Luận văn sư phạm Nghiên cứu phân lập các hợp chất Alkaloid từ cây Hoàng Liên Ô Rô (Mahonia Nepalensis)

Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p M U Vi t Nam n m khu v c nhi t đ i, có khí h u nóng, m kho ng 80%, l m cao ng m a l n, nh ng u ki n nh v y r t thích h p cho th c v t phát tri n Do v y h th c v t Vi t Nam vô phong phú, đa d ng v i kho ng 12000 loài, có t i 4000 lồi đ d c nhân dân ta dùng làm th o c H th c v t phong phú m t ti n đ cho s phát tri n ngành hoá h c h p ch t thiên nhi n T n c ta ngàn x a cha ông ta s d ng nhi u ph ng thu c dân gian t c đ ch a b nh, b i b c th , hay t o mùi th m… nh Tía tơ gi i c m, Thì là, X t o mùi th m Nhân sâm t ng c ng s c đ kháng Các ph ng thu c y h c c truy n th hi n nh ng m t m nh u tr b nh đ c tính tác d ng ph Do ngày ng i ngày quan tâm đ n h p ch t có ho t tính sinh h c th c v t đ ng v t V lâu dài, đ i v i s phát tri n c ph m m i, h p ch t có ho t tính sinh h c đóng vai trị r t quan d tr ng, ch t kh i đ u cho vi c t ng h p nên lo i thu c m i có tác d ng t t h n Vi c s d ng ph ng pháp hoá lý đ nghiên c u, kh o sát v thành ph n hoá h c c a h p ch t thiên nhiên tách chi t t loài thu c có giá tr cao c a Vi t Nam ngày tr nên đ c bi t quan tr ng Nó s giúp cho vi c xác đ nh xác c u trúc hố h c c a h p ch t t o c s khoa h c cho vi c s d ng chúng m t cách h p lí có hi u qu có t m quan tr ng đ c bi t Theo h ng nghiên c u trên, Lu n v n t p trung kh o sát thành ph n hoá h c c u trúc c a m t s alkaloid tách chi t t hồng liên rơ, m t thu c có giá tr , đ Phùng V n Minh c s d ng làm thu c ch a b nh dân gian L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p N i dung c a khóa lu n g m S d ng ph ng pháp chi t s c ký đ phân l p đ c alkaloid s ch t hồng liên rô S d ng ph ng pháp ph k t h p đ xác đ nh c u trúc hoá h c c a h p ch t phân l p đ Phùng V n Minh c L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Ch Khóa lu n t t nghi p ng T NG QUAN 1 VƠi nét chung v chi hoƠng liên Mahonia [3], [6], [7], [10] 1 V th c v t Hoàng liên có nhi u lo i khác tu thu c vào t ng vùng đ a lý khác Do tính ch t c a khí h u, đ t đai đ c bi t ch ng lo i khác Sau m t s phân lo i ch y u đ c bi t đ n c a lo i 1 1 Mahonia bealei (Fort ) Carr Là b i cao t m 2- 3m Thân d có màu vàng, kép lông chim, m c so le dài 15 đ n- 35cm, có 7- 15 chét khơng cu ng hình b u d c ho c hình tr ng l ch dài 3- 9cm, r ng 2, 5- 4, 5cm dày c ng, chét t n to h n có cu ng, g c trịn ho c h i hình tim, đ u nh n s c, mép khía r ng nơng nh gai s c nh n, gân gân ph k t thành m ng n i rõ C m hoa m c thành ng n h n ng n; b c nh ; hoa nhi u màu vàng; đài chín s p thành ba vòng; cánh hoa sáu nh h n đài trong; nh sáu, bao ph n dài h n ch nh ; b u hình tr Qu th t ch a h t Mùa hoa : Tháng 10- 11; mùa qu : tháng 12-2 Mahonia Bealei Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 