Đang tải... (xem toàn văn)
Bài viết trình bày đánh giá hiệu quả điều trị của nano bạc đối với C.albicans được phân lập được tại Bệnh viện Da liễu Trung ương. Phương pháp nghiên cứu: 30 chủng C. albicans phân lập từ bệnh nhân viêm âm hộ-âm đạo, được chẩn đoán xác định tại Bệnh viện Da liễu trung ương, cho tiếp xúc với nano bạc ở các nồng độ và khoảng thời gian khác nhau để đánh giá khả năng diệt C. albicans của nano bạc.
NGHIÊN CỨU KHOA HỌC , ,(8 ,(7 12 % Lê Văn Hưng *, Trịnh Thị Hương ** TÓM TẮT Candida albicans tác nhân hàng đầu gây nhiễm trùng nấm người Bình thường, chúng sinh vật sống cộng sinh, tìm thấy niêm mạc đường tiêu hóa miệng 40-60% người lớn khỏe mạnh Khi hệ thống miễn dịch suy yếu C albicans phát triển mức gây nhiễm trùng Đặc biệt, thuốc kháng nấm thường có độc tính cao, tỷ lệ kháng thuốc tăng nhanh khiến cho việc điều trị gặp nhiều khó khăn Mục tiêu: Đánh giá hiệu điều trị nano bạc C.albicans phân lập Bệnh viện Da liễu Trung ương Phương pháp nghiên cứu: 30 chủng C albicans phân lập từ bệnh nhân viêm âm hộ-âm đạo, chẩn đoán xác định Bệnh viện Da liễu trung ương, cho tiếp xúc với nano bạc nồng độ khoảng thời gian khác để đánh giá khả diệt C albicans nano bạc Kết quả: Tác dụng diệt C albicans nano bạc tỷ lệ thuận với nồng độ thời gian tiếp xúc Nồng độ diệt C albicans tối thiểu nano bạc sau tiếp xúc, sau 15 phút, giờ, 6,25mg/L; 25mg/L; 12,5mg/L; 3,125mg/L; 3,125mg/L Kết luận: Nano bạc có hiệu diệt nấm tốt, nồng độ thấp thời gian tiếp xúc đủ dài Từ khóa: Nano bạc, Candida albicans, Bệnh viện Da liễu trung ương ĐẶT VẤN ĐỀ khuẩn huyết, viêm âm đạo, viêm thực quản Đặc Nấm nguyên nhân hàng đầu gây bệnh nhiễm trùng người, Candida albicans nấm men gây bệnh phổ biến [1], [2] Bình thường, C albicans sống cộng sinh niêm mạc đường tiêu hóa, tìm thấy da niêm mạc âm đạo Khi hệ thống miễn dịch thể suy yếu, chúng phát triển nhanh gây nhiều bệnh nhiễm trùng nhiễm * Bộ môn Da liễu, Trường Đại học Y Hà Nội ** Bộ môn Vi sinh-Ký sinh trùng lâm sàng, Trường Đại học Y Hà Nội DA LIỄU HỌC Số 27 (Tháng 09/2018) biệt, C albicans có khả hình thành bio lmcấu trúc màng sinh học giúp chúng bám dính tốt khả chống lại tác dụng thuốc kháng nấm Trong nguyên gây nhiễm trùng huyết liên quan đến đặt catherter, C albicans tác nhân đứng hàng đầu với tỷ lệ tử vong cao [3] Do đó, việc điều trị nhiễm trùng tác nhân nấm gây gặp nhiều khó khăn Sự xuất vật liệu với phổ kháng khuẩn, kháng nấm rộng không chịu tác động hiệu ứng kháng thuốc có ý nghĩa việc điều trị bệnh nhiễm trùng Từ lâu, bạc NGHIÊN CỨU KHOA HỌC biết đến kim loại có khả diệt khuẩn Dung dịch keo bạc sử dụng để điều - Môi trường thạch Sabouraud, nhuộm Gram, huyết thỏ, nước muối sinh lý trị bệnh nấm da, vết thương, vết - Tủ ấm (Thermo), tủ an toàn sinh học, tủ lạnh bỏng, bệnh miệng Tuy nhiên, xuất thường, tủ âm sâu, máy đo độ đục (BioMérieux), thuốc kháng sinh vào kỷ XX máy vortex (IKA) làm cho mức độ sử dụng thuốc có nguồn gốc từ bạc giảm dần Gần đây, xuất gia tăng nhanh chóng nhiều vi khuẩn, nấm, ký 2.3 Phương pháp nghiên cứu: Mô tả cắt ngang, thực kỹ thuật xét sinh trùng kháng thuốc, tính kháng khuẩn, nghiệm Labo kháng nấm bạc lại