Xác định hàm vitamin c trong thuốc trong thuốc bolero bằng phương pháp vôn ampe

Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Trƣờng Đại học sƣ phạm hà Nội Khoa hoá học võ thị hồng vịnh xác định hàm lƣợng vitamin c thuốc bolero phƣơng pháp vôn - ampe Khoá luận tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: Hoá phân tích Người hướng dẫn khoa học ts nguyễn văn hải Hà Nội - 2010 Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Văn Hải hướng dẫn, bảo em tận tình, giúp em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn tới thầy giáo, cô giáo khoa Hóa học Trường Đại học sư phạm Hà Nội tận tình dạy dỗ em trình học tập Mặc dù cố gắng em tránh khỏi thiếu sót Vì em kính mong nhận đóng góp chân thành thầy giáo, cô giáo bạn sinh viên quan tâm Hà Nội, tháng 05 năm 2010 Sinh viên thực Võ Thị Hồng Vịnh Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Khóa luận “Nghiên cứu xác định hàm lượng vitamin C thuốc Bolero phương pháp vôn-ampe” hoàn thành hướng dẫn trực tiếp TS Nguyễn Văn Hải Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết nêu khóa luận trung thực, không trùng với khóa luận khác công bố Hà Nội, tháng 05 năm 2010 Sinh viên thực Võ Thị Hồng Vịnh Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Vitamin C (Vit.C) hay gọi axit L-ascobic loại hợp chất quan trọng sống người Vit.C giữ vai trò quan trọng cho trình chuyển hoá protein cụ thể oxi hoá nhiều axit amin thơm tyrozin, phenylalinin Vit.C có khả chống oxi hoá: Vit.C đóng vai trò quan trọng việc ngăn chặn trình sản xuất gốc tự do, bảo vệ axit béo không no màng tế bào, đồng thời bảo vệ Vitamin E chất chống oxi hoá màng tế bào, kích thích trình tổng hợp trì chất keo, kết tăng sức đề kháng sức khoẻ mô Trong dược phẩm, Vit.C tham gia vào nhiều trình chuyển hoá thể Chống oxi hoá cách trung hoà gốc tự do, sản sinh phản ứng chuyển hoá nhờ bảo vệ tính toàn vẹn màng tế bào; làm giảm nhạy cảm thể với Histamin; chống stress… Nên giúp tăng sức đề kháng cho thể, tham gia tạo colagen số thành phần khác tạo nên mô liên kết xương mạch máu Sự thiếu hụt Vit.C dù với hàm lượng nhỏ gây nhiều ảnh hưởng xấu đến sức khoẻ Vit.C tìm thấy trái cây, đồ đóng hộp, dược phẩm, rau quả, nước uống trái cây… Ở điều kiện nhiệt độ ánh sáng bình thường axit ascobic chất dễ bị phân huỷ Do việc xác định đối tượng nghiên cứu cách xác, nhanh chóng yêu cầu đặt hàng đầu Ở Việt Nam, phương pháp xác định Vit.C phòng thí nghiệm chủ yếu phương pháp chuẩn độ thể tích, có độ xác độ nhạy không cao Theo nghiên cứu, Vit.C hợp chất có tính khử, phân tích Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp phương pháp điện hoá, đặc biệt phương pháp vôn-ampe Đây phương pháp phân tích hợp chất hữu nhanh đạt độ xác cao, chi phí cho máy móc hoá chất phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm Việt Nam Vì vậy, chọn đề tài: XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG VITAMIN C TRONG THUỐC BOLERO BẰNG PHƢƠNG PHÁP VÔN - AMPE Nhiệm vụ đặt ra: - Nghiên cứu quy trình xác định Vit.C phương pháp vôn-ampe cách nhanh chóng, độ xác cao, chi phí thấp, dễ thực thi phòng thí nghiệm Việt Nam - Đánh giá độ tin cậy quy