Nghiên cứu xác định tần số elen, tần số kiểu gen của gen mã hóa αs1 casein có liên quan đến chất lượng sữa ở một số giống dê nuôi tại việt nam

Bộ giáo dục đào tạo Viện khoa học công nghệ Việt Nam VIệN SINH THáI Và TàI NGUYÊN SINH VậT o0o Nguyễn Hùng Thanh Nghiên cứu xác định tÇn sè alen, tÇn sè kiĨu gen cđa gen m· hóa S1-casein có liên quan đến chất l-ợng sữa số giống dê nuôi Việt Nam Chuyên ngành: Sinh häc thùc nghiÖm M· sè: 60 42 30 LuËn ¸n th¹c sü sinh häc Ng-êi h-íng dÉn khoa häc TS Ngun Anh Hà Nội, 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 LI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Việt Nam Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh LuËn án thạc sỹ khoá 12 Lời cảm ơn cú thể hồn thành luận văn này, trƣớc tiên, tơi muốn bày tỏ lỏng biết ơn sâu sắc tới Chủ nhiệm đề tài TS Nguyễn Anh - Phòng Sinh học tế bào sinh sản Viện Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam định hƣớng nghiên cứu, trực tiếp hƣớng dẫn bảo tận tình cho tơi suốt thời gian nghiên cứu Tơi mong muốn đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo cán Viện Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị sở vật chất giúp tơi hồn thành nghiên cứu Tơi muốn đƣợc bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới cán Phòng Sinh học tế bào sinh sản - Viện Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện để thực đề tài Tôi xin đƣợc cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện Phịng Miễn dịch học - Viện Cơng nghệ Sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Trung tâm Nghiên cứu Dê Thỏ Sơn Tây - Ba Vì - Hà Nội Tơi xin đƣợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Phòng Đào tạo Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ suốt thời gian học tập viện Qua đây, muốn đƣợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy cô giáo tham gia giảng dạy lớp cao học K12 - Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ trang bị kiến thức hữu ích cho suốt thời gian học tập viện Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ kho¸ 12 Đề tài luận văn đƣợc thực với hỗ trợ kinh phí từ đề tài “Nghiên cứu xác định tần số alen, tần số kiểu gen gen mã hóa ỏS1-casein có liên quan đến chất lượng sữa số giống dê nuôi Việt Nam” Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, ngƣời ln cổ vũ, động viên tơi vƣợt qua khó khăn q trình học tập nghiên cứu Hµ Néi, ngày 01 tháng 01 năm 2011 Học viên Nguyễn Hùng Thanh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn Ngun Hïng Thanh Ln ¸n thạc sỹ khoá 12 M U Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÌNH HÌNH CHĂN NI DÊ 1.1.1 Tình hình chăn nuôi dê giới 1.1.2 Tình hình chăn ni dê Việt Nam 1.2 ĐẶC ĐIỂM SỮA DÊ 1.2.1 Thành phần protein 1.2.1.1 Whey protein 1.2.1.2 Casein 1.2.1.3 Các protein hàm lƣợng thấp 1.2.2 So sánh sữa dê với loại sữa khác 1.2.3 Giá trị dinh dƣỡng sữa dê 12 1.3 PHƢƠNG PHÁP TRUYỀN THỐNG CHỌN GIỐNG DÊ SỮA Ở VIỆT NAM 13 1.3.1 Chọn giống dê sữa hƣớng sữa 13 1.3.1.1 Ngoại hình 13 1.3.1.2 Khả tiết sữa 14 1.3.1.3 Phẩm chất chăn nuôi 14 1.3.1.4 Dòng giống 14 1.3.2 Chọn dê đực giống hƣớng sữa 14 1.3.2.1 Ngoại hình 14 1.3.2.2 Dòng giống 15 1.3.2.3 Phẩm chất chăn nuôi 15 1.3.2.4 Khả thụ tinh 15 1.4 PHƢƠNG PHÁP CHỌN GIỐNG DÊ SỮA DỰA VÀO CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, HÓA SINH 15 1.5 CÁC PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG CHỌN GIỐNG VẬT NUÔI 17 1.5.1 Microsatellite 17 1.5.2 RAPD 18 1.5.3 RFLP 18 1.5.4 AFLP 19 1.6 CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH GEN CSN1S1 Ở DÊ 20 1.6.1 Phân tích protein 20 1.6.1.1 Điện di điểm đẳng điện (IEF) 20 1.6.1.2 Điện di mao quản (CZE) 21 1.6.1.3 Sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo (RP-HPLC) 23 1.6.2 Phân tích ADN 24 1.6.2.1 AS-PCR 24 1.6.2.2 PCR-RFLP 25 1.6.2.3 Realtime-PCR 26 1.7 NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH DI TRUYỀN GEN CSN1S1 CỦA DÊ 26 1.7.1 Đặc điểm di truyền gen CSN1S1 dê 27 1.7.2 Ứng dụng nghiên cứu đa hình di truyền gen CSN1S1của dê 29 Chƣơng 34 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 NGUYấN LIU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 34 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 34 2.1.1.1 Dê Alpine 34 2.1.1.2 Dê Saanen 36 2.1.2 Mẫu nghiên cứu 37 2.1.3 Các hóa chất kit 38 2.1.4 Dụng cụ trang thiết bị 38 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.2.1 Xác định kiểu gen cá thể 39 2.2.1.1 Tách chiết ADN tổng số 39 2.2.1.2 Thiết kế mồi thực phản ứng AS - PCR phân biệt alen E alen non-E 40 2.2.1.3 Thực phản ứng PCR-RFLP phân biệt alen non-E 43 2.2.1.4 Kỹ thuật phát sản phẩm phản ứng PCR 45 2.2.2 Định lƣợng số thành phần sữa dê 47 2.2.3 Thống kê sinh học 48 Chƣơng 49 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 49 3.1 XÁC ĐỊNH KIỂU GEN CSN1S1 CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU 49 3.1.1 Tách chiết ADN tổng số từ 64 mẫu máu dê sữa 49 3.1.2 Kết AS-PCR với cặp mồi (CEX19F-CEX19R -CEX19L) 50 3.1.3 Kết PCR-RFLP với cặp mồi (XR-XF) 51 3.1.4 Tần số kiểu gen 52 3.1.4.1 Tần số kiểu gen dê Alpine 52 3.1.4.2 Tần số kiểu gen dê Saanen 55 3.1.4 Tần số alen 59 3.1.4.1 Tần số alen dê Alpine 59 3.1.4.2 Tần số alen dê Saanen 60 3.2 CÁC CHỈ TIÊU HÓA SINH CỦA SỮA DÊ 62 3.2.1 Phân tích tiêu hóa sinh sữa dê 62 3.2.1.1 Hàm lƣợng protein sữa 62 3.2.1.2 Hàm lƣợng casein sữa 64 3.2.1.3 Hàm lƣợng lipid sữa 65 3.2.1.4 Hàm lƣợng lactose sữa 66 3.2.2 Phân tích tiêu hóa sinh sữa kiểu gen CSN1S1 68 3.2.3 Phân tích tiêu hóa sinh sữa hai giống dê nghiên cứu 72 KẾT LUẬN 74 KIẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT AE Elution buffer AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism PCR AL Lysis Buffer AS-PCR Allele specific polymerase chain reaction (PCR đặc hiệu alen) ATL Tissue Lysis Buffer AW Wash buffer CZE Capillary zone electrophoresis (Điện di mao quản) EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Gen CSN1S1 Gen mã hóa alpha-S1-casein IEF Isoelectric focusing (Điện di điểm đẳng điện) KCal KiloCalo KJ KiloJun LINE Long interspersed nuclear elements (Các yếu tố rãi rác có kích thƣớc dài) RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA RE Restriction Enzyme (Enzyme cắt giới hạn) RFLP Restriction length fragment polymorphism RP-HPLC Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatographic (Sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo) Rpm Revolutions per minute (Vòng/phút) SDS-PAGE Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis Taq Thermus aquaticus Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 DANH MỤC BẢNG Chƣơng Bảng 1.1 So sánh thành phần sữa dê, sữa bò, sữa ngƣời 11 Bảng 1.2 Thành phần amino acid loại sữa 13 Bảng 1.3 Giá trị phần trăm diện tích pic so với phân đoạn casein tổng số kiểu gen đƣợc xác định trƣớc 25 Bảng 1.4 Giá trị phần trăm diện tích pic so với phân đoạn casein tổng số kiểu gen đƣợc xác định trƣớc 25 Bảng 1.5 Thuộc tính sữa kiểu gen trình chế biến mát 34 Bảng 1.6 Chỉ số cảm quan mát 34 Chƣơng Bảng 3.1 Kiểu gen cá thể dê nghiên cứu 54 Bảng 3.2 Thành