ý 2.3.1 Chuẩn bị chủng C albicans Với tiến công nghệ nano, 30 chủng C albicans thử nghiệm phân lập từ bạc chia thành phân tử có kích thước bệnh phẩm mủ, dịch viêm bệnh nhân vô nhỏ bé, nano mét, làm tăng diện tích bề mặt bạc nhờ khả diệt khuẩn chẩn đoán viêm âm hộ-âm đạo dựa tiêu tăng lên gấp nhiều lần Trong nghiên cứu gần đây, nano bạc chứng minh có hiệu Candida albicans [4], [5] Tuy nhiên, nghiên cứu tập trung làm rõ chế tác động nano bạc Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Đánh giá hiệu diệt Candida albicans nano bạc” để xác định hiệu nano bạc lên chuẩn: - Soi tươi: tiêu soi tươi, bào tử C albicans có hình bầu dục, nhiều bảo tử nảy chồi, thấy sợi giả - Nuôi cấy: sau 48 nuôi cấy thạch Sabouraud, C albicans tạo thành khuẩn lạc màu trắng, dạng S, có đường kính khoảng C albicans theo nồng độ thời gian tiếp xúc 2-3mm Bắt khuẩn lạc nhuộm Gram thấy tế ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU nảy chồi, bắt màu Gram dương 2.1 Đối tượng bào nấm men hình bầu dục, nhiều tế bào - Test mầm giá (Germ tube test): dương tính 30 chủng Candida albicans phân lập từ bệnh từ bệnh nhân chẩn đoán viêm âm hộâm đạo đến khám điều trị Bệnh viện Da liễu Trung ương 2.2 Vật liệu - Dung dịch nano bạc có nồng độ 500mg/L cung cấp Phịng Cơng nghệ thân môi trường, Viện Công nghệ môi trường Các hạt nano bạc có kích thước 10-30 nm điều chế phương pháp dùng Sodium Borohydride (NaBH4) khử dung dịch bạc nitrat Hình 1.1 Test mầm giá xác định Candida albicans Số 27 (Tháng 09/2018) DA LIỄU HỌC NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Các chủng C albicans sau phân lập bảo quản môi trường Skim milk nhiệt 2.3.2 Chuẩn bị dung dịch nano bạc với nồng độ khác độ -800C Trước thử nghiệm, cấy chuyển lần Dung dịch nano bạc pha loãng 10 chủng lên thạch Sabouraud để kiểm tra nồng độ 500mg/L; 50mg/L; 25mg/L; 12,5mg/L; ổn định đặc tính sinh học Sau kiểm tra, 6,25mg/L; tiến hành pha huyền dịch nấm để thực thử 0,39mg/L; 0,19mg/L tương ứng với nghiệm hệ số pha loãng 1, 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 3,125mg/L; 1,56mg/L; 0,78mg/L; 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560 2ml dd Nano bạc Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Nước cất Ống chứng: cho vào 2ml nước cất vơ trùng Hình 2.2 Pha lỗng dung dịch nano bạc nồng độ khác 2.3.3 Đánh giá khả diệt nano bạc đối 2.3.4 Xác định nồng độ tiêu diệt tối thiểu với C albicans nano bạc C albicans Pha hỗn hợp huyền dịch nấm dung Nồng độ diệt nấm tối thiểu (Minimum dịch nano bạc nồng độ khác nhau, điều Fungicidal Concentration-MFC) nồng độ thấp chỉnh độ đục đạt 0,5 McFarland (tương đương làm giảm 99,9% lượng nấm ban đầu Trong 1-5x106 CFU/ml) Vortex để trộn hỗn hợp nghiên cứu này, MFC dung dịch nano bạc Cấy trải 100µl hỗn hợp lên môi trường thạch nồng độ ống mà cấy lên môi trường không Sabouraud, nuôi cấy 370C Đối chứng có có khuẩn lạc mọc nước cất vô trùng khuẩn lạc C albicans Hiệu tiêu diệt nano bạc C albicans đánh giá dựa số lượng khuẩn lạc nấm cịn mọc mơi trường so với nồng độ nấm ban đầu sau khoảng thời gian tiếp xúc với dung dịch nano bạc Số lượng khuẩn lạc hỗn hợp nồng độ thời gian