Nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa 1%

Bỏng là một bệnh ngoại khoa khá quan trọng Để điều trị bỏng các chế phẩm của sulfadiazin bạc có nhiều ưu điểm đã được chứng minh trong lâm sàng. Viêc cung ứng thuốc có khó khăn.

Nguyễn tuấn quang nghiên cứu thành phần hoá học bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae) Khoá luận tốt nghiệp dược sỹ đại học Hướng dẫn khoa học: TS Triệu Duy Điệt - Khoa Dược liệu - Bộ môn DHQS Hà Nội - 2003 Nội dung báo cáo gồm: - Đặt vấn đề - tổng quan - nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu - Kết bàn luận - Kết luận kiến nghị Đặt vấn đề Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L Họ Đuôi công: Plumbaginaceae) Theo kinh nghiệm, nhân dân sử dụng để chữa bệnh da, vết thương, vết bỏng với tác dụng bật kháng khuẩn chống viêm Theo tài liệu Bạch hoa xà có chứa nhóm quinon chủ yếu chất Plumbagin Để nghiên cứu đầy đủ thành phần hoá học chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học Bạch hoa xà" với mục tiêu: - Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận - Xác định hàm lượng Plumbagin phận khác tổng quan 1.1 Về BHX (Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae) - Đặc điểm thực vật Hình 1.1: Cây Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L.) - Phân bố, thu hái, chế biến - Thành phần hoá học - Công dụng BHX theo YHCT theo KN dân gian *Theo YHCT: BHX có vị cay, tính nóng, có tác dụng thông kinh hoạt huyết, sát khuẩn, tiêu viêm * nước ta: ông cha ta dùng BHX chữa mụn nhọt, hắc lào, chữa chai chân, sắc nước rửa vết thương, vết loét - Tác dụng dược lý ứng dụng lâm sàng BHX 1.2 ChÊt Plumbagin 1.2.1 CÊu t¹o:C11H8O3 O CH3 HO O Tªn khoa häc: methyl - 5hydroxy - 1,4 naphtoquinon 1.2.2 Nguån gèc ph©n lËp [0] CrO3/CH3COOH 1.2.3 TÝnh chÊt vËt lý: 1.2.4 TÝnh chÊt ho¸ häc: - Plumbagin bị khử hoá SO2 tạo thành di phenol; O OH CH3 CH3 SO2 HO O HO OH - Acetyl hoá Plumbagin tạo thành dẫn xuất acetyl có màu vàng, t0 nóng chảy: 117 - 1180C O O CH3 HO O CH3 CH3COOH H3C-C-O O O - Tan dung dịch kiềm cho màu đỏ tạo thành ion phenolat - Cho màu đỏ với muối sắt III clorid nguyên vật liệu phương pháp NC 2.1 Nguyên vật liệu - Cây Bạch hoa xà - Dung môi, hoá chÊt, thc thư - Dơng thÝ nghiƯm 2.2 Ph­¬ng pháp nghiên cứu 2.2.1 Sơ xác định nhóm hoạt chất: phản ứng hoá học ống nghiệm (theo phương pháp phân tích khoa dược liệu - Trường đại học dược Rumania) - Dịch chiết ether: flavonoid, quinon, alcaloid, tinh dầu, acid hữu cơ, phytosterol - Dịch chiết cồn: quinon, flavonoid, alcaloid, acid hữu cơ, sterol, ®­êng khư, tanin, anthocynosid - DÞch chiÕt n­íc acid: alcaloid, tanin, đường khử, saponin 2.2.2 Định tính nhóm hợp chất SKLM Lấy khoảng 1g dược liệu phận khác (rễ, thân, lá) đem chiÕt víi cån 900, lÊy dÞch chiÕt chÊm SK: - B¶n máng dïng Silicagel G (cđa viƯn KiĨm nghiƯm) chÕ tạo thành mỏng có kích thước 5ì20 cm, hoạt hoá 110oC - Dung môi chạy SK víi c¸c hƯ: I) Benzen - Methanol - N­íc ( 15- 1- 4) II) Ether dÇu - Ethyl acetat (7 - 3) III) Benzen - Methanol - Acid acetic ( 45-8-3 ) - Thc thư hiƯn mµu: KOH 10%/cån 2.2.3 Chiết xuất phân nhóm hoạt chất quinon 2Chiết xuất: Dùng dung