Kỹ thuật tìm E6/E7 mRNA trong mẫu thử HPV cổ tử cung (APTIMA® HPV Assay): Một xét nghiệm nhiều triển vọng

Nhìn chung, xét nghiệm E6/E7 mRNA trong mẫu th HPV cổ tử cung đã được cho thấy đây là một công cụ hữu ích trong lĩnh vực phòng ngừa ung thư cổ tử cung 8.

TỔNG QUAN Y VĂN Kỹ thuật tìm E6/E7 mRNA mẫu thử HPV cổ tử cung (APTIMA® HPV Assay): Một xét nghiệm nhiều triển vọng Huỳnh Xuân Nghiêm*, Huỳnh Giang Châu** Đại cương Ung thư c t cung nh ng bệnh ung thư thương gặp nh t n tồn th gi i Có ng 530.000 trư ng h p m c m i 275.000 trư ng h p t vong hàng năm.1 Hơn 40 năm qua, để gi m bệnh su t t su t ung thư c t cung, hầu h t nư c phát triển đưa chương trình tầm sốt ung thư c t cung dựa việc kiểm tra ph t t bào c t cung Tuy nhiên, ph t t bào c t cung cho th y hạn ch độ nhạy th p Sự ti n khoa học v i hiểu bi t diễn ti n tự nhiên ung thư c t cung gần g i ý cho có thêm phương pháp ti p cận khác Nhiễm HPV (human papilloma virus) týp nguy cao kéo dài đư c công nhận nguyên nhân ung thư c t cung.2 Tuy nhiên, nhiễm HPV týp nguy cao ph bi n dân số nói chung hầu h t nhiễm thoáng qua, thoái lui tự nhiên kho ng th i gian từ 18-24 tháng Trên thực t , giá trị tiên đoán dương xét nghiệm DNA HPV týp nguy cao dương tính th p (chỉ có tỷ lệ nhỏ ph n có k t qu dương tính v i HPV-DNA týp nguy cao có t n thương CIN2+ vào th i điểm làm xét nghiệm vài năm ti p theo), 10% số ngư i có xét nghiệm HPVDNA dương tính cần đư c can thiệp thêm phương pháp khác *BV Hùng Vương DĐ: 0908135572 Email: nghiemsk@yahoo.com.vn ** BV Hùng Vương DĐ: 0989617177 Email: drlinhgiangchau@gmail.com Năm 2008 xét nghiệm APTIMA® HPV Assay đ i, giúp xác định nh ng trư ng h p nhiễm HPV nguy cao cách tập trung nh m vào E6/E7 mRNA Nhiều nghiên cứu cho th y E6/E7 mRNA diện HPV gây bi n đ i t bào nồng độ E6/E7 mRNA tăng diễn ti n bệnh nặng Đ n năm 2011, C c Qu n lý Thực phẩm Dư c phẩm Hoa Kỳ (FDA) đồng ý s d ng xét nghiệm ph n 30 tu i tr lên ph n từ 21 đ n 29 tu i có k t qu Pap’s ASC-US để b sung cho quy trình theo dõi, chẩn đốn điều trị Việt Nam m i có Khoa Gi i Phẫu Bệnh-T Bào-Di Truyền (GPB-TBDT) bệnh viện Hùng Vương ti n hành xây dựng quy trình để triển khai kỹ thuật nhằm có thêm vũ khí để tầm sốt ung thư c t cung tiên lư ng kh dẫn đ n ung thư c t cung để s m có gi i pháp cho bệnh nhân Kỹ thuật tìm E6/E7 mRNA mẫu thử HPV cổ tử cung (APTIMA® HPV Assay) Xét nghiệm APTIMA HPV (Hologic, San Diego, CA) xét nghiệm dùng đoạn mồi axit nucleic khu ch đại nhằm m c đích phát mRNA E6/E7 14 nhóm HPV nguy cao (16/18/31/33/35/39/45/ 51/52/56/58/59/66/68) Có ba thành phần ống nghiệm: b t đối tư ng đích, khu ch đại đối tư ng đích thơng qua q trình phiên mã ngư c sau phát s n phẩm khu ch đại Quá trình phiên mã ngư c đư c thực nh men là: reverse transcriptase (RT) RNA polymerase (Hình 1) 11 THỜI SỰ Y HỌC, Chuyên đề SỨC KHỎE SINH SẢN, Tập 17, Số 2, Tháng – 2017 Hình Khuếch đại đối tượng đích thơng qua q trình phiên mã ngược (Nguồn: Kacian DL and Fultz TJ (1995) ) Men reverse transcriptase đư c s d ng để tạo b n DNA từ chuỗi mRNA đối tư ng đích, có chứa đoạn promoter cho men RNA polymerase Nh mà men RNA polymerase s n xu t nhiều b n mRNA từ b n DNA.4 Các phiên b n khu ch đại (amplicon) đư c phát phương pháp lai s d ng đoạn mồi axit nucleic đơn s i có g n ch t phát quang b sung v i amplicon đích Ch t th chọn lọc phân biệt đư c đoạn mồi đư c lai hoá nh ng đoạn mồi chưa đư c lai hoá cách b t hoạt đoạn gen đư c đánh d u đoạn mồi Trong bư c phát hiện, ánh sáng phát từ đoạn gen đư c đánh d u RNA/DNA lai đư c đo tín hiệu photon quang k đư c xem đơn vị ánh sáng tương đối.3 Xét nghiệm APTIMA thực định týp HPV 16 HPV 18/45 cần kít APTIMA 16, 18/45 riêng biệt Chỉ định  Ph n từ 21 tu i đ n 29 tu i có k t qu Pap t bào gai khơng điển hình 12 có ý nghĩa chưa xác định đư c (ASC-US)  Ph n từ 30 tu i đ n 65 tu i Mẫu bệnh phẩm  Các bác sỹ s n ph khoa đư c hu n luyện l y bệnh phẩm dịch c t cung bệnh nhân phòng khám ph khoa, cho vào dung dịch cố định chuyên d ng (có thể thực mẫu làm Thinprep)  Chuyển mẫu xét nghiệm phi u yêu cầu xét nghiệm đ n phòng ti p nhận bệnh phẩm khoa GPB-TB-DT, Bệnh viện Hùng Vương Kết triển khai thí điểm bệnh viện Hùng Vương Phương pháp nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu: xác định mức độ tương h p gi a k t qu xét nghiệm tìm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung (APTIMA® HPV Assay)” v i k t qu ph t t bào c t cung k t qu gi i phẫu bệnh Thiết kế nghiên cứu: báo cáo loạt ca TỔNG QUAN Y VĂN Địa điểm nghiên cứu: khoa GPB-TB-DT Bệnh viện Hùng Vương  Không ghi nhận đư c k t qu Pap năm liên ti p đối v i trư ng h p Pap bình thư ng  Các trư ng h p bị th t lạc mẫu Dân số chọn mẫu: nh ng trư ng h p có k t qu Pap nhúng dịch (Thinprep) đư c thực từ tháng 01/2017 Phân loại k t qu t bào học theo Bethesda 2014.6 Phân loại k t qu gi i phẫu bệnh (GPB) theo WHO 2014.7 Phương pháp tiến hành  L y d liệu k t qu PAP Thinprep, soi c t cung, gi i phẫu bệnh thông tin bệnh nhân liên quan  L y mẫu lọ Thinprep ti n hành làm xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung (APTIMA® HPV Assay)  Phân tích k t qu Tiêu chuẩn vàng:  Dương thật: có chứng GPB là: LSIL (condylome, CIN 1), HSIL (CIN 2, CIN 3), Carcinom t bào gai (hoặc n)  Âm thật: có chứng GPB mẫu sinh thi t c t cung khơng có t n thương tiền ung thư hay ung thư, q trình theo dõi có c lần liên ti p PAP(-) năm Kết ban đầu Qua kh o sát tìm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung (APTIMA® HPV Assay) 30 ca khám tầm soát ung thư CTC Bệnh viện Hùng Vương từ tháng năm 2017, chúng tơi có nh ng k t luận Tiêu chuẩn chọn mẫu  T t c nh ng trư ng h p có thực tầm sốt c t cung (CTC) PAP Thinprep từ ngày 01/2017:  Đối v i trư ng h p k t qu bình thư ng, chúng tơi chọn nh ng ca có lần k t qu Pap liên ti p bình thư ng  Đối v i nh ng trư ng h p Pap b t thư ng (ASC-US, LSIL, ASC-H HSIL, ung thư) gọi bệnh nhân vào ti n hành soi c t cung b m sinh thi t n u soi c t cung