Nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa 1%

Bỏng là một bệnh ngoại khoa khá quan trọng Để điều trị bỏng các chế phẩm của sulfadiazin bạc có nhiều ưu điểm đã được chứng minh trong lâm sàng. Viêc cung ứng thuốc có khó khăn.

Nguyễn tuấn quang

nghiên cứu thành phần hoá học của cây bạch hoa xà

(Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae)

Khoá luận tốt nghiệp d ợc sỹ đại học

TS Triệu Duy Điệt - Khoa D ợc liệu - Bộ môn DHQS

Hà Nội - 2003

Nội dung báo cáo gồm:

- Đặt vấn đề.- tổng quan

- nguyên vật liệu và ph ơng pháp nghiên cứu.- Kết quả và bàn luận

- Kết luận và kiến nghị.

Để nghiên cứu đầy đủ về thành phần hoá học của cây

chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học của cây Bạch hoa xà" với 2 mục tiêu:

- Sơ bộ nghiên cứu thành phần hoá học trong các bộ phận của cây.

- Xác định hàm l ợng Plumbagin trong các bộ phận khác nhau của cây.

- Ph©n bè, thu h¸i, chÕ biÕn.- Thµnh phÇn ho¸ häc.

- C«ng dông cña BHX theo YHCT vµ theo KN d©n gian.*Theo YHCT: BHX cã vÞ cay, tÝnh nãng, cã t¸c dông

th«ng kinh ho¹t huyÕt, s¸t khuÈn, tiªu viªm

* ë n íc ta: «ng cha ta dïng c©y BHX ch÷a môn nhät, h¾c lµo, ch÷a chai ch©n, s¾c n íc röa vÕt th ¬ng, vÕt loÐt

- T¸c dông d îc lý vµ øng dông l©m sµng cña BHX.

1.2 ChÊt Plumbagin.

Tªn khoa häc: 2 methyl - 5hydroxy - 1,4 naphtoquinon

- Plumbagin bÞ khö ho¸ do SO2 t¹o thµnh di phenol;

HO

- Acetyl hoá Plumbagin tạo thành dẫn xuất acetyl có màu vàng, t0 nóng chảy: 117 - 1180C.

- Tan trong dung dịch kiềm cho màu đỏ do tạo thành ion phenolat.

- Cho màu đỏ với muối sắt III clorid.

H3C-C-O

O

- DÞch chiÕt ether: flavonoid, quinon, alcaloid, tinh dÇu, acid h÷u c¬, phytosterol.

- DÞch chiÕt cån: quinon, flavonoid, alcaloid, acid h÷u c¬, sterol, ® êng khö, tanin, anthocynosid.

- DÞch chiÕt n íc acid: alcaloid, tanin, ® êng khö, saponin

- Dung m«i ch¹y SK víi c¸c hÖ:

I) Benzen - Methanol - N íc ( 15- 1- 4).II) Ether dÇu - Ethyl acetat (7 - 3).

III) Benzen - Methanol - Acid acetic ( 45-8-3 ) - Thuèc thö hiÖn mµu: KOH 10%/cån.

ChiÕt xuÊt: Dïng dung m«i lµ ethanol 90o.Ph©n lËp: Dïng ph ¬ng ph¸p SK líp chÕ ho¸.

2.2.4 Sơ bộ nhận dạng Plumbagin và các hợp chất thông qua một số chỉ số lý hoá.

- Thể chất: cảm quan, hình dạng tinh thể, màu sắc, độ tan - Đo điểm chảy tinh thể: trên máy Boetius HMK ( Đức) tại bộ môn DHQS

- SKLM với 3 hệ dung môi khác nhau.

- Đo phổ tử ngoại: trên máy Cintra 40 ( Australia ) tại bộ môn DHQS.

2.2.5 Định l ợng Plumbagin trong các bộ phận của cây bằng ph ơng pháp quang phổ tử ngoại.

* Xây dựng đ ờng chuẩn: A = k.C + b.

* Xác định hàm l ợng Plumbagin trong các bộ phận của cây

bA 

Công thức tính C% =

Kết quả và bàn luận

3.1 Sơ bộ xác định thành phần hoá học trong các bộ phận của cây.

Kết quả xác địnhSTTCác nhóm hợp

chất cần tìm

Các phản ứng và

thuốc thửRễThânLá

1. Quinon - Dung dịch KOH 10% +++ + +

2.Flavonoid- Dung dịch KOH 10%.- Nhôm clorid.

- Cyanydin.

-

-

-3. Phytosterol.- Libermann. + + -4.Alcaloid.- Mayer.

Bouchardat.- Dragendorff.

- Acid picric bão hoà- Silicotungstic.

- - - -

- - - -

- - - -5.Tanin.- Dung dịch sắt III clorid 5%

Dung dịch Gelatin.

- - 6. Acid hữu cơ. -Tinh thể Na2CO3

Xanh Bromothymol

7. Đ ờng khử. -Fehling A- B. + + 8.Anthocyanosid.- HCl; KOH -9.Tinh dầu.-Bay hơi -10.Caroten- H2SO4 10% -11. Saponin - Sinh bọt ++ -

-Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm hợp chất trong các bộ phận của cây BHX

Ghi chú:

(++): Phản ứng d ơng tính rõ.