trình phân tích - Ứng dụng xác định Vit.C thuốc Bolero Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ Vit.C 1.1.1 Công thức nhận định Vit.C tên thường gọi axit L-ascobic, có tên quốc tế là: 2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone-2,3-enediol hoặc: (R)-3,4-đihydroxy-5-((S)-1,2-đihydroxylethyl)furan-2-(5H)-one Công thức phân tử: C6H8O6 Khối lượng phân tử: 176,1 Nhiệt độ nóng chảy: 193°C Công thức cấu tạo: 6CH2OH OH O HO O (*) OH pK1 (C3-OH) : 4,2 pK2 (C3-OH) : 11,6 Trong công thức cấu tạo axit ascobic, C4*, C5* Cacbon bất đối, tồn đồng phân quang học: axit L-ascobic, axit izo L-ascobic, axit Dascobic, axit izo D-ascobic Trong đồng phân có axit L-ascobic izo L-ascobic có tác dụng chữa bệnh, đồng phân D iso D antivitamin, tức chất ức chế tác dụng vitamin Trong thiên nhiên tồn Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp dạng axit L-ascobic, đồng phân khác thu đường tổng hợp Axit ascobic rắn tinh thể đơn tà, không màu, không mùi, có vị chua, nóng chảy 193°C Axit ascobic dễ tan nước, tan rượu không tan dung môi hữu không phân cực Axit ascobic dễ bị phân hủy tác động ánh sáng, nhiệt độ Vì cần bảo quản axit ascobic bóng tối nhiệt độ thấp 1.1.2 Tính chất hóa học a Tính khử Axit ascobic chất khử mạnh, có bán phản ứng sau: CH2OH OH O HO CH 2OH OH O O OH O Ax it L- ascobic O 2H + 2e- O Ax it L- dehidroascobic Thế khử phụ thuộc nhiều vào pH môi trường Axit ascobic dạng khan bền vững, phân tử có nhóm OH đính vào C chưa no (C2, C3) nên bị ẩm ướt dung dịch dễ bị oxi hóa, oxi không khí, có mặt ion kim loại: đồng, sắt, magiê… theo phản ứng sau: CH 2OH CH2OH OH OH O HO O O OH Võ Thị Hồng Vịnh O 1/ O2 O H 2O O K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Sản phẩm tạo axit L-đehiđroascobic, chất có hoạt tính sinh học tương tự axit L-ascobic, không bền, dễ bị thủy phân phá vòng tạo axit 2,3-đixetogulonic CH2OH-(CHOH)2-CO-CO-COOH, chất tác dụng sinh lí Tốc độ oxi hóa axit ascobic thành axit L-đehiđroascobic lớn pH tăng Các chất saccarozơ, carotenoit, flavonoit,… có khả làm chậm trình oxi hóa axit ascobic nên dùng làm chất ổn định hóa Vit C Cơ chế phân hủy axit ascobic chất oxi hóa biểu diễn theo sơ đồ sau: CH 2OH CH 2OH OH OH O O - 2e- O 2H + OH HO C HO OH [ O] HO O Axit L- ascobic H 2O O +2e +2H + HO COOH C O O HO CH 2OH CH 2OH HO C O CH 2OH COOH [ O] HO H 2O HO C HO [ O] HO C OOH CH 2OH CH 2OH CH 2OH C HO [ O] HO [ O] C O CH 2OH CH 2OH CH 2OH CH 2OH C O C HO OH Axit 2,3- dixetogulonic [ O] CH 2OH COOH C O OH CH 2OH Axit L- dehidroascobic COOH OH [ O] COOH [ O] COOH COOH [ O] COOH [ O] C O CH 2OH Có thể thấy, axit L-ascobic bị oxi hóa thành axit Lđehiđroascobic Dưới tác dụng nước, axit L-đehiđroascobic bị thủy phân mở vòng tạo thành axit 2,3-đixetogulonic không hoạt tính vitamin Phản ứng không thuận nghịch, tăng nhanh theo pH nhiệt độ dung Võ Thị Hồng Vịnh K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp dịch Tiếp theo, axit 2,3-đixetogulonic bị phân hủy thành loạt sản phẩm trung gian khác, cuối tạo axit oxalic Ngoài phân hủy theo kiểu oxi hóa, axit ascobic có xu hướng phân hủy theo kiểu thủy phân môi trường kiềm axit mạnh