phần kiểu gen nhóm cá thể dê Alpine nghiên cứu 56 Bảng 3.3 Kiểu gen cá thể dê Alpine nghiên cứu 57 Bảng 3.4 Thành phần kiểu gen nhóm cá thể dê Saanen nghiên cứu 58 Bảng 3.5 Tần số alen tần số kiểu gen nhóm cá thể dê Alpine 60 Bảng 3.6 Tần số alen tần số kiểu gen nhóm cá thể dê Saanen 61 Bảng 3.7 Hàm lƣợng protein sữa kiểu gen nghiên cứu 63 Bảng 3.8 Hàm lƣợng casein sữa kiểu gen nghiên cứu 65 Bảng 3.9 Hàm lƣợng lipid sữa kiểu gen nghiên cứu 66 Bảng 3.10 Hàm lƣợng lactose sữa kiểu gen nghiên cứu 67 Bảng 3.11 Các tiêu chất lƣợng sữa kiểu gen dê Alpine 69 Bảng 3.12 Các tiêu chất lƣợng sữa kiểu gen dê Saanen 70 Bảng 3.13 Chỉ tiêu chất lƣợng sữa hai giống dê sữa Alpine Saanen Italia 71 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 Bng 3.14 Cỏc tiêu chất lƣợng sữa có ảnh hƣởng tới sản xuất mát 72 DANH MỤC HÌNH Chƣơng Hình 1.1 Điện di đồ SDS-PAGE casein sữa Hình 1.2 Cấu tạo micelle casein 10 Hình 1.3 Điện di điểm đẳng điện với gradient pH 2,5-5,0 4,0-6,5 mẫu sữa 23 Hình 1.4 Hình ảnh điện di mao quản mẫu sữa 24 Hình 1.5 Sắc ký đồ RP-HPLC mẫu casein đƣợc phân tích trƣớc IEF PCR 26 Hình 1.6 Đồ thị tín hiệu huỳnh quang nhiệt độ phản ứng Realtime-PCR 28 Hình 1.7 Sơ đồ cấu trúc gen CSN1S1 dê bò, gen CSN1S1 dài 17,5 kb, bao gồm 19 exon 29 Hình 1.8 Sơ đồ trình đột biến tạo thành alen CSN1S1 34 Chƣơng Hình 2.1 Dê Alpine 36 Hình 2.2 Bản đồ phân bố dê Alpine 37 Hình 2.3 Dê Saanen 38 Hình 2.4 Bản đồ phân bố dê Saanen 39 Hình 2.5 Trình tự phân đoạn gen CSN1S1 vị trí primer 43 Hình 2.6 Kiểu mẫu alen E CSN1S1 locut thực ASPCR 44 Hình 2.7 Phân tích kiểu gen đối tƣợng quan sát phƣơng pháp XmnI PCR-RFLP 46 Hình 2.8 Các bƣớc đúc gel agarose 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 Hỡnh 2.9 Sơ đồ lắp đặt máy chạy điện di ADN 49 Chƣơng Hình 3.1 Điện di đồ ADN tổng số tách từ mẫu máu dê 51 Hình 3.2 Điện di đồ sản phẩm PCR cá thể có kiểu gen A*A*, A*E EE 52 Hình 3.3 Điện di đồ cá thể có alen non-E 53 Hình 3.4 Điện di đồ sản phẩm PCR cắt enzyme XmnI 54 Hình 3.5 Tần số kiểu gen nhóm cá thể dê Alpine 56 Hình 3.6 Tần số kiểu gen nhóm cá thể dê Alpine 59 Hình 3.7 Tần số alen nhóm cá thể dê Alpine nghiên cứu 61 Hình 3.8 Tần số alen nhóm cá thể dê Saanen nghiên cứu 62 Hình 3.9 Biểu đồ tần số alen giống dê nghiên cứu 63 Hình 3.9 Biểu đồ so sánh hàm lƣợng protein sữa kiểu gen 64 Hình 3.11 Biểu đồ so sánh hàm lƣợng casein sữa kiểu gen 66 Hình 3.12 Biểu đồ so sánh hàm lƣợng lipid sữa kiểu gen 67 Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hàm lƣợng lactose sữa kiểu gen 68 Hình 3.14 Biểu đồ so sánh tiêu chất lƣợng sữa kiểu gen CSN1S1 dê Alpine 69 Hình 3.15 Biểu đồ so sánh tiêu chất lƣợng sữa kiểu gen CSN1S1 dê Saanen 70 Hình 3.16 Biểu đồ so sánh tiêu chất lƣợng sữa giống dê 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 29 E Renner (1983) Milk and Dairy Products in Human Nutrition W.G Mott University of Glessen, Munich, Germany 30 E.R Chung, S K Han (1995) Genetic polymorphism of milk proteins in Korean Native goats Korean Journal of Dairy Science 21(4): 255-262 31 F d’Angelo et al (2007) A simple salting-out method for DNA extraction from milk somatic cells: Investigation into the Goat CSN1S1 Gene Journal of Dairy Science 90: 3550-3552 32 F Grosclaude et al (1987): A Mendelian polymorphism underlying quantitative variations of goat αS1-casein Genetics Selection Evolution 19: 399-412 33 F Grosclaude, P Martin (1997) Casein Polymorphism in the Goat, IDF Seminar “Milk Protein Polymorphism II”, Palmerston North: 241-253 34 F Remeuf (1993) Influence of genetic polymorphism of caprine αs1-casein on physicochemical and technological properties of goat's milk Lait 73: 549-557 35 G Coenza et al (1999) A MseI RFLP at the S2-casein gene Animal genetics 29: 150-160 36 G Cosenza et al (2003) Molecular characterization of the goat CSN1S1O1 allele, Journal of Animal Research 70: 237-240 37 G Wright et al (1991) High-level expression of active human a-1antitrypsin in the milk oftransgenic sheep Biotechnology 9: 830834 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 81 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 38 G.F Greppi, P Roncada and R Fortin (2008) Protein Components of Goat’s Milk Dairy goats feeding and nutrition: 74 39 G.F.W.Haenlein (1984) Goat milk versus cow milk In: Extension Goat Handbook, G.F.W.Haenlein and D.L.Ace, ed., USDA Publ., Washington, D.C., E: 1-4 40 G.F.W.Haenlein (1987) Cow and goat milk aren't the same especially in somatic cell content Dairy Goat Journal 65(12): 806 41 G.F.W.Haenlein (1992) Role of goat meat and milk in human nutrition In: Proceeding V International Conference on Goats, Vol II, New Delhi (India), 1-8 March 1992 ICAR Publ., New Delhi: 575-580 42 H.M Meudt, A.C Clarke (2007) "Almost forgotten or latest practice? AFLP applications, analyses and advances" Trends Plant Science 12 (3): 106-117 43 I Verdalet (1995) Effect of genetic variants of protein on the cheese-making properties of milks J Genral review CA section:17 ( food and feed chemistry): 263-271 44 J Antonio et al (2008) Genetic polymorphism of the αS1-casein locut in five populations of goats from Mexico Electronic Journal of Biotechnology 11(3): 1-11 45 J Buchberger, P Dovc (2000) Lactoprotein genetic variants in cattle and cheese making ability Food Technolology and Biotechnology 38: 91-98 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 82 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sü kho¸ 12 46 J Jordana et al (1996) Gene frequencies of caprine αs1-casein polymorphism in Spanish goat breeds Small Ruminant Research 20( 3): 215-221 47 J Williams et al (1993) Genetic analysis using random amplified polymorphic ADN markers Methods Enzymol 218: 704740 48 J Williams et al (1990) DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers Nucleic Acids Research 18: 6531-6535 49 J.P Damián et al (2008) Cheese yield, casein fractions and major components of milk of Saanen and Anglo-Nubian dairy goats Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia 60(6): 1564-1569 50 J Krzyzewski (1998) Relations between genetic polymorphism of protein and cow milk yield, chemical composition and technological parameters Prace i Materiały Zootechniczne 52: 7-35 51 L Chianese et al (1997) Occurence of three novel as1-casein variants in goat milk, IDF Seminar “Milk Protein Polymorphism II”, Palmerston North: 259-267 52 L Chianese et al (1997) Occurrence of three novel alpha s1-casein variants in goat milk Milk Protein Polymorphism FIL-IDF Palmerston North, New Zealand: 259-267 53 L Ramunno et al (2000) Identification of the goat CSN1S1F allele by means of PCR-RFLP Animal Genetics 31: 333-346 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 83 - http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh LuËn ¸n th¹c sü kho¸ 12 54 L Ramunno et al (2004) The goat aS1-casein gene: gene structure and promoter analysis Gene 334: 105-111 55 L Ramunno et al (2005) Comparative analysis of gene of goat CSN1S1 F and N alleles and characterization of CSN1S1 