Nghiên cứu tách chiết axit 5-Aminolevulinic trong lá ổi (Psidium guajava) và đánh giá tác động trên chuột bị tiểu đường

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Trần Trung Đoàn NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT AXIT 5-AMINOLEVULINIC TRONG LÁ ỔI (PSIDIUM GUAJAVA) VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG TRÊN CHUỘT BỊ TIỂU ĐƢỜNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Trần Trung Đoàn NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT AXIT 5-AMINOLEVULINIC TRONG LÁ ỔI (PSIDIUM GUAJAVA) VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG TRÊN CHUỘT BỊ TIỂU ĐƢỜNG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Trịnh Tất Cƣờng Hà Nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Luận văn thạc sĩ tơi thực phịng Eznyme học phân tích hoạt tính sinh học trực thuộc Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzyme Protein, Trường Đại Học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Trịnh Tất Cường, người thầy trực tiếp hướng dẫn cho tơi, ln bảo tận tình để tơi hồn thành luận văn Thầy ln ân cần quan tâm, trao đổi cho tơi góp ý bổ ích mặt khoa học để tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô khoa sinh, đặc biệt thầy cô thuộc môn Hóa sinh Sinh lý thực vật người thầy trực tiếp giảng dạy, cung cấp cho kiến thức phong phú quý giá giúp ứng dụng tốt nghiên cứu Tơi xin gửi lời biết ơn tới thầy cô trực thuộc Phịng Thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein, thầy cô giáo môn, anh chị nghiên cứu sinh, cao học, thuộc Bộ mơn Hóa sinh Sinh lý thực vật tạo điều kiện đầy đủ trang thiết bị phịng thí nghiệm, nhiệt tình giúp đỡ tơi thời gian học tập nghiên cứu khoa học Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln cổ vũ động viên mặt tinh thần giúp tơi hồn thành luận văn Học viên TRẦN TRUNG ĐOÀN MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1- TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tiểu đường 1.1.1 Tình hình bệnh tiểu đường giới Việt Nam 1.1.2 Chẩn đoán phân loại bệnh tiểu đường 1.1.3 Sinh lý bệnh tiểu đường 1.2.Thuốc trị tiểu đường 11 1.2.1 Insulin thuốc kích thích tiết insulin 12 1.2.2 Các thuốc làm tăng nhạy cảm mơ đích với insulin 13 1.2.3 Thuốc chống tăng glucose huyết sau bữa ăn 13 1.3.5-Aminolevulinic axit ổi 14 1.3.1.Cây ổi 14 1.3.2.5-Aminolevulinic axit 17 CHƢƠNG -ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP 21 2.1 Đối tượng 21 2.1.1 Dược liệu 21 2.1.2 Động vật thí nghiệm 21 2.2 Vật liệu 21 2.3 Phương pháp .22 2.3.1 Phương pháp tạo mẫu khô từ dịch chiết ổi [20] 22 2.3.2 Phương pháp thử độc tính cấp dịch chiết Ổi từ Ổi .22 2.3.