1 Mahonia japonica (Thumb ) DC Là b i cao kho ng 3- 5m Thân r m u vàng, cành màu nâu đen Lá kép lơng chim m c so le, dài 20- 45cm, có đ n 23 chét hình mác thn, dài 5- 15cm, r ng 2- 5cm, g c tròn đ u nh n nh gai, mép khía r ng nh n s c, gân gân ph thành m ng rõ C m hoa m c đ ng ng n thành ng n h n lá; b c thuôn; hoa màu vàng nh t; đài s p thành vòng; cánh hoa nh h n đài trong, đ u cánh h i lõm; nh sáu, bao ph n dài b ng ho c dài h n ch nh , b u hình tr Qu th t, hình tr ng, chín có màu tím đen Mùa hoa : tháng 9- 11; mùa qu : tháng 12-2 Mahonia japonica 1 Mahonia nepalensis DC (M Annamica Gagnep ) Là b i, có th cao 6- 7m Thân r màu vàng Lá kép lông chim l , m c so le, dài 20- 40cm, chét dài hình trái xoan ho c h i thuôn, không cu ng, dài 6- 10cm, r ng 2- 4, 5cm, g c tròn ho c h i hình tim, đ u nh n nh gai, mép khía r ng to s c nh n, gân gân ph thành m ng rõ Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i C m hoa m c Khóa lu n t t nghi p ng n thành bơng phân nhánh có dài h n lá; kh c hình b u d c hoa nhi u màu vàng nh t; đài s p thành vịng; cánh hoa có n g c, nh đ i di n v i cánh hoa, bao ph n dài b ng n a ch nh ; b u hình tr Qu th t hình c u, chín màu xanh l , đ u qu có núm nh n; h t màu nâu đen Mùa hoa: tháng 2- 4; mùa qu : tháng 5- Mahonia nepalensis 1 Phân b sinh thái Chi Mahonia Nutt g m đ i di n b i hay g nh , phân b ôn đ i m ho c c n nhi t đ i châu Á, bao g m Trung Qu c, Nê Pan, m ts n c khác vùng trung Á - Mahonia bealei (Fort ) Carr: vùng n Vi t Nam có lồi (Nguy n t p, 1996) Qu n B (Hà Giang) - Mahonia japonica (Thumb ) DC: Qu n B , ng V n (Hà Giang) : Sìn H (Lai Châu); Hà Qu ng (Cao B ng); Sa Pa (Lào Cai) - Mahonia nepalensis DC: Phùng V n Minh L cD ng (Lâm ng) Lai Châu L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p Nói chung c ba lồi đ u nh ng a m, a sáng có th ch u bóng, th ng m c d i tán r ng kín th ng xanh hay tr ng b i núi đá vôi v i đ cao 1400- 1700m Cây sinh tr ng t t u ki n khí h u m mát quanh n m, nhi t đ trung bình 15- 160C, l m khơng khí 80% s ng m a 1800- 2800mm/n m nh ng vùng có hồng liên ô rô quanh n m có ng mù Cây hoa qu nhi u hàng n m; quan sát loài Mahonia japonica (thumb) DC qu n b (Hà Giang cho th y, r ng b m tán (do khai thác g ) nh ng m c qu n h b i, b n nên l ng d y d c chi u sáng nhi u ng hoa qu m i nhi u g p 2- l n nh ng m c d b che bóng M c dù có l i tán r ng ng hoa qu nhi u (100- 150 qu cây) nh ng s m c t nhiên t h t r t Cây có kh n ng tái sinh tr i sau b ch t 1 Tác d ng d c lý M c dù hồng liên rơ có berberin, palmatin m t s alcaloid khác, nh ng nh ng nghiên c u tác d ng kháng khu n n khơng th y có tác d ng, c ng ch a th y có tác d ng kháng n m, kháng virus Th đ c tính c p cao khơ chi t c n hồng liên ô rô xác đ nh đ c LD50 = 175mg/kg tiêm phúc m c cho chu t c ng tr ng