Luận văn Thạc sĩ nông nghiệp Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính cây lô hội (Aloe vera Linne.var Sinensis Berger) bằng phương pháp nuôi cấy nuôi cấy in vitro và phương pháp giâm hom

Lời cam đoan Bộ giáo dục v đo tạo trờng đại học nông nghiệp i - Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực cha đợc công bố công trình khác Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn Bùi Thị hồng quyên đ đợc cám ơn thông tin trích dẫn luận văn đ đợc rõ nguồn gốc Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội (Aloe vera Linne var Sinensis Berger) phơng pháp Tác giả luận văn nuôi cấy in vitro v phơng pháp giâm hom thân Bùi Thị Hồng Quyên Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : trồng trọt Mã số : 60.62.01 Ngời hớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Kim Thanh H nội - 2007 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip i Lời cảm ơn Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp cố gắng thân đ nhận đợc nhiều quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cô, bạn bè ngời thân Trớc tiên xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy cô giáo Khoa Nông học ngời đ trực tiếp giảng dạy trang bị kiến thức bổ ích suốt thời gian học đại học nh học cao học Tôi xin đợc gửi lời chân thành cảm ơn tới thầy cô giáo môn Sinh lý Mục lục Đặt vấn đề 1.2 Mục đích, yêu cầu đề tài Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu chung Lô hội 2.2 Tình hình sản xuất sử dụng Lô hội nớc 2.3 Cơ sở khoa học phơng pháp nhân giống vô tính kỹ thuật giâm cành, giâm hom 2.4 trình thực đề tài hoàn thành luận văn 14 26 Kỹ thuật nuôi cấy mô, tế bào ứng dụng nhân giống vô tính trồng 27 Đối tợng, nội dung phơng pháp nghiên cứu 32 3.1 Đối tợng 32 hoàn thiện Đặc biệt xin đợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo TS Nguyễn Thị Kim Thanh ngời đ tận tình hớng dẫn giúp đỡ động viên i 1.1 Thực vật, anh chị Trung tâm chuyển giao TBKH&CN Sở KHCN Vĩnh Phúc đ chân thành đóng góp ý kiến giúp cho luận văn đợc Mở đầu Bên cạnh xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tất ngời thân, bạn 3.2 Nội dung nghiên cứu 32 bè ngời bên cạnh động viên giúp đỡ trình học tập 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 38 thực đề tài 3.4 Các tiêu theo dõi 40 3.5 Xử lý số liệu 42 3.6 Thời gian địa điểm nghiên cứu 42 Kết nghiên cứu thảo luận 43 4.1 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống Lô hội phơng pháp Hà Nội, ngày 19 tháng 12 năm 2007 Tác giả luận văn nuôi cấy in vitro Bùi Thị Hồng Quyên 43 4.1.1 Nghiên cứu kỹ thuật tạo vật liệu khởi đầu in vitro 43 4.1.2 Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi Lô hội in vitro 48 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hởng tổ hợp xytokinnin auxin đến khả nhân nhanh chồi Lô hội in vitro Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip ii 53 4.1.3 Nghiên cứu kỹ thuật rễ tạo hoàn chỉnh Lô hội in vitro 57 4.1.4 Nghiên cứu kỹ thuật vờn ơm (sau ống nghiệm) 63 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iii 4.2 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội phơng pháp giâm hom Danh mục chữ viết tắt 67 4.2.1 Nghiên cứu ảnh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến khả phát sinh chồi nách tạo vật liệu giâm hom thân Lô hội 67 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hởng việc xử lý IBA đến khả rễ nảy mầm đoạn hom thân Lô hội 68 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hởng việc phun chế phẩm dinh dỡng đến khả phát sinh chồi nách Lô hội 70 Kết luận đề nghị 71 BAP : Benzyl Adenin Purin CT : Công thức CP : Chế phẩm Đ/C : Đối chứng ĐTST : Điều tiết sinh trởng : - Naphtyl Axetic Axit 5.1 Kết luận 71 -NAA 5.2 Đề nghị 71 IBA : - Indol Butyric Axit Tài liệu tham khảo 73 IAA : - Indol Axit Phụ lục 77 HĐST : Huỷ đỉnh sinh trởng KHCN : Khoa học công nghệ KH&CN : Khoa học công nghệ Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iv Ki : Kinetin NXB : Nhà xuất TB : Trung bình THT : Than hoạt tính Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip v Danh mục bảng 4.1 ảnh hởng phơng thức thời lợng khử trùng đến tỷ lệ sống mẫu cấy 4.2 Danh mục hình 44 ảnh hởng thời vụ lấy mẫu đến khả tái sinh chồi mẫu cấy 47 4.3 ảnh hởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Lô hội 50 4.4 ảnh hởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lô hội 4.6 2.2 Chất gel Lô hội 4.1 ảnh hởng phơng thức thời lợng khử trùng đến tỷ lệ sống mẫu cấy 4.2 45 ảnh hởng thời vụ lấy mẫu đến khả tái sinh chồi 48 4.3 ảnh hởng hàm lợng BAP đến hệ số nhân chồi 50 ảnh hởng tổ hợp BAP -NAA đến khả nhân 4.4 Giai đoạn nhân nhanh chồi Lô hội in vitro 51 nhanh chồi Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 4.5 ảnh hởng hàm lợng kinetin đến hệ số nhân chồi 53 4.6 ảnh hởng tổ hợp BAP -NAA đến hệ số nhân chồi Lô 52 54 ảnh hởng tổ hợp BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 56 4.7 ảnh hởng -NAA tới khả rễ Lô hội in vitro 59 4.8 ảnh hởng IBA tới khả rễ Lô hội in vitro 60 4.9 ảnh hởng hàm lợng Than hoạt tính (THT) tới khả rễ Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 62 vờn ơm (sau 60 ngày) 64 66 4.13 ảnh hởng IBA tới kết giâm thân Lô hội 67 69 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vi in vitro 57 4.8 Giai đoạn rễ tạo hoàn chỉnh 58 4.9 ảnh hởng hàm lợng -NAA tới tỷ lệ chồi rễ 59 vitro rễ Lô hội in vitro vờn ơm 61 62 65 4.13 ảnh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến hệ số nhân chồi Lô hội ảnh hởng việc phun chế phẩm dinh dỡng tới khả phát sinh chồi nách Lô hội ảnh hởng tổ hợp BAP IAA đến hệ số nhân chồi Lô hội 4.12 ảnh hởng thời vụ đến tỷ lệ sống giai đoạn 4.12 ảnh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến khả phát sinh chồi nách Lô hội 4.7 55 4.11 ảnh hởng hàm lợng Than hoạt tính (THT) tới khả 4.11 Nghiên cứu ảnh hởng giá thể sau ống nghiệm (sau 30 ngày) hội in vitro 4.10 ảnh hởng hàm lợng IBA tới khả rễ chồi Lô hội in 4.10 ảnh hởng thời vụ đến tỷ lệ sống giai đoạn 4.14 Cây Lô hội 1năm tuổi vờn thí nghiệm mẫu cấy invitro (sau tuần) 4.5 2.1 70 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vii 68 Mở đầu đến tác dụng Lô hội sử dụng thuốc Đông y Ngày để tăng cờng sử dụng hoá mỹ phẩm có nguồn gốc từ thảo dợc 1.1 Đặt vấn đề Cây Lô hội (Aloe Vera) thuộc họ Huệ tây (Liliaceae) [3],[19], mọc nhiều vùng có khí hậu nóng khô Đây dợc liệu đợc dùng đông y tây y Cây có vị đắng, tính hàn, vào bốn kinh can, tì vị đại trờng Những tính Lô hội đ đợc khắp nơi giới biết đến, từ thời văn minh cổ Ai Cập, Hy Lạp, ấn Độ, Châu Phi đợc sử dụng cách 2000 năm [9] Một tính kỳ diệu loài dợc thảo đ đợc nhà khoa học Trờng Đại học Bang Texas (Mỹ) nghiên cứu dịch chiết Lô hội có khả làm nhanh lành vết thơng, dịch chiết chứa hoạt chất có tính thẩm thấu cao làm gi n nở mao mạch, làm tăng lợng máu cung cấp cho vùng xung quanh vết thơng, làm tăng tốc độ phân trồng đợc quan tâm phát triển Lô hội Tuy nhiên vấn đề giống cho vùng nguyên liệu gặp khó khăn tự nhiên Lô hội khó nhân giống hạt Vì ngời dân thờng nhân giống vô tính Lô hội phơng pháp truyền thống phơng pháp tách chồi thụ động có hệ số nhân giống không cao, sinh có sức sống thấp sản xuất đợc số lợng lớn giống theo quy mô công nghiệp Trong năm gần đây, nhằm tạo giống trồng chất lợng tốt, không phụ thuộc vào mùa vụ, nhiều địa phơng nớc đ ứng dụng phơng pháp giâm hom vào công tác nhân giống.Tuy nhiên phơng pháp cho kết không cao nhiều đối tợng trồng cha đáp ứng đợc số lợng lớn giống [21] chia tế bào, kích thích hệ thống miễn dịch Trong Lô hội có chất đông Công nghệ nhân giống vô tính kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào dính (gel) có ích việc điều trị chứng rối loạn tiêu hoá bệnh phơng thức nhân giống vô tính có nhiều u điểm trội là: cho tiểu đờng Một số công trình nghiên cứu nớc đ ghi nhận hệ số nhân giống cao, sản xuất quanh năm không phụ thuộc vào mùa vụ, khuyến cáo uống dịch chiết Lô hội (2 - gram/ngày) có tác dụng làm chậm cần diện tích sản xuất vật liệu nhân giống ban đầu, giống sản xuất trình l o hoá, tăng cờng hệ thống miễn nhiễm có tác dụng tốt cho hoàn toàn bệnh, đồng mặt di truyền [14], việc vận chuyển đờng tiêu hoá giống xa thuận tiện, tổn thất ít, chất lợng đợc đảm bảo hoàn Trong năm gần chất gel chiết rút từ Lô hội đợc dùng nhiều ngành công nghệ dợc phẩm, hoá mỹ phẩm nh: kem thoa lên da, thuốc viên hay thuốc mỡ để trị bệnh với thơng hiệu thuốc Lô hội, mỹ phẩm Lô hội, thực phẩm dới dạng nớc uống xirô toàn đáp ứng đợc yêu cầu sản xuất giống với số lợng lớn mang tính công nghiệp Phơng pháp đ áp dụng thành công nhiều loại