Bài viết tiến hành phân lập và xác định thành phần dinh dưỡng của vi tảo Chlorella Ellipsoidea tại vườn quốc gia Xuân Thủy thông qua thuần khiết các loài vi tảo, khảo sát thời gian và môi trường nuôi cấy loài Chlorella ellipsoidea, thành phần axit béo của loài C. ellipsoidea, hàm các lượng sắc tố của loài vi tảo C. ellipsoidea.
TNU Journal of Science and Technology 225(08): 454 - 460 PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN DINH DƯỠNG CỦA VI TẢO CHLORELLA ELLIPSOIDEA TẠI VƯỜN QUỐC GIA XUÂN THỦY Nguyễn Thị Thanh Nhàn1*, Phó Thị Thúy Hằng2 1Trường 2Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải Dương, Đại học Y Dược – ĐH Thái Nguyên TÓM TẮT Hiện nay, nguồn nguyên liệu từ thiên nhiên, vi tảo tập trung nghiên cứu nhiều đem lại nhiều lợi ích cho người Chlorella lồi vi tảo lục đặc biệt quý giá kích thước nhỏ, chứa đầy đủ axit amin, vitamin khống chất Người sử dụng vi tảo Chlorella có tác dụng tăng sức đề kháng, làm máu, gan, thận ruột, kích thích sinh sản tế bào hồng cầu, tăng oxy cho tế bào não Với mục đích bảo tồn nguồn gen vi tảo Chlorella phục vụ cho nghiên cứu ứng dụng sau này, tiến hành phân lập mẫu vi tảo thu Vườn Quốc gia Xuân Thủy, Nam Định Kết nghiên cứu xác định loài Chlorella ellipsoidea sinh trưởng tốt môi trường BG11 Lồi Chlorella ellipsoidea có thành phần dinh dưỡng chứa axit béo không no cao (gồm axit linoleic 13,867% axit alpha-linoleic 17,457%) Carbohydrate mức giá trị trung bình Các sắc tố quan trọng chlorophyll a, chlorophyll b caroteinoid Từ khoá: Carbohydrate; Chlorella ellipsoidea; phân lập, vi tảo; Vườn Quốc Gia Xuân Thủy Ngày nhận bài: 21/01/2020; Ngày hoàn thiện: 31/7/2020; Ngày đăng: 31/7/2020 ISOLATE AND IDENTYFY THE NUTRITIONAL INGREDIENT OF CHLORELLA ELLIPSOIDEA MICROALGE IN XUAN THUY NATIONAL PARK Nguyen Thi Thanh Nhan1*, Pho Thi Thuy Hang2 1Hai 2TNU Duong Medical Technical University, - University of Medicine and Pharmacy ABSTRACT Nowadays, in the material from nature, microalge is studied very much and caried a lots of benefit to the human Chlorella is the precious special microalge It is small size but it is full of amino acids, vitamins and minerals Chlorella is absorbed in human body to increase resist, cleaning blood, liver, kidney and bowel, incuding red blood cell are produced, and increase oxy to brain, cell For the purpose of preserving the gene source for application studies later, we isolated on the microalges collected in the Xuan Thuy national park, Nam Dinh The results obtained by Chlorella ellipsoidea grow the best in the BG11 medium Chlorella ellipsoidea has non-fatty acids components are high (linoleic acid 13.867% and alpha-linoleic acids 17.457%) The carbohydrates are above average There are important elements such as chlorophyll a, chlorophyll b and caroteinoid Keywords: Carbohydrate; Chlorella elipsoidea; isolate; microagle; Xuan Thuy park national Received: 21/01/2020; Revised: 31/7/2020; Published: 31/7/2020 * Corresponding author Email: ntthanhnhan89@gmail.com 454 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Đặt vấn đề Trong nguồn nguyên liệu từ thiên nhiên, vi tảo (microalgae) tập trung nghiên cứu nhiều đem lại nhiều lợi ích cho người Vi tảo đối tượng khai thác hợp chất chống oxi hóa carotenoid, axit béo không no đa nối đôi, chuỗi polysaccharide beta - glucan dominate đặc biệt hợp chất có hoạt tính kháng tế bào ung thư [1] Chlorella loài vi tảo lục đặc biệt quý giá Mặc dù kích thước nhỏ, Chlorella chứa đầy đủ axit amin, vitamin khoáng chất Các protein lồi tảo có chứa tất axit amin cần thiết cho nhu cầu dinh dưỡng người động vật Vi tảo Chlorella hấp thụ vào thể người có tác dụng tăng sức đề kháng cho thể, làm máu, gan, thận ruột, kích thích sinh sản tế bào hồng cầu, tăng oxy cho tế bào não; giúp tăng pH máu để đạt trạng thái kiềm hơn; giữ cho tim hoạt động bình thường; giúp tăng cường sản phẩm khu hệ sinh vật đường tiêu hóa Vi tảo Chlorella xem chất trao đổi ion đường ruột, loại bỏ Hg máu [2] Các nghiên cứu Mỹ Châu Âu vi tảo Chlorella có khả giúp thể bẻ gẫy hydrocacbon bền loại độc tố kim loại nặng thuốc diệt cỏ Ngồi ra, vi tảo Chlorella cịn có khả chống tia phóng xạ Gama, vách tế bào vi tảo Chlorella có khả hấp thụ bám với nguyên tử riêng biệt uranium chì [2] Chưa có thực vật quang hợp ánh sáng mặt trời lại có nhiều ích lợi người Chlorella, lồi tảo trở thành phần thiếu phần ăn hàng ngày Vườn Quốc Gia (VQG) Xuân Thủy nằm hệ thống VQG Việt Nam vùng tiêu biểu cho hệ sinh thái đất ngập nước cửa sông ven biển đồng châu thổ sông Hồng Vùng rừng ngập mặn VQG Xuân Thủy khu vực có ý nghĩa quan trọng http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 225(08): 454 - 460 sinh thái phát triển ngư nghiệp, đặc biệt sản lượng hải sản khai thác tôm, cua, động vật thân mềm… Những công bố vi tảo VQG Xuân Thủy chưa nhiều, chủ yếu tập trung mức độ đa dạng thành phần lồi Với mong muốn góp phần bảo tồn loài vi tảo, tạo tiền đề cho nghiên cứu ứng dụng tiếp theo, tiến hành nghiên cứu “Phân lập xác định thành phần dinh dưỡng vi tảo Chlorella elipsoidea vườn quốc gia Xuân Thủy” Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Các loài vi tảo lục phân lập VQG Xuân Thuỷ, tỉnh Nam Định 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp thu mẫu Dụng cụ lấy mẫu: Vợt sinh vật phù du, panh, kẹp Mẫu để ống falcon có nắp nhựa đậy kín Lấy mẫu nước tầng mặt cách mặt nước độ sâu 30 - 60 cm Lấy mẫu bùn đại diện cho tầng cần khơng khí Lấy mẫu thân rễ rừng ngập mặn như: trang, sú, vẹt… 2.2.2 Phương pháp phân lập khiết đĩa thạch Quá trình phân lập tiến hành theo phương pháp Shirai có cải tiến [3] Các vi tảo xác định kính hiển vi ni cấy đĩa thạch chứa môi trường GB11 Sau 7-10 ngày, khuẩn lạc quan sát kính hiển vi với độ phóng đại 100, để xác định sơ hình dạng vi tảo Sau đó, khuẩn lạc phân lập tăm vơ trùng Chuyển đầu tăm có chứa khuẩn lạc lồi vi tảo vào lọ penicillin có chứa dịch thể môi trường BG11 Trong 5-10 ngày, sinh khối vi tảo phát triển, tiến hành quan sát kiểm tra độ tinh mẫu vi tảo phân lập 2.2.3 Phương pháp phân loại theo hình thái Các chủng vi tảo định danh dựa theo khóa phân loại tài liệu định loại Shirota (1966) Dương Đức Tiến, Võ Hành 455 Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN (1997) [4], [5] 2.2.4 Khảo sát thời gian sinh trưởng vi tảo loại môi trường ni cấy Các lồi vi tảo phân lập, nuôi cấy môi trường BBM (bảng 1), BG11 (bảng 2) C (bảng 3), sau ngày nuôi cấy, tiến hành đếm số lượng tế bào để lựa chọn thời gian sinh trưởng môi trường nuôi cấy tối ưu Bảng Thành phần môi trường BBM TT 10 Hoá chất NaNO3 MgSO4.7H2O KH2PO4 NaCl K2HPO4 CaCl2.2H2O TE- Solution Dung dịch EDTA gốc Dung dịch Fe Nước cất Khối lượng 0,25 g 0,075 g 0,175 g 0,025 g 0,075 g 0,025g ml ml ml 997 ml Bảng Thành phần môi trường BG11 TT Hóa chất Hàm lượng/L K2HPO4.3H2O 0,04 g NaNO3 0,15 g MgSO4.7H2O 0,075 g Acid citric 0,006 g CaCl2.2H2O 0,036 g Na2EDTA 0,001 g Na2CO3 0,02 g Feric amoni nitrat 0,006 g Vi lượng A5 ml 10 Nước cất 999 ml Bảng Thành phần môi trường C TT 10 Hóa chất Ca(NO3)2.4H2O KNO3 -Na2glicerolphosphate.5H2O MgSO4.7H2O PIV metals Trishydroximethyl aminoethanol B12 H B1 Nước cất Hàm lượng 15 mg 10 mg mg mg 0,3 ml 50 mg 0,01 g 0,01 g g 99,7 ml 2.2.5 Phương pháp đếm tế bào buồng đếm Neubauer Số lượng tế bào vi tảo đếm buồng đếm Neubauer tính theo công thức: 456 D = X.(a/64).10-6 225(08): 454 - 460 (1) Trong đó: D: số lượng tế bào (số tế bào /ml), a: số tế bào trung bình buồng đếm X: hệ số pha loãng 2.2.6 Phương pháp nhân nuôi thu sinh khối vi tảo Vi tảo nhân nuôi thu sinh sau: ml mẫu giống cấy chuyển vào bình nhân giống 250 ml, sau cấy chuyển vào bình tăng sinh khối tích lít, cấy chuyển vào bình tăng sinh khối tích lít, lít 20 lít Sau 28 ngày tiến hành làm lắng thu sinh khối vi tảo 2.2.7 Xác định khối lượng tươi khối lượng khô Tế bào đếm thường xuyên ngày/lần, sinh khối vi tảo thu vào giai đoạn đầu pha cân Sau ly tâm sinh khối tảo thu (sau để lắng) với tốc độ 5000 vòng/phút 10 phút rửa nước cất Sấy khô mẫu 60-70o C khoảng 48 h Khối lượng tươi: mg (sinh khối tảo)/l (dung dịch nuôi cấy) Khối lượng khô: mg (sinh khối tảo khô)/l (dung dịch nuôi cấy) 2.2.8 Xác định thành phần axit béo loài vi tảo nghiên cứu [6] Mẫu nuôi sinh khối vi tảo li tâm 10000 vòng/phút, 15 phút, 2oC để thu sinh khối tươi Sau xử lí metanol/chlorofooc (1:1, v/v) để phá vỡ thành tế bào Dịch chiết thu cô quay chân không để thu cặn chiết Cặn chiết hòa tan metanol: acid sulfuric (95:5, v/v) đun 80oC h để este hóa axit béo Các axit béo sau methyl este hóa chiết lần với ml n-hexan Hỗn hợp metyl este axit béo phân tích máy sắc ký khí (GC, gas chromatography, Finnigan Trace GC, cột BPX70 (50 M) Các axit béo xác định cách so sánh thời gian lưu (retention time) với dung dịch chất chuẩn định lượng cách so sánh peak với chuẩn http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 2.2.9 Xác định hàm lượng carbohydrate