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 22 2.3.3.1 Giới thiệu phương pháp .22 2.3.3.2 Nguyên lý tiến hành .23 2.3.3.3.Phương pháp đánh giá định tính định lượng 5-ALA HPLC 24 2.3.4 Đánh giá hoạt tính 5-ALA mơ hình bệnh tiểu đường chuột 25 2.3.4.1 Mơ hình gây bệnh tiểu đường chuột 25 2.3.4.2 Phương pháp đánh giá khả điều trị tiểu đường 5-ALA 25 2.3.5 Phương pháp định lượng Glucose máu 26 2.3.6 Phương pháp định lượng Insulin HbA1c máu .27 2.3.7 Phương pháp xét nghiệm số men gan 27 2.3.7.1 Nguyên tắc 27 2.3.7.2 Xác định số GOT, GPT, ALP Bilirubin 30 2.3.8 Phương pháp làm tiêu gan, thận, tụy chuột 31 2.3.8.1 Nguyên tắc 31 2.3.8.2 Quy trình thí nghiệm 32 2.3.9 Cholesteol huyết 33 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Sơ đồ tách chiết 5-ALA từ ổi 34 3.2 Xác định hàm lượng 5-ALA ổi .35 3.3 Tác động 5-ALA tới chuột bị bệnh tiểu đường 37 3.3.1 Đánh giá hàm lượng glucozo máu 39 3.3.2 Đánh giá hàm lượng insulin máu 40 3.3.3 Đánh giá hàm lượng HbA1c máu .41 3.3.4 Tác động 5-ALA đến tế bào thận tụy chuột bị tiểu đường 43 3.4 Tác động 5-ALA tới tế bào gan chuột bị tiểu đường .46 3.4.1 Hoạt động GOT bệnh tiểu đường 46 3.4.2 Hoạt động GPT bệnh tiểu đường 48 3.4.3 Hoạt động ALP bệnh tiểu đường .49 3.4.4 Hoạt động Bilirubin bệnh tiểu đường 50 3.4.5 Tác động tế bào gan 5-ALA 52 3.5 Tác động 5-ALA đến số cholesterol 53 KẾT LUẬN 55 KIẾN NGHỊ .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1:Tình hình tiểu đường số vùng giới [4] Hình 1.2: Tốc độ tăng trưởng tiểu đường Việt Nam [4] Hình 1.3: Cấu trúc phân tử Insulin Hình 1.4:Các giai đoạn tiến triển tiểu đường typ [9] 11 Hình 1.5:Cấu trúc phân tử 5-Aminolevulinic axit .18 Hình 2.1: Máy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 23 Hình 3.1: Quy trình tách chiết 5-ALA từ ổi 34 Hình 3.2: Sắc ký đồ dịch chiết tổng số 35 Hình 3.3: Sắc ký đồ dịch chiết sau tinh 35 Hình 3.4: Sắc ký đồ 5-ALA chuẩn (sigma) 35 Hình 3.5: Bước sóng hấp thụ 5-ALA 36 Hình 3.6: Đường chuẩn 5-ALA 36 Hình 3.7.Dịch chiết sau tinh so sánh trênđường chuẩn 5-ALA 37 Hình 3.8: Nồng độ glucose máu chuột uống 400mg/kg dịch chiết 38 Hình 3.9: Hàm lượng glucose máu 39 Hình 3.10: Hàm lượng insulin máu 40 Hình 3.11: Hàm lượng HbA1c máu 41 Hình 3.12: Tiêu tế bào thận nhóm chuột 43 Hình 3.13: Tiêu tế bào tụy nhóm chuột 45 Hình 3.14: Chỉ số GOT bệnh tiểu đường 47 Hình 3.15: Chỉ số GPT bệnh tiểu đường 48 Hình 3.16: Chỉ số ALP bệnh tiểu đường 49 Hình 3.17: Chỉ số Bilirubin bệnh tiểu đường 50 Hình 3.18: Tiêu tế bào gan nhóm chuột 53 Hình 3.19: Chỉ số cholesterol 53 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh tiểu đường theo IDF năm 2005[16] Bảng 1.2:Một số loại thực phẩm chứa 5-ALA[19] .20 Bảng 2.1: Công thức pha đệm đo Bilirubin 31 Bảng 3.1: Diện tích Pic ứng với thể tích 10, 20, 30, 40, 50µl dịch chiết sau tinh 37 BẢNG CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT – ALA – Aminolevulinic acid  Tế bào beta- đảo tụy Langerhans ICA Islet cells antibodies (Kháng thể chống lại cụm tế bào sản sinh insulin) HbA1c Hemoglobin A1c, Hemoglobin glycosylat LDL Low-density lipoprotein (Rối loạn mỡ máu) HPLC High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) CDC Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm Kiểm sốt Phịng