trồng nh loại nông nghiệp: khoai tây, chuối, mía, dứacác loại hoa: phong lan, cẩm chớng, cúc, đồng tiềncác loại lâm nghiệp: keo lai, bạch đàn, tếch, gió trầm [17]các loại dợc liệu: địa Việt Nam, Lô hội có nhiều dòng khác nhau, Aloe hoàng, hà thủ ô, trinh nữ hoàng cungVì việc ứng dụng công nghệ nuôi Vera đợc ghi nhận thuốc cổ truyền Việt Nam, cấy mô tế bào để nhân nhanh số lợng giống đủ cung cấp cho vùng phân bố nhiều vùng ven biển miền Trung Từ xa xa nhân dân ta đ biết trồng nguyên liệu cần thiết Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trên sở tiến hành đề tài: Nghiên cứu kỹ thuật nhân 1.2.3 ý nghĩa khoa học giống vô tính Lô hội (Aloe vera Linne.var Sinensis Berger) phơng pháp nuôi cấy in vitro phơng pháp giâm hom thân - Thông qua đề tài, tìm hiểu đợc vai trò số chất điều tiết sinh trởng trình tái sinh, nhân nhanh tạo rễ cho chồi in vitro 1.2 Mục đích, yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội Aloe vera Linne.var Lô hội - Làm rõ ảnh hởng điều kiện ngoại cảnh thông qua yếu tố mùa vụ đến khả sống tái sinh mẫu cấy nh khả sống sinh Sinensis Berger sở bớc xây dựng quy trình nhân Lô hội trởng in vitro giai đoạn vờn ơm phơng pháp nuôi cấy in vitro giâm hom cho thực tiễn sản xuất 1.2.4 ý nghĩa thực tiễn 1.2.2 Yêu cầu * Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội phơng pháp nuôi cấy in vitro: - Xác định phơng pháp khử trùng thời điểm lấy mẫu thích hợp cho tỷ lệ mẫu tái sinh cao - Xác định môi trờng tái sinh chồi thích hợp, rút ngắn giai đoạn tái - Đề xuất đợc quy trình nhân nhanh giống Lô hội phơng pháp in vitro, để đảm bảo cung cấp số lợng lớn giống có chất lợng cao, đồng cho sản xuất Nhằm góp phần gia tăng nguồn nguyên liệu cung cấp cho ngành y, dợc, mỹ phẩm thảo dợc nớc - Xác định đợc khả nhân giống Lô hội phơng pháp giâm hom áp dụng thực tiễn sản xuất sinh chồi - Xác định môi trờng nhân nhanh cho hệ số nhân cao, chất lợng chồi tốt - Xác định môi trờng rễ tối u với tỷ lệ rễ cao - Xác định thời vụ, giá thể đảm bảo tỷ lệ sống vờn ơm cao * Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống Lô hội phơng pháp giâm hom: - Xác định ảnh hởng thời vụ huỷ đỉnh sinh trởng đến khả phát sinh chồi nách Lô hội - Xác định khả phát sinh chồi nách qua việc phun chế phẩm dinh dỡng Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Tổng quan ti liệu tên khác nh: Tợng đảm, Long tu, Du thông, Lỡi hổ, Hổ thiết thuộc chi Aloe, họ Huệ tây (Liliaceae) [6] Trong khoảng 180 loài thuộc chi Aloe 2.1 Giới thiệu chung Lô hội 2.1.1 Lịch sử phát Cây Lô hội (Aloe vera Linne) loại thảo mộc đ có từ thời thợng cổ [8] Khoảng 5000 năm trớc Công Nguyên, nhiều dân tộc ả rập vùng có loài đợc sử dụng để làm thuốc bổ dỡng chữa bệnh, số loài có độc tố Hai loài đợc ý nhiều Aloe Ferox Mill Aloe vera Linne Theo sách "Cây cỏ Việt Nam" Phạm Hoàng Hộ chi Aloe nớc ta có loài Aloe vera L Sinensis Berger tức Lô hội nhỏ [8],[9] Trung Đông đ biết sử dụng Lô hội để phục vụ cho sống Rồi từ vùng Trung Đông Lô hội di thực sang nhiều quốc gia khác nh: ấn 2.1.2 Đặc điểm sinh học Lô hội Độ, Trung Quốc, Malaixia, Mexico, CuBa Lịch sử tồn phát triển Lô hội khắp giới gắn liền với hiểu biết ngày phong phú lĩnh vực: sinh học, dợc lý Tại nhiều quốc gia, dân gian coi Lô hội nh đấng hào kiệt lẽ hữu ích dễ tìm, dễ trồng [12] Đến nay, sau nhiều năm nghiên cứu, nhà khoa học đ chứng minh đợc rằng: Lô hội có nguồn gốc từ Bắc Phi Trung Đông, từ lâu đợc loài ngời sử dụng để làm thuốc Theo tài liệu cổ ngời Sumeri viết chữ hán nôm phiến đất nung tìm thấy thành phố Nippur từ niên đại 2200 năm trớc Công Nguyên Dựa ghi chép ngời Ai Hình 2.1 Cây Lô hội 1năm tuổi vờn thí nghiệm Cập cổ đại giấy sậy cho thấy: Ngời Ai Cập cổ dùng Lô hội đơn phối hợp với nhiều dợc thảo thành 12 dạng bào chế khác nhau, dùng chữa nhiều bệnh bên bên [42] Vào cuối kỷ XIII nhà khoa học ngời ý Macro Polo (1254 - 1323) đ thực chuyến nghiên cứu thực vật nhiệt đới Châu đến Trung Quốc Macro Polo đ giới thiệu cho ngời dân xứ loại dợc thảo (sau gọi Lô hội), từ Trung Quốc Lô hội đợc di thực sang Việt Nam [36], [38] Cây Lô hội loại bụi nh xơng rồng, đợc gọi số Theo Võ Văn Chi (1991) [4], Đỗ Thanh Hội (1997),[10] Lô hội loại dạng thân cỏ, mập, màu xanh lục nhạt, thân ngắn Cây Lô hội trởng thành có mập, dài 30 50 cm, rộng 10 cm, dày 