soát thiếu hụt G6PD trẻ sơ sinh bệnh viện Từ Dũ từ 15/3/2002 đến 15/4/2002”, Hội nghị sàng lọc sơ sinh toàn quốc 2002 Tạ Thị Tĩnh cs (1999) “ Thiếu men G6PD hồng cầu đái huyết cầu tố huyện Kim Bơi Hịa Bình”, Báo cáo khoa học hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, NXB Khoa học Kĩ Thuật, tr 210-215 Tạ Thành Văn (2010), “PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử”, Nhà xuất y học TIẾNG ANH 10 Aday, A L and Cornelius, L J,(2006) “Book of designing and conducting survey” 11 Allahverdiyev A.M, et al.,(2012), “Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase Deficiency and Malaria: A Method to Detect Primaquine-Induced Hemolysis In Vitro”, Genetics and Molecular Biology In Tech; Rijeka, Croatia 12 Au S.W., et al.,(1999),“Solution of the structure of tetrameric human glucose 6-phosphate dehydrogenase by molecular replacement Acta Crystallogr” D Biol Crystallogr; 55:826–834 13 Asssumpcio Pujades et al, (1999) “Evalutation of the blue formazan spot test for screening G6PD deficiency”, internation journal ò hematology, vol 69, pp 234-236 14 Bautista.J.M(1995),“A New Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase Variant, G6PD Orissa (44 Ala→Gly), is the Major Polymorphic Variant in Tribal Populations in India”, Am J Hum Genet.; 57(6): 1335–1341 15 Betke, K., Brewer, G J, Kirkman, H N., Luzzatto, L., Motulsky, A G., Ramot, B., Siniscalco, M (1979) “Standardization of procedure for the study of glucose-6-phosphate dehydrogenase: report of a WHO Scientific Group.” World Health Org Techn Rep Ser 366, 1–53 16 Beutler E (1989),“Glucose-6-phosphate dehydrogenase: new perspectives.” Blood Vol.73(No 6):1397-1401 17 Beutler E (1990),“The genetics of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency.” Semin Hematol Vol.27(No 2):137-164 18 Beutler E (1991) “Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency.” N Engl J Med Vol.324(No 3):169-174 19 Beutler E (1992),“The molecular biology of G6PD variants and other red cell enzyme defects.” Annu Rev Med Vol.43(No.:47-59 20 Beutler E (1994), “G6PD deficiency.” Blood Vol.84(No 11):3613-3636 21 Beutler E, Yeh M & Fairbanks VF (1962) “The normal human female as a mosaic of Xchromosome activity: studies using the gene for G-6-PD- 22 23 24 25 26 27 deficiency as a marker.” Proceedings of the national academy of sciences of the united states of america Vol.48(No 1):9 Beutler E (1996),“G6PD: Population Genetics and Clinical Manifestations”, Blood, No 10, p 45-52 Benmansour I., Moradkhani K., Moumni I., Wajcman H., Hafsia R., Ghanem A., Préhu C.(2013),“ Two new class III G6PD variants (G6PD Tunis (c.920A > C: p.307Gln > Pro) and G6PD Nefza (c.968T > C: p.323 Leu > Pro)) and overview of the spectrum of mutations in Tunisia.” Blood Cells Mol Dis.;50:110–114 Chen E.Y., (1991),“Sequence of human glucose-6-phosphate dehydrogenase cloned in plasmids and a yeast artificial chromosome.” Genomics Chiu et,al (1993),“Molecular Characterization of G6PD Deficiency in Patients of Chinese Descent and Identification of New Base Substitutions in Human G6PD Gen”, Blood, Vol 81, No 8, p 2150-2154 Frank J.E.