Trong dân gian hoàng liên ô rô đ c dùng đ ch a r t nhi u b nh, đ c tính mát, đ ng c a Nó có tác d ng nhi t ph , v , gan, th n Qu l i ti u làm d u kích thích C hồng liên rơ ch a ki t l , tiêu ch y viêm ru t, n không tiêu, đau m t đ viêm da d D ng, m n ng a m n nh t i m t s thu c dân gian có dùng hồng liên rơ: Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p *Ch a viêm gan c p tính: Dùng thân ho c r hồng liên rơ 25g, r hồng liên gai 15g, nhân tr n 15g S c u ng: Tr ng h p hoàng đ n dùng đinh l ch t 4g, long đ m th o 4g, s n chi t 6g, nhân tr n 6g, hoàng c m 6g S c u ng *Th ng dùng ch a ho lao, s t c n, kh c máu, l ng g i y u m i, chóng m t ù tai, m t ng Dùng khô hay qu 8- 12g s c u ng hay ph i h p v i v thu c khác Ch a viêm ru t, a ch y, viêm da d ng, viêm gan vàng da, m t đau s ng đ , dùng r hay khô 10- 20g s c u ng, dùng riêng hay ph i h p v i v thu c khác n , ng i ta dùng qu tr ki t l Nhân dân th ng dùng ch a l , n u ng không tiêu, vàng da, đau m t *Ch a say n ng: N u kèm theo nôn m a, tiêu ch y, tim h i h p khát n h c dùng ng nhu tía 10g, cát c n 10g, di p cá 10g, ban 10g, hồng liên rơ 10g, th ch x ng b 6g, m c h ng 3g *Ch a lao ph i, ho máu ho c kh c đ m l n máu: M qu 40g, Dây Rung rúc 30g, Bách b Hồng liên rơ, m i v 20g s c u ng *Ch a ki t l , tiêu ch y, viêm ru t n khơng tiêu: R , thân ho c tồn hồng liên rơ 15g, r c t khí c 15g, thái nh s c u ng làm l n ngày Có th dùng d ng b t nhi u ngày *Ch a đau m t đ , viêm gan vàng da: R ho c thân hoàng liên ô rô 20g, h khô th o 10g, s c u ng *Ch a viêm da d kh sâm 20g, n u n ng, m n ng a, m n nh t: R ho c hồng liên rơ 15g, c đ c đ r a 1 Thành ph n hố h c Các lồi M Bealei, M japonica ch a Alkaloid nhóm benzyliso quinolein g m berberin, berbamin, oxyacanthin, isotetrandrin, palmatin jatrorrhizin Loài M nepalensis Alkaloid d c a chúng Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p có umbellatin (0 48%) neprotin (0, 02%) {Theo The Wealth of India T VI, 226} Lồi M japonica có isotetrandrin 1, 566%, palmatin 0, 35% jatrorrhizin 0, 087% Ngồi cịn có magnoflorin columbamin (Theo Trung d c t h i I, 262) Trong lo i h t hồng liên rơ có berberin jatrorrhizin M t s h p ch t phân l p t hoàng liên ô rô [11] Berbamin Oxyacanthin Berberin Isotetrandrin Umbellatin Palmatin Magnoflorin Jatrorrhizine Columbamin Các h p ch t Ankaloid [1], [2], [4], [5] Khái ni m đ nh ngh a Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Alkaloid đ Khóa lu n t t nghi p c bi t đ n t r t lâu, có ý nh Alkali D c s W Meissner đ a thu t ng Alkaloid n m 1819: Alkaloid nh ng h p ch t baz có ch a nit có ngu n g c t th c v t, chúng có c u trúc phân t ph c t p chúng có ho t tính d c lý Cịn theo Landenberg Alkaloid đ c xem nh nh ng h p ch t t nhiên t th c v t mà có đ c tính baz ch a đ ng nh t m t nguyên t N nh ng d vịng phân t có ho t