1- 2cm Lá Lô hội gồm phần: phần vỏ lớp vỏ xanh, cắt ngang chảy nhựa màu vàng có mùi hắc, để khô chuyển thành màu đen, phần phần thịt mọng nớc dạng gel Cụm hoa cao khoảng 1m, mọc thành chùm, hoa to có màu vàng lục nhạt Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Quả nang hình trứng màu xanh, chứa nhiều hạt Nếu rạch đờng Lô hội tơi dùng thìa nạo Lô hội quan sát có chất 2.1.4 Tác dụng dợc lý Lô hội Từ năm 1700 trớc Công Nguyên, ngời đ biết sử dụng Lô hội gel suốt để trị bách bệnh nh: da, làm lành vết thơng Sau ngời ta đ phát 2.1.3 Thành phần hóa học Lô hội thêm nhiều tác dụng chữa bệnh khác Lô hội [12] Phân tích thành phần lấy từ Lô hội, nhà nghiên cứu tìm thấy chất sau: * Hợp chất anthraquinon: Đây thành phần có tác dụng chữa bệnh Lô hội bao gồm: - Aloe emodine chất dịch tơi Lô hội mà có - Năm 1981: Hội đồng khoa học Quốc gia Hoa Kỳ đ bảo vệ viện bào chế sản phẩm Lô hội [27] - Năm 1986 đến nay: Hàng loạt sản phẩm đợc tổng hợp từ Lô hội đời ngày phát triển Theo y học cổ truyền nhựa khô, chiếm 0,05 - 0,5% Chất tan ether, cloroform, benzen, - Barbaloin: chiếm 15 - 30% thành phần nhựa Lô hội, chất tan dần để không khí ánh sáng, tan đợc nớc, cồn, Axeton, tan Benzen Cloroform Do Lô hội có vị đắng, tính hàn, vào kinh: Can, tỳ, vị, đại tràng nên có tác dụng thông đại tiện, mát huyết, hạ nhiệt, trị cam tích, kinh giản trẻ em, ăn uống không tiêu, giúp tiêu hóa, đắp trị phỏng, rôm sảy - Aloinosid A, Aloinosid B, Anthranol * Glycosid, Aloezin, Aloenin * Chất nhựa: Esther acide Cinnamic * Chất hữu cơ: monosacharide, polysacharide, cellulose, mannose, L- Rhamnose * Các vitamine: B1, B2, B6, acide folic * Các Enzym: oxydase, lipase, amilase, catalase, allnilase * Các nguyên tố khoáng vi lợng: zinc, potasodium, mangesium, manganese, calcium Theo Al.Awadi F cộng (1991) Aloe Vera, Ajabnoor MA (1990) [26], [27], [28] Hình 2.2 Chất gel Lô hội Theo y học hiên đại - Lô hội có tác dụng bồi bổ thể sau ốm, giúp tiêu hóa tốt, kích thích nhẹ niêm mạc ruột không cho cặn b lâu ruột Sử dụng với liều nhỏ (0,05 0,10g) Ngoài Lô hội có tác dụng đẩy mạnh nhng tác dụng chậm, gây xung huyết ruột già, có tác dụng sau 10 15 giờ, phân mềm nh o, không lỏng sử dụng với liều nhỏ (0,05 0,10g)[2] Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip - Có tác dụng làm lành vết thơng: Lô hội có chứa nhiều khoáng chất nh Canxi, Potassium, Kẽm có chứa nhiều vitamin C E Các chất tiền chất để đẩy nhanh tiến trình làm lành da Canxi giữ vai trò quan trọng hệ thống thần kinh mô cơ, chất xúc tác trình làm lành vết thơng - Chống viêm nhiễm dị ứng: Lô hội có tác dụng làm lành vết đứt, vết loét, vết hay vết sng côn trùng cắn đốt da có chứa hợp chất hữu gồm vitamin, hormon, chất Magnesium lactate có tác dụng ức chế phản ứng Histamin, ức chế loại trừ Bradykinin thành phần gây phản ứng dị ứng viêm [24] - Chống l o hóa tế bào: + Lô hội có chứa Canxi có liên quan đến tân dịch tế bào thể, trì cân tế bào, tạo tế bào khỏe mạnh + Lô hội có chứa 17 amino - axit cần thiết để tổng hợp protein tế + Lô hội có chứa amino axit để tạo prrotein giúp hình thành tế bào mô + Lô hội chứa enzym cần thiết để phân giải chất đờng, đạm chất béo dày ruột - Lô hội có vai trò tá dợc: + Có chứa chất lignin chất giúp thấm sâu luân chuyển với yếu tố khác mà liên kết, lý nhiều sản phẩm dợc phẩm, mỹ phẩm pha trộn với Lô hội + Có polysaccharide, chất khoáng, vitamin, amino axit với chất lignin tẩy tế bào chết, kích thích tái sinh tế bào bổ sung dinh dỡng cho da Các ứng dụng điều trị lâm sàng - Trị táo bón: bột Lô hội, cao mật bò, bột cam thảo tá dợc vừa đủ Hay dùng là: Lô hội tơi 100g, đậu xanh vỏ 20g, đờng cát 50g nấu ăn - Trị đau lng: Lô hội tơi 50g, đậu đen 50g, đờng cát 100g nấu ăn bào + Lô hội có chứa chất khoáng nh: Potassium, Sodium yếu tố cần thiết cho trao đổi chất hoạt động tế bào - Giải độc cho thể: - Trị mụn nhọt: gi nhuyễn lẫn vỏ đắp lên vùng xng đỏ - Trị rôm sảy mụn: lấy nớc cốt Lô hội tơi thoa lên vùng da bệnh [2] 2.1.5 Kỹ thuật trồng Lô hội + Lô hội có chứa nguyên tố Natri, Uronic axit nên có tác dụng cải thiện nớc ta, Lô hội trồng đợc nhiều nơi, nhng sinh trởng và kích thích chức gan, thận, hai quan chủ yếu việc loại trừ chất phát triển tốt khu vực có số ngày nắng năm cao nh khu vực Miền độc thể Trung Tây Nguyên Khi