(2005),“Diagnosis and management of G6PD deficiency.” Am Fam Phys.;7:1277–1282 M Ganczakowski ,et al (1995),“Multiple glucose 6-phosphate dehydrogenase-deficient variants correlate with malaria endemicity in the Vanuatu archipelago (southwestern Pacific).”Am J Hum Genet.; 56(1): 294–30 28 Gómez-Manzo S., Marcial-Quino J., Vanoye-Carlo A (2016), “Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase: Update and Analysis of New Mutations around the World.” Int J Mol Sci, 17(12): 2069 29 Greene L.S.(1993),“G6PD deficiency as protection against falciparum malaria: An epidemiologic critique of population and experimental studies.” Am J Phys Anthropol ;36:153–178 30 Hirono A and S Miwa (1993),“ Human G6PD: Structure and function of narmal and variant enzyme” Haematologia 25(2): p 85-97 31 Hirono A, et al, (1998) “An improved single- step screening method for G6PD defiency.”; Japanese journal tropical medical hyg, Vol 26 No1, pp1-4 32 Hirono.A, Hisaichi Fujii (1995), “Identification of Two Novel Deletion Mutations in G6PD Gen Causing Hemolytic Anemia”, Blood, Vol 85, No 4, p 1118-1121 33 Hisaichi Fujii et al, (1984),“ A new simple screening method for G6PD deficeincy”, ACTA Haematology, JNP, Vol 47, pp185-188 34 Hue N.T., Charlieu J.P., Chau T.T., Day N., Farrar J.J., Hien T.T., Dunstan S.J.(2009),“Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) mutations and haemoglobinuria syndrome in the Vietnamese population” Malar J ;8:152 35 Howes R.E., et al.(2012), “G6PD deficiency prevalence and estimates of affected populations in malaria endemic countries: A geostatistical model-based map.”, PLoS Med ;9:1001339 36 Iwai K., Hirono A., Matsuoka H (2001),“Distribution of glucose-6phosphate dehydrogenase mutations in Southeast Asia” Hum Genet, 108(6), 445–449 37 Janney S.K., Joist J.J., Fitch C.D.(1986),“ Release of ferriheme in G6PDdeficient erythrocytes: Possible cause of hemolysis and resistance to Malaria.” Blood.;67:331–333 38 Jalloh A., Jalloh M., Gamanga I., Baion D., Sahr F., Gbakima A., Matsuoka H.(2008) ,“G6PD deficiency assessment in Freetown, Sierra Leone, reveals further insight into the molecular heterogeneity of G6PD” A J Hum Genet.;53:675–679 39 Laman Amin-Zaki, et al., (1972),“Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency among ethnic groups in Iraq” Bull World Health Organ.; 47(1): 1–5 40 Luzzatto L.,(1989), “ G6PD deficency”, the metabolic basis of inherited disease, pp 2237-2254 41 Luzzatto L.,(1985),“Glucose-6-phosphate dehydrogenase.” Adv Hum Genet;14:217–386 42 Luzzatto L.,(2006),“Glucose 6-phosphate dehydrogenase deficiency: From genotype to phenotype” Haematologica ;91:1303–1306 43 Luzzatto L, Mehta, A., Vulliamy, T (2001) “Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency.” The Metabolic and molecular bases of inherited disease Vol 3, McGraw-Hill Co, New York, p.^pp 4517-4553 44 Lopez R., Cooperman J.M.(1971), “Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency and hyperbilirubinaemia in the newborn.” Am J Dis Child.;122:66–70 45 Martini G.