ngừa Dịch bệnh Hoa kỳ) IDF International Diabetes Federation (Hiệp hội bệnh Tiểu đường Thế giới) WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay MỞ ĐẦU Tiểu đường rối loạn chuyển hóa carbohydrate hormon insulin tuyến tụy bị thiếu hay giảm tác động thể Biểu bệnh nồng độ đường máu cao vượt ngưỡng Một bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa có mức tăng nhanh chóng thời gian gần số lượng chi phí điều trị trở thành gánh nặng kinh tế xã hội nhiều quốc gia giới Theo Tổ chức Y tế giới (WHO), năm 2011 toàn giới có 366 triệu người mắc bệnh tiểu đường Theo IDF có khoảng 415 triệu người[56] Đây ba bệnh có tốc độ phát triển nhanh nguyên nhân gây tử vong hàng đầu nước phát triển Ở Mỹ, theo thơng báo Trung tâm kiểm sốt phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ (CDC), bệnh tiểu đường tăng 14% năm (2003-2005) nguyên nhân hàng đầu gây tử vong Mỹ Dự tính tới năm 2040 lên tới 642 triệu người mắc tiểu đường Trong đó, 90% người bệnh mắc tiểu đường type 2.[3,5,6] Việt Nam nước phát triển khơng nằm ngồi quy luật Theo nghiên cứu Bệnh viện Nội tiết Trung ương, năm 2002 nước có khoảng 2,7% dân số mắc bệnh tiểu đường đến năm 2012 điều tra vùng nước tỷ lệ tăng lên gần 5,7%[1] Với nhu cầu điều trị bệnh tiểu đường, hàng loạt thuốc tổng hợp công ty dược phẩm nghiên cứu phát triển Tolbutamid, Biguanid, Thiazolidindion Tuy nhiên, thuốc có nguồn gốc tổng hợp giải pháp tối ưu với quốc gia phát triển Việt Nam giới, lý đưa có nhiều tác dụng phụ Thuốc có nguồn gốc thảo dược nước quan tâm phát triển với ưu điểm nguồn dược liệu sẵn có, dễ sử dụng.[4,6,8] Việt Nam với khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm mưa nhiều nên có hệ thực vật vơ phong phú đa dạng Có nhiều loại sử dụng dược liệu quý Đã có nhiều hoạt chất tách chiết từ thực vật có tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường tìm thấy như: Mướp Đắng (Momordica charantia L.) thuộc họ Bầu bí (Cucurbitaceae), Húng Quế (Ocimum basilicum L.) thuộc họ Bạc Hà (Lamiaceae), Sung (Ficus glomerata L.)[13],… Do đó, chắn thiên nhiên cịn nhiều tiềm ẩn hoạt chất có tác dụng chống bệnh tiểu đường chờ người khám phá Cây ổi (có tên khoa học Psidium guajava L.) thực vật họ Đào Kim Nương hay họ Sim Các hoạt tính dược học 5-Aminolevulinic axit từ ổi chứng minh in vitro in vivo Khả hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường ổi kiểm chứng nhiều nghiên cứu Tuy nhiên, chưa có nhiều nghiên cứu khả hỗ trợ bệnh tiểu đường 5-Aminolevulinic axit Việt Nam Xuất phát từ thực tế tiến hành đề tài “ Nghiên cứu tách chiết axit 5-Aminolevulinic ổi (Psidium guajava) đánh giá tác động chuột bị tiểu đƣờng ”với mục tiêu: - Tách chiết 5-ALA từ ổi - Đánh giá tác động 5-ALA chuột bị tiểu đường thông qua số (glucozo, insulin, HbA1c) - Đánh giá khả bảo vệ 5-ALA đến quan gan, thận tụy chuột bị tiểu đường - Đánh giá tác động 5-ALA đến số cholesterol chuột bị tiểu đường thái bình thường với nồng độ ALP 57,43 UI/L 52,67 