Nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa

Trần văn quangnghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa 1% Ngời hớng dẫn : TS.. Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất của chế p

Trần văn quang

nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa 1%

Ngời hớng dẫn :

TS Nguyễn Thị Lộc

Đặt vấn đề

Bỏng là một bệnh ngoại khoa khá quan trọng

Để điều trị bỏng các chế phẩm của sulfadiazin bạc có

nhiều u điểm đã đợc chứng minh trong lâm sàng

Viêc cung ứng thuốc có khó khăn

Các mục tiêu cụ thể của khóa luận :

1 Nghiên cứu kỹ thuật bào chế kem Silver sulfa

1%.

2 Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất của chế

phẩm.

3 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn trên in vitro

có so sánh với với chế phẩm Silvirin 1% (ấn Độ).

PhÇn I Tæng quan tµi liÖu

1 Tû lÖ m¾c bÖnh báng

Thêi b×nh : 1,8% - 10% so víi chÊn th¬ng ngo¹i khoa.

Trong chiÕn tranh : 3% - 10% tæng sè th¬ng binh vµ cã thÓ lªn tíi 70% - 85%.

2 Thuèc mì s¸t khuÈn ®iÒu trÞ vÕt báng t¹i chç

* Kem maduxin;* Mì cao vµng;* Damcream

* ChÕ phÈm chøa ho¹t chÊt sulfadiazin b¹c nh :

Sivadene (Mü), Flammazin (Ph¸p), Silvirin (Ên §é),

Slivin (Pakistan)…

* sulfadiazin có tác dụng kìm khuẩn : do cạnh tranh ức chế với PABA.

* Ion bạc:

Ion bạc chuyển cầu nối giữa 2 nitơ thuộc 2 nhân

purin đối diện Do vậy đã làm mất khả năng

sinh sản phân đôi của vi khuẩn

Phối hợp: nhân pyrimidin sẽ dễ dàng làm vận

chuyển ion bạc qua màng vi khuẩn.

* Cơ chế tác dụng khác với các hợp chất bạc

khác, khác với sulfadiazin đơn độc.

3.2 Cơ chế tác dụng.

3.3 T¸c dông kh¸ng khuÈn.

B¶ng 1: Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn trªn invitro cña sulfadiazin b¹c

S aureus 100/101 101/101

S epidermidis 51/51 51/51 Enterococus (nhãm D) 52/53 52/53 Candia albicans 43/50 50/50

3.4 Hấp thu thuốc.

* Các nghiên cứu về hấp thu với Ag 111 cho thấy hầu hết

thuốc tích tụ ở lớp biểu bì (có tác dụng tại chỗ).

Khoảng 10% lợng sulfadiazin bôi tại chỗ đợc hấp thu

Để đo sulfadiazin và các chất chuyển hoá đặc hiệu cần

- Không gây đau khi bôi

- Không gây rối loạn điện giải hay kiềm toan

- Không làm bẩn y phục hay vải trải giờng

1 Vật liệu trang thiết bị.

1.1 Vật liệu hoá chất.

- Bạc sulfadiazin đạt tiêu chuẩn USP 24

- Các tá dợc cần thiết đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Các chất bảo quản, các chất chống ôxy hoá đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Các dung môi dùng cho SKLM, HPLC-pp

- Màng nhân tạo cellophan

- Các hoá chất khác cần thiết

Phần II Vật liệu và phơng pháp nghiên cứu

1.2 Dụng cụ, trang thiết bị.

- Cân phân tích độ chính xác 0,1mg của Trung Quốc

- Máy ly tâm của Nhật Bản

- Tủ điều nhiệt giữ đợc nhiệt độ ở 400C, Trung Quốc

- Bản mỏng Silicagel 60 F254 ,VKN cung cấp

- Đèn huỳnh quang soi ở bớc sóng 254 nm

- Thạch Muller - Hinton

- Các chủng vi khuẩn: S aureus, P aeruginosa, E coli

- Dụng cụ nghiên cứu khả năng giải phóng dợc chất ra khỏi tá dợc thuốc mỡ

- Máy sắc ký lỏng cao áp hiệu năng cao Shimadzu

- Các dụng cụ cần thiết khác trong phòng thí nghiệm

2.3 Các bớc nghiên cứu mô hình kem Silver sulfa 1%.

Loạibớt CT có độ giải phóng kém

Hình 4: Các bớc nghiên cứu mô hình kem Sliver sulfa 1%

* Nghiªn cøu t×m chÊt chèng «xy ho¸

Ion b¹c trong c«ng thøc ho¹t chÊt rÊt dÔ bÞ «xy ho¸

-Nghiªn cøu víi 4 chÊt chèng «xy ho¸ sau:

Natri sulfit ,natri bisulfit,natri metasulfit,hydro quinon

Hình 5: Sơ đồ quy trình bào chế kem Silver sulfa 1%

Chuẩn bị dợc chất Chuẩn bị tá dợc

Kiểm nghiệm thành phẩm

2.3.2 (Bớc 2): Nghiên cứu sơ bộ độ bền vững.

