Luận văn sư phạm Xác định hàm Vitamin C trong thuốc trong thuốc Bolero bằng phương pháp Vôn - Ampe

Tr ng HSP Hà N i Tr Khóa lu n t t nghi p ng i h c s ph m hà N i Khoa hoá h c võ th h ng v nh xác đ nh hàm l ng vitamin c thu c bolero b ng ph ng pháp vôn - ampe Khoá lu n t t nghi p đ i h c Chun ngành: Hố phân tích Ng ih ng d n khoa h c ts nguy n v n h i Hà N i - 2010 Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p L IC M N Em xin g i l i c m n chân thành nh t t i TS Nguy n V n H i đư h ng d n, ch b o em t n tình, giúp em hồn thành khóa lu n t t nghi p Qua đây, em c ng xin g i l i c m n t i th y giáo, giáo khoa Hóa h c Tr ng i h c s ph m Hà N i đư t n tình d y d em trình h c t p M c dù r t c g ng nh ng em v n không th tránh kh i nh ng thi u sót Vì v y em kính mong nh n đ c s đóng góp chân thành c a th y giáo, cô giáo b n sinh viên quan tâm Hà N i, tháng 05 n m 2010 Sinh viên th c hi n Võ Th H ng V nh Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p L I CAM OAN Khóa lu n “Nghiên c u xác đ nh hàm l ng vitamin C thu c Bolero b ng ph ng pháp vơn-ampe” đ c hồn thành d i s h ng d n tr c ti p c a TS Nguy n V n H i Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng Các s li u k t qu nêu khóa lu n trung th c, khơng trùng v i khóa lu n khác đư cơng b Hà N i, tháng 05 n m 2010 Sinh viên th c hi n Võ Th H ng V nh Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p M U Vitamin C (Vit.C) hay g i axit L-ascobic m t nh ng lo i h p ch t quan tr ng đ i v i s s ng c a ng i Vit.C gi vai trị quan tr ng cho q trình chuy n hố protein c th oxi hoá nhi u axit amin th m nh tyrozin, phenylalinin Vit.C có kh n ng ch ng oxi hốμ Vit.C đóng vai trị quan tr ng vi c ng n ch n trình s n xu t g c t do, b o v axit béo không no c a màng t bào, đ ng th i b o v Vitamin E ch t ch ng oxi hoá c a màng t bào, kích thích q trình t ng h p trì ch t keo, k t qu t ng s c đ kháng v s c kho mô Trong d c ph m, Vit.C tham gia vào nhi u q trình chuy n hố c th Ch ng oxi hố b ng cách trung hồ g c t do, s n sinh ph n ng chuy n hố nh b o v đ c tính tồn v n c a màng t bào; làm gi m nh y c m c th v i Histamin; ch ng stress… Nên giúp t ng s c đ kháng cho c th , tham gia t o colagen m t s thành ph n khác t o nên mô liên k t x ng r ng m ch máu S thi u h t Vit.C dù ch v i hàm l ng nh s gây nhi u nh h ng x u đ n s c kho Vit.C đ n c tìm th y trái cây, đ đóng h p, d c u ng trái cây… u ki n nhi t đ ánh sáng bình th ng axit ascobic m t ch t r t d b phân hu Do vi c xác đ nh đ i t m t cách xác, nhanh chóng m t yêu c u đ Nam, ph ph c ph m, rau qu , ng nghiên c u c đ t hàng đ u Vi t ng pháp xác đ nh Vit.C phịng thí nghi m ch y u v n ng pháp chu n đ th tích, có đ xác đ nh y không cao Theo nghiên c u, Vit.C m t h p ch t có tính kh , có th phân tích b ng Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i ph ng pháp n hoá, đ c bi t ph nh ng ph Khóa lu n t t nghi p ng pháp vôn-ampe ây m t ng pháp phân tích h p ch t h u c nhanh đ t đ c đ xác cao, chi phí cho máy móc hố ch t r t phù h p v i u ki n c a phịng thí nghi m c a Vi t Nam Vì v y, tơi ch n đ tài: XÁC NH HÀM L NG VITAMIN C TRONG THU C BOLERO B NG PH NG PHÁP VÔN - AMPE Nhi m v đ t ra: - Nghiên c u quy trình xác đ nh Vit.C b ng ph ng pháp vơn-ampe m t cách nhanh chóng, đ xác cao, chi phí th p, d th c thi phịng thí nghi m Vi t Nam - ánh giá đ tin c y c a quy trình phân tích - ng d ng xác đ nh Vit.C thu c Bolero Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p N I DUNG CH NG T NG QUAN TÀI LI U 1.1 IC NG V Vit.C 1.1.1 Công th c vƠ nh n đ nh Vit.C tên th ng g i c a axit L-ascobic, có tên qu c t làμ 2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone-2,3-enediol ho cμ (R)-3,4-đihydroxy-5-((S)-1,2-đihydroxylethyl)furan-2-(5H)-one Công th c phân t μ C6H8O6 Kh i l ng phân t μ 176,1 Nhi t đ nóng ch yμ 1λ3°C Cơng th c c u t oμ 6CH2OH OH O HO O (*) OH pK1 (C3-OH) : 4,2 pK2 (C3-OH) : 11,6 Trong công th c c u t o c a axit ascobic, C4*, C5* Cacbon b t đ i, v y t n t i đ ng phân quang h cμ axit L-ascobic, axit izo L-ascobic, axit Dascobic, axit izo D-ascobic Trong đ ng phân ch có axit L-ascobic izo L-ascobic có tác d ng ch a b nh, đ ng phân D iso D antivitamin, t c ch t c ch tác d ng c a vitamin Trong thiên nhiên ch t n Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p t i d ng axit L-ascobic, đ ng phân khác ch thu đ c b ng đ ng t ng h p Axit ascobic r n nh ng tinh th đ n tà, khơng màu, khơng mùi, có v chua, nóng ch y r 1λ3°C Axit ascobic d tan n c, tan h n u không tan dung môi h u c không phân c c Axit ascobic r t d b phân h y d i tác đ ng c a ánh sáng, nhi t đ Vì v y c n b o qu n axit ascobic bóng t i nhi t đ th p 1.1.2 Tính ch t hóa h c a Tính kh Axit ascobic ch t kh m nh, có bán ph n ng nh sauμ CH2OH OH CH 2OH OH O O O HO O OH O Ax it L- ascobic 2H + O Ax it L- dehidroascobic Th kh c a ph thu c nhi u vào pH c a môi tr Axit ascobic 2e- ng d ng khan b n v ng, nh ng phân t có nhóm OH đính vào C ch a no (C2, C3) nên b m t ho c dung d ch r t d b oxi hóa, c b i oxi khơng khí, nh t có m t ion kim lo iμ đ ng, s t, magiê… theo ph n ng sauμ CH 2OH CH2OH OH OH O O HO O O 1/ O2 OH Võ Th H ng V nh O H 2O O K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p S n ph m t o axit L-đehiđroascobic, ch t c ng có ho t tính sinh h c t ng t nh axit L-ascobic, nh ng khơng b n, d b th y phân phá vòng t o axit 2,3-đixetogulonic CH2OH-(CHOH)2-CO-CO-COOH, ch t khơng có tác d ng sinh lí T c đ oxi hóa axit ascobic thành axit L-đehiđroascobic l n pH t ng Các ch t saccaroz , carotenoit, flavonoit,… có kh n ng làm ch m q trình oxi hóa c a axit ascobic nên đ c dùng làm ch t n đ nh hóa Vit C C ch s phân h y c a axit ascobic b i ch t oxi hóa có th đ c bi u di n theo s đ sauμ CH 2OH CH 2OH OH OH O O - 2e- O 2H + OH C HO OH HO [ O] O COOH OH [ O] CH 2OH CH 2OH C HO OH H 2O HO CH 2OH CH 2OH Axit 2,3- dixetogulonic Axit L- dehidroascobic HO COOH HO O Axit L- ascobic COOH C O OH H 2O O +2e +2H + HO COOH C O C HO C OOH [ O] HO C HO [ O] HO CH 2OH CH 2OH CH 2OH [ O] [ O] COOH COOH [ O] [ O] CH 2OH HO C O COOH [ O] C O CH 2OH CH 2OH HO CH 2OH Có th CH 2OH C O COOH [ O] C O CH 2OH th y, axit L-ascobic đ u tiên b oxi hóa