UI/L so với nhóm đối chứng (nhóm 1) 31,15 UI/L 3.4.4 Hoạt động Bilirubin bệnh tiểu đƣờng Bằng kit xác định Bilirubin chứng minh khả bảo vệ gan 5-ALA qua biểu đồ sau: Hình 3.17:Chỉ số Bilirubin bệnh tiểu đƣờng - Nhóm : đối chứng sinh học - Nhóm : đối chứng dương tiêm alloxan monohydrate - Nhóm : điều trị với Gliclazide liều 19,2mg/kg - Nhóm 4: điều trị với 5-ALA liều 100mg/kg - Nhóm 5: điều trị với 5-ALA liều 150mg/kg - Nhóm 6: điều trị với 5-ALA liều 200mg/kg Qua biểu đồ ta thấy nồng độ bilirubin nhóm đối chứng dương tăng gấp gần lần nhóm đối chứng âm điều chứng tỏ tế bào mơ gan bị phá hoại 50 Vì bilirubin trực tiếp lưu giữ tế bào gan chuyển qua mật thải tế bào gan bị phá hoại lên phần lớn bilirubin lại bị chuyển sang dạng gián tiếp vào máu Dẫn đến nồng độ bilirubin gián tiếp máu tăng cao Cũng giống số trước ta thấy tác động rõ rệt 5-ALA Nồng độ 5-ALA 150 mg/kg cho hiệu việc bảo vệ gan 5-ALA 51 3.4.5 Tác động tế bào gan 5-ALA A B C D E F 52 Hình 3.18: Tiêu tế bào gan nhóm chuột - Hình 3.17A: nhóm đối chứng sinh học - Hình 3.17B: nhóm đối chứng dương tiêm alloxan monohydrate - Hình 3.17C: nhóm điều trịvới Gliclazide liều 19,2mg/kg - Hình 3.17D: nhóm điều trị với 5-ALA liều 100mg/kg - Hình 3.17E: nhóm điều trị với 5-ALA liều 150mg/kg - Hình 3.17F: nhóm điều trị với 5-ALA liều 200mg/kg Ta thấy hình 3.17B tế bào gan bịphá hủy nghiêm trọng alloxan monohydrate.Mặc dù chất độc gây bệnh tiểu đường gần ảnh hưởng đến thận nhiều chúng ảnh hưởng lớn đến tê bào gan chất độc vào thể ảnh hưởng tới gan Hình 3.17E+F cho thấy 5-ALA có khả điều trị tốt cịn gliclazide 5-ALA nồng độ 100mg/kg gần khơng có khả chữa trị 3.5 Tác động 5-ALA đến số cholesterol Hình 3.19: Chỉ số cholesterol 53 - Nhóm : đối chứng sinh học - Nhóm : đối chứng dương tiêm alloxan monohydrate - Nhóm : điều trị với Gliclazide liều 19,2mg/kg - Nhóm 4: điều trị với 5-ALA liều 100mg/kg - Nhóm 5: điều trị với 5-ALA liều 150mg/kg - Nhóm 6: điều trị với 5-ALA liều 200mg/kg Sau 21 ngày ni có thay đổi rõ rệt nồng độ cholesterol nhóm chuột Ở nhóm 1(đối chứng âm) cho thấy hàm lượng cholesterol 3,44 mm/l nhóm đối (đối chứng dương) có hàm lượng cholesterol máu 6,1 mm/l, gấp 1,77 lần so với nhóm Các nhóm điều trị 5ALA cho thấy khả làm giảm nồng độ cholesterol cách đáng kể, đặc biệt nhóm (100 mg/kg) nhóm (150 mg/kg) nhóm 6(200mg/kg) với nồng độ cholesterol 3,66 mm/l 3,68 mm/l 3,56 mm/l đưa mức cholesterol trở gần mức bình thường thể Nhóm điều trị với Gliclazide liều 19,2mg/kg cho thấy giảm nhẹ nồng độ cholesterol mức 5,68 mm/l Cho thấy 5-ALA có khả giúp phân giải chất béo cịn Gliclazide khơng 5-ALA có hoạt tính hóa mạnh giúp tăng cường khả chuyển hóa lượng 54 KẾT LUẬN  Bước đầu tách chiết thành công 5-ALA từ ổi với độ tinh 90% hàm lượng 0,436 mg/ml  Tác động 5-ALA chuột bị tiểu đường có hiệu lực liều 150mg/kg giúp cho nồng độ glucozo máu gần trở bình thường  Chỉ số HbA1c ởchuột bị tiểu đường gây alloxan monohydrate điều trị 5-ALA