- Điều kiện 1:

Ly tâm thuốc mỡ mới bào chế trong vòng 5 phút với tốc độ 600v/phút ở nhiệt độ 20  10C Quan sát sự phân lớp của thuốc mỡ

- Điều kiện2:

Đặt thuốc mỡ ở 40  10C trong vòng 1 ngày đêm Quan sát sự thay đổi của thuốc mỡ

-Lựa chọn ba công thức bền vững nhất nghiên cứu

độ giải phóng hoạt chất

2.3.3 (Bớc 3): Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất qua màng cellophan

*Khuếch tán thuốc qua màng:

- Ngăn trên : 3g thuốc mỡ

- Môi trờng khuếch tán : 25ml dung dịch NH 4 OH 2,5%

- Thời gian t 1 , t 2 , t 3 , t 4 đã định sẵn.

* Định tính hoạt chất giải phóng: SKLM(DĐVN I)để

xác định đã có hoạt chất giải phóng và xác định t 1.

*Định lợng nồng độ : phơng pháp HPLC.

- Với mỗi CT, ở 1 thời điểm t, khuếch tán 5 mẫu để tính lợng hoạt chất giải phóng qua màng bằng phơng pháp HPLC

- Xây dựng đờng chuẩn: bằng phơng pháp bình phơng tối thiểu.

- Các thông số của phơng pháp HPLC :

+ Pha động là một hệ dung môi A: B = 28 : 72 với

Dung môi A là hỗn hợp : Acetolnitrile

2.3.4 (Bớc 4): Nghiên cứu độ kháng khuẩn.

Sử dụng phơng pháp khuếch tán trên gel thạch:

Thạch Muller - Hinton đổ đĩa đờng kính 9cm, đục 2 lỗ

đối xứng có đờng kính 1cm, 1 lỗ cho Silver sulfa 1%

(công thức có độ giải phóng hoạt chất tốt nhất tìm đợc ở bớc 3), lỗ còn lại cho thuốc đối chứng Silvirin 1% Sử

dụng 3 đĩa thạch cho 3 chủng vi khuẩn S aureus; P

aeruginosa; E coli (theo quy định của DĐVN)

1 KÕt qu¶ x©y dùng c«ng thøc bµo chÕ. X©y dùng c«ng thøc:

Lựa chọn chất chống oxy hoá.

Bảng 2: Hiệu lực bảo vệ chống ôxy hoá của natri bisulfit.

Thời điểm Hàm lượng

2 Kết quả nghiên cứu sơ bộ độ bền vững.

Bảng 3: Kết quả nghiên cứu sơ bộ độ ổn định

3 Kết quả đo giải phóng hoạt chất

3.1 Kết quả định tính hoạt chất giải phóng qua màng:

3.2.Kết quả định lợng dợc chất giải phóng qua

màng

3.2.1 Kết quả xây dựng đờng chuẩn.

- Sắc ký đồ dung môi của cốt tá dợc.

- Các đờng chuẩn:

+ Chuẩn 1: nồng độ hoạt chất 2,12g/ml

+ Chuẩn 2: nồng độ hoạt chất 5,30g/ml

+ Chuẩn 3: nồng độ hoạt chất 10,60g/ml

3.2.2.NhËn biÕt pic cña sulfadiazin b¹c.

Sö dông hÖ thèng HPLC kÕt hîp detecter diode array:

Bảng 5: Nồng độ dợc chất giải phóng qua màng theo

thời gian của CT3(n = 5;SD = 0,0018)

Các thời điểm t R (giây) S(mAU) Nồng độ (g/ml)

*Tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua màng:

Công thức tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua màng:

30

25100

10.3

250

Bảng 6: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng

của các CT theo thời gian

Hình 6: Đồ thị so sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải

phóng qua màng của các CT theo thời gian (các tỷ lệ

Bảng 7: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng của Silvirin 1% theo thời gian(n = 5;SD = 0,0018)

t 1 3,460 628819 3,002 2,502

t 2 3,358 657693 4,831 4,026

t 3 3,448 1048732 5,017 4,182

t 4 3,444 1328906 7,544 6,287

Bảng 8: So sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng của CT3 với Silvirin 1% theo thời gian

Nồng độ giải phóng qua

màng (x%) CT3 Silvirin 1%

Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua màng CT3 / Silvirin 1%

5 KÕt qu¶ ®o kh¸ng khuÈn trªn invitro.

B¶ng 9:So s¸nh kh¶ n¨ng khuÈn trªn invitr« gi÷a CT3

Kết luận

- Đã xây dựng đợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn

định bền vững trong điều kiện bình thờng vì đã ổn

định trong điều kiện khắc nghiệt

- Khả năng giải phóng hoạt chất qua màng của CT3

và Silvirin 1% là tơng đơng nhau Nh vậy kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá dợc không cản trở khả năng giải phóng hoạt chất của

kem

- Khả năng kháng khuẩn của CT3 là tơng đơng với

Kiến nghị.

Tiếp tục nghiên cứu các tính chất khác của kem Silver sulfa 1%:

* Nghiên cứu độ ổn định lâu dài

* Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất và kháng khuẩn trên invivo

* Nghiên cứu độc tính cấp và trờng diễn

* Nghiên cứu hiệu lực điều trị của kem