b t thư ng  Trư ng h p Pap ASC-US LSIL, n u soi c t cung không th y b t thư ng theo dõi ti p năm ban đầu sau (b ng 1): Tỷ lệ phát nhiễm HPV týp nguy cao trư ng h p có Pap Thinprep bình thư ng, ASC-US, LSIL ASC-H+ lần lư c là: 45,45%, 40%, 60% 100% (B ng 2,3) Bảng Phân phối theo nơi cư trú tuổi Đặc điểm n % TP.HCM 11 36.7 Tỉnh 19 63,3 21-29 13,4 30-39 10 53,3 ≥ 40 16 63,3 Tuổi TB 41,7 ± 12,3 Địa Tuổi Tiêu chuẩn loại trừ  Không liên lạc đư c bệnh nhân k t qu Pap b t thư ng Tổng 30 100% Bảng Kết Pap Thinprep theo Bethesda 2014 n = 30 Bình thường ASC-US LSIL ASC-H HSIL Số ca K TB gai K tuyến 11 (36,37%) (16,67%) 10 ( 33,33%) (6,665%) (0%) (6,665%) (0%) HPV+ (45,45%) (40%) (60%) (100%) (0%) (100%) (0%) HPV- (54,55%) (60%) (40%) (0%) (0%) (0%) (0%) 13 THỜI SỰ Y HỌC, Chuyên đề SỨC KHỎE SINH SẢN, Tập 17, Số 2, Tháng – 2017 Bảng 3: Kết xét nghiệm HPV kết định týp Tổng số Lành tính ASC-US LSIL ASC-H K TB gai HPV 16+ (1/18 = 5,56%) (1/1 = 100%) (00%) (00%) (00%) (00%) HPV 18/45+ (1/18 = 5,56%) (00%) (00%) (00%) 0(00%) (1/1 = 100%) HPV 16,18/45+ (2/18 = 11,12%) (00%) 0(00%) (00%) (00%) (1/2 = 50%) hrHPV khác+ 16 (16/18 = 77,76%) (5/16 = 31,25%) (2/16 = 12,5%) (6/16 = 37,5%) (2/16 = 12,5%) (1/16 = 6,25%) hrHPV+ 18 (60%) (6/18 = 33,335%) (2/18 = 11,11%) (6/18 = 33,335%) (2/18 = 11,11%) (2/18 = 11,11%) hrHPV- 12 (40%) (5/12 = 41,66%) (25,01%) (4/12 = 33,33%) 0(00%) 0(00%) Tổng số 30 (100%) 11 (11/30 = 36,67%) (5/30 = 16,67%) 10 (10/30 = 33,33%) (2/30 = 6,665%) (2/30 = 6,665%) Bàn luận Tuy k t qu 30 trư ng h p chưa đại diện dân số mẫu nhận th y rằng: Việc phát HPV týp nguy cao kỹ thuật tìm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung (APTIMA® HPV Assay) nh ng trư ng h p chưa có biểu lâm sàng (Pap âm tính) kh tiên lư ng diễn ti n bệnh, giúp cho có k hoạch theo dõi, hư ng x trí phù h p cho bệnh nhân Tỷ lệ phát HPV týp nguy cao tăng theo mức độ t n thương Pap, từ 45,45% đối v i Pap Thinprep bình thư ng đ n 100% trư ng h p đối v i Pap Thinprep từ ASC-H tr lên Cỡ mẫu nhỏ nên chưa ph n ánh đầy đũ nh ng m c tiêu cần nghiên cứu Kết luận Nhìn chung, xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung đư c cho th y cơng c h u ích lĩnh vực phịng ngừa ung thư c t cung Các chứng cho th y kh xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th 14 HPV c t cung triển khai nhiều s khám ch a bệnh khác để tầm soát t n thương tiền ung thư c t cung.9,10 So v i xét nghiệm HPV DNA týp nguy cao, xét nghiệm E6/E7 mRNA cho th y có c i thiện độ đặc hiệu r t tốt, giá trị tiên đốn dương cao nh ng t n thương c t cung từ HSIL tr lên (CIN2 +).11 Mặc dù thi u th nghiệm có đối chứng có cỡ mẫu l n, v i d liệu ban đầu cho th y kh k t h p tốt xét nghiệm mRNA v i xét nghiệm t bào học tầm soát ung thư c t cung Xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung đóng vai trị quan trọng việc xác định nh ng bi n đ i thoáng qua nhiễm HPV v i t n thương có kh ti n triển nặng Do đó, xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung giúp làm gi m gánh nặng tâm lý liên quan đ n xét nghiệm HPV DNA.12 Tóm lại, từ b t đầu kỷ nguyên sinh học phân t phòng ngừa ung thư c t cung, nhiều kỹ thuật ti n đư c thực nhằm kh c ph c nh ng hạn ch TỔNG QUAN Y VĂN t bào c t cung Xét nghiệm E6/E7 mRNA phương thức m i, có giá trị, góp phần làm tăng hy vọng loại bỏ đư c ung thư c t cung xâm l n ph n tương lai gần Tài liệu tham khảo JemalA, BrayF, CenterM, etal (2011) “Global cancer statistics”, CA Cancer J Clin, Vol (61), pp 69-90 Tommasino M (2014) “The humanpapilloma virus family and its role in carcinogenesis”, Semin Cancer Bio, pp l2613–12621 Arnold LJ et al (1989) “Assay formats involving acridinium-ester-labeled DNA probes”, Clin Chem, Vol (35), pp 1588–1594 Kacian DL and Fultz TJ (1995) Nucleic acid sequence amplification methods, U.S Patent, pp 5399-5491 Practice Bulletin No 168 Summary: “Cervical Cancer Screening and Prevention”, Obstetrics & Gynecology: October 2016 - Volume 128 Issue - p 923–925 Nayar R, Wilbur DC (2015) The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology, Springer, pp 12-312 Kurman RJ, Carcangiu ML et al (2014) WHO classification of tumours of female reproductive organs, International Agency for Research on Cancer, Lyon, pp 169-206 Oliveira A,Verdasca N and Pista  (2013) “Use of the NucliSENS EasyQ HPV assay in the management of cervical intraepithelial neoplasia”, J Med Virol, Vol 85(7), pp 1235– 1241 Benevolo M et al (2011) “Sensitivity, specificity, and clinical value of human papillomavirus (HPV) E6/E7 mRNA assay as a triage test for cervical cytology and HPV DNA test”, J Clin Microbiol , Vol 49(7), pp 2643– 2650 10 Zappacosta R et al (2015) “Role of E6/E7 mRNA test in the diagnostic algorithm of HPVpositive patients showing ASCUS and LSIL: clinical and economic implications in a publicly financed healthcare system”, Expert Rev Mol Diagn, Vol 15(1), pp 137–150 11 Argyri E et al (2013) “E6/E7mRNA expression of high-risk HPV types in 849 Greek women”, Anticancer Res, Vol 33(9), pp 4007–4011 12 Möckel J et al (2011) “Human papillomavirus E6/E7 mRNA testing has higher specificity than liquid-based DNA testing in the evaluation of cervical intraepithelial neoplasia”, Anal Quant Cytol Histol, Vol 33(6), pp 311–315 15 ... chung, xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung đư c cho th y công c h u ích lĩnh vực phịng ngừa ung thư c t cung Các chứng cho th y kh xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th 14 HPV c t cung triển khai nhiều. .. u th nghiệm có đối chứng có cỡ mẫu l n, v i d liệu ban đầu cho th y kh k t h p tốt xét nghiệm mRNA v i xét nghiệm t bào học tầm soát ung thư c t cung Xét nghiệm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung. .. Tuy k t qu 30 trư ng h p chưa đại diện dân số mẫu nhận th y rằng: Việc phát HPV týp nguy cao kỹ thuật tìm E6/E7 mRNA mẫu th HPV c t cung (APTIMA® HPV Assay) nh ng trư ng h p chưa có biểu lâm sàng