loài vi tảo nghiên cứu [2] Mẫu khô thủy phân dung dịch 2,5 N HCl Sau mẫu pha loãng lần ly tâm 4000 v/phút 15 phút Dung dịch mẫu phân tích theo phương pháp phenol – axit sulfuric, sử dụng 5% phenol, 96% H2SO4 với glucose làm chất chuẩn đo bước sóng 490 nm 2.2.10 Xác định hàm lượng sắc tố Hàm lượng sắc tố xác định theo phương pháp Jeffrey [7] 200 mg mẫu tươi ngâm acetone 90% Sau ngâm bể siêu âm khoảng 5-7 phút Quá trình chiết sắc tố diễn vịng h để qua đêm, sau lấy ly tâm 5000 vòng/phút thời gian 10 phút Dung dịch sau ly tâm đo bước sóng 750 nm, 664 nm, 647 nm, 630 nm 480 nm 2.2.11 Phương pháp xử lý số liệu 225(08): 454 - 460 khoảng 5-7 ngày, khuẩn lạc xuất hiện, quan sát tách khuẩn lạc kính hiển vi Olympus với độ phóng đại 10 lần Kết chúng tơi thu 12 lồi vi tảo ứng với 12 khuẩn lạc khác tiến hành định danh theo phương pháp hình thái Dựa theo khóa phân loại Shirora (1966), Dương Đức Tiến Võ Hành (1997) mười hai loài vi tảo Ankistrodesmus obtusus, Ankistrodesmus gracilis, Ankistrodesmus longissimus, Chlorella vulgaris, Chlorella ellipsodea, Oocystis sp., Scenedesmus obliqous, Scenedesmus denticulatus, Golenkinia radiata, Chlorococcum sp., Pleodorina sp Fristchiella tuberose 12 loài vi tảo thuộc chi Ankistrodesmus, Chlorella, Oocytis, Scenedesmus, Golenkinia, Chlorocococum, Pleodorina, Fritschiella Các loài khiết lưu giữ môi trường thạch nghiêng bảo quản 4oC Sau chúng tơi chọn lồi Chlorella ellipsoidea để tiếp tục nghiên cứu Các số liệu sau thu thập xử lý phần mềm Microsoft Excel Kết thảo luận 3.1 Phân lập khiết loài vi tảo Mẫu tự nhiên lấy cần làm tăng mật độ tế bào để phục vụ nghiên cứu Kết thực nghiệm cho thấy nuôi vi tảo lọ penicillin nhỏ thích hợp cho q trình làm giàu mẫu (hình 1) Sau 4-6 ngày thấy vi tảo xuất Hình Hình dạng khuẩn lạc lồi vi tảo Chlorella ellipsoidea đĩa thạch 3.2 Khảo sát thời gian mơi trường ni cấy lồi Chlorella ellipsoidea Lồi tảo Chlorella ellipsoidea ni cấy mơi trường BG11, C BBM 32 ngày tiến hành xác định mật độ tế bào sau ngày nuôi Sau xác định mật độ tế bào ngày/ lần Hình Lọ penicilin làm giàu mẫu Quá trình phân lập khiết vi tảo thực đĩa thạch, chủng vi tảo cấy trải môi trường đặc BG11 Sau http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Kết bảng cho thấy, loài C ellipsoidea sinh trưởng phát triển tốt môi trường dinh dưỡng, mật độ tế bào đạt tối đa vào khoảng ngày nuôi cấy thứ 24 đến 28, mật độ tế bào cao gấp nhiều lần so với cấy mẫu (khoảng 36 lần) Mật độ vi tảo 457 Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN đạt cao mơi trường BG11 sau 28 (đạt 58,35×106 tế bào/ml), gấp 40 lần so với mật độ ban đầu Trong mơi trường C, lồi C ellipsoidea có mật độ thấp so với hai môi trường BG11 BBM (đạt 40,20×106 tế bào/m) sau 26 ngày ni cấy Như vậy, lồi C ellipsoidea có khả sinh trưởng tốt môi trường BG11 Bảng Tốc độ phát triển lồi vi tảo C ellipsoidea mơi trường BBM, BG11 C khoảng thời gian Thời gian nuôi (ngày) 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 