(1986), “Structural analysis of the X-linked gene encoding human glucose 6-phosphate dehydrogenase.” EMBO J;5:1849–1855 46 Matsuoka H., Thi Vinh Thuan D., van Thien H (2007) “Seven different glucose-6-phosphate dehydrogenase variants including a new variant distributed in Lam Dong Province in southern Vietnam.” Acta Med Okayama, 61, 213–9 47 Minucci B., Giardina C., Zuppi E (2009) “Glucose-6-phosphate dehydrogenase laboratory assay: How, when, and why?”IUBMB Life;61:27–34 48 Minucci A.,et,al (2012) “Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) mutations database: Review of the “old” and update of the new mutations” Blood Cells Mol Dis ;48:154–165 49 S.A Miller, D.D Dykes et al (1988) “ A simple salting out produce for extracting DNA from human nucleated cells”, Nucleic acids Res., 16, p.1215 50 McDade J., Abramova T., Mortier N., Howard T., Ware R.E.(2008) “A novel G6PD mutation leading to chronic hemolytic anemia.” Pediatr Blood Cancer ;51:816–819 51 Moiz B., Nasir A., Moatter T., Naqvi Z.A., Khurshid M.(2011) “Molecular characterization of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in Pakistani population.” Int J Lab Hematol.;33:570–578 52 Moura Neto J.P., Dourado M.V., Reis M.G., Gonỗalves M.S.(2008) A novel c.197T A variant among Brazilian neonates with glucose-6phosphate dehydrogenase deficiency.” Genet Mol Biol.;31:33–35 53 Nantakomol R.P., Attakorn P., Day N.P.J., White N.J., Imwong M.(2013) “Evaluation of the phenotypic test and genetic analysis in the detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency Duangdao.” Malar J.;12 54 Nkhoma E.T.,Beutler E.(2009),“The global prevalence of glucose-6phosphate dehydrogenase deficiency: A systematic review and metaanalysis Blood Cells Mol Dis.”;42:267–278 55 Pai G.S.,et al.(1980)“Localization of loci for hypoxanthine phosphoribosyltransferase and glucose-6-phosphate dehydrogenase 202 and biochemical evidence of nonrandom X chromosome expression from studies of a human X-autosome translocation” Proc Natl Acad Sci USA 77:2810–2813 56 Persico M.G., Luzzatto L., D’Urso M.(1986), “Isolation of human glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) cDNA clones: Primary structure of the protein and unusual 5′ non-coding region.” Nucleic Acids Res.;14:2511–2522 57 Rigano P., Fabiano C., Pojero F., Niceta M., Pecoraro A., Maggio A., Sammarco P.(2010) “Glucose 6-phosphate dehydrogenase Palermo R257M: A novel variant associated with chronic non-spherocytic haemolytic anaemia.” Br J Haematol.;149:296–299 58 Ruwende C., Hill A.(1998) “Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency and malaria.” J Mol Med;76:581–588 59 Szabo P., Purrello M., Rocchi M., Archidiacono N., Alhadeff B., Filippi G., Toniolo D., Martini G., Luzzatto L., Siniscalco M (1984) “Cytological mapping of the human glucose-6-phosphate dehydrogenase gene distal to the fragile-X site suggests a high rate of meiotic recombination across this site.” Proc Natl Acad Sci USA.;81:7855– 7859 60 Taku Shirakawa et el (1997), “ a comprehensive method to scan for point mutation of the G6PD deficiency gene”, Japanese journal human genetics, vol 42, pp417-423 61 I S Tantula et al (1999), “Field Trials of Rapid Test fot