trồng Lô hội đầu t ban đầu nhiều, kỹ + Lô hội có phần chất xơ thành phần chất thải nằm kẹt nếp gấp ruột - Sinh lợng dinh dỡng: + Lô hội có chứa Vitamin C thúc đẩy trình trao đổi chất, sinh thuật chăm sóc đơn giản trồng lần thu hoạch lâu dài [12] Kỹ thuật làm đất - Chọn đất: Lô hội l chịu đợc khô hạn, nhng không chịu đợc ngập úng, phải chọn vùng đất cao ráo, thoáng xốp, tốt đất pha lợng cần thiết, trì hoạt động miễn dịch giúp phòng chống đợc nhiều bệnh cát để dễ thoát nớc Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 10 - Làm đất: Đất trồng phải đợc cầy bừa kỹ, mục đích làm nhỏ đất sinh trởng tốt, đạt suất chất lợng cao san phẳng ruộng trồng, sau lên luống, đánh r nh trồng Thông thờng - Tiêu nớc: Cây Lô hội không chịu đợc ngập úng lâu Do vậy, luống đợc đánh cao khoảng 20 cm để dễ thoát nớc Đánh r nh trồng theo trời ma dài ngày phải khơi thông r nh trồng tạo điều kiện để thoát nớc mật độ hàng cách hàng 80 cm, cách 40 cm tốt Nếu để mơng r nh bị tích nớc gây thối rễ, làm cho Lô hội chết - Bón lót: Sử dụng phân chuồng hoai để bón lót Mỗi bón lót khoảng 500- 700g phân chuồng, khoảng 2,5 phân chuồng/ha Thời vụ trồng Cây Lô hội trồng quanh năm, nhng tốt trồng vào mùa Xuân mùa Thu, thời gian Lô hội phục hồi phát triển nhanh Kỹ thuật trồng Cây trồng đợc lấy từ vờn ơm, đào nên cẩn thận, lấy đợc nhiều rễ tốt, nhằm thu ngắn thời gian hồi sức hàng loạt - Làm cỏ xới xáo đất: Trong trình chăm sóc Lô hội phải xới xáo đất trừ cỏ nhiều đợt Việc xới đất thờng xuyên giúp cho đất đợc thông thoáng trừ đợc loại cỏ dại, làm cho trình chuyển hoá chất dinh dỡng đất đợc nhanh chóng để Lô hội dễ hấp thu, sinh trởng phát triển nhanh - Bón phân: Cây Lô hội có khả hấp thụ chuyển hóa nhanh chất dinh dỡng đất Do đó, việc bón lót phân chuồng (khoảng 2,5 tấn/ha) phải thờng xuyên bón thúc cho Lô hội phân NPK Thời gian bón thúc tốt tháng/lần, với liều lợng khoảng Khi trồng để mầm nhô khỏi mặt đất, lấp đất lên 100kg/ha Khi bón phân tránh làm bẩn lá, thờng bón trớc trời có ma gây úng thối tới nớc, giữ cho thẳng đứng rễ phủ phải tới nớc sau bón phân Mỗi lần bón phân nên kết hợp với xới lấp chặt đất, đất không đủ ẩm để giữ gốc nên tới thêm nớc Sau đó, xáo đất để dễ hấp thụ [11] trời khô hạn phải thờng xuyên tới nớc giữ độ ẩm vừa đủ, trời ma liên Phòng trừ bệnh hại tục phải ý thoát nớc, dễ bị chết úng nớc Cây Lô hội vừa trồng xong mầm đỏ vàng, nhng câyđ Biểu bì Lô hội đợc bao bọc lớp giáp cứng, nên loại côn trùng khó gây hại Nhng điều kiện trồng với mật độ dày, đất bén rễ mầm xanh trở lại Cây Lô hội giống sau đa khỏi vờn ơm ẩm nhiệt độ thấp, Lô hội bị số loại trực khuẩn gây hại nên để chỗ râm mát từ - ngày, sau đem trồng Trên mặt xuất nhiều đốm đen ảnh hởng lớn đến chất lợng nhanh mọc mầm tỉ lệ sống cao [11] Kỹ thuật chăm sóc Biện pháp phòng trừ: Đảm bảo thông thoáng vờn trồng Lô hội Việc chăm sóc Lô hội chủ yếu gồm khâu kỹ thuật: phải kịp thời tiêu nớc để khống chế độ ẩm đất phù hợp, làm cỏ lúc - Tới nớc: Cây Lô hội chịu đợc nắng hạn nhng lại phát triển tốt giúp phát triển mạnh, tạo nên khả kháng bệnh tốt Nếu xuất dấu có độ ẩm đất vừa phải Vì vậy, mùa khô phải tới nớc thờng hiệu bệnh trực khuẩn gây ra, nên nhanh chóng cắt bỏ mang bệnh xuyên giữ độ ẩm cho đất Tốt - ngày phải tới nớc lần giúp đem tiêu hủy, tránh lây lan sang khác Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 11 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 12 Sơ đồ nhân giống vô tính Lô hội : Kết luận v đề nghị 5.1 Kết luận Cây trội tuyển chọn Từ kết nghiên cứu rút kết luận sau: 5.1.1.Sử dụng phơng pháp nhân giống vô tính Lô hội kỹ thuật nuôi cấy invitro cho hệ số nhân giống cao, chất lợng chồi tốt Lấy mẫu (chồi đỉnh) 5.1.2.Kỹ thuật tạo vật liệu khởi đầu invitro nên sử dụng mẫu vụ Xuân khử Xử lý cho nảy chồi trùng đơn dung dịch HgCl2 0,1% thời gian 7phút cho hiệu khử 10%MS+5mg/lBAP (4 tuần) trùng tốt, tỷ lệ mẫu sống bật chồi cao (68,5%) 5.1.3 Môi trờng thích hợp cho nhân nhanh chồi Lô hội invitro môi trờng MS bổ sung 2,5mg/l BAP + 0,6 mg/l NAA cho hệ số nhân cao (4,1 lần), chất lợng chồi tốt Khởi động chồi (môi trờng MS) (1 tuần) 5.1.4 Môi trờng thích hợp cho rễ tạo hoàn chỉnh môi trờng: MS bổ sung 0,5 mg/l IBA + 0,5 mg/l NAA + 0,3 g/l than hoạt tính cho tỷ lệ rễ cao (100%), chất lợng rễ tốt Nhân nhanh chồi 5.1.5 Giá thể Lô hội invitro thích hợp cát mịn Cây giá (MS +2,5mg/lBAP+0,6mg/lNAA ) Giâm chồi (IBA dạng bột) (3 tuần) thể tỷ lệ sống đạt (81,4%), sinh trởng phát triển chồi tốt Thời vụ không ảnh hởng đáng kể đến hiệu Lô hội invitro 5.1.6 Sử dụng phơng pháp huỷ đỉnh sinh trởng thời vụ làm tăng khả bật chồi Lô hội invitro làm nguyên liệu cho nhân giống.Thời vụ ảnh hởng không đáng kể đến khả nảy chồi 5.1.7.Phơng pháp xử lý chế phẩm dinh dỡng làm tăng khả phát sinh chồi Thúc rễ (MS+0,5mg/lIBA+0,6mg/lNAA +0,3g/l THT) (2 tuần) so với đối chứng 5.2.