Mật độ tế bào vi tảo C.ellipsoidea (x106 tế bào) môi trường BG11 C BBM 1,35±0,01 1,3±0,02 2,05±0,01 3,35±0,01 4,95±0,01 6,3±0,02 8,2±0,02 10,5±0,01 15,45±0,1 21,15±0,02 27,15±0,01 35,0±0,03 43,8±0,01 53,05±0,02 58,35±0,01 55,3±0,05 52,4±0,05 1,35±0,01 1,35±0,1 1,75±0,01 2,85±0,01 3,40±0,01 4,2±0,02 5,0±0,01 7,4±0,03 10,80±0,01 14,50±0,03 19,05±0,01 26,35±0,04 34,65±0,01 40,20±0,01 37,45±0,01 34,8±0,1 33,55±0,05 1,35±0,01 1,25±0,02 1,95±0,01 3,1±0,01 3,75±0,01 5,25±0,2 6,35±0,01 9,0±0,02 13,15±0,01 17,45±0,01 21,65±0,01 29,9±0,02 38,80±0,1 44,65±0,01 48,35±0,01 43,85±0,03 41,55±0,04 Như vậy, môi trường BG11 sử dụng để nuôi cấy thu sinh khối loài vi tảo lục C ellipsoidea thời gian 28 ngày để phục vụ cho nghiên cứu 3.3 Kết nhân ni sinh khối lồi C ellipsoidea quy mơ lớn Hình Ni sinh khối vi tảo bình lít Lượng sinh khối vi tảo tươi xử lý qua trình chiết vi tảo Kết thu sinh 458 225(08): 454 - 460 khối, khối lượng tươi khối lượng khô loài C ellipsoidea đạt 4,12 ± 0,005 mg/l 0,79 ± 0,001 mg/l Như khối lượng vật chất khơ lồi C.ellipsoide chiếm khoảng 19,17% so với khối lượng tươi (Hình 3) 3.4 Thành phần axit béo lồi C ellipsoidea Chúng tơi tiến hành chiết mẫu tảo lồi C ellipsoidea, sau este hóa phân tích máy sắc kí khí Các axit béo xác định cách so sánh peak với chuẩn Hình Sắc kí đồ thành phần axit béo loài Chlorella ellipsoidea Bảng Thành phần axit béo loài C ellipsoidea TT 10 11 12 Axit béo 14:0 15:0 16:0 16:1n-7 17:0 17:1n-7 18:0 18:1n-9 18:2n-6-t 18:3n-3 19:0 20:0 Tên thường gọi Myristic Convolvulinolic Palmitic Palmitoleic Margric Heptadecenoic Stearic Oleic Linoleic Anpha-Linolenic Isoarachidic Arachidic Tỷ lệ % 2,146 ± 0,001 17,815 ± 0,05 1,288 ± 0,001 1,67 ± 0,001 2,14 ± 0,05 7,354 ± 0,01 15,516 ± 0,03 13,867 ± 0,05 17,457 ± 0,05 3,284 ± 0,001 - Sắc kí đồ hình cho thấy, lồi C ellipsoidea có thành phần axit thuộc loại alpha-linolenic (18:3n-3) có tỷ lệ cao nhất, tiếp đến oleic (18:1n-9) linoleic (18:2n-6-t) Ngoài axit palmitic (16:0) stearic (18:0) chiếm tỉ lệ đáng kể Trong axit béo không no mạch dài không thấy rõ Kết nghiên cứu phù hợp với đặc điểm thành phần axit béo loài tảo lục http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN với axit C16 C18 chiếm đa số axit C20 C22 chiếm tỉ lệ nhỏ [8] Thành phần axit béo lồi C ellipsoidea đa dạng Có axit béo no chiếm tỉ lệ 50% axit béo khơng no chiếm tỉ lệ 50% Trong axit béo no chủ yếu palmitic (16:0), axit béo không no chủ yếu axit béo không no đa nối đôi linoleic (18:2n-6-t) alpha-linolenic (18:3n-3) Vi tảo C ellipsoidea khơng có axit docosahecxaenoic (DHA), eicosapentaenoic (EPA), arachidonic (AA) tỉ lệ axit béo cần thiết (EFA) bao gồm axit linoleic alpha-linolenic lại cao, chiếm tới 31,32% (Bảng 5) Tỉ lệ loài C ellipsoidea cao loài C vulgaris (25,87%) [9] Kết nghiên cứu phù hợp với nhiều nhận định trước tảo lục thiếu có EPA DHA lại có hàm lượng EFA cao Những axit béo tiền chất axit dông ω-3 ω-6 AA (20:4 ω-6) EPA (20:5 ω-6); DHA (22:6 ω-3) AA EPA cịn có vai trò làm tiền chất tổng hợp nên loạt chất có hoạt tính sinh học cao loại protaglandin, leukotriene, thromboxane Mặt khác EFA có vai trị quan trọng với phát triển não bộ, hàm lượng LA tiêu chuẩn để đánh giá giá trị sinh học chất béo Với hàm lượng EFA cao, lồi C ellipsoidea dùng để kết hợp với loài vi tảo silic giàu EPA, DHA để tạo nguồn thức ăn giàu dinh dưỡng cho động vật nuôi trồng thủy sản [10] 3.5 Hàm lượng carbohydrate loài vi tảo C ellipsoidea Hàm lượng carbohydrate loài vi tảo C ellipsoidea đạt 13,261%, hàm lượng carbohydrate loài C ellipsoidea cao loài Navicula tuscula, Nannochloropsis oculata, Chlorella vulgaris, Chaetoceros muelleri, Amphiprora alata, Chlorella sllipsoide, thấp loài Chlorococcum sp Từ biểu đồ cịn thấy hàm lượng carbohydrate lồi tảo silic khơng cao, http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 225(08): 454 - 460 kết hợp với kết thành phần axit béo, từ phối trộn tảo lục tảo silic phần ăn loài động vật nhằm bổ sung đầy đủ chất dinh dưỡng 3.6 Hàm lượng sắc tố loài vi tảo C ellipsoidea Thành phần sắc tố loài C ellipsoidea chlorophyll a,b carotenoid Hàm lượng chlorophyll a cao đạt 5,86; tiếp đến carotenoid 3,3 thấp chlorophyll b (0,85) Chlorophyll b Chlorella ellipsoidea tương đối thấp Điều thu sinh khối vào cuối pha log, lúc số lượng tế bào cao hàm lượng nitrat giảm nên hàm lượng chlorophyll b giảm [9] Mặt khác, hàm lượng chlorophyll thay đổi nuôi điều kiện khác, phần chế độ ánh sáng khác Vì vậy, tùy mục đích nghiên cứu nhằm ứng dụng thực tiễn mà người ta tiến hành thu sinh khối thời điểm khác Ngồi chlorophyll, carotenoid sắc tố quan trọng tìm thấy C ellipsoidea Hàm lượng caroteinoid C ellipsoidea đạt mức trung bình Hiện nay, thị trường có hàng loạt chế phẩm bổ sung carotenoid sản xuất chuyên biệt cho người Những carotenoid chế phẩm dinh dưỡng hấp thu tốt carotenoid thực phẩm tự nhiên Lý carotenoid thực phẩm tự nhiên bị giữ lưới sợi xơ khó tiêu hóa Việc nấu chín thức ăn phá vỡ lưới sợi này, giúp tăng cường hấp thu carotenoid, làm hỏng Vì vậy, việc chiết xuất carotenoid từ vi tảo nhằm tạo chế phẩm dinh dưỡng hướng nghiên cứu tạo nhiều ứng dụng thực tiễn Các chủng vi tảo nghiên cứu có thành phần axit béo, carbohydrate sắc tố đặc trưng cho loài Việc kết hợp loài vi tảo tạo nguồn thức ăn tương đối đầy đủ thành phần dinh dưỡng với tỷ lệ cao axit béo 459 Nguyễn Thị Thanh Nhàn Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN chưa no đa nối đôi (DHA, EPA) đồng thời cung cấp lượng protein carbohydrate dồi cho chuyển hoá quan trọng sinh vật Cùng với đa dạng kích thước, biết phối hợp hiệu loài vi tảo tạo nguồn thức ăn giàu dinh dưỡng nuôi thuỷ sản giai đoạn ấu trùng cá thể bố mẹ nuôi chung bể Kết luận Nghiên cứu phân lập 12 chủng vi tảo từ VQG Xuân Thủy xếp vào chi Loài C ellipsoidea lựa chọn khảo sát sinh trưởng tốt môi trường BG11 sau 28 ngày ni cấy Lồi C ellipsoidea có thành phần dinh dưỡng phong phú gồm axit