tiếp xúc mọc đĩa ni cấy tính trung bình 30 chủng DA LIỄU HỌC Số 27 (Tháng 09/2018) Số liệu xử lý theo chương trình Excell 2016 KẾT QUẢ 3.1 Đánh giá hiệu kháng C albicans nano bạc Tại nồng độ thời gian ủ cụ thể, hỗn hợp C albicans dung dịch nano bạc cấy NGHIÊN CỨU KHOA HỌC lên môi trường thạch Sabouraud ủ 370C Sau 48 giờ, đếm số lượng khuẩn lạc mọc tính giá trị trung bình 30 chủng Biểu đồ 3.1 cho thấy nồng độ thấp tiếp xúc thời gian ngắn, nano bạc có khả tiêu diệt C albicans Tác dụng diệt nấm nano bạc tỷ lệ thuận với nồng độ thời gian tiếp xúc Ở nồng độ 25mg/L, nano bạc có khả tiêu diệt 90% C albicans vừa tiếp xúc Ở nồng độ 3,125mg/L, nano bạc có khả tiêu diệt 100% C albicans ủ tương ứng Biểu đồ 3.1 Khả tiêu diệt nano bạc chủng C albicans theo thời gian tiếp xúc Số 27 (Tháng 09/2018) DA LIỄU HỌC NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 3.2 Xác định nồng độ tiêu diệt tối thiểu nano Sau 48 nuôi cấy, với thời gian tiếp xúc giờ, 15 phút, giờ, giờ, ống có nồng độ nano bạc 6,25mg/L; 50mg/L; 12,5mg/L; 3,125mg/L; 3,125mg/L không phát thấy khuẩn lạc 30 chủng C albicans nghiên cứu xuất mơi trường Nhóm nghiên cứu xác định nồng độ tiêu diệt tối thiểu nano bạc C albicans theo khoảng thời gian tiếp xúc (Bảng 3.1) Thời gian 15 phút giờ MFC (mg/L) 6,25 50 12,5 3,125 3,125 Bảng 3.1 Nồng độ tiêu diệt tối thiểu nano bạc C albicans theo thời gian tiếp xúc BÀN LUẬN Từ lâu, bạc biết đến kim loại 4.1 Hiệu diệt Candida albicans nano bạc có khả diệt khuẩn Dung dịch keo bạc sử dụng để điều trị bệnh nấm da, Hiệu kháng nấm nano bạc vết thương, vết bỏng, bệnh miệng Với đánh giá dựa số lượng khuẩn lạc mọc sau 48 tiến công nghệ nano, bạc nuôi cấy so với số lượng tế bào nấm hỗn chia thành phân tử có kích thước vơ nhỏ hợp ban đầu Mẫu chứng thực đồng bé, nano mét, làm tăng diện tích bề mặt bạc thời để kiểm sốt chất lượng 30 chủng C nhờ khả diệt khuẩn tăng lên albicans nghiên cứu, môi trường nuôi cấy thao gấp nhiều lần Cho đến nay, nhà khoa học tác người thực đưa nhiều thuyết chế diệt khuẩn Candida albicans tác nhân nấm hàng đầu nano bạc, lý thuyết hấp thụ thuyết phục gây nhiễm trùng hội Một yếu tố quan trọng Bản chất thuyết chỗ tế bào góp phần vào sinh bệnh học C albicans vi sinh vật bị vơ hiệu hóa kết hình thành bio lm-một cấu trúc màng sinh học trình tương tác tĩnh điện bề mặt mang điện giúp chúng bám tốt lên bề mặt rắn bề mặt tích âm tế bào ion Ag+ hấp phụ lên sinh học Đặc biệt thiết bị thay nhân tạo đó, ion sau xâm nhập vào bên catheter chứa bề mặt tối ưu cho hình thành tế bào vi sinh vật vơ hiệu hóa chúng Với kích bio lm Trong nguyên gây nhiễm trùng thước nhỏ bé, hạt nano bạc có diện tích bề huyết liên quan đến đặt catherter, C albicans mặt lớn để tương tác lớn, từ giúp cho nano tác nhân đứng hàng đầu với tỷ lệ tử vong cao bạc có hiệu diệt khuẩn, diệt nấm vượt trội [3] Mặt khác, lớp màng sinh học giúp tế bào Kết thử nghiệm nhóm nghiên cứu nấm chống lại chế bảo vệ tế bào chủ cho thấy, nano bạc có khả tiêu diệt hiệu lực thuốc chống nấm Do đó, việc C albicans vừa tiếp xúc Ở nồng độ điều trị nhiễm trùng nấm gây gặp nhiều 3,125mg/L, nano bạc tiêu diệt >90% khó khăn nấm C albicans (