Đề nghị - Bớc đầu áp dụng kết nghiên cứu vào sản xuất giống Lô hội Ra (cát mịn) phơng pháp nuôi invitro - Tiếp tục thử nghiệm phơng pháp xử lý giâm hom thân để đề phơng pháp có hiệu kinh tế - Cần đánh giá tiếp chất lợng dợc liệu Lô hội đợc nhân phơng pháp invitro Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 71 Vờn mẹ Xử lý cho nảy chồi 10%MS+5mg/lBAP Cây giống (cao 12-14cm - nặng 12 - 15g) Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 72 Ti liệu tham khảo 15 xe, Y học thực hành Nhà xuất Thành phố Hồ Chí Minh I.Tài liệu tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997) Công nghệ sinh học 16 Cách dùng Lô hội chữa bệnh 17 18 Võ Văn Chi (1991), Từ điển thực điển thực vật thông dụng, Tập1, Nhà 19 Hoàng Thị Sản (2003), Phân loại học thực vật, Nhà xuất Giáo Dục 20 Nguyễn Văn Uyển (2000), Những phơng pháp Công nghệ Sinh học Thực vật, Tập I, Nhà xuất Nông nghiệp, Tp Hồ Chí Minh xuất Khoa Học Kỹ Thuật Nguyễn Văn Chơng, Trịnh Văn Thịnh (1991), Từ điển bách khoa 21 Phạm Tiến Dũng (2003), Xử lý kết máy vi tính INRISTAT 22 10 nghiệp Phạm Hoàng Hộ (1991), Cây cỏ Miền Nam Việt Nam, Tập 2, Nhà xuất Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh Viện sinh học nhiệt đới(1998), Tuyển tập công trình nghiên cứu khoa học ngành nông lâm nghiệp 1993-1998 Nhà xuất nông Windows, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Uyển tác giả(1995), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Nhà xuất nông nghiệp Nông nghiệp, Trung tâm quốc gia biên soạn - Hà Nội Mạnh Tùng (2004), Báo cáo Lô hội, Tặng phẩm từ thiên nhiên, số 32, Báo ngời Lao Động Võ Văn Chi (1991), Cây thuốc An Giang, Nhà xuất Uỷ ban khoa học Kỹ thuật An Giang sinh học - Công ty giống trồng Đông Bắc Bộ) Võ Văn Chi, Dơng Đức Tiến (1978), Phân loại thực vật - Thực vật bậc cao, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp Lê Thị Thu Thuỷ (2001), Báo cáo kết nhân giống dinh dỡng trồng phơng pháp nuôi cấy mô (Tài liệu hội thảo công nghệ http://www.baocantho.com.vn/vietnam/suckhoe/19049 Phạm Chí Thành (1998), Giáo trình Phơng Pháp Thí Nghiệm, Trờng Đại học Nông nghiệp I Hà Nội thực vật cải tiến giống trồng Nhà xuất nông nghiệp Võ Thanh Thái (1962), Tác dụng Lô hội vết thơng áp 23 Viện Di Truyền Nông nghiệp (2001), Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật (Giáo trình hớng dẫn thực tập), Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh II Tài liệu tiếng Anh 10.Đỗ Thanh Hội (1977), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB 24 Agarwal OP (1985), Prevention of atheromatous heart disease Angiology, pp 485- 492 Khoa Học Kỹ Thuật 25 Al-Awadi F, Fatania H, Shamte U (1991) The effect of a plants mixture 11 Kỹ thuật trồng Lô hội http://www.laocai.gov.vn/home 12 Những câu chuyện truyền kỳ Lô hội, http://www.phongdiep.net extract on liver gluconeogenesis in streptozotocin induced diabetic rats Hoàng Minh Tấn, Nguyễn Quang Thạch, Trần Văn Phẩm (1994), Giáo Diabetes Research 18, pp 163-168 13 trình Sinh Lý Thực Vật, NXB Nông nghiệp - Hà Nội 14 26 http://www.enwikipedia.org/wiki/ Nguyễn Quang Thạch (1995), ứng dụng công nghệ sinh học nuôi cấy mô tế bào Nhà xuất nông nghiệp Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 73 26.AloeVera - the free encyclopedia, 27 Ajabnoor MA (1990), Effect of Aloes on blood glucose levels in Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 74 28 normal and alloxan diabetic mice Journal of Ethnopharmacology 28, hypoglycemic pp.215-220 Investigacion Medica 22 pp 7-93 Brusick D Mengs (1997), Environmental and Molecular Mutagenesis 41 29, pp.1-9 29 30 42 Podiatric Medical Association, pp.559-562 43 Ghannam N and others (1986) The antidiabetic activity of Aloes: clinical and