tính sinh h c Theo nh ng miêu t đ c tr ng Alkaloid nh ng h p ch t có ngu n g c th c v t ch a N có ho t tính quang h c r t cao ch a nh ng nguyên t n m d vịng mang ho t tính sinh lý h c Trong t t c nh ng khái ni m khơng hồn tồn cho t t c Alkaloid Ví d : - Colchicine: c xem nh Alkaloid m c dù khơng ph i h p ch t d vòng N h u nh khơng có tính baz : - Thiamine: Là h p ch t d vịng ch a N có tính baz nh ng khơng ph i Alkaloid b i khơng đ c phân b ph bi n v t th s ng: M t vài h p ch t đ c phân lo i nh Alkaloid nh ng chúng khơng ch a d vịng N, nh ng ch a N m ch nhánh ví d Choline hordenine nh Ephdrine, hordenine, betanine, choline, Muscarine… Muscarine Phùng V n Minh L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p Nh ng h p ch t m ch th ng xu t hi n t nhiên có ho t tính sinh lý h c nh ng không đ c phân lo i Alkaloid nh là: Chlonine, aminoacid, phenylethylamine - Piperine: Khơng có tính bazo hay ho t tính sinh lý h c nh ng Alkaloid - Nh ng h p ch t tho mãn nh ng u ki n nêu nh ho t tính sinh lý, có d vịng N nh ng khơng đ c coi Alkaloid ví d : Thiamine, caffeine, purine, theobromine, xanthenes Caffeine Thiamin Theobromine Nh v y đ đ nh ngh a Alkaloid th t xác m t vi c r t khó th c hi n Ng i ta ch có th nói t ng quát v Alaloid nh sau: Alkaloid nh ng h p ch t h u c ch a Nit có nh h ng ng d c lý lên c th i đ ng v t 2 Tr ng thái thiên nhiên Alkaloid có r t nhi u sinh v t bao g m vi khu n, th c v t đ ng v t Trong đ ng v t nh lồi có v nh trai, sị, tơm, cua…Trong th c v t có nhi u khoai tây, cà chua, chè, cafe… Chúng th mu i c a acid h u c Phùng V n Minh nh ng có m t d i d ng nh ng acid acetic, oxalic acid, malic, lactic, tartaric, 10 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p Cl]+, 420, 336 [M-CCl3]+ (positive), C20H18NO4CCl3 , (M = 455) H-NMR (500 MHz, CD3OD)  (ppm): 7,16 (s, H-1), 6.61 (s, H-4), 2,73 (m, Ha-5), 3,34 (m, Hb-5), 3,69 (m, Ha6), 3,87 (m, Hb-6), 5,64 (s, H-8), 6,97 (d, J = 8,5 Hz, H-11), 6,86 (d, J = 8,5 Hz, H-12), 6,09 (s, H-13), 5,94 vµ 5,95 (2 x s, OCH2O), 3,94 (s, 9-OCH3) vµ 3,87 (s, 10-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3)  (ppm): 104,18 (C-1), 125,10 13 (C-1a), 146,76 (C-2), 147,49 (C-3), 108,16 (C-4), 128,74 (C-4a), 30,53 (C-5), 51,62 (C-6), 73,56 (C-8), 114,91 (C-8a), 146,43 (C-9), 149,70 (C-10), 114,68 (C11), 118,62 (C-12), 129,39 (C-12a), 97,54 (C-13), 137,62 (C-13a), 101,07 (OCH2O), 60,98 (9-OCH3), 56,40 (10-OCH3) vµ 105,56 (8-CCl3) Ch ng TH O LU N 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất Hợp chất thu đ-ợc d-ới dạng chất rắn có màu vàng có phản ứng d-ơng tính với thuốc thử Dragendoff cho thấy hợp chất alkaloid Phỉ Phùng V n Minh 32 H-NMR cđa L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p xt hiƯn bốn tín hiệu singlet 6,96, 6,72, 8,66 9,77 cđa proton olefin cïng víi mét cỈp hai