môi ethanol 90o .Phân lập: Dùng phương pháp SK lớp chế hoá 2.2.4 Sơ nhận dạng Plumbagin hợp chất thông qua số số lý hoá - Thể chất: cảm quan, hình dạng tinh thể, màu sắc, độ tan - Đo điểm chảy tinh thể: máy Boetius HMK ( Đức) môn DHQS - SKLM với hệ dung môi khác - Đo phổ tử ngoại: máy Cintra 40 ( Australia ) môn DHQS 2.2.5 Định lượng Plumbagin phận phương pháp quang phổ tử ngoại * Xây dựng đường chuẩn: A = k.C + b * Xác định hàm lượng Plumbagin phận Công thức tính C% = A −b V n k 100(%) m.10 KÕt bàn luận 3.1 Sơ xác định thành phần hoá học phận STT Các nhóm hợp chất cần tìm Quinon Bảng 3.1 Kết định tính nhóm hợp chất phận BHX Ghi chú: (++): Phản ứng dương tính rõ (+): Phản ứng dương tính (-): Phản ứng âm tính * Nhận xét: Flavonoid Phytosterol Alcaloid Tanin Các phản ứng thuốc thử Kết xác định Rễ Thân Lá - Dung dịch KOH 10% +++ + + - Dung dÞch KOH 10% - Nh«m clorid - Cyanydin - - - + + - - - - - Libermann - Mayer - Bouchardat - Dragendorff - Acid picric b·o hoµ - Silicotungstic - Dung dịch sắt III clorid 5% -Dung dịch Gelatin - - - Acid hữu -Tinh thể Na CO -Xanh Bromothymol + + + + + + §­êng khư -Fehling A- B + + - Anthocyanosid - HCl; KOH - - - Tinh dÇu -Bay h¬i - - - 10 Caroten - H SO 10% - - - 11 Saponin + + - - Sinh bọt 3.2 Định tính nhóm hợp chất quinon SKLM Hình 3.1: Sắc ký đồ nhóm hợp chất quinon Bảng 3.2: Giá trị Rf x 100 vết SK đồ: Màu sắc Các vết Rf x 100 vết hệ dung môi Soi đèn tử ngoại Vàng I II III P1 Bình thường Vàng nhạt 20 36 62 P2 Vàng ®Ëm Hång ®á 68 69 88 * NhËn xÐt: C¸c hệ dung môi cho kết có vết Vết phía điều kiện ánh sáng bình thường (vết ký hiệu P2) có màu vàng đậm, soi phát quang ánh sáng tử ngoại có mầu hồng đỏ; vết phía (vết ký hiệu P1) mầu vàng nhạt, soi phát quang ánh sáng tử ngoại có màu vàng Vậy kết nhận thấy: phận Bạch hoa xà có chøa hai chÊt thuéc nhãm Quinon 3.3 ChiÕt xuÊt vµ phân lập chất nhóm hợp chất quinon 3.3.1 Chiết xuất Bột dược liệu (Rễ/thân/lá) Chiết cồn 900 Dịch chiết cồn Thu hồi dung môi Cặn Tinh chế, hoà tan cồn Dung dịch cồn để phân lập Hình 3.2: Sơ đồ quy trình chiết xuất nhóm Quinon từ phận 3.3.2 Phân lập chất cđa nhãm Quinon b»ng SK líp chÕ ho¸ VÕt P2 Vết P1 Hình 3.3: Sắc ký đồ lớp chế hoá nhóm hợp chất quinon - Đánh dấu, cạo riêng phần silicagel P1 P2 Tiến hành tư ơng tự thu 10 chế hoá - Bột silicagel chứa chất P1 chất P2 chiết ethanol 900 (theo sơ đồ hình 3.4) Bột Silicagel cạo từ chế hoá Ethanol 90 Dung dịch cồn Thu hồi cồn Dịch cồn đậm đặc Để lạnh 40 C 12h, läc, sÊy Tinh thÓ P lần Tinh thể P lần Hình 3.4: Sơ đồ quy trình chiết xuất, tinh chế chất P2 sau sắc ký lớp chế hoá 3.4 Nhận dạng chất P2 chiết - Thể chất: tinh thể P2 tinh thể hình kim, có màu vàng cam, tan nước, tan nhiều dung môi hữu - Kiểm tra tạp chất Quinon khác SKLM: Hình 3.5: Sắc ký đồ chất P2 + Đo điểm chảy tinh thể: kết quả: 78 - 790C + Đo phổ tử ngoại ethanol 900 1.25 Abs 210 1.0 0.75 266 0.5 421 0.25 0.0 200 250 300 350 400 450 500 550 600 nm Hình 3.6: Hình ảnh phổ tử ngoại chất P2 ethanol 90o 3.5 Định lượng Plumbagin phận phư ơng pháp quang phổ tử ngoại 3.5.1 Kết xây dựng đường chuẩn Bảng 3.3 ®é hÊp thơ (A) ë b­íc sãng 266nm C (µ g/ml) A 