experimental observations Hormone antidiabetic plants Archivosde Smith L, Struck D (1997), The Aloe vera trail, Investigation of four 44 33 How much Aloe Vera gel should I drink?http://www.Aloe vera.org/ 34 Ishii Y, Tanizawa H, Takino Y (1994), Studies of Aloe V Mechanism Smith L., Blum J (1997), Police probe death of second patient treated Smith L, Lipton E (1997), Panel suspends the license of VA physician, Doctor's Aloe therapy suspected in deaths Washington Post Sept 27, Sec.A, 1:2 45 Smith L(1997), Judge rejects case against Doctor's aide, Man allegedly gave Aloe vera injections, Washington Post Nov 18, Sec.B of Ethnopharmacology, pp.117- 151 Hecht A (1981) The Overselling of Aloe vera FDA Consumer, pp.26-29 Schultz W Proposed Rules Federal Register (1997), Vol 62, pp.169 by Manassas Doctor Washington Post Sept 26 Grindlay D, Reynolds T (1986), The Aloe vera phenomenon: A review of the properties and modern uses of the leaf parenchyma gel Journal 32 some Washington Post, pp.36-38 Oral and topical activity of Aloe vera Journal of the American Research, pp 288-294 31 of patient deaths leads officials to company based in Maryland Davis RH, Leitner MG, Russo JM, Byrne ME (1989) Wound healing Preliminary effect 46 Sharma, J.K(1994), Pathological investigations in forest nurseries and palantiations in Vietnam.FAO VIE/92/022 Hanoi, Vietnam.46p of cathartic effect" Biological and Pharmaceutical Bulletin 17, pp.4 35 Nambiar E.K.S and A.G.Brow(1997), Management of soil, Nutrients and water in Tropocal Plantation Forests ACIAR CSIRO CIFOR.571 P 36 37 Nature's Choice Aloe Vera Online Catalog, June 22, 1998 O.Gramborg, G.C.Phillips (1997), Plant Cell, Tissue and Organ culture-by Fundamental Methods cell spinger Lab Manual 38 Odes H.S (1991), Madar Z.A double-blind trial of a celandin, Aloevera and psyllium laxative preparation in adult patients with constipation Digestion, pp.65-71 39 Premium Aloe Company Web site, June 22, 1998 40 Roman-Ramos R and others (1991) Experimental study of the Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 75 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 76 Phụ lục Phụ lục Một số hình ảnh minh hoạ Giai đoạn nhân nhanh Giai đoạn tạo hoàn chỉnh Mẫu bệnh Mấu nhiễm Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 77 Một số hình ảnh Lô hội vờn ơm Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 78 Cây Lô hội Cắt ngang Lô hội Chất gel Lô hội Hoa Cây Lô hội Các sản phẩm Lô hội Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 79 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 80 Phụ lục : Thành phần môi trờng MS (Murashige and Skoog - 1962 ) Một điều kiện quan trọng đảm bảo thành công cho nuôi cấy mô, tế bào thực vật xác định đợc môi trờng nuôi cấy Vitamine : Myo-inostol 100 ppm Glycine 2,0 ppm Niacine (acid nicotinic ) 0,5 ppm dinh dỡng MS (Murashige and Skoog - 1962) có thành phần nh sau: Pyridoxine (B6) 0,5 ppm Khoáng đa lợng : Thiamine HCL (B1) 0,1 ppm đề tài sử dụng môi trờng nuôi cấy giàu chất KNO3 1.900 ppm NH4NO3 1.650 ppm Môi trờng nuôi cấy trình chuẩn bị đợc bổ xung thêm đờng KH2PO4 170 ppm Saccharose 30 gram/lít, chất kích thích sinh trởng, thạch agar gram/lít MgSO4.7H2O 370 ppm chất phụ gia khác Các môi trờng sau nuôi cấy đợc chắt vào bình CaCl2.2H2O 440 ppm thuỷ tinh với thể tích 50 - 70 ml, sau đợc vô trùng cách hấp nhiệt độ 130oC, áp xuất 1,2 atm thời gian 20-30 phút Khoáng vi lợng : KI 0,83 ppm H3BO3 6,2 ppm MnSO4.4H2O 22,3 ppm ZnSO4.7H2O 8,6 ppm Na2MoO4.H2O 0,25 ppm CuSO4.5H2O 0,025ppm CoCl2.6H2O 0,025ppm Sắt - EDTA : Na2.EDTA 37,3 ppm FeSO4.7H2O 27,8 ppm Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 81 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 82 Phụ lục 3: Số liệu xử lý thống kê sinh học FILENAME : Bang 4.3 TITLE : Anh hng cua BAP den kha nang nhan nhanh A N A L Y S I S O F Comparison 2-C means TREATMENT C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 REP TOTALS REP MEANS : = = = = = = = = CT (C) = c1 c2 c3 c4 c5 c6 c7 Chieu cao choi (cm) r1 r2 r3 2.7 2.9 3.0 3.1 3.7 2.8 3.3 2.5 2.7 2.8 2.8 3.8 3.1 3.1 2.9 3.1 4.2 3.4 3.6 4.5 3.5 14.8 3.0 13.3 2.5 16.3 3.6 ANALYSIS OF VARIANCE FOR chieu cao choi =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.64285714 