thành axit L- đehiđroascobic D i tác d ng c a n c, axit L-đehiđroascobic b th y phân m vịng t o thành axit 2,3-đixetogulonic khơng cịn ho t tính vitamin n a Ph n ng không thu n ngh ch, t ng nhanh theo pH nhi t đ c a dung Võ Th H ng V nh K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p d ch Ti p theo, axit 2,3-đixetogulonic b phân h y thành m t lo t s n ph m trung gian khác, cu i t o axit oxalic Ngoài s phân h y theo ki u oxi hóa, axit ascobic cịn có xu h phân h y theo ki u th y phân môi tr ng ng ki m ho c axit m nh thành fufurol s n ph m khác qua ph n ng decacboxyl hóa dehydrat hóa T ng t nh v y, axit ascobic d dàng nh ng hiđro cho peoxit, v y ng n khơng cho peoxit oxi hóa h p ch t khác Do đó, ng i ta s d ng axit ascobic làm ch t ch ng oxi hóa cơng nghi p ch bi n b Tính axit Trong dung d ch n t c axit ascobic m t axit y u n c 1, pK a,1=4,2 ng ng v i trình phân ly H+ c a nhóm OH đính vào C3 (*) r t y u n c 2, pKa,2=11,6 t ng ng v i s phân ly H+ c a nhóm OH đính vào C2 (*) Axit ascobic d dàng ph n ng v i dung d ch baz m nh nh NaOH, KOH, Ca(OH)2 t o mu iμ CH 2OH CH2OH OH OH O O O HO O NaOH OH NaO Các mu i d tan n H 2O OH c h n axit ascobic nên công nghi p h s d ng d ng mu i c a axit ascobic làm ch t b o qu n dung d ch n c qu Trong dung d ch ki m đ c, vòng  -lacton b phá v t o mu i gluconatμ CH 2OH OH O O HO NaOH CH 2OH (CHOH)3 OH Võ Th H ng V nh C COONa H 2O O K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Tuy nhiên axit hóa đun nh vịng lacton l i l p l i c Tác d ng v i axit h u c t o este Trong CTCT c a axit ascobic có nhi u nhóm OH nh nhóm ch c r u, có kh n ng t o este v i axit h u c , đ c bi t axit béo nh axit panmitic, axit stearic S n ph m este d ng 6-O-axyl L-ascobic (ascobyl panmitat, ascobyl stearat) có m ch cacbon dài, d tan d u Nh ng este đ c t ng h p dùng làm ch t b o qu n ch t béo công nghi p ch bi n M t s d n xu t khác c a axit ascobic c ng đ CH2OH CH2OH OH OH O O O R RO HO OH 3- O- anky l ax it ascobic CH 2OCOR OH 5,6- O- anky liden ax it ascobic CH 2OH OH CH 2OH OH OH O O O HO O O OR 2- O- ankyl ax it ascobic O O O HO c s d ng làμ OH 6- O- ankanoyl ascobat O O HO OCOR 2- O- ankanoy l ascobat O ROCO OH 3- O- ankanoy l ascobat Trong đó, R g c hiđrocacbon m ch dài, có th no ho c không no, giúp cho d n xu t c a axit ascobic d tan d u béo h n 1.1.3 Ho t tính sinh hóa Vit.C có tác d ng t ng c hi n t ng s c đ kháng cho c th , ch ng l i ng choáng ho c ng đ c hóa ch t, đ c tính c a vi trùng tính ch t kh m nh c a Vit.C Vit.C tham gia vào trình oxi hóa kh khác c a c th nh μ Chuy n hóa h p ch t th m thành phenol; q trình hyđroxyl hóa triptophan thành hyđroxyltritophan; u hòa s t o AND t ARN; chuy n Võ Th H ng V nh 10 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i 3.1.5.2 Ki m tra đ Khóa lu n t t nghi p ng chu n ki m tra đ xác c a đ ng chu n, pha dung d ch Vit.C có n ng đ coi nh n ng đ th c (µx), đo đ d ch đó, dùng đ theo đ ng chu n xác đ nh đ ng chu n v i giá tr th c lu n đ xác c a đ Ti n hành ghi đ x ng c c ph c a Vit.C dung c n ng đ Cx So sánh Cx tìm đ v i đ tin c y