Nghiên cứu phân lập các hợp chất alkaloid từ cây hoàng liên ô rô (mahonia nepalensis)

Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip M U Vit Nam nm khu vc nhit i, cú khớ hu núng, m m cao khong trờn 80%, lng ma ln, nhng iu kin nh vy rt thớch hp cho thc vt phỏt trin Do vy h thc vt Vit Nam vụ cựng phong phỳ, a dng vi khong 12000 loi, ú cú ti 4000 loi c nhõn dõn ta dựng lm tho dc H thc vt phong phỳ trờn l mt tin cho s phỏt trin ngnh hoỏ hc cỏc hp cht thiờn nhin nc ta T ngn xa cha ụng ta ó s dng nhiu phng thuc dõn gian t cõy c cha bnh, bi b c th, hay to mựi thm nh lỏ Tớa tụ gii cm, Thỡ l, X to mựi thm v Nhõn sõm tng cng sc khỏng Cỏc phng thuc y hc c truyn ó th hin nhng mt mnh iu tr bnh l ớt c tớnh v tỏc dng ph Do ú ngy ngi ngy cng quan tõm n cỏc hp cht cú hot tớnh sinh hc thc vt v ng vt V lõu di, i vi s phỏt trin cỏc dc phm mi, cỏc hp cht cú hot tớnh sinh hc úng vai trũ rt quan trng, nú l cht u cho vic tng hp nờn cỏc loi thuc mi cú tỏc dng tt hn Vic s dng cỏc phng phỏp hoỏ lý nghiờn cu, kho sỏt v thnh phn hoỏ hc ca cỏc hp cht thiờn nhiờn tỏch chit t loi cõy thuc cú giỏ tr cao ca Vit Nam ngy cng tr nờn c bit quan trng Nú s giỳp cho vic xỏc nh chớnh xỏc cu trỳc hoỏ hc ca cỏc hp cht v to c s khoa hc cho vic s dng chỳng mt cỏch hp lớ v cú hiu qu cú tm quan trng c bit Theo hng nghiờn cu trờn, Lun ny trung kho sỏt thnh phn hoỏ hc v cu trỳc ca mt s alkaloid tỏch chit t cõy hong liờn ụ rụ, mt cõy thuc cú giỏ tr, c s dng lm thuc cha bnh dõn gian Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Ni dung ca khúa lun gm S dng cỏc phng phỏp chit v sc ký phõn lp c cỏc alkaloid sch t cõy hong liờn ụ rụ S dng cỏc phng phỏp ph kt hp xỏc nh cu trỳc hoỏ hc ca cỏc hp cht ó phõn lp c Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Chng TNG QUAN 1 Vi nột chung v chi hong liờn Mahonia [3], [6], [7], [10] 1 V thc vt Hong liờn cú nhiu loi khỏc tu thuc vo tng vựng a lý khỏc Do tớnh cht ca khớ hu, t v c bit l chng loi khỏc Sau õy l mt s phõn loi ch yu ó c bit n ca loi cõy ny 1 1 Mahonia bealei (Fort ) Carr L cõy bi cao tm 2- 3m Thõn v d cú mu vng, lỏ kộp lụng chim, mc so le di 15 n- 35cm, cú 7- 15 lỏ chột khụng cung hỡnh bu dc hoc hỡnh trng lch di 3- 9cm, rng 2, 5- 4, 5cm dy v cng, lỏ chột tn cựng to hn v cú cung, gc trũn hoc hi hỡnh tim, u nhn sc, mộp khớa rng nụng nh gai sc nhn, gõn chớnh v gõn ph kt thnh mng ni rừ Cm hoa mc thnh bụng ngn hn lỏ ngn; lỏ bc nh; hoa nhiu mu vng; lỏ i chớn sp thnh ba vũng; cỏnh hoa sỏu nh hn lỏ i trong; nh sỏu, bao phn di hn ch nh; bu hỡnh tr Qu tht cha ht Mựa hoa : Thỏng 10- 11; qu: thỏng 12-2 Mahonia Bealei Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip 1 Mahonia japonica (Thumb ) DC L cõy bi cao khong 3- 5m Thõn r mu vng, cnh mu nõu en Lỏ kộp lụng chim mc so le, di 20- 45cm, cú n 23 lỏ chột hỡnh mỏc thuụn, di 5- 15cm, rng 2- 5cm, gc trũn u nhn nh gai, mộp khớa rng nhn sc, gõn chớnh v gõn ph thnh mng rừ Cm hoa mc ng ngn thnh bụng ngn hn lỏ; lỏ bc thuụn; hoa mu vng nht; lỏ i sp thnh vũng; cỏnh hoa nh hn lỏ i trong, u cỏnh hi lừm; nh sỏu, bao phn di