0.32142857 67.50 ** CT (C) 1.28571429 0.21428571 45.00 ** ERROR 12 0.05714286 0.00476191 TOTAL 20 1.98571429 =============================================================================== cv = 3.3% ** = significant at 1% level TABLE OF CT (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT MEANS DIFFERENCE -C1 (CONTROL) C2 ** C3 ** C4 ** C5 ** C6 ** C7 ** -MEAN -** = significant at 1% level Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 83 LSD(5%) 0.12 LSD(1%) 0.1 TABLE OF CT (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT RANKS MEANS -c1 2.70 a c2 2.90 b c3 3.00 bc c4 3.10 c c5 3.70 d c6 3.80 d c7 3.30 d -MEAN 2.11 -Means followed by a common letter are not significantly different at the 5% level by DMRT V A R I A N C E RANDOMIZED COMPLETE BLOCK DESIGN REPLICATION (R) S.E.D 0.03 He so nhan (lan) C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 r1 r2 r3 1.1 1.9 2.5 2.8 3.1 3.7 3.5 0.8 2.0 2.4 2.7 3.2 3.6 3.3 1.2 1.8 2.6 2.9 3.0 3.8 3.7 REP TOTALS 18.6 18.0 REP MEANS 2.8 2.6 ANALYSIS OF VARIANCE FOR He so nhan 19.6 2.7 =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.14095238 0.07047619 2.08 ns CT (C) 16.40285714 2.73380952 80.86 ** ERROR 12 0.40571429 0.03380952 TOTAL 20 16.94952381 =============================================================================== cv = 6.8% ** = significant at 1% level; ns = not significant TABLE OF CT (C) MEANS FOR he so nhan (lan) (AVE OVER REPS) -CT MEANS DIFFERENCE -C1 (CONTROL) 1.10 C2 1.90 0.97 ** C3 2.50 1.57 ** C4 2.80 1.77 ** C5 3.10 2.07 ** C6 3.70 2.77 ** C7 3.50 2.57 ** Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 84 -MEAN 2.70 -** = significant at 1% level Comparison 2-C means S.E.D 0.15 LSD(5%) 0.33 FILENAME : bang 4.4 TITLE : Anh hng cua kinetin en kha nang nhan nhanh A N A L Y S I S LSD(1%) 0.46 O F V A R I A N C E RANDOMIZED COMPLETE BLOCK DESIGN TABLE OF CT (C) MEANS FOR he so nhan (lan) (AVE OVER REPS) -CT RANKS MEANS -c1 1.10 a c2 1.90 b c3 2.50 c c4 2.80 cd c5 3.10 d c6 3.70 e c7 3.50 e -MEAN 2.70 -Means followed by a common letter are not significantly different at the 5% level by DMRT *** END OF ANALYSIS OF VARIANCE RUN *** REPLICATION (R) TREATMENT C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 : = = = = = = = = CT (C) = c1 c2 c3 c4 c5 C6 C7 Chieu cao choi (cm) r1 2.7 2.8 2.9 2.9 2.8 2.5 2.2 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 REP TOTALS REP MEANS 19.1 2.7 r2 2.5 2.6 2.6 2.7 2.5 2.7 2.4 r3 2.9 3.0 3.2 3.1 3.1 2.6 2.3 18.0 2.6 20.2 2.9 ANALYSIS OF VARIANCE FOR chieu cao choi =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.57600000 0.28800000 96.00 ** CT6 (C) 0.08400000 0.02100000 7.00 * ERROR 0.02400000 0.00300000 TOTAL 14 0.68400000 =============================================================================== cv = 3.0% ** = significant at 1% level; * = significant at 5% level TABLE OF CT6 (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT6 MEANS DIFFERENCE -C1 (CONTROL) 2.70 C2 2.80 0.10 ns C3 2.90 0.20 ** C4 2.90 0.20 ** C5 2.80 0.10 ns C6 2.50 C7 2.20 -MEAN 2.62 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 85 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 86 ** = significant at 1% level C1 is excluded from the analysis ns = not significant Comparison 2-C means S.E.D 0.04 LSD(5%) 0.10 LSD(1%) 0.15 TABLE OF CT (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT RANKS MEANS -c1 2.70 b c2 2.80 bc c3 2.90 c c4 2.90 c c5 2.80 bc C6 2.50 ab C7 2.20 a -MEAN 1.82 -Means followed by a common letter are not significantly different at the 5% level by DMRT Comparison 2-C means S.E.D 0.04 LSD(5%) 0.10 TABLE OF CT (C) MEANS FOR he so nhan (lan) (AVE OVER REPS) -CT RANKS MEANS -C1 1.00 a c2 2.60 bc c3 2.70 c c4 2.90 d c5 2.60 bc C6 2.3 b C7 2.1 a -MEAN 1.70 -Means followed by a common letter are not significantly different at the 5% level by DMRT *** END OF ANALYSIS OF VARIANCE RUN *** LSD(1%) 0.15 he so nhan (lan) C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 REP TOTALS REP MEANS r1 r2 r3 1.0 2.6 2.7 2.9 2.6 2.3 2.1 1.0 2.7 2.8 2.8 2.5 2.4 2.0 1.0 2.5 2.6 3.0 2.7 2.2 2.2 16.2 2.3 16.2 2.3 16.2 2.3 ANALYSIS OF VARIANCE FOR he so nhan =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.00000000 0.00000000