thành fufurol sản phẩm khác qua phản ứng decacboxyl hóa dehydrat hóa Tương tự vậy, axit ascobic dễ dàng nhường hiđro cho peoxit, ngăn không cho peoxit oxi hóa hợp chất khác Do đó, người ta sử dụng axit ascobic làm chất chống oxi hóa công nghiệp chế biến b Tính axit Trong dung dịch nước axit ascobic axit yếu nấc 1, pK a,1=4,2 tương ứng với trình phân ly H+ nhóm OH đính vào C3 (*) yếu nấc 2, pKa,2=11,6 tương ứng với phân ly H+ nhóm OH đính vào C2 (*) Axit ascobic dễ dàng phản ứng với dung dịch bazơ mạnh NaOH, KOH, Ca(OH)2 tạo muối: CH 2OH CH2OH OH OH O O O HO O NaOH OH NaO H 2O OH Các muối dễ tan nước axit ascobic nên công nghiệp họ sử dụng dạng muối axit ascobic làm chất bảo quản dung dịch nước Trong dung dịch kiềm đặc, vòng  -lacton bị phá vỡ tạo muối gluconat: CH 2OH OH O HO O NaOH CH 2OH ( CHOH) C OH Võ Thị Hồng Vịnh COONa H 2O O K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Tuy nhiên axit hóa đun nhẹ vòng lacton lại lặp lại c Tác dụng với axit hữu tạo este Trong CTCT axit ascobic có nhiều nhóm OH nhóm chức rượu, có khả tạo este với axit hữu cơ, đặc biệt axit béo axit panmitic, axit stearic Sản phẩm este dạng 6-O-axyl L-ascobic (ascobyl panmitat, ascobyl stearat) có mạch cacbon dài, dễ tan dầu Những este tổng hợp dùng làm chất bảo quản chất béo công nghiệp chế biến Một số dẫn xuất khác axit ascobic sử dụng là: CH2OH CH2OH OH OH O O HO O OR 2- O- ankyl ax it ascobic CH 2OCOR OH O HO RO CH 2OH 6- O- ankanoyl ascobat OH 5,6- O- anky liden ax it ascobic CH 2OH OH O HO O HO OH OH OH O O O 3- O- anky l ax it ascobic O O R O O OCOR 2- O- ankanoy l ascobat ROCO O OH 3- O- ankanoy l ascobat Trong đó, R gốc hiđrocacbon mạch dài, no không no, giúp cho dẫn xuất axit ascobic dễ tan dầu béo 1.1.3 Hoạt tính sinh hóa Vit.C có tác dụng tăng cường sức đề kháng cho thể, chống lại tượng choáng ngộ độc hóa chất, độc tính vi trùng tính chất khử mạnh Vit.C Vit.C tham gia vào trình oxi hóa khử khác thể như: Chuyển hóa hợp chất thơm thành phenol; trình hyđroxyl hóa triptophan thành hyđroxyltritophan; điều hòa tạo AND từ ARN; chuyển Võ Thị Hồng Vịnh 10 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 3.1.5.2 Kiểm tra đƣờng chuẩn Để kiểm tra độ xác đường chuẩn, pha dung dịch Vit.C có nồng độ coi nồng độ thực (µx), đo đường cực phổ Vit.C dung dịch đó, dùng đường chuẩn xác định nồng độ Cx So sánh Cx tìm theo đường chuẩn với giá trị thực μx với độ tin cậy thống kê cho trước để kết luận độ xác đường chuẩn tìm Tiến hành ghi đường cực phổ Vit.C nồng độ µx1=1,2mg/l µx2=4,8mg/l, lặp lại lần Thay giá trị y đo vào phương trình đường chuẩn iP = (24,754 ± 0,007).CVit.C + (10 ± 2), thu giá trị nồng độ Cx1, Cx2 bảng 3.6 Bảng 3.6: Đánh giá độ xác đƣờng chuẩn iP = f(CVit.C) Nồng độ Vit.C thực (mg/l) 1,20 4,80 1,180 4,856 1,176 4,815 1,216 4,735 1,167 4,735 1,224 4,815 1,188 4,775 1,180 4,856 1,200 4,735 Giá trị đo lặp lại Giá trị trung bình Giới hạn tin cậy Độ lệch chuẩn S Độ lệch chuẩn giá trị trung bình Sai số tương đối q% Sai số tương đối lí thuyết thực nghiệm % 4,790 0,044 0,053 0,007 1,05 0,019 0,84 0,73 Hằng số Student thực nghiệm Hằng số Student lí thuyết Võ Thị Hồng