transcript variants in mammary gland Gene 345: 289-299 56 L.W Hill (1939) Immunological relationships between cow's milk and goat's milk Journal of Pediatrics 15: 157 - 162 57 M Dettori et al (2009) A reliable method for characterization of the goat CSN1S1 E allele Livestock Science 125(1): 105-108 58 M Feligini et al (2005) Caprine αs1-Casein Polymorphism Food Technolology and Biotechnology 43(2): 123-132 59 M.F Mahé, F Grosclaude (1989) αS1-CnD, another allele associated with a decreased synthesis rate at the caprine αS1-casein locut Genetics Selection Evolution 21: 127-129 60 M.J Pérez et al (1994) Occurrence of a LINE sequence in the 3′ UTR of the goat αs1-casein E-encoding allele associated with reduced protein synthesis level Gene 147: 179-187 61 P Jarne (1996) Microsatellites, from molecules to populations and back Trends in Ecology and Evolution 11: 424-429 62 P Martin et al (1996) Genetic polymorphism of casein in the milk of goats and sheep Proceedings International Seminar on Production and Utilization of Ewe's and Goat Milk: 4558 63 P Martin et al (2002) The impact of genetic polymorphisms on the protein composition of ruminant milks Reproduction Nutrition Development 42 (5): 433-459 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 84 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 64 P Martin, C Leroux (1994) Characterization of a further αS1casein variant generated by exon skipping XXIV International Conference on Animal Genetics: 86 65 P Martin, C Leroux (2000) The caprine gene specifying caseinαs1: a suspect in multiple unexpected effects INRA productions animales (Special issue, Molecular genetics: principles and applications in animal populations): 125-132 66 P Martin, F Grosclaude (1993) Improvement of milk protein quality by gene technology Livestock Production Science 35(1): 95115 67 P.B Mack (1953) A preliminary nutrition study of the value of goat's milk in the diet of children Amer Goat Soc Inc., Mena, Arkansas, Year Book 1952 - 1953: 112-132 68 R Ambrosoli et al (1988) Content of αs1-Casein and coagulation properties in goat milk Journal of Dairy Science 71(1): 26 69 R Aschaffenburg, J Drewry (1955) Occurence of different βlactoglobulin in cow's milk Nature 176: 218-219 70 R Jenness (1980) Composition and characteristics of goat milk: Review 1968 - 1979 Journal of Dairy Science 63: 1605 - 1630 71 R.K Saiki et al (1985) Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia Science 230 (4732): 1350-1354 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun - 85 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Ngun Hïng Thanh Ln ¸n thạc sỹ khoá 12 72 S Clark, J.W Sherbon (1996) Alphas1-casein, milk composition and coagulation properties of goat milk Small ruminant research 38(2): 123-134 73 S Clark, J.W Sherbon (2004) Genetic variants of Alphas1-casein in goat milk: Breed distribution and associations with milk composition and coagulation properties Thesis 74 S Lyu et al (2003) Characterization of Lactoferin gene 5' flanking region of Korean native goat Korean Journal of Animal Science 42 (1): 9-20 75 Tokarska et al (2003) Milk and blood as alternative sources of mRNA for studies of genetic polymorphism of alpha s1-casein in goats Czech Journal of Animal Science 46(1): 17-21 Tiếng Pháp 76 F Addeo et al (1987) Proprietà funzionale dei latti caprini selezionati in base al tipo di variante gentica di caseina as1, Il Vergaro, 7: 36–40 77 F Grosclaude (1988) Le polymorphisme génétique des