bng hoc di hn ch nh, bu hỡnh tr Qu tht, hỡnh trng, chớn cú mu tớm en Mựa hoa : thỏng 9- 11; qu: thỏng 12-2 Mahonia japonica 1 Mahonia nepalensis DC (M Annamica Gagnep ) L cõy bi, cú th cao 6- 7m Thõn v r mu vng Lỏ kộp lụng chim l, mc so le, di 20- 40cm, lỏ chột di hỡnh trỏi xoan hoc hi thuụn, khụng cung, di 6- 10cm, rng 2- 4, 5cm, gc trũn hoc hi hỡnh tim, u nhn nh gai, mộp khớa rng to sc nhn, gõn chớnh v gõn ph thnh mng rừ Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Cm hoa mc ngn thnh bụng phõn nhỏnh cú di hn lỏ; lỏ khc hỡnh bu dc hoa nhiu mu vng nht; lỏ i sp thnh vũng; cỏnh hoa cú tuyn gc, nh i din vi cỏnh hoa, bao phn di bng na ch nh; bu hỡnh tr Qu tht hỡnh cu, chớn mu xanh l, u qu cú nỳm nhn; ht mu nõu en Mựa hoa: thỏng 2- 4; qu: thỏng 5- Mahonia nepalensis 1 Phõn b v sinh thỏi Chi Mahonia Nutt gm cỏc i din l cõy bi hay g nh, phõn b vựng ụn i m hoc cn nhit i chõu , bao gm Trung Quc, Nờ Pan, n v mt s nc khỏc vựng trung Vit Nam cú loi (Nguyn tp, 1996) - Mahonia bealei (Fort ) Carr: Qun B (H Giang) - Mahonia japonica (Thumb ) DC: Qun B, ng Vn (H Giang) : Sỡn H (Lai Chõu); H Qung (Cao Bng); Sa Pa (Lo Cai) - Mahonia nepalensis DC: Lc Dng (Lõm ng) v Lai Chõu Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Núi chung c ba loi u l nhng cõy a m, a sỏng v cú th chu búng, thng mc di tỏn rng kớn thng xanh hay cỏc trng cõy bi trờn nỳi ỏ vụi vi cao 1400- 1700m Cõy sinh trng tt iu kin khớ hu m mỏt quanh nm, nhit trung bỡnh 15- 160C, lng ma 1800- 2800mm/nm m khụng khớ trờn 80% nhng vựng cú hong liờn ụ rụ quanh nm cú sng mự Cõy hoa qu nhiu hng nm; quan sỏt loi Mahonia japonica (thumb) DC qun b (H Giang cho thy, rng b m tỏn (do khai thỏc g) v nhng cõy mc qun h cõy bi, b nng dy dc chiu sỏng nhiu nờn lng hoa qu trờn mi cõy nhiu gp 2- ln nhng cõy mc di tỏn rng b che búng Mc dự cú lng hoa qu nhiu (100- 150 qu trờn cõy) nhng s cõy mc t nhiờn t ht rt ớt Cõy cú kh nng tỏi sinh cõy tri sau b cht 1 Tỏc dng dc lý Mc dự hong liờn ụ rụ cú berberin, palmatin v mt s alcaloid khỏc, nhng nhng nghiờn cu tỏc dng khỏng khun n ó khụng thy cú tỏc dng, cng cha thy cú tỏc dng khỏng nm, khỏng virus Th c tớnh cp cao khụ chit cn hong liờn ụ rụ ó xỏc nh c LD50 = 175mg/kg tiờm phỳc mc cho chut cng trng Trong dõn gian cõy hong liờn ụ rụ c dựng cha rt nhiu bnh, c tớnh mỏt, ng ca nú Nú cú tỏc dng nhit ph, v, gan, thn Qu li tiu v lm du kớch thớch C cõy hong liờn ụ rụ cha kit l, tiờu chy viờm rut, n khụng tiờu, au mt viờm da d ng, mn nga mn nht Di õy l mt s bi thuc dõn gian cú dựng cõy hong liờn ụ rụ: Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip *Cha viờm gan cp tớnh: Dựng thõn hoc r hong liờn ụ rụ 25g, r hong liờn gai 15g, nhõn trn 15g Sc ung: Trng hp hong n dựng inh lch t 4g, long m tho 4g, sn chi t 6g, nhõn trn 6g, hong cm 6g Sc ung *Thng dựng cha ho lao, st cn, khc mỏu, lng gi yu mi, chúng mt ự tai, mt ng Dựng lỏ khụ hay qu 8- 12g sc ung hay phi hp vi cỏc v thuc khỏc Cha viờm rut, a chy, viờm da d ng, viờm gan vng da, mt au sng , dựng r hay cõy khụ 10- 20g sc ung, dựng riờng hay phi hp vi cỏc v