th ng kê cho tr ng chu n tìm đ cđ k t c ng c c ph c a Vit.C t i n ng đ µx1=1,2mg/l µ x2=4,8mg/l, l p l i l n Thay t ng giá tr y đo đ đ c vào ph ng chu n iP = (24,754 ± 0,007).CVit.C + (10 ± 2), thu đ ng trình c giá tr n ng đ Cx1, Cx2 nh b ng 3.6 B ng 3.6: ánh giá đ xác c a đ ng chu n iP = f(CVit.C) N ng đ Vit.C th c (mg/l) 1,20 4,80 1,180 4,856 1,176 4,815 1,216 4,735 1,167 4,735 1,224 4,815 1,188 4,775 1,180 4,856 1,200 4,735 Giá tr đo l p l i Giá tr trung bình Gi i h n tin c y l ch chu n S l ch chu n giá tr trung bình Sai s t ng đ i q% Sai s t ng đ i gi a lí thuy t th c nghi m % 1,191 0,017 0,020 4,790 0,044 0,053 0,007 1,05 0,019 0,84 0,73 H ng s Student th c nghi m H ng s Student lí thuy t Võ Th H ng V nh c 1,230 2,365 50 0,21 0,530 2,365 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p So sánh tTN v i tb(0,05; 7) = 2,365 tTN < tb V y s khác gi a giá tr n ng đ C tính theo đ ng chu n giá tr µx đư pha ng u nhiên v i đ tin c y λ5% Xác đ nh n ng đ kho ng 0,5÷30mg/l (2,84.10-6 đ n 1,70.10-4M) có đ t t Ph ng pháp đo không m c sai s h th ng Khi xác đ nh m u th c t , ti n hành đo kh o sát tr c, sau pha loưng dung d ch m u cho n ng đ n m kho ng t i u xác đ nh 3.1.5.3 Gi i h n phát hi n c a ph S d ng đ Cmin  ng pháp ng chu n, tính theo quy t c 3  0,2589mg / l  0,26mg / l  1,48.106 M a Th c nghi m cho th y u ki n xác đ nh đ ng chu n, đo sóng c c ph xung vi phân c a Vit.C t i n ng đ 0,25mg/l khơng xác đ nh đ ph c pic c a Vit.C K t qu phù h p v i lí thuy t tính đ nh y c a ng pháp 0,26mg/l Các k t qu v đ qu ghi đ ch ng chu n, gi i h n phát hi n đ ng c c ph theo ch ng trình đo, g m kích th ng trình đo c tính d a k t b ng 2.1 Vì v y thay đ i c gi t, biên đ xung, t c đ quét… d n đ n thay đ i giá tr chi u cao pic đo đ c, v y h s a, b c a đ ng chu n c ng nh gi i h n phát hi n có th thay đ i Tuy nhiên m c đích c a b n khóa lu n khơng ph i t ng đ nh y mà ch c n xác đ nh kho ng n ng đ t i u xác đ nh Vit.C t i m t u ki n đo c đ nh đư ch n K t qu đ nh h ng cho nghiên c u m u th c t ti p theo 3.1.6 Kh o sát ch t nh h ng Nghiên c u tài li u cho th y đ i t lo i qu , lo i d th c ph m m t s lo i n ng xu t hi n Vit.C c đóng h p, m t s ch t c bi t vitamin nhóm B thu c, hay axit h u c rau qu , có hàm l Võ Th H ng V nh ng th c t nh μ thu c, 51 ng t ng đ i l n, b ng ho c nhi u K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i h n c l Khóa lu n t t nghi p ng Vit.C Tuy nhiên vitamin có thu c v i Vit.C khơng th hi n tính ch t c c ph t i vùng th nghiên c u, v y vitamin khơng nh h ng đ n phép đo 3.1.6.1 Kh o sát nh h ng c a axit h u c Axit oxalic, axit tactric, axit xitric axit h u c có nhi u nh t lo i rau qu Công th c c u t o pKa t COOH ng ng làμ HO HOOCH2C C CH2COOH HOOC C CH COOH OH H OH HOOC COOH Axit oxalic Axit xitric Axit D- tactric pKa1=3,128 pKa1=3,036 pKa1=1,27 pKa2=4,761 pKa2=4,366 pKa2=4,25 pKa3=6,396 Ti n hành th c nghi m kh o sát nh h Vit.C ođ kh i l ng g p k l n K t qu đ ng c a chúng lên pic c a ng c c ph c a Vit.C 2mg/l có m t axit v i t l Võ Th H ng V nh c đ a b ng 3.7 52 