béo đặc thù lồi tảo lục, axit béo khơng no loại axit linoleic axit anphalinoleic đạt 13,867% 17,457% Hàm lượng carbohydrate đạt giá trị trung bình Có sắc tố quan trọng chlorophyll a, chlorophyll b caroteinoid TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES [1] M J Abada, and P Bermejo, “Bioactive natural products from marine sources”, Attaur-Rahman (Ed.) Studies in Natural Products Chemistry, vol 25, pp 638-775, 2001 [2] M R Brown, S W Jeffrey, J K Volkman, and G A Dunstan, “Nutritional properties of microalgae for mariculture,” CSIRO Diuision of Marine Research, GPO Box 1538, Hobart, Tas 7001, Australia, Aquaculture, vol 151, pp 315-333, 1997 [3] S Makato, M Katsumi, O Aikio, T Yoshichika, A Tokujiro, and N Masayasu, 460 225(08): 454 - 460 “Development of a solid medium for growth and isolation of axenic microcystis strains (Cyanobacteria),” Apply Environ Microbiol, vol 55, no 10, pp 2569-2571, 1989 [4] A Shirora, The plankton of south Viet Nam Fresh Water and Marine Plankton Overseas Technical Cooperation Agency Japan, 1966 [5] D T Duong, and H Vo, Vietnam fresh algae - taxonomy of order chlorococcales Agricultural publisher, 1997 [6] I A Guschina, and J L Harwood, “Lipids and lipid metabolismin eukaryoticalgae,” Progress in lipid research, vol 2006, pp 160186, 2006 [7] S W Jeffrey, and G F Humphrey, “New spectrophotometric equations for determining chlorophylls a, b, c1and c2 in higher plants, algae and natural phytoplankton,” Biochem Physiol Pjlunz., vol 167, pp 191-194, 1975 [8] J K Volkman, S W Jeffrey, P D Nichols, G I Rogers, and C D Garland, “Fatty acid and lipit composition of 10 species of microalgae used in mariculture,” Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, vol 128, pp 219-240, 1989 [9] T Q H Nguyen, “Influence of some environmental factors for the growth and nutrient composition of microalgae speciesAmphiprora alata, Chaetoceros muelleri, Chlorella vulgaris, Nannochloropsis oculata, Navicula tuscula isolate from mangrove forest Giao Thuy district, Nam Dinh,” M.S thesis, Ha Noi national university of education, 2010 [10] M Piorreck, and P Pohl, “Formation of biomass, total protein, chlorophylls, lipids and fatty acids in green and blue- green algae during one growth phase”, vol 23, pp 217223,1984 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn ... cứu ? ?Phân lập xác định thành phần dinh dưỡng vi tảo Chlorella elipsoidea vườn quốc gia Xuân Thủy? ?? Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Các loài vi tảo lục phân lập VQG Xuân. .. loài vi tảo tạo nguồn thức ăn giàu dinh dưỡng nuôi thuỷ sản giai đoạn ấu trùng cá thể bố mẹ nuôi chung bể Kết luận Nghiên cứu phân lập 12 chủng vi tảo từ VQG Xuân Thủy xếp vào chi Loài C ellipsoidea. .. sinh khối vi tảo phát triển, tiến hành quan sát kiểm tra độ tinh mẫu vi tảo phân lập 2.2.3 Phương pháp phân loại theo hình thái Các chủng vi tảo định danh dựa theo khóa phân loại tài liệu định loại