G6PD Deficiency in Combination with a Rapid Diagnosis of Malaria”, Tropical Medicine and International Health, Vol 4, No 4, p 245-250 62 Wrigley N.G., Heather J.V (1972), “Bonsignore A., de Flora A Human erythrocyte glucose 6-phosphate dehydrogenase: Electron microscope studies on structure and interconversion of tetramers, dimers and monomers” J Mol Biol;68:483–499 63 Yoshida.A et al (1971), “Human G6PD Deficiency Variants”, Bull Org mond.Santt., Vol 45, p 243-253 64 Vulliamy T.J., et al (1998) “ Diverse point mutations in the human glucose-6-phosphate dehydrogenase gene cause enzyme deficiency and mild or severe hemolytic anemia.” Proc Natl Acad Sci USA.;85:5171– 5175 Website: 65 https://www.brendaenzymes.org/enzyme.php?ecno=1.1.1.49#SYNONYM (truy cập ngày 30/4/2020) 66 https://www.tuscany-diet.net/2018/09/01/pentose-phosphatepathway/#Catalytic-mechanism-of-glucose-6-phosphate-dehydrogenase (truy cập 03/5/2020) 67 Richardson SR, O'Malley GF Glucose Phosphate Dehydrogenase (G6PD) Deficiency [Updated 2019 May 2] In: StatPearls [Internet] Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2020 Jan- Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK470315 68 https://www.researchgate.net/figure/MTT-reduction-in-formazan-Thereaction-is-catalysed-by-succinate-dehydrogenase_fig4_322298866 ( truy cập 27/6/2020) Bộ kít: 69 Cat.No PD 410; Lot No.114716 70 Cat.No PD 2618, Lot.No 416PD PHỤ LỤC DANH SÁCH CÁC ĐỐI TƯỢNG THIẾU HỤT G6PD ĐƯỢC XÉT NGHIỆM BẰNG KĨ THUẬT PCR-MPTP PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN STT Họ tên Nơi cung cấp mẫu Dân tộc Thiếu hụt Hà Nhì 3+ nt Thái 2+ Lương Văn Nh nt Thái 3+ Lèng Văn L nt Thái 2+ Lị Thị L nt Thái 3+ Lý Cơng M nt Hà Nhì 3+ Khống B Bệnh viện 108 Thái 3+ Lò Thị N nt Thái 3+ Th ng Thị X nt Thái 3+ 10 Cầu Thị V nt Thái 3+ 11 Lò Văn Th nt Thái 3+ 12 Poong Thị H nt Thái 3+ 13 Khồng Thị Q nt Thái 3+ 14 Khống Văn B nt Thái 3+ 15 Phong Thị D nt Thái 3+ 16 Lành Văn V nt Thái 3+ 17 Lèng Văn Th nt Thái 3+ 18 Th ng Thị I nt Thái 2+ 19 Lành Thị Ng nt Thái 3+ 20 Tào Văn Ch nt Thái 3+ 21 Do Xuan B Bênh viện 108 Kinh 3+ 22 Nguyen Thi H Bộ môn sinh lý bệnh- - Lý Hồ S Hoàng Thị T Bênh viện 108 Đại học Y Hà Nội 2+ 23 Ngan Hoang Ng Nt - 3+ 24 Nguyen Viet A Nt - 2+ 25 Truong Van Q Nt - 2+ 26 Nguyen Quang H Nt - 2+ 27 Nhu Nhat A Nt - 2+ 28 Hoang Thi L Nt - 2+ 29 Vu Thi Kim Y Nt - 2+ 30 Le Trong H Nt - 3+ 31 Rơ Mạnh Đ Bênh viện 108 Mường 3+ 32 Lường văn C nt - 2+ 33 Lành thị X nt - 3+ 34 Lường Thị B nt - 3+ PHỤ LỤC CÁC HÌNH ẢNH ĐIỆN DI TRONG NGHIÊN CỨU Exon Exon Exon 11-12 ... THANH NGA PHÁT HIỆN CÁC ĐỘT BIẾN GEN GLUCOSE- 6- PHOSPHAT DEHYDROGENASE TRONG HỒNG CẦU NGƢỜI Ở MỘT SỐ DÂN TỘC PHÍA BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8.72.02.08... dân tộc phía Bắc Việt Nam? ?? với mục tiêu: Khảo sát tình trạng thiếu hụt G6PD hồng cầu người thuộc số dân tộc phía Bắc Việt Nam Phát đột biến gen exon 2, 9, 11, 12 cá thể người thiếu hụt G6PD Chƣơng... giới có 217 đột biến gen G6PD xác nhận có 31 đột biến đột biến [28] Trong số 54 nhóm dân tộc Việt nam, tình trạng thiếu G6PD tương đối phổ biến dân tộc điều tra [1 ,6, 7] Nghiên cứu G6PD mức độ