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p B ng 3.7: K t qu kh o sát nh h ng c a axit oxalic, axit xitric, axit tactric lên sóng c c ph c a Vit.C Axit tactric Ca/C0 iP %iP/i0P Axit xitric Ca/C0 (nA) iP Axit oxalic %iP/i0P Ca/C0 (nA) iP %iP/i0P (nA) 115 0,00 114 0,00 115 0,00 25 109 5,50 25 103 9,65 50 112 2,61 50 108 6,48 50 103 9,65 100 107 6,96 200 102 12,75 100 102 10,53 150 105 8,70 400 99,5 15,58 200 101 11,40 200 103 10,43 500 98 17,35 300 101 11,40 250 102 11,30 400 98,3 13,77 300 98,8 14,09 500 97,8 14,21 Nh n xét: K t qu cho th y có m t axit h u c khác g p đ n hàng tr m l n v kh i l ng, pic c a Vit.C n ng đ 2mg/l v n cho k t qu t t, pic v n cân đ i, th d ch chuy n v phía d Tr ng h n, chi u cao pic có b gi m ng h p có m t axit oxalic g p 200 l n v kh i l m i gi m 10%, ng chi u cao pic axit tactric kho ng 150 l n axit xitric 100 l n Pic c a Vit.C b gi m ch hàm l ng axit oxalic, axit xitric, axit tactric l n, đ nh t c a dung d ch t ng làm gi m h s khu ch tán Phân t c a chúng c ng k nh, đ linh đ ng c a dung d ch nh h ng m nh h n đ n chi u cao pic, có th th y axit xitric c ng k nh h n axit oxalic nên ch c n hàm l ng g p 100 l n đư làm gi m pic 10% cịn axit oxalic ph i đ n 200 l n Võ Th H ng V nh 53 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Tuy nhiên vi c gi m chi u cao pic khơng gây khó kh n cho phân tích n u phân tích n ng đ 10-5M, m c đích sóng c c ph c a Vit.C v n xu t hi n v i ch t l ng t t H n n a ta th y axit khơng ch a nhóm ch c d b oxi hóa nh Vit.C Do v y chúng khơng th hi n ho t tính c c ph kho ng th c a Vit.C ph ây m t nh ng u m c a ng pháp phân tích c c ph có đ ch n l c cao Có th phân tích m t ch t ch t có m t l ng l n ch t khác K t qu c ng phù h p v i k t qu đ a b i ph ng pháp phân tích Vit.C b ng n c c bi n tính n c c sinh h c 3.1.6.2 Kh o sát nh h ng c a ion clorua Trong lo i th c ph m th Ion có m t ng ch a m t l ng nh t đ nh ion clorua n ng đ l n có th gây c n tr quy trình phân tích Vì v y tơi ti n hành kh o sát gi i h n n ng đ cho phép đ i v i ion clorua ph ng pháp phân tích c c ph Vit.C Theo tài li u nghiên c u ion clorua nh h ng ch y u đ n th oxi hóa c a gi t th y ngân, n ng đ l n th oxi hóa c a th y ngân chuy n v vùng âm h n, ngh a chuy n d ch v phía pic c a Vit.C n m t n ng đ đó, đ ng c c ph c a th y ngân s bao trùm lên pic c a Vit.C Ti n hành đo đ clorua theo hàm l ng c c ph c a Vit.C 2mg/l, thay đ i n ng đ ion ngμ 5, 10, 50, 100, 250, 500mg/l t ng ng 1,4.10-4M; 2,8.10-4M; 1,4.10-3M; 2,8.10-3M; 7.10-3M; 1,4.10-2M K t qu cho hình 3.λ Võ Th H ng V nh 54 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Hình 3.9: Sóng c c ph c a Vit.C có m t ion clorua v i n ng đ t ng d n Nh n xét: Khi hàm l ng ion clorua dung d ch t ng d n, giá tr th đ nh pic c a Vit.C không thay đ i nhi u (t -47,6mV khơng có Cl- chuy n d ch theo chi u d ng đ n -41,7mV n ng đ Cl- l n h n 100mg/l ) th oxi hóa c a th y ngân chuy n d ch theo chi u âm, g n pic cua Vit.C h n Do v y n ng đ c a l n h n 10 -2M, m c dù v n xu t hi n pic c a Vit.C nh ng máy tính khơng th xác đ nh chi u cao pic đ c n a Có th k t