10 12 14 MÉu 0,1379 0,2720 0,4068 0,5413 0,6759 0,8095 0,9450 MÉu 0,1371 0,2715 0,4060 0,5414 0,6760 0,8099 0,9444 MÉu 0,1372 0,2716 0,4066 0,5407 0,6755 0,8103 0,9448 MÉu 0,1370 0,2721 0,4067 0,5408 0,6751 0,8104 0,9445 MÉu 0,1379 0,2724 0,4061 0,5413 0,6754 0,8103 0,9449 X  0,1374 0,2719 0,4064 0,5411 0,6756 0,8101 0,9447 SD 0,0004 0,0004 0,0004 0,0003 0,0004 0,0004 0,0003 Abs 0,9447 0,1374 10 12 14 C(àg/ml) Hình 3.7: Sự tương quan tuyến tính (C) (A) Sự tương quan biểu thị phương trình: A = k.C + b, có r = 0,9999 Víi k = 0,06728; b = 0,00281 VËy A = 0,06728 C + 0,00281 3.5.2 Kết định lượng Plumbagin phận Sau đo độ hấp thụ (A), theo phương trình: C% = A −b V n k 100(%) m.10 Víi: k = 0,06728, b = 0,00281 V: thÓ tÝch ban đầu (100ml) n: hệ số pha loÃng phận Rễ = 75 (lần) Thân = (lần) Lá = 1,25 (lần) m: khối lượng mẫu đem chiết phận (Rễ: 30g; thân: 20g; lá: 20g) Sẽ tính hàm lượng % Plumbagin phận Kết trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết độ hấp thụ (A) nồng độ ( C ) tương ứng rễ, thân, Bạch hoa xà ë b­íc sãng = 266nm §é hÊp thơ A RƠ A Thân CR (%) A CT (%) Lá A CL (%) MÉu 0,7991 0,2959 0,9431 0,03494 0,8516 0,00788 MÉu 0,7978 0,2954 0,9428 0,03493 0,8524 0,00789 MÉu 0,7973 0,2952 0,9427 0,03492 0,8527 0,00790 MÉu 0,7977 0,2954 0,9425 0,03492 0,8518 0,00789 MÉu 0,7985 0,2957 0,9444 0,03499 0,8523 0,00789 X 0,7981 0,2955 0,9431 0,03494 0,8522 0,00789 SD 0,0007 0,0003 0,0008 0,0003 0,0005 0,00001 VËy:% Plumbagin trong: RƠ c©y= 0,2955 0,0003 (%) Thân cây= 0,03494 0,0003 (%) Lá = 0,00789 0,00001 (%) Kết luận kiến nghị 4.1 Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận Bạch hoa xà: - Rễ Bạch hoa xà có: Quinon, phytosterol, acid hữu cơ, đường khử saponin - Thân Bạch hoa xà có: Quinon, phytosterol, acid hữu cơ, đường khử saponin - Lá Bạch hoa xà có: Quinon acid hữu * B»ng s¾c ký líp máng silicagel G víi hƯ dung môi khác nhau: Nhóm Quinon gồm chất * Chiết xuất, phân lập nhóm Quinon từ phận Bạch hoa xà có chất thuộc nhóm quinon lµ P1 vµ P2 ChÊt P2 kÕt tinh thµnh tinh thể hình kim màu vàng cam Dựa vào thông số lý, hoá (sắc ký lớp mỏng, điểm chảy tinh thể, phổ tử ngoại) đà sơ xác định Plumbagin Chất P1 lượng chưa có điều kiện kết tinh 4.2 Định lượng Plumbagin phận cho kết quả: Rễ : 0,2955 ± 0,0003 (%) Th©n c©y : 0,03494 ± 0,0003 (%) Lá : 0,00789 0,00001 (%) 4.3 Kiến nghị: Đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thêm thành phần hoá học phận riêng rẽ Cải tiến quy trình chiết xuất dung môi trình chiết xuất Plumbagin để nâng cao hiệu xuất trình ... dụng bật kháng khuẩn chống viêm Theo tài liệu Bạch hoa xà có chứa nhóm quinon chủ yếu chất Plumbagin Để nghiên cứu đầy đủ thành phần hoá học chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành... 12h, lọc, sấy Tinh thĨ P lÇn Tinh thĨ P lần Hình 3.4: Sơ đồ quy trình chiết xuất, tinh chế chất P2 sau sắc ký lớp chế hoá 3.4 Nhận dạng chất P2 chiết - Thể chất: tinh thể P2 tinh thể hình kim,... đồ quy trình chiết xuất nhóm Quinon từ phận 3.3.2 Phân lập chất nhóm Quinon SK lớp chế hoá Vết P2 Vết P1 Hình 3.3: Sắc ký đồ lớp chế hoá nhóm hợp chất quinon - Đánh dấu, cạo riêng phần silicagel