Vịnh 1,191 0,017 0,020 1,230 2,365 50 0,21 0,530 2,365 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp So sánh tTN với tb(0,05; 7) = 2,365 tTN < tb Vậy khác giá trị nồng độ C tính theo đường chuẩn giá trị µx pha ngẫu nhiên với độ tin cậy 95% Xác định nồng độ khoảng 0,5÷30mg/l (2,84.10-6 đến 1,70.10-4M) có độ tốt Phương pháp đo không mắc sai số hệ thống Khi xác định mẫu thực tế, tiến hành đo khảo sát trước, sau pha loãng dung dịch mẫu cho nồng độ nằm khoảng tối ưu xác định 3.1.5.3 Giới hạn phát phƣơng pháp Sử dụng đường chuẩn, tính theo quy tắc 3σ Cmin  3  0,2589mg / l  0,26mg / l  1,48.106 M a Thực nghiệm cho thấy điều kiện xác định đường chuẩn, đo sóng cực phổ xung vi phân Vit.C nồng độ 0,25mg/l không xác định pic Vit.C Kết phù hợp với lí thuyết tính độ nhạy phương pháp 0,26mg/l Các kết đường chuẩn, giới hạn phát tính dựa kết ghi đường cực phổ theo chương trình đo bảng 2.1 Vì thay đổi chương trình đo, gồm kích thước giọt, biên độ xung, tốc độ quét… dẫn đến thay đổi giá trị chiều cao pic đo được, hệ số a, b đường chuẩn giới hạn phát thay đổi Tuy nhiên mục đích khóa luận tăng độ nhạy mà cần xác định khoảng nồng độ tối ưu xác định Vit.C điều kiện đo cố định chọn Kết định hướng cho nghiên cứu mẫu thực tế 3.1.6 Khảo sát chất ảnh hƣởng Nghiên cứu tài liệu cho thấy đối tượng thực tế như: thuốc, loại quả, loại dược phẩm số loại nước đóng hộp, số chất thường xuất Vit.C Đặc biệt vitamin nhóm B thuốc, hay axit hữu rau quả, có hàm lượng tương đối lớn, nhiều Võ Thị Hồng Vịnh 51 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp lượng Vit.C Tuy nhiên vitamin có thuốc với Vit.C tính chất cực phổ vùng nghiên cứu, vitamin không ảnh hưởng đến phép đo 3.1.6.1 Khảo sát ảnh hƣởng axit hữu Axit oxalic, axit tactric, axit xitric axit hữu có nhiều loại rau Công thức cấu tạo pKa tương ứng là: COOH HO HOOCH2C C CH2COOH HOOC C CH COOH OH H OH HOOC COOH Axit oxalic Axit xitric Axit D- tactric pKa1=3,128 pKa1=3,036 pKa1=1,27 pKa2=4,761 pKa2=4,366 pKa2=4,25 pKa3=6,396 Tiến hành thực nghiệm khảo sát ảnh hưởng chúng lên pic Vit.C Đo đường cực phổ Vit.C 2mg/l có mặt axit với tỷ lệ khối lượng gấp k lần Kết đưa bảng 3.7 Võ Thị Hồng Vịnh 52 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.7: Kết khảo sát ảnh hƣởng axit oxalic, axit xitric, axit tactric lên sóng cực phổ Vit.C Axit tactric Ca/C0 iP %iP/i0P Axit xitric Ca/C0 (nA) iP Axit oxalic %iP/i0P Ca/C0 (nA) iP %iP/i0P (nA) 115 0,00 114 0,00 115 0,00 25 109 5,50 25 103 9,65 50 112 2,61 50 108 6,48 50 103 9,65 100 107 6,96 200 102 12,75 100 102 10,53 150 105 8,70 400 99,5 15,58 200 101 11,40 200 103 10,43 500 98 17,35 300 101 11,40 250 102 11,30 400 98,3 13,77 300 98,8 14,09 500 97,8 14,21 Nhận xét: Kết cho thấy có mặt axit hữu khác gấp đến hàng trăm lần khối lượng, pic Vit.C nồng độ 2mg/l cho kết tốt, pic cân đối, dịch chuyển phía dương hơn, chiều cao pic có bị giảm Trường hợp có mặt axit oxalic gấp 200 lần khối lượng chiều cao pic giảm 10%, axit tactric khoảng 150 lần axit xitric 100 lần Pic Vit.C bị giảm hàm lượng axit oxalic, axit xitric, axit tactric lớn, độ nhớt dung dịch tăng làm giảm hệ số khuếch tán Phân tử