tÝn hiƯu doublet t¹i  8,00 (J = 9,0 Hz) vµ 8,10 (J = 9,0 Hz) cđa hai proton n»m vị trí octo vòng thơm bốn vị trí Hình 4.1.a Phổ 1H-NMR Phựng V n Minh 33 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p H×nh 4.1.b Phỉ Phùng V n Minh 34 13 C-NMR cđa L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i H×nh 4.1.c Phỉ O O 4a 1a 13 Khóa lu n t t nghi p C-NMR phổ DEPT N 13a 13 14 OCH3 8a 12a 12 10 11 15 OCH3 H×nh 4.1.d CÊu tróc hoá học Hai nhóm metoxi đ-ợc nhận 4,22 (3H, s) 4,11 (3H, s) víi tÝn hiƯu cđa mét nhãm dioxymetylen t¹i  6,11 (2H, s) Ngoài ra, tín hiệu nhóm metylen 3,28 (t, J = 6,0 Hz) đặc biệt dịch chuyển mạnh phía truờng thấp tÝn hiƯu nhãm metylen t¹i  4,95 (t, J = 6,0 Hz) chøng tá hai nhãm metylen liỊn vµ nhóm có độ dịch chuyển hoá học 4,95 phải gắn với nguyên tử nitơ [3] có dạng khung berberin Từ kiện phổ nêu dự đoán hợp chất berberin, alkaloid chủ yếu loài Mahonia Phổ 13 C-NMR xuất tín hiệu 20 nguyên tử cacbon cïng Phùng V n Minh 35 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p với phổ DEPT 90o DEPT 135o xác định đ-ợc có mặt cđa cacbon CH, CH2, CH3 vµ C TÝn hiƯu CH2 t¹i C 102,67/H 6,11 (2H, s) chøng tá nhãm dioxymetylen nèi trùc tiÕp víi mét vßng benzen Sự dịch chuyển mạnh phía tr-ờng thấp tÝn hiƯu cđa mét nhãm metin C 145,35/H 9,77 (s) chửng tỏ nhóm đ-ợc nối với nguyen tử nitơ Hai nhóm metoxi đ-ợc khẳng định thêm tín hiệu C 61,61 56,71 Trên phổ HSQC, tín hiệu H 9,77, 8,66, 8,10, 8,00, 7,62, 6,96, 6,11, 4,95, 4,22, 4,11 3,28 lần l-ợt có píc giao với cacbon C 145,35, 120,45, 127,14, 123,53, 105,52, 108,39, 102,67, 56,23, 61,61, 56,71 27,21 Trên phổ HMBC, t-ơng tác proton hai nhóm metoxi H 4,22 4,11 lần l-ợt với C-9 (C 144,75) với C-10 (C 150,99), t-ơng tác H-8 (H 9,77) víi C-9 (c 144,75) cïng víi t-¬ng tác HMBC hai proton H 8,00/8,10 với C10 (C 150,99) khẳng định hai nhóm metoxi phải nối vào C-9 C-10 Kết so sánh giá trị phổ NMR với giá trị t-ơng ứng berberin (Bảng 1) hoàn toàn phù hợp Phổ ESI-MS xuất píc ion m/z 335,8 [M]+ (positive) hoàn toàn t-ơng ứng phù hợp với công thức phân tử C20H18NO4+ (M = Phựng V n Minh 36 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 336) Từ kiện phổ nêu khẳng định đ-ợc hợp chất berberin [8] Bảng 4.1 Kết phổ NMR berberin Berberin [8] C C (ppm) H (ppm) C (ppm) H (ppm) 105,1 7,39 105,52 7,62 s 1a 119,8 - 120,81 - 148,6 - 148,89 - 151,0 - 151,15 - 108,5 6,83 108,39 6,96 s 4a 129,8 - 130,87 - 27,2 3,24 (J = 6,0 27,21 3,28 t (J = 6,0 Hz) 56,3 Hz) 4,88 (J = 6,0 56,23 Hz) 4,95 t (J = 6,0 Hz) 144,1 9,54 145,35 9,77 s 8a 121,8 - 122,29 - 144,1 - 144,75 - 10 150,5 - 150,99 - 11 126,9 7,90 (J = 9,1 127,14 8,10 (J = 9,0 Hz) 12 123,1 Hz) 7,88(J = 9,1 123,53 Hz) 8,00 (J = 9,0 Hz) 12a 133,5 - 134,14 - 13 120,2 8,34 120,45 8,66 s 13a 138,2 - 138,61 - OCH2O 102,3 6,07 102,67 6,11 s Phùng V n Minh 37 