(+): Phản ứng d ơng tính.(-): Phản ứng âm tính.* Nhận xét:

3.2 Định tính nhóm hợp chất quinon bằng SKLM.

Hình 3.1: Sắc ký đồ của nhóm hợp chất quinon

Bảng 3.2: Giá trị Rf x 100 của các vết trên SK đồ:

* Nhận xét: Các hệ dung môi đều cho kết quả có 2 vết Vết phía trên ở điều kiện ánh sáng bình th ờng (vết ký hiệu P2) có màu vàng đậm, soi phát quang d ới ánh sáng tử ngoại có mầu hồng đỏ; vết phía d ới (vết ký hiệu P1) mầu vàng nhạt, khi soi phát quang d ới ánh sáng tử ngoại có màu vàng Vậy kết quả này có thể nhận thấy: trong các bộ phận của cây Bạch hoa xà có chứa hai chất thuộc nhóm Quinon.

Màu sắcRf x 100 của các vết trêncác hệ dung môi

Các vết

Bìnhth ờng

Soi d ới đèn

3.3.2 Phân lập các chất của nhóm Quinon bằng SK lớp chế hoá

Hình 3.3: Sắc ký đồ trên lớp chế hoá của nhóm hợp chất quinon.

- Đánh dấu, cạo riêng các phần silicagel P1 và P2 Tiến hành t ơng tự thu đ ợc 10 bản chế hoá.

- Bột silicagel chứa chất P1 và chất P2 đều đ ợc chiết bằng ethanol 900 (theo sơ đồ hình 3.4)

Vết P2

Vết P1

Hình 3.4: Sơ đồ quy trình chiết xuất, tinh chế chất P2 sau sắc ký lớp chế hoá.

Bột Silicagel cạo từbản chế hoá

+ §o ®iÓm ch¶y tinh thÓ: kÕt qu¶: 78 - 790C.

H×nh 3.6: H×nh ¶nh phæ tö ngo¹i cña chÊt P2 trong ethanol 90o.

3.5 §Þnh l îng Plumbagin trong c¸c bé phËn cña c©y b»ng ph ¬ng ph¸p quang phæ tö ngo¹i.

2 4 6 8 10 12 14 C(g/ml)0

Abs0,9447

H×nh 3.7: Sù t ¬ng quan tuyÕn tÝnh gi÷a (C) vµ (A)

Sù t ¬ng quan ® îc biÓu thÞ b»ng ph ¬ng tr×nh: A = k.C + b, cã r = 0,9999

Víi k = 0,06728; b = 0,00281VËy A = 0,06728 C + 0,00281

3.5.2 Kết quả định l ợng Plumbagin trong các bộ phận của cây.

Sau khi đo đ ợc độ hấp thụ (A), theo ph ơng trình:

m: khối l ợng mẫu đem chiết của các bộ phận của cây (Rễ: 30g; thân: 20g; lá: 20g).

Sẽ tính đ ợc hàm l ợng % Plumbagin trong các bộ phận của cây Kết quả đ ợc trình bày ở bảng 3.4.

bA 

C% =

Bảng 3.4 Kết quả độ hấp thụ (A) và nồng độ ( C ) t ơng ứng của rễ, thân, lá Bạch hoa xà ở b ớc sóng = 266nm.

Độ hấp thụ A

Mẫu 10,79910,29590,9431 0,03494 0,8516 0,00788Mẫu 20,79780,29540,9428 0,03493 0,8524 0,00789Mẫu 30,79730,29520,9427 0,03492 0,8527 0,00790Mẫu 40,79770,29540,9425 0,03492 0,8518 0,00789Mẫu 50,79850,29570,9444 0,03499 0,8523 0,00789

Vậy:% Plumbagin trong: Rễ cây= 0,2955  0,0003 (%) Thân cây= 0,03494 0,0003 (%) Lá cây = 0,00789 0,00001 (%)

- Lá Bạch hoa xà có: Quinon và acid hữu cơ.

* Bằng sắc ký lớp mỏng silicagel G với 3 hệ dung môi khác nhau: Nhóm Quinon gồm 2 chất.

* Chiết xuất, phân lập nhóm Quinon từ các bộ phận cây

Bạch hoa xà có 2 chất thuộc nhóm quinon là P1 và P2 Chất P2 kết tinh thành tinh thể hình kim màu vàng cam Dựa vào các thông số lý, hoá (sắc ký lớp mỏng, điểm chảy tinh thể, phổ tử ngoại) đã sơ bộ xác định là Plumbagin.

Chất P1 do l ợng quá ít ch a có điều kiện kết tinh đ ợc.

4.2 Định l ợng Plumbagin trong các bộ phận của cây cho kết quả:

Rễ cây : 0,2955  0,0003 (%).Thân cây : 0,03494  0,0003 (%)Lá cây : 0,00789  0,00001 (%)

4.3 Kiến nghị:

Đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thêm về thành phần hoá học trong các bộ phận riêng rẽ của cây Cải tiến quy trình chiết xuất và dung môi trong quá trình chiết xuất Plumbagin để nâng cao hiệu xuất của quá trình.