chúng cồng kềnh, độ linh động dung dịch ảnh hưởng mạnh đến chiều cao pic, thấy axit xitric cồng kềnh axit oxalic nên cần hàm lượng gấp 100 lần làm giảm pic 10% axit oxalic phải đến 200 lần Võ Thị Hồng Vịnh 53 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Tuy nhiên việc giảm chiều cao pic không gây khó khăn cho phân tích phân tích nồng độ 10-5M, mục đích sóng cực phổ Vit.C xuất với chất lượng tốt Hơn ta thấy axit không chứa nhóm chức dễ bị oxi hóa Vit.C Do chúng hoạt tính cực phổ khoảng Vit.C Đây ưu điểm phương pháp phân tích cực phổ có độ chọn lọc cao Có thể phân tích chất chất có mặt lượng lớn chất khác Kết phù hợp với kết đưa phương pháp phân tích Vit.C điện cực biến tính điện cực sinh học 3.1.6.2 Khảo sát ảnh hƣởng ion clorua Trong loại thực phẩm thường chứa lượng định ion clorua Ion có mặt nồng độ lớn gây cản trở quy trình phân tích Vì tiến hành khảo sát giới hạn nồng độ cho phép ion clorua phương pháp phân tích cực phổ Vit.C Theo tài liệu nghiên cứu ion clorua ảnh hưởng chủ yếu đến oxi hóa giọt thủy ngân, nồng độ lớn oxi hóa thủy ngân chuyển vùng âm hơn, nghĩa chuyển dịch phía pic Vit.C Đến nồng độ đó, đường cực phổ thủy ngân bao trùm lên pic Vit.C Tiến hành đo đường cực phổ Vit.C 2mg/l, thay đổi nồng độ ion clorua theo hàm lượng: 5, 10, 50, 100, 250, 500mg/l tương ứng 1,4.10-4M; 2,8.10-4M; 1,4.10-3M; 2,8.10-3M; 7.10-3M; 1,4.10-2M Kết cho hình 3.9 Võ Thị Hồng Vịnh 54 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.9: Sóng cực phổ Vit.C có mặt ion clorua với nồng độ tăng dần Nhận xét: Khi hàm lượng ion clorua dung dịch tăng dần, giá trị đỉnh pic Vit.C không thay đổi nhiều (từ -47,6mV Cl- chuyển dịch theo chiều dương đến -41,7mV nồng độ Cl- lớn 100mg/l ) oxi hóa thủy ngân chuyển dịch theo chiều âm, gần pic cua Vit.C Do nồng độ lớn 10 -2M, xuất pic Vit.C máy tính xác định chiều cao pic Có thể kết luận nồng độ ion clorua nhỏ 10-2M có khả phân tích Vit.C cực phổ Trong trường hợp hàm lượng ion clorua lớn, phải xử lí với bạc nitrat lọc bỏ kết tủa 3.1.7 Độ bền Vit.C môi trƣờng khác Vit.C chất dễ bị phân hủy, dung dịch nên luôn phải pha mẫu chuẩn theo ngày Tuy nhiên ngày dung dịch Vit.C bị phân hủy lượng nhỏ Để giảm tối đa hiệu ứng này, cần chọn dung dịch pha Vit.C, hay dung dịch dùng để chiết Vit.C mẫu thực tế Võ Thị Hồng Vịnh 55 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp cho độ bền Vit.C lớn Nghĩa môi trường hòa tan oxi hơn, kìm hãm tốc độ oxi hóa axit ascobic Theo tài liệu cho biết, Vit.C bền môi trường pH thấp, đồng thời môi trường axit, oxi hòa tan Có thể pha dung dịch đệm photphat, dung dịch hỗn hợp axit metaphotphat axit axetic hay đơn giản nước Tuy nhiên chế phân hủy Vit.C oxi phức tạp tiến hành khảo sát độ bền Vit.C môi trường khác Do quy trình phân tích cực phổ Vit.C axetat nên chọn môi trường dung dịch axit axetic 0,1M (pH=2,76), dung dịch đệm axetat 0,1M (pH=4,66) nước Tất dung dịch pha nước cất lần đuổi oxi hòa tan trước pha mẫu Pha loãng lần dung dịch Vit.C gốc dung dịch đuổi oxi: a Dung dịch axit axetic 0,1M b Dung dịch đệm axetat 0,1M (5:5) c Nước cất lần Để dung dịch vừa pha tiếp xúc với không khí Theo dõi nồng độ Vit.C dung dịch theo thời gian, sau t phút, lấy 0,1ml dung dịch, đo sóng cực phổ Vit.C 10ml dung dịch đệm axetat theo quy trình ghi bảng 2.1, ghi lại chiều cao pic sau lần đo, t = 0, 30, 60, 180, 240 phút Kết thu bảng 3.8 Võ Thị Hồng Vịnh 56 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.8: Chiều cao pic Vit.C theo thời gian môi trƣờng khác Thời gian Vit.C 200mg/l (phút) Trong HAc Trong đệm Ac Trong nước 69,5 66,9 69,7 30 70,8 67,1 68,6 60 70,7 64,7 68,9 180 70,9 57,8 69,2 240 69,7 54,0 68,0 Nhận xét: Từ thực nghiệm cho thấy, sau 240 phút, Vit.C dung dịch axit axetic nước không thay đổi, để không khí, dung dịch đệm axetat ( 5:5, pH= 4,7) chiều cao pic giảm 5% sau 60 phút Vì pha dung dịch Vit.C gốc dung dịch chuẩn pha loãng từ dung dịch gốc nước dung dịch axit axetic loại oxi đảm bảo độ bền suốt thời gian làm việc Tuy nhiên để đơn giản chọn dung môi nước để pha chế dung dịch chuẩn Vì xử lý mẫu dùng dung dịch axit axetic 0,1M có pH=2,76 để chiết Vit.C, đồng thời dịch chiết chứa Vit.C thu bền trình đo Võ Thị Hồng Vịnh 57 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.10: Đồ thị biểu diễn độ bền dung dịch Vit.C theo thời gian môi trƣờng khác a.Vit.C pha axit axetic 0,1M b.Vit.C pha đệm axetat 0,1M c Vit.C pha nƣớc Tóm tắt điều kiện tối ƣu xác định Vit.C: Qua khảo sát chọn điều kiện tối ưu xác định Vit.C phương pháp von-ampe • Đo sóng cực phổ Vit.C đệm axetat 0,1M có pH=4,66 tương ứng tỷ lệ CHAc= CAc , thời gian đuổi khí oxi hòa tan trước cho Vit.C vào bình đo 90s • Khoảng nồng độ tối ưu phân tích rộng, từ 0,5÷30mg/l tương đương 2,84.10-6M ÷ 1,70.10-4M • Chương trình đo máy tính chọn tối ưu theo gợi ý nhà sản xuất, theo tài liệu tham khảo theo kinh nghiệm thực tế - Khoảng quét từ -250mV ÷ +100mV: khoảng thu từ kinh nghiệm thực tế, không nên hẹp không quét hết chân phổ, nhiên không nên rộng tốn thời gian đo Võ Thị Hồng Vịnh 58 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp - Thời gian cân trước quét thế: 10s đủ để giúp cho dung dịch trở lại trạng thái tĩnh, ổn định sau khuấy trộn - Biên độ xung: 50mV - Bước nhảy thế: 6mV - Thời gian cho xung: 40ms - Thời gian bước nhảy: 0,4s - Tốc độ quét: 15mV/s • Dung dịch Vit.C gốc dung dịch chuẩn pha loãng từ dung dịch gốc phải pha theo ngày pha nước cất lần loại oxi hòa tan Các dung dịch đảm bảo độ bền thời gian phân tích • Các axit hữu axit oxalic, axit xitric, axit tactric ion clorua không ảnh hưởng đến sóng cực phổ Vit.C khoảng nồng độ cho phép Dựa kết phần nghiên cứu bản, tiến hành định lượng Vit.C mẫu thực tế Với loại đối tượng khảo sát sơ để đưa quy trình xử lý riêng phù hợp với phương pháp phân tích 3.2 XÁC ĐỊNH VIT.C TRONG MẪU THỰC TẾ Mẫu thuốc: Thuốc Bolero, dạng viên sủi Eurostock Ltd, Bulgary Thành phần có viên sủi Bolero: Vitamin C 12mg Vitamin B6 0,4mg Vitamin A 500 IU Vitamin B12 0,6µg Vitamin E 3mg Nikotinamid 3,6mg Vitamin B1 0,3mg Calcium D-pantothenat 2,4mg Vitamin B2 0,4mg Axit folic 32µg Hoà tan hoàn toàn viên thuốc Bolero vào nước, định mức thành 100ml dung dịch mẫu (B1) Xác định Vit.C mẫu (B1) theo phương pháp thêm chuẩn Võ Thị Hồng Vịnh 59 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hút 