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 14 61,9 4,19 61,61 4,22 s 15 56,7 4,07 56,71 4,11 s a §o CD3OD, b125 MHz, c500 MHz Hình 4.1.e Phổ khổi l-ợng ESI-MS 4.2 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất Các phổ NMR gần t-ơng tự nh- phổ t-ơng ứng Nhóm dioxymetylen nối với vòng benzen đ-ợc xác định C 101,07/H 5,94, 5,95 (2 s), hai nhóm metylen C-5 C-6 khung berberin lần l-ợt đ-ợc xác định C 30,53/H 2,73 (m); 3,34 (m) vµ C 51,62/H 3,69 (m); 3,87 (m) Hai nhãm metoxi t¹i C Phùng V n Minh 38 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 60,98/H 3,94 (s) vµ C 56,40/H 3,87 (s) Nh- vËy, xác định đ-ợc dẫn xuất Điểm khác biệt đ-ợc nhận so sánh phổ NMR hai hợp chất hợp chất có tín hiệu 21 nguyên tử cacbon, nhiều hợp chất nguyên tử cacbon, thay đổi tập trung vào vị trí C-8, C-8a, 12a, 13, 13a O 4a O 1a 13a N CCl3 13 14 OCH3 8a 12a 10 12 11 15 OCH3 Hình 4.2.a Cấu trúc hoá häc cđa B¶ng 4.2 KÕt qu¶ phỉ NMR cđa vµ 8-trichloromethyl7,8-dihydroberberin 8-trichloromethyl- 7,8-dihydroberberin C [9] C a,b H a,c (ppm) Ca,b Ha,c (ppm) 104,10 7,16 s 104,18 7,16 s 1a 125,00 - 125,10 - 146,71 - 146,76 - 147,44 - 147,49 - Phùng V n Minh 39 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 108,12 6.61 s 108,16 6.61 s 4a 128,69 - 128,74 - 30,48 2,72 m/3,34 30,53 2,73 m/3,34 m 51,62 3,69 m/3,87 m m 51,57 3,70 m/3,87 m 73,47 5,64 s 73,56 5,64 s 8a 114,83 - 114,91 - 146,34 - 146,43 - 10 149,65 - 149,70 - 11 114,53 6,97 (J = 8,5 Hz) 114,68 6,97 (J = 8,5 Hz) 12 118,58 6,86 (J = 8,5 Hz) 118,62 6,86 (J = 8,5 Hz) 12a 129,30 - 129,39 - 13 97,46 6,10 s 97,54 6,09 s 13a 137,55 - 137,62 - OCH2O 101,03 5,94 s/5,95 s 101,07 5,94 s/5,95 s 9-OCH3 60,95 3,94 s 60,98 3,94 s 10OCH3 56,30 3,87 s 56,40 3,87 s 8-CCl3 105,50 - 105,56 - a §o CDCl3, b125 MHz, c500 MHz Phùng V n Minh 40 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p H×nh 4.2.b Phỉ 1H-NMR cđa Sù thay thÕ pÝc C 145,35 (cña 1) b»ng pÝc C 73,56 (cđa 2) cïng víi sù xt hiƯn thêm tín hiệu cacbon bậc bốn C 105,56 cho thấy nhóm -CCl3 đà đ-ợc nối vào C-8 [9] Với thay này, độ d ch chuyển hoá học đà bị thay đổi So sánh giá trị phổ NMR với 8-trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (Bảng 2) điều kiện dung môi đo hoàn toàn trung khớp Kết so sánh đ-ợc kiểm chứng thêm phổ HSQC, HMBC ESI-MS Nh- công thức phân tử C21H18NO4Cl3 (M = 455) phï hỵp víi sù Phùng V n Minh 41 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p xt hiƯn píc ion m/z 418, 419, 420 [MCl]+, 336 [M-CCl3]+ (positive) phổ ESI-MS Những kiện phổ cho thấy hợp trichloromethyl-7,8-dihydroberberin chất [9] Đây là 8lần hợp chất đ-ợc thông báo tìm thấy trình phân lập alkaloid hoàng liên ô rô Hình 4.2.c Phổ Phựng V n Minh 42 13 C-NMR cña L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i H×nh 4.2.d Phỉ 13 Khóa lu n t t nghi p