thuc khỏc n , ngi ta dựng qu tr kit l Nhõn dõn thng dựng cha l, n ung khụng tiờu, vng da, au mt *Cha say nng: Nu kốm theo nụn ma, tiờu chy, tim hi hp khỏt nc dựng hng nhu tớa 10g, cỏt cn 10g, dip cỏ 10g, cõy ban 10g, hong liờn ụ rụ 10g, thch xng b 6g, mc hng 3g *Cha lao phi, ho mỏu hoc khc m ln mỏu: M qu 40g, Dõy Rung rỳc 30g, Bỏch b v Hong liờn ụ rụ, mi v 20g sc ung *Cha kit l, tiờu chy, viờm rut n khụng tiờu: R, thõn hoc ton cõy hong liờn ụ rụ 15g, r ct khớ c 15g, thỏi nh sc ung lm ln ngy Cú th dựng dng bt nhiu ngy *Cha au mt , viờm gan vng da: R hoc thõn hong liờn ụ rụ 20g, h khụ tho 10g, sc ung *Cha viờm da d ng, mn nga, mn nht: R hoc lỏ hong liờn ụ rụ 15g, lỏ kh sõm 20g, nu nc c 1 Thnh phn hoỏ hc Cỏc loi M Bealei, M japonica cha cỏc Alkaloid nhúm benzyliso quinolein gm berberin, berbamin, oxyacanthin, isotetrandrin, palmatin v jatrorrhizin Loi M nepalensis ngoi cỏc Alkaloid trờn d ca chỳng cũn Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip cú umbellatin (0 48%) v neprotin (0, 02%) {Theo The Wealth of India T VI, 226} Loi M japonica cú isotetrandrin 1, 566%, palmatin 0, 35% v jatrorrhizin 0, 087% Ngoi cũn cú magnoflorin v columbamin (Theo Trung dc t hi I, 262) Trong cỏc loi ht hong liờn ụ rụ cú berberin v jatrorrhizin Mt s hp cht ó phõn lp t cõy hong liờn ụ rụ [11] Berbamin Oxyacanthin Berberin Isotetrandrin Umbellatin Palmatin Magnoflorin Jatrorrhizine Columbamin Cỏc hp cht Ankaloid [1], [2], [4], [5] Khỏi nim v nh ngha Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Alkaloid ó c bit n t rt lõu, nú cú ý nh l Alkali Dc s W Meissner ó a thut ng Alkaloid nm 1819: Alkaloid l nhng hp cht baz cú cha nit cú ngun gc t thc vt, chỳng cú cu trỳc phõn t phc v chỳng cú hot tớnh dc lý Cũn theo Landenberg Alkaloid c xem nh l nhng hp cht t nhiờn t thc vt m cú c tớnh baz v cha ng ớt nht mt nguyờn t N nhng d vũng phõn t v cú hot tớnh sinh hc Theo nhng miờu t c trng thỡ Alkaloid l nhng hp cht cú ngun gc thc vt cha N cú hot tớnh quang hc rt cao v cha nhng nguyờn t nm cỏc d vũng mang hot tớnh sinh lý hc Trong tt c nhng khỏi nim trờn khụng hon ton l ỳng cho tt c cỏc Alkaloid Vớ d: - Colchicine: c xem nh l Alkaloid mc dự nú khụng phi l hp cht d vũng N v hu nh khụng cú tớnh baz: - Thiamine: L hp cht d vũng cha N cú tớnh baz nhng khụng phi l Alkaloid bi vỡ nú khụng c phõn b ph bin vt th sng: Mt vi hp cht c phõn loi nh l Alkaloid nhng chỳng khụng cha d vũng N, nhng cha N mch nhỏnh vớ d Choline hordenine nh Ephdrine, hordenine, betanine, choline, Muscarine Muscarine Phựng Vn Minh Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Nhng hp cht mch thng xut hin t nhiờn cú hot tớnh sinh lý hc nhng khụng c phõn loi l Alkaloid nh l: Chlonine, aminoacid, phenylethylamine - Piperine: Khụng cú tớnh bazo hay hot tớnh sinh lý hc nhng nú l Alkaloid - Nhng hp cht tho nhng iu kin nờu trờn nh l hot tớnh sinh lý, cú d vũng N nhng khụng c coi l Alkaloid vớ d: Thiamine, caffeine, purine, theobromine, xanthenes Thiamin Caffeine Theobromine Nh vy nh ngha Alkaloid tht chớnh xỏc l mt vic rt khú thc hin Ngi