lu n n ng đ ion clorua nh h n 10-2M v n có kh n ng phân tích Vit.C b ng c c ph Trong tr ng h p hàm l ng ion clorua l n, ph i x lí v i b c nitrat l c b k t t a 3.1.7 b n c a Vit.C môi tr ng khác Vit.C ch t r t d b phân h y, nh t dung d ch nên luôn ph i pha m u chu n theo ngày Tuy nhiên ngày dung d ch Vit.C c ng có th b phân h y m t l ng nh gi m t i đa hi u ng này, c n ch n dung d ch pha Vit.C, hay dung d ch dùng đ chi t Vit.C m u th c t Võ Th H ng V nh 55 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p cho đ b n c a Vit.C l n nh t Ngh a mơi tr ng hịa tan oxi h n, kìm hưm t c đ oxi hóa axit ascobic Theo tài li u cho bi t, Vit.C b n h n môi tr th i môi tr ng pH th p, đ ng ng axit, oxi c ng hịa tan h n Có th pha dung d ch đ m photphat, ho c dung d ch h n h p axit metaphotphat axit axetic hay đ n gi n n c Tuy nhiên c ch phân h y Vit.C b i oxi r t ph c t p v y ti n hành kh o sát đ b n c a Vit.C môi tr ng khác Do quy trình phân tích c c ph Vit.C n n axetat nên ch n môi tr ng dung d ch axit axetic 0,1M (pH=2,76), dung d ch đ m axetat 0,1M (pH=4,66) n hòa tan tr c T t c dung d ch đ u pha b ng n c c t l n đu i oxi c pha m u Pha loưng l n dung d ch Vit.C g c b ng dung d ch đư đ c đu i oxi: a Dung d ch axit axetic 0,1M b Dung d ch đ m axetat 0,1M (5μ5) c N cc t2l n dung d ch v a pha ti p xúc v i khơng khí Theo dõi n ng đ Vit.C dung d ch theo th i gian, sau t phút, l y 0,1ml t ng dung d ch, đo sóng c c ph c a Vit.C 10ml dung d ch đ m axetat theo quy trình ghi b ng 2.1, ghi l i chi u cao pic sau m i l n đo, t = 0, 30, 60, 180, 240 phút K t qu thu đ Võ Th H ng V nh c b ng 3.8 56 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p B ng 3.8: Chi u cao pic Vit.C theo th i gian môi tr ng khác Th i gian Vit.C 200mg/l (phút) Trong HAc Trong đ m Ac Trong n 69,5 66,9 69,7 30 70,8 67,1 68,6 60 70,7 64,7 68,9 180 70,9 57,8 69,2 240 69,7 54,0 68,0 c Nh n xét: T th c nghi m cho th y, sau 240 phút, Vit.C dung d ch axit axetic n c h u nh không thay đ i, m c dù đ ngồi khơng khí, cịn dung d ch đ m axetat ( 5μ5, pH= 4,7) chi u cao pic gi m 5% sau 60 phút Vì v y pha dung d ch Vit.C g c c ng nh dung d ch chu n pha loưng t dung d ch g c b ng n c ho c b ng dung d ch axit axetic đư lo i oxi v n đ m b o đ b n su t th i gian làm vi c Tuy nhiên đ đ n gi n ch n dung môi n c đ pha ch dung d ch chu n Vì v y x lý m u dùng dung d ch axit axetic 0,1M có pH=2,76 đ chi t Vit.C, đ ng th i d ch chi t ch a Vit.C thu đ c s b n trình đo Võ Th H ng V nh 57 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Hình 3.10: Khóa lu n t t nghi p th bi u di n đ b n c a dung d ch Vit.C theo th i gian môi tr ng khác a.Vit.C pha axit axetic 0,1M b.Vit.C pha đ m axetat 0,1M c Vit.C pha n c Tóm t t u ki n t i u xác đ nh Vit.C: Qua kh o sát đư ch n đ ph c u ki n t i u xác đ nh Vit.C b ng ng pháp von-ampe • pH=4,66 t o sóng c c ph c a Vit.C n n đ m axetat 0,1M có ng ng t l CHAc= CAc , th i gian đu i khí oxi hịa tan tr c cho Vit.C vào bình đo λ0s • Kho ng n ng đ t i u phân tích r ng, t 0,5ữ30mg/l t ng ng 2,84.10-6M ữ 1,70.10-4M ã Ch ng trình đo máy