C-NMR phổ DEPT Hình 4.2.e Phổ khối l-ỵng ESI-MS cđa Phùng V n Minh 43 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ch-¬ng K T LU N Bằng ph-ơng pháp sắc ký kết hợp, hợp chất alkaloid đà đ-ợc phân lập từ hoàng liên ô rô Các hợp chất lµ: + Berberin (1) + 8-Trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (2) CÊu tróc hợp chất đ-ợc xác định nhờ vào ph-ơng pháp phổ đại nh- phổ cộng h-ởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT 135 DEPT 90) phổ khối l-ợng phun mù điện tư (ESI) CÊu tróc hãa häc cđa vµ O O 4a 2 O 1a 13a O N 4a 1a 13a N CCl3 8 13 13 14 14 OCH3 8a 12a 12 10 8a 12a 12 10 11 11 15 OCH3 15 OCH3 Berberin (1) Phùng V n Minh OCH3 8-Trichloromethyl-7,8dihydroberberin (2) 44 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p TÀI LI U THAM KH O [1] ”Phytochemistry of Alkaloid” - Dr Avnish Upadhyway [2] ‘Alkaloid chemistry’, John Wiley & Sons, New York [3] Dr Ame Pictet (1904) “The Vegetable Alkaloids With particular reference to their chemical constitution” London: Chapman & Hall [4] R H F Manske, H L Holmes, ”The Alkaloids”, Academic Press, 1950- 1994 [5] [6] ng v C ng’ Bài gi ng d c li u’, Nhà xu t b n Y H c Bich, D H., Chung, D Q., Chuong, B X., Dong, N T., Dam, D T., Hien, P V., Lo, V N., Mai, P D., Man, P K., Nhu, D T., Tap, N., Toan, T., 2004 Vietnam” “Medicinal Hanoi Plants Science and Animals and in Technology Publishing House, Vol 2, p 956-957 [7] Võ Văn Chi, 1997 Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hµ Néi, trang 566-576 [8] Janssen R H A M., Lousberg, R J J C., Wijkens, Assignment resonances P., of of Kruk, H and some C., The and 13 Theuns, C-NMR isoquinoline H spectrum G., of alkaoids, Phytochemistry, Vol 28(10), 2833-2839 (1989) Phùng V n Minh 45 L p K32C – Khoa Hóa h c Tru ng đ i h c s ph m Hà N i [9] Khóa lu n t t nghi p Marek, R, Seckarova, P., Hulova, D., Marek, J., Dostal, J., and Sklenar, V., Palmatine and berberine isolation artifacts, J Nat Prod Vol 66, 481-486 (2003) Sách Đỏ Việt Nam - Phần Thực Vật, Nhà Xuất [10] Khoa học Công nghệ, 2007, trang 133 [11] Schiff, P L., Bisbenzylisoquinoline alkaloids, J Nat Prod, 60, 934-953 (1997) Phùng V n Minh 46 L p K32C – Khoa Hóa h c ... ph-ơng pháp sắc ký kết hợp, hợp chất alkaloid đà đ-ợc phân lập từ hoàng liên ô rô Các hợp chất là: + Berberin (1) + 8-Trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (2) CÊu tróc cđa hợp chất đ-ợc xác định nhờ... ESI-MS Những kiện phổ cho thấy hợp trichloromethyl-7,8-dihydroberberin chất [9] Đây là 8lần hợp chất đ-ợc thông báo tìm thấy trình phân lập alkaloid hoàng liên ô rô Hình 4.2.c Phổ Phựng V n Minh... sinh vật Mô tả: Cây hoàng liên ? ?rô có tên khoa học lµ Mahonia nepalensis thuéc DC hä 1821 Hoµng (Berberidaceae) lµ [5] Hình 1.1 Hoàng liên ? ?rô Mahonia nepalensis DC 1821 mộc bụi, cao từ 2-3 m,