principales lactoprotéines bovines Relations avec la quantité, lacomposition et les aptitudes fromagéres du lait, INRA Prod Anim 1: 5–17 78 F Grosclaude et al (1994) Du géne au fromage: le polymorphisme de la caseine as1, ses effets, son évolution, INRA Prod Anim 7: 3– 19 79 L.Vassal et al (1994) Influence des génotypes AA, EE et FF de la caséine as1 caprine sur le rendement fromager et les caractéristiques Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 86 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sü kho¸ 12 sensorielles des fromages traditionnels: Premières observations, Lait, 74: 89–103 Tiếng Ý 80 G.C Emaldi, N Ciafarone (1987) Influenza della composizione del latte di capra e in particolare delle frazioni caseiniche sulle tecnologie casearie, Il Vergaro, 7: 33–35 81 L Chianese et al (1994) Correlazione tra polimorfismo gentico dell'as1-caseina caprina e attitudine del latte di capra alla coagulazione, Atti della giornata scientifica “Miglioramento dell'efficienza riproduttiva degli ovini e dei caprini”, Bella (Potenza) (1994) 4.1– 4.18 Các trang Web 82 Hirst, K Kris "The History of the Domestication of Goats" About.com Accessed August 18, 2008 83 http://www.dairyforall.com/goatmilk-composition.php 84 http://www.food-info.net/vn/protein/milk.htm PHỤ LỤC Lý lịch dê sữa nghiên cứu Stt Số hiệu 60 68 152 Giống Alpine Alpine Alpine Nguồn gốc Mỹ Mỹ Mỹ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 87 - Năm sinh Năm 2002 13/4/2002 Năm 2002 Nơi sinh Mỹ Việt Nam Mỹ http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 162 180 258 300 634 640 650 716 748 812 812.2 872 952 964 970 1048 1050 1082 1086 1090 1184 1186 1194 1196 1274 1288 1300 12 18 26 234 254 Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Alpine Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Luận án thạc sỹ kho¸ 12 Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 85 - Năm 2002 4/3/2007 Năm 2002 Năm 2002 26/3/2004 13/4/2004 26/4/2004 7/1/2005 4/8/2004 2/2/2005 25/2/2008 25/4/2005 5/2/2006 21/3/2006 27/2/2006 31/1/2008 8/5/2007 19/5/2007 1/3/2008 10/12/2007 22/2/2008 15/1/2008 23/4/2008 2/2/2008 29/1/2008 20/12/2006 25/1/2008 08/03/2004 13/3/2002 12/3/2007 Năm 2002 Năm 2002 Mỹ Việt Nam Mỹ Mỹ Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Mỹ Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Mỹ Mỹ http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 362 386 614 622 642 664 712 740 762 766 768 840 842 852 870 880 986 1066 1040 1068 1074 1122 1222.2 1224 1226 1244 1264 1402 1644 Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Saanen Luận án thạc sỹ khoá 12 Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Mỹ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 86 - 11/3/2004 3/3/2004 18/3/2004 20/7/2004 5/2/2007 31/5/2004 29/12/2004 8/1/2005 22/12/2005 9/1/2005 4/1/2005 24/1/2005 22/5/2005 5/3/2005 3/3/2005 22/5/2005 26/3/2006 29/1/2008 31/1/2008 29/10/2006 2/2/2008 20/3/2008 11/09/2009 22/4/2006 19/5/2006 22/3/2007 4/3/2007 20/11/2005 21/12/2008 Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Vit Nam http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ kho¸ 12 PHỤ LỤC So sánh tần số alen giống dê nghiên cứu giống dê nƣớc khác [44] Giống n A* Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 87 - E F Nƣớc http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 Saanen 159 0,16 0,41 0,43 Pháp Saanen 70 0,03 0,49 0,46 Italia Saanen 97 0,21 0,42 0,37 Mexico Saneen 34 0,27 0,33 0,40 Nghiên cứu Alpine 213 