giảm đáng kể nhóm dùng Gliclazide khơng hiệu  5-ALA bảo vệ gan, thận, tụy chuột bị tiểu đường gây alloxan monohydrate liều 160 mg/kg  5-ALA cho thấy khả làm giảm nồng độ cholesterolđặc biệt nồng độ 150mg/kg 55 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu tách chiết để thử nghiệm thỏ khỉ Tối ưu hóa quy trình tách chiết để đưa lên quy mô công nghiệp 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Tạ Văn Bình (2007), Những nguyên lý tảng bệnh đái tháo đường, tăng glucose máu, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Thu Hằng, Phạm Thanh Kỳ, Trần Văn Hiển (2004), “Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết hoa cơm cháy trịn (Sambucus nigra ssp.canadensis (L.) R.Bolli)” Tạp chí Dược học, tr 336 Nguyễn Khánh Hòa, Đào Văn Phan, Nguyễn Duy Thuần (2002), “Nghiên cứu sàng lọc tác dụng hạ đường huyết chè Nhật Bản, đỗ trọng, huyền sâm, nhàu” Tạp chí nghiên cứu y học,tr 204 Mai Phương (2016), “Bệnh đái tháo đường – thách thức kỷ 21”, Sở y tế Phú Thọ, Phú Thọ, tr 20 Phùng Thanh Hương, Mai Thanh Vân, Hồ Thị Thanh Xuân, Nguyễn Xuân Thắng (2009), “Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết lăng nước (Lagerstroemia specciosa (L.) Pers.) lên hoạt độ enzym glucose phosphatase hexokinase gan chuột thực nghiệm”, Tạp chí Dược học, tr 398 Đào Văn Phan, Nguyễn Khánh Hòa, Phạm Hữu Điển (2005), “Tác dụng hạ đường huyết Bạch truật, Câu kỷ tử Cam thảo nam chuột nhắt trắng”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, tr 38 Nguyễn Trung Qn (2009), “Tạo mơ hình tiểu đường chuột nhắt trắng thử tác dụng hạ đường huyết số chế phẩm tự nhiên”, Luận văn Thạc sĩ Đỗ Thị Nguyệt Quế, Nguyễn Trần Thị Giáng Hương, Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Viết Thân, Nguyễn Kim Huế (2009), ”Bước đầu đánh giá tác dụng hạ glucose huyết rễ chóc máu (Salacia cochinchinesis)trên 57 chuột nhắt bị tăng glucose huyết streptozocin”, Tạp chí Dược học, tr 399 Nguyễn Thị Minh Thanh, Lại Thị Kim Dung, Trần Thanh Phong, Đỗ Ngọc Liên (2008), “Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết dứa dại (Pandaus odoratissimus L.) họ Dứa dại (Pandanaceae)”, Tạp chí Y học thực hành, tr 587 - 598 10 Nguyễn Đức Diệu Trang, Đăng Văn Giáp, Võ Thị Cẩm Vy, Lê Quang Nghiệm (2008), “Nghiên cứu tương đương sinh học viên nén gliclazid 30mg phóng thích kéo dài”, Tạp chí Dược học, tr 389 11 Cao Ngọc Minh Trang, “Sắc ký lỏng phân bố hiệu cao”, Đề tài khoa học trường Đại học dân lập Văn Lang 12 Đào Thị Xuân Trang, Phạm Thị Lan Anh, Trần Thanh Mến, Bùi Tấn Anh (2012), “Khảo sát khả điều trị bệnh Tiều Đường Cao chiết Ổi (Psidium guajava L.)”, Tạp chí Khoa học, tr 22 13 Tạ Thành Văn, Nguyễn Thị Phương Thúy (2006), “Khảo sát tác dụng hạ đường huyết dịch chiết dừa cạn (Catharanthus coseus)trên chuột nhắt trắng bình thường chuột gây đái tháo đường streptozocin”, Tạp chí Y học Việt Nam, tr 320 14 Đỗ Quốc Việt, Trần Văn Sung, Nguyễn Thanh Thúy (2006), “Sơ nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết chuối hột (Musa balbisiana) chuột thực nghiệm”, Tạp chí Dược học, tr 361 15 Nguyễn Ngọc Xuân (2004), Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết Thổ phục linh (Smilax glabra roxb smilacaceae) súc vật thực nghiệm Luận án tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội 58 Tiếng Anh 16 Andreas Richter, Enrico Peter, Yvonne Pors, Stephan Lorenzen, Bernhard Grimm and Olaf Czarnecki (2010), “Rapid Dark Repression of – Aminolevulinic Acid Synthesis in Green Barley Leaves” Plant & Cell Physiology,51(5),pp 670-681 17 Ashok D.Chougate, Shrimant N Panakar, Pradeep M Gurao and Akalpita Y Arvindekar (2007),“Optimization of Alloxan dose is essential to Induce Stable Diabetes for Prolonged Period”, Asian Journal of Biochemistry, pp.402-408 18 Beale SI (1990),”Biosynthesis of the tetrapyrrole pigment precursor, 5aminolevulinic acid from glutamate”, Plant Physiol, 93( ),pp 1273– 1279 19 Beatriz L Rodriguez, M.D Ph.D, J David Curb, M.D James Davis, et al (2012) “Use of the Dietary Supplement 5-Aminiolevulinic Acid (5ALA) and its relationship with Glucose Levels and Hemoglobin A1C among Individuals with Prediabetes”,Cilnical and translational science, vol 5,pp 314-320 20 Brotz-Oesterhelt, H., D Beyer, H.P Kroll, R Endermann and C Ladel (2005), “Dysregulation of bacterial proteolytric machinery by a new class of antibiotics”, Nature Medicine,11,pp.1082-1087 21 Burkill H.M(1997), “The Useful Plants of West Tropical Africa”WhitefriarsPress Ltd., Great Britai, vol 4,pp 89-93 22 Chah K.F., C.A Eze, C.E Emuelosi and C.O Esimone (2006),“Antibacterial and wound healing properties of methanolic extracts of some Nigerian medicinal Ethnopharmacology,104,pp 164-167 59 plants”Journal of 23 Dhana S.P Mohan Marugaraja M.K and Suresh (2008), “Antidiabetic activity of Clerodendron pholomoidis Leaf Extract in Alloxan – Induced Diabetic Rats”, Indian J.Pharm Sci., 70(6), pp 841-844 24 Fotinos N, Campo MA, Popowycz F, Gurny R, Lange N (2006), “Aminolevulinic acid derivatives in photomedicine characteristics application and perspectives” ,Photochem Photobiol,82(4),pp 994– 1015 25 Garcia, S., M Araiza, M Gomez and N Heredia (2002) “ Inhibition of growth, enterotoxin production and spore formation of Clostridium perfringens perfringens by extracts of medicinal plants”,J Food Prot,pp 1667-1669 26 Hiroshi Ikegami, Tomomi Fujisanwa, and Toshio Ogihara (2004), “Mouse Models of Type and Type Diabetes Derived from the Same Closed Colony: Genetic Susceptibility Shared Between Two Type of Diabetes”, ILAR Journal, pp 45 27 Hirotaka Oishi, Hiroko Nomiyama, Kazuo Nomiyama and Katsumaro Tomokuni (1996), “Fluorometric HPLC Determination of Δ- Aminolevulinic Acid (ALA) in the Plasma and Urine of Lead Workers”,Biological Indicators of Lead Exposure, pp 329 28 Jaiarj P, P Khoohaswan, Y Wongkrajang, P Peungvicha, P Suriyawong, M.L.S Saraya and O Ruangsomboom (1999) “Anticough and antimicrobial activities of Psidium guajava leaves extract” J.Ethopharmacol., pp 203-212 29 Ji Su Kim, Jung Bong Ju, Chang Won Choi and Sei Chang Kim (2006), “Hypoglycemic and Antihyperlipidemic Effect of Four Korean Medicinal Plants in Alloxan Induced Diabetic Rats”, Am J Biochem & Biotech., pp.2(4) 60 30 Joseph B and R.M Priya(2011), “Phytochemical and biopharmaceutical aspects ofPsidium guajava(L.) essential oil”: Res J Med Plant, 5, pp 432-442 31 Limsong.J, E Benjavongkulchai and J Kuvatanasuchati(2004),“Inhibitory effects of some herbal extracts on adherence of Streptococcus mutans”,J Ethnopharmacol,pp 281-289 32 Michael H Perez, Beatriz L Rodriguez, Terry T Shintani, Keitaro Watanabe, Setsuko Miyanari, and Rosanne C Harrigan (2013), “5 – Aminolevulinic Acid (5-ALA): Analysis of Preclinical and Safety Literature”, Food and Nutrition Sciences, 4, pp 1009-1013 33 Milad Bitar and Myron Weiner (1984), “Diabetes-induced Metabolic Alterations in Heme Synthesis and Degradation and Various Hemecontaining Enzymes in Female Rats”, Diabetes,vol 33 34 Mohamed Bnouham, Abderrahim Ziyyat, Hassane Mekhfi, Abdelhafid Tahri, Abdelkhaleq Legssyer (2006), “Review: Medicinal plants with potential antidiabetic activity – A review of ten year of herbal medicine research”,Int J Diabetes Metab, 14 (1) 35 Nair R and S Chanda(2007) “In vitro antimicrobial activity of Psidium guajava L leaf extracts against clinically important pathogenic microbial strains” Braz J Microbiol, vol38,pp.452-458 36 Nigel Unwin and Amanda Marlin (2004), “Diabetes Action Now: WHO and IDF working together to raise awareness worldwide”,Diabetes Voices, 49 (2) 37 Prabu G.R, Gnanamani A, Sadulla S (2006), “Guaijaverin a plant flavonoid as potential antiplaque agent against Streptococcus mutans”, Journal of AppliedMicrobiology, 101,pp 487–495 61 38 Pranee J, Paranee K, Yuwadee W, Penchom P, Potjanee S, Saraya M.L.S, Orawan R (1999), “Anticough and antimicrobial activities of Psidium guajava Linn leaf extract”, Journal of Ethnopharmacology ,67,pp 203– 212 39 Qadan F, Thewaini A.J, Ali D.A, Afifi R, Elkhawad A, Matalka K.Z (2005), “The antimicrobial activities of Psidium guajava and Juglans regia leaf extracts to acne-developing organisms” American Chinese Medical ,33,pp 197–204 40 Roif Deeg J Ziegenhorn (1983), "Kinetic enzymic method for automated determination of total cholesterol in serum", Clinical chemistry, 29(10), pp 1798-1802 41 Salib, J.Y and H.N Michael (2004), “Cytotoxic phenylethanol glycosides from Psidium guajava seeds” Phytochemistry, 65,pp 2091-2093 42 Sato J, Goto K, Nanjo F, Hawai S, Murata K (2000), “Antifungal activity of plant extracts against Arthrinium sacchari and Chaetomium funicola”, Journalof Biochemical Engineering and Sciences,90,pp 442–446 43 Sarah Wild, Bchir, Gojka Roglic, Andergreen, Richard Sicree, Hilary (2004), “Global Prevalence of Diabetes Estimates for the year 2000 