10ml dung dịch đệm Axetat 0,1M, pH=4,66 vào bình đo, đuổi khí 90s, thêm 0,1ml dung dịch mẫu (B1), đo sóng cực phổ giá trị y0k, thêm lần 0,1ml dung dịch Vit.C chuẩn 100mg/l, đo sóng cực phổ giá trị y 1k, y2k, k số lần lặp, k=3 Bảng 3.9: Kết đo xác định mẫu thực tế STT ximg/l) yik, nA 0,00 45 46 45,1 44,9 45,25 0,98 84,7 83,6 83,5 84 83,95 1,94 124 122 122 122 122,50 yi , nA x: tổng nồng độ chuẩn thêm vào dung dịch, mg/l y: chiều cao pic Vit.C, nA Xử lí đường thêm chuẩn theo phương pháp hồi quy tuyến tính Excel: y = (39,8 ± 0,4)x + (45,1 ± 0,5) Hệ số tương quan : r = 0,9999 Đường thêm chuẩn cắt trục hoành xm, giá trị xm xác định theo định luật lan truyền sai số (công thức 2.17): xm = (1,1352 ± 0,0275) Nồng độ Vit.C mẫu B1 là: Cm = (114,7 ± 2,8) mg/l Vì viên hoà tan vào nước 100ml dung dịch B1 nên hàm lượng Vit.C viên thuốc là: (11,5 ± 0,3) mg/viên Độ lệch khỏi giá trị trung bình là: 2,61% So sánh với giá trị nhà sản xuất đưa 12 mg/viên, sai khác 4,17% Võ Thị Hồng Vịnh 60 K32C - Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Nhận xét: Hàm lượng Vit.C thuốc thường lớn, cần pha loãng dung dịch mẫu cho nồng độ nằm khoảng 50÷1000mg/l Để xác định Vit.C phương pháp cực phổ theo phương pháp thêm chuẩn (thêm 0,1ml mẫu vào 10ml dung dịch đệm nghĩa pha loãng thêm 100 lần) nồng độ Vit.C dung dịch đo nằm khoảng 0,5÷10mg/l Tính hàm lượng Vit.C thêm chuẩn nằm khoảng tối ưu (≤ 30mg/l) Kết xác định Vit.C thuốc Bolero có độ lặp tốt, sai số tương đối q[...]... 1.2 C C PHƢƠNG PHÁP X C ĐỊNH VIT .C Có thể chia c c phương pháp x c định Vit .C thành 2 nhóm lớn: - Nhóm c c phương pháp phân tích hóa h c - Nhóm c c phương pháp phân tích c ng c 1.2.1 Phƣơng pháp phân tích hóa h c Võ Thị Hồng Vịnh 12 K3 2C - Hóa h c Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Trong c c phương pháp phân tích hóa h c, phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử đư c sử dụng nhiều nhất, dựa vào tính chất... giọt thu c thử dư đầu tiên Phương pháp này c thể đư c áp dụng tr c tiếp để x c định Vit .C trong dư c phẩm Tuy nhiên trong c c đối tượng kh c như rau quả, lương th c, th c phẩm thường chứa c c chất khử kh c nữa và dung dịch nghiên c u thường c màu và đ c, gây khó khăn cho vi c x c định điểm cuối chuẩn độ Người ta c ng c thể chuẩn độ axit ascobic bằng dung dịch iot, với chất chỉ thị hồ tinh bột để x c. .. c a c c phương pháp phân tích c ng c và những thiết bị hiện đại, vi c x c định Vit .C cũng đã đạt đư c những yêu c u đó Đ c biệt, quy trình phân tích nhanh và đa số trường hợp không phải xử lí mẫu trư c đã giảm thiểu đư c sự mất mát Vit .C trong quá trình định lượng C c phương pháp phân tích c ng c c thể x c định Vit .C gồm nhóm c c phương pháp phân tích quang h c và nhóm c c phương pháp phân tích điện... x c định Vit .C bằng phương pháp c c phổ, sử dụng điện c c giọt Hg, là tr c tiếp dựa trên tính chất oxi hóa khử c a Vit .C Ngoài điện c c giọt Hg, người ta c n dùng c c điện c c biến tính, bằng c ch tạo 1 lớp màng c hoạt tính điện hóa với Vit .C trên bề mặt điện c c rắn Để hỗ trợ thêm cho c c phương pháp phát hiện Vit .C, c c kỹ thuật tách c ng đư