0,24 0,34 0,41 Pháp Alpine 80 0,06 0,35 0,59 Italia Alpine 81 0,51 0,24 0,28 Mexico Alpine 30 0,23 0,42 0,35 Nghiên cứu Murciana-Granadina 109 0,31 0,59 0,08 Tây Ba Nha Murciana-Granadina 26 0,45 0,44 0,12 Mexico Toggenburg 92 0,53 0,15 0,32 Mexico Mosaico Lagunero 30 0,71 0,05 0,23 Mexico Dê sữa Hungary 109 0,61 0,08 0,31 Hungary Poitevine 209 0,40 0,45 0,14 Pháp Corse 106 0,27 0,14 0,59 Pháp Rove 147 0,28 0,62 0,10 Pháp Garganica 54 0,61 0,37 0,02 Italia Maltese 81 0,34 0,11 0,27 Italia Malagueña 373 0,18 0,65 0,04 Tây Ba Nha Payota 111 0,24 0,76 0,00 Tây Ba Nha Canaria 74 0,60 0,20 0,20 Tây Ba Nha Dê sữa Cilentana 86 0,46 0,21 0,33 Italia Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 88 - http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 Girgentana 341 0,83 0,00 0,17 Italia Argentata dell’Etna 183 0,82 0,00 0,18 Italia Vallesana 83 0,34 0,28 0,39 Italia Roccaverano 77 0,39 0,21 0,38 Italia Maltese 70 0,57 0,06 0,37 Italia Jonica 110 0,66 0,06 0,28 Italia Garganica 38 0,69 0,09 0,22 Italia White Shorthair 333 0,29 0,05 0,66 Cộng hòa Séc Brown Shorthair 165 0,32 0,09 0,60 Cộng hòa Séc Hungarian Milking* 103 0,39 0,08 0,46 Hungary PHỤ LỤC Các tiêu chất lƣợng sữa giống dê nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 89 - http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 Alpine STT Số Protein tổng Lipid tổng tai số số (g/l) (g/l) Lactose Casein (g/l) (g/l) 68 23,90 13,30 50,00 16,90 152 28,20 28,60 44,00 20,30 162 33,20 32,90 38,00 21,80 180 29,30 27,80 51,00 18,80 634 23,90 26,00 45,00 16,90 650 28,20 28,90 56,00 22,94 716 24,70 19,20 46,00 17,70 760 33,60 20,10 46,00 28,34 964 27,20 22,70 59,00 19,30 10 1050 32,50 19,80 55,00 22,00 11 1082 31,80 30,14 53,00 24,7 12 748 35,73 20,05 55,45 28,90 13 812 25,37 25,69 50,00 21,77 14 258 31,44 22,54 53,50 24,34 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 90 - http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hïng Thanh 15 872 Trung bỡnh (Mean SEM) Luận án thạc sỹ khoá 12 27,51 14,85 56,50 29, 30  1,04 23,50  1,47 51,23  1,22 20,41 21,78  0,99 Saanen Số STT tai Protein tổng số Lipid tổng số Lactose Casein (g/l) (g/l) (g/l) (g/l) 18 22,90 22,70 37,00 21,10 234 19,70 17,20 50,00 12,70 362 28,90 35,80 47,00 21,90 712 33,60 37,70 45,00 26,60 740 38,60 34,80 57,00 32,81 768 23,60 15,20 53,80 18,34 840 31,40 31,60 50,00 24,40 852 35,00 38,20 57,50 29,74 870 34,70 31,40 48,00 31,20 10 386 25,01 25,24 45,25 17,91 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 91 - http://www.lrc-tnu.edu.vn NguyÔn Hùng Thanh Luận án thạc sỹ khoá 12 11 760 30,01 41,03 47,00 22,91 12 1222 35,73 60,69 35,73 32,13 13 1264 26,80 27,48 46,17 19,70 14 880 23,94 28,27 50,68 13,24 29,99  1,55 32,45  2,89 48,57  24,02  1,74 1,77 Trung bình (Mean  SEM) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên - 92 - http://www.lrc-tnu.edu.vn ... ? ?Nghiên cứu xác định tần số alen, tần số kiểu gen gen mã hóa αS 1casein có liên quan đến chất lượng sữa số giống dê nuôi Việt Nam. ” Trong luận văn chúng tơi trình bày kết điều tra ban đầu xác định. .. thực với hỗ trợ kinh phí từ đề tài ? ?Nghiên cứu xác định tần số alen, tần số kiểu gen gen mã hóa ỏS1 -casein có liên quan đến chất lượng sữa số giống dê nuôi Việt Nam? ?? Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng... 3.6 Tần số alen tần số kiểu gen nhóm cá thể dê Saanen 61 Bảng 3.7 Hàm lƣợng protein sữa kiểu gen nghiên cứu 63 Bảng 3.8 Hàm lƣợng casein sữa kiểu gen nghiên cứu 65 Bảng 3.9 Hàm lƣợng lipid sữa kiểu