and projections for 2030”, Diabetes Care,27 (5),pp 1047-1053 44 Singh R.B, Rastogi S.S, Singh R, Ghosh S, Niaz M.A (1992), “Effects of guava intake on serum total high-density lipoprotein cholesterol levels and on systemic blood pressure”, American Journal of Cardiology.70,pp 1287–1291 45 Sugawara K, Ishiuchi S, Kurihara H, Nakazato Y, Saito N (2003), “Intraoperative fluorescence detection of malignant gliomas using 5Aminolevulinic acid”, Kitakanto Med J ,53(2),pp 109–113 62 46 Stummer W, Novotny A, Stepp H, Goetz C, Bise K, Jürgen Reulen H (2000), “Fluorescence-guided resection of glioblastoma multiforme utilizing 5-ALA-induced porphyrins a prospective study in 52 consecutive patients” J Neurosurg, 93(6),pp 1003–1013 47 Svetlana V.D, Reyes M.H, Flores H.S, Mart´inez G.M.C, Gonz´alezde Cossio O.M, Ch´ avez S.M.A, Rivera A.E, Lozoya X (2007), “Effect of aPsidii guajavae folium extract in the treatment of primary dysmenorrhea a randomized clinical trial”, Journal of Ethnopharmacology,110,pp 305–310 48 Teixeira R.S, Camparoto M.L, Mantovani M.S, Vicentini V.E.P (2003), “Ssessment of two medicinal plants Psidium guajava L and A chillea millefolium L in vitro andin vivo assays”, Genetics and Molecular Biology 26,pp 234–239 49 Vargas A.D, Soto H.M, Gonzalez H.V.A, Engleman E.M, Martinez G.A (2006), “Kinetics of accumulation and distribution of flavonoids in guava (Psiduim guajava), Agrociencia, 40,pp 109–115 50 Venkatesan N, Thiyagarajan V, Narayanan S, Arul A, Raja S, Kumar S.G.V, Rajarajan T, Perianayagam J.B (2005), “Anti-diarrhoeal potential of Asparagus racemosus wild root extracts in laboratory animals” Journal of Pharmacology and Pharmaceutical Sciences, 8, pp 39–45 51 Vladislavovna S.D, Reyes H.M, Flores H.S, Mart´inez-Garc´ia M.C, Gonz´alezde Cossio O.M, Ch´avez S.M.A, Rivera A.E, Lozoya X (2007), “Effect of aPsidii guajavae folium extract in the treatment of primary dysmenorrhea a randomized clinical trial” Journal of Ethnopharmacology, 110, pp 305–310 52 Waget A., Cabou C, Masseboeuf M, Cattan P, Armanet M, Karaca M, Castel J, Garret C, Payros G, Maida A, et al (2011), “Diabetes insulin 63 glucagon gastrointestinal physiological and pharmacological mechanisms through which the DPP-4 inhibitor sitagliptin regulates glycemia in mice”, Endocrinology ,152(8), pp 3018–3029 53 Webber J, Kessel D, Fromm D (1977), “Side effects of photosensitization of human tissue after aminolevulinic acid” ,J Surg Res, 68,pp 31–37 54 World Health Organization & International Diabetes Federation (2006), “Definition and diagnosis of diabetes mellitus and intermediate hyperglycemia” 55 Zhang, W.J., B.T Chen, C.Y Wang, Q.H Zhu and Z.X Mo(2003),“Mechanism of quercetin as an antidiarrheal agent”,Di Yi Jun Yi Xue Xue Bao,23, pp 1029-1031 Websise 56 http://www.diabetesatlas.org/ 57 https://tieuduongvn.wordpress.com/ 58 https://yhoccongdong.com/thongtin/tinh-hinh-benh-tieu-duong-tai-vietnam/ 64