tính đ c ch n t i u theo g i ý c a nhà s n xu t, theo tài li u tham kh o theo kinh nghi m th c t - Kho ng th quét t -250mV ÷ +100mVμ kho ng th thu đ kinh nghi m th c t , khơng nên q h p s không quét đ ct c h t chân ph , nhiên c ng không nên r ng s t n th i gian đo Võ Th H ng V nh 58 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p - Th i gian cân b ng tr c quét th μ 10s đ đ giúp cho dung d ch tr l i tr ng thái t nh, n đ nh sau khu y tr n - Biên đ xungμ 50mV -B c nh y th μ 6mV - Th i gian cho m t xungμ 40ms - Th i gian m t b c nh yμ 0,4s - T c đ quétμ 15mV/s • Dung d ch Vit.C g c dung d ch chu n pha loưng t dung d ch g c ph i đ c pha theo ngày pha b ng n c c t l n đư lo i oxi hòa tan Các dung d ch đ m b o đ b n th i gian phân tích • Các axit h u c nh axit oxalic, axit xitric, axit tactric ion clorua không nh h ng đ n sóng c c ph c a Vit.C kho ng n ng đ cho phép D a k t qu c a ph n nghiên c u c b n, ti n hành đ nh l Vit.C m u th c t V i m i lo i đ i t đ a quy trình x lý riêng phù h p v i ph 3.2 XÁC ng đ u đ ng c kh o sát s b đ ng pháp phân tích NH VIT.C TRONG M U TH C T M u thu cμ Thu c Bolero, d ng viên s i c a Eurostock Ltd, Bulgary Thành ph n có m t viên s i Boleroμ Vitamin C 12mg Vitamin B6 0,4mg Vitamin A 500 IU Vitamin B12 0,6µg Vitamin E 3mg Nikotinamid 3,6mg Vitamin B1 0,3mg Calcium D-pantothenat 2,4mg Vitamin B2 0,4mg Axit folic Hoà tan hoàn toàn m t viên thu c Bolero vào n 32µg c, đ nh m c thành 100ml dung d ch m u (B1) Xác đ nh Vit.C m u (B1) theo ph ng pháp thêm chu n Võ Th H ng V nh 59 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Hút 10ml dung d ch đ m Axetat 0,1M, pH=4,66 vào bình đo, đu i khí λ0s, thêm 0,1ml dung d ch m u (B1), đo sóng c c ph đ c giá tr y0k, thêm l n 0,1ml dung d ch Vit.C chu n 100mg/l, đo sóng c c ph đ c giá tr y 1k, y2k, k s l n l p, k=3 B ng 3.9: K t qu đo xác đ nh m u th c t STT ximg/l) yik, nA 0,00 45 46 45,1 44,9 45,25 0,98 84,7 83,6 83,5 84 83,95 1,94 124 122 122 122 122,50 yi , nA xμ t ng n ng đ chu n thêm vào dung d ch, mg/l yμ chi u cao pic c a Vit.C, nA X lí đ ng thêm chu n theo ph ng pháp h i quy n tính Excel: y = (39,8 ± 0,4)x + (45,1 ± 0,5) H s t ng quan μ r = 0,9999 ng thêm chu n c t tr c hoành t i xm, giá tr xm đ c xác đ nh theo đ nh lu t lan truy n sai s (công th c 2.17)μ xm = (1,1352 ± 0,0275) N ng đ Vit.C m u B1 làμ Cm = (114,7 ± 2,8) mg/l Vì m t viên hoà tan vào n l c đ c 100ml dung d ch B1 nên hàm ng Vit.C m t viên thu c làμ (11,5 ± 0,3) mg/viên l ch kh i giá tr trung bình là: 2,61% So sánh v i giá tr nhà s n xu t đ a 12 mg/viên, sai khác 4,17% Võ Th H ng V nh 60 K32C - Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Nh n xét: Hàm l ng Vit.C thu c th ng l n, v y c n pha loãng dung d ch m u cho n ng đ n m kho ng 50÷1000mg/l Vit.C b ng ph ng pháp c c ph theo ph xác đ nh ng pháp thêm chu n (thêm 0,1ml m u vào 10ml dung d ch đ m ngh a pha loưng thêm 100 l n) n ng đ Vit.C dung d ch đo n m kho ng 0,5÷10mg/l Tính c hàm l ng Vit.C thêm chu n v n n m kho ng t i u (≤ 30mg/l) K t qu xác đ nh Vit.C thu c Bolero có đ l p t t, sai s t đ i q