c kết hợp để tăng độ chính x c, độ nhạy và độ chọn l c. .. Trư c năm 1950, phương pháp c c phổ c điển đã đư c áp dụng x c định hàm lượng Vit .C trong nhiều mẫu thu c, rau, quả Nhiều c ng trình nghiên c u đã tìm đư c điều kiện thích hợp cho phép x c định Vit .C Tuy nhiên do giới hạn c a phương pháp c c phổ c điển mà vi c định lượng Vit .C vẫn bị gây c n trở bởi một số chất c thế khử gần với thế khử c a axit ascobic C c hợp chất sunfuhydryl thường c mặt trong c c. .. sau: CH O CH 2OH CH 2OH CH 2OH H OH H OH C O H 3C O C HO H H2/Ni HO H C oxi hóa HO H + 2CH 3COCH 3 O H H OH H OH Acetobacter xylinum H OH H 3C H+ CH 3 H O O HO H HO H HO H H C CH 2OH CH 2OH CH 2OH CH 3 CH 2 O DSobozo D- glucozo D- Sobitol [ O] HO C O HO C H HO H COOH CO CO H+ T automehóa CH 2OH C OO HO H H HO H + 2H 2O, H + - 2CH 3COCH 3 CH 2OH H 3C O C C O H H 3C H O O H CH 3 C CH 2 O Vitamin C CH 3... giúp cho vi c x c định vị trí và chiều cao pic c a Vit .C một c ch rõ ràng và chính x c Điều này c nghĩa là c khả năng x c định tr c tiếp Vit .C trên điện c c giọt Hg mà không c n xử lý mẫu để loại những chất nền ảnh hưởng đến bản chất hóa h c của phương pháp Quy trình nhanh, chính x c, khả năng phân tích hàng loạt là c thể đạt đư c Vì vậy tôi chọn sử dụng điện c c giọt Hg treo trong phân tích Vit .C. .. nghiệm Hơn nữa, theo nghiên c u thì c c chất kh c có mặt trong đối tượng nghiên c u c ng với Vit .C: c c hợp chất glucozo, fructozo, sucrozo, lactozo, saccarozo; c c axit thường xuất hiện trong trái c y như: axit xitric, axit oxalic, axit malic, axit tactric; c c muối natri clorua, canxi clorua; c c chất c thể xuất hiện trong thu c tổng hợp như axit benzoic, axit salixilic, axetaminophen… Không gây... giữa c c phương pháp c c phổ c điển (DC), c c phổ xung thường (NP) và c c phổ xung vi phân (DP) Ưu điểm c a phương pháp c c phổ xung vi phân từ vi c phân tích sóng c c phổ c dạng pic là tăng độ nhạy, tăng độ phân giải, độ chọn l c Qua phân tích một số đ c điểm c a Vit .C và nhận thấy ưu điểm c a phương pháp c c phổ tôi tiến hành th c nghiệm M c đích là tìm ra điều kiện tối ưu x c định Vit .C theo phương. .. Vit .C có thể phản ứng với oxi không khí hay c c chất khử kh c cũng c thể phản ứng với c c chất oxi hóa đó 1.2.2.2 Nhóm c c phƣơng pháp phân tích điện hóa 1.2.2.2.1 Sơ lƣ c về phƣơng pháp Von -ampe * Nguyên t c của phương pháp Phương pháp phân tích von -ampe (c c phổ) là phương pháp quan trọng nhất trong số c c phương pháp phân tích điện hóa Phương pháp này dựa trên lý thuyết về quá trình điện c c, phụ ... + - 2CH 3COCH CH 2OH H 3C O C C O H H 3C H O O H CH C CH O Vitamin C CH 1.2 C C PHƢƠNG PHÁP X C ĐỊNH VIT .C Có thể chia phương pháp x c định Vit .C thành nhóm lớn: - Nhóm phương pháp phân tích... chọn đề tài: X C ĐỊNH HÀM LƢỢNG VITAMIN C TRONG THU C BOLERO BẰNG PHƢƠNG PHÁP VÔN - AMPE Nhiệm vụ đặt ra: - Nghiên c u quy trình x c định Vit .C phương pháp vôn- ampe c ch nhanh chóng, độ x c cao,... 2, 3- ixetogulonic CH2OH-(CHOH)2-CO-CO-COOH, chất t c dụng sinh lí T c độ oxi hóa axit ascobic thành axit L-đehiđroascobic lớn pH tăng C c chất saccarozơ, carotenoit, flavonoit,… c khả làm chậm trình