ta ch cú th núi tng quỏt v Alaloid nh sau: Alkaloid l nhng hp cht hu c cha Nit cú nh hng dc lý lờn c th ngi v ng vt 2 Trng thỏi thiờn nhiờn Alkaloid cú rt nhiu sinh vt bao gm vi khun, thc vt v ng vt Trong ng vt nh loi cú v nh trai, sũ, tụm, cuaTrong thc vt cú nhiu khoai tõy, c chua, chố, cafe Chỳng thng cú mt di dng nhng mui ca acid hu c nh l acid acetic, oxalic acid, malic, lactic, tartaric, Phựng Vn Minh 10 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Cl]+, 420, 336 [M-CCl3]+ (positive), C20H18NO4CCl3 , (M = 455) H-NMR (500 MHz, CD3OD) (ppm): 7,16 (s, H-1), 6.61 (s, H-4), 2,73 (m, Ha-5), 3,34 (m, Hb-5), 3,69 (m, Ha6), 3,87 (m, Hb-6), 5,64 (s, H-8), 6,97 (d, J = 8,5 Hz, H-11), 6,86 (d, J = 8,5 Hz, H-12), 6,09 (s, H-13), 5,94 5,95 (2 x s, OCH2O), 3,94 (s, 9-OCH3) 3,87 (s, 10-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): 104,18 (C-1), 125,10 13 (C-1a), 146,76 (C-2), 147,49 (C-3), 108,16 (C-4), 128,74 (C-4a), 30,53 (C-5), 51,62 (C-6), 73,56 (C-8), 114,91 (C-8a), 146,43 (C-9), 149,70 (C-10), 114,68 (C11), 118,62 (C-12), 129,39 (C-12a), 97,54 (C-13), 137,62 (C-13a), 101,07 (OCH2O), 60,98 (9-OCH3), 56,40 (10-OCH3) 105,56 (8-CCl3) Chng THO LUN 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất Hợp chất thu đ-ợc d-ới dạng chất rắn có màu vàng có phản ứng d-ơng tính với thuốc thử Dragendoff cho thấy hợp chất alkaloid Phổ Phựng Vn Minh 32 H-NMR Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip xuất bốn tín hiệu singlet 6,96, 6,72, 8,66 9,77 bốn proton olefin với cặp hai tín hiệu doublet 8,00 (J = 9,0 Hz) 8,10 (J = 9,0 Hz) hai proton nằm vị trí octo vòng thơm bốn vị trí Hình 4.1.a Phổ 1H-NMR Phựng Vn Minh 33 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Hình 4.1.b Phổ Phựng Vn Minh 34 13 C-NMR Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Hình 4.1.c Phổ O O 4a 1a Khúa lun tt nghip 13 C-NMR phổ DEPT N 13a 13 14 OCH3 8a 12a 12 10 11 15 OCH3 Hình 4.1.d Cấu trúc hoá học Hai nhóm metoxi đ-ợc nhận 4,22 (3H, s) 4,11 (3H, s) với tín hiệu nhóm dioxymetylen 6,11 (2H, s) Ngoài ra, tín hiệu nhóm metylen 3,28 (t, J = 6,0 Hz) đặc biệt dịch chuyển mạnh phía truờng thấp tín hiệu nhóm metylen 4,95 (t, J = 6,0 Hz) chứng tỏ hai nhóm metylen liền nhóm có độ dịch chuyển hoá học 4,95 phải gắn với nguyên tử nitơ [3] có dạng khung berberin Từ kiện phổ nêu dự đoán hợp chất berberin, alkaloid chủ yếu loài Mahonia Phổ 13 C-NMR xuất tín hiệu 20 nguyên tử cacbon Phựng Vn Minh 35 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip với phổ DEPT 90o DEPT 135o xác định đ-ợc có mặt cacbon CH, CH2, CH3 C Tín hiệu CH2 C 102,67/H 6,11 (2H, s) chứng tỏ nhóm dioxymetylen nối trực tiếp với vòng benzen Sự dịch chuyển mạnh phía tr-ờng thấp tín hiệu nhóm metin C 145,35/H 9,77 (s) chửng tỏ nhóm đ-ợc nối với nguyen tử nitơ Hai nhóm metoxi đ-ợc khẳng định thêm tín hiệu C 61,61 56,71 Trên phổ HSQC, tín hiệu H 9,77, 8,66, 8,10, 8,00, 7,62, 6,96, 6,11, 4,95, 4,22, 4,11 3,28 lần l-ợt có píc giao với cacbon C 145,35, 120,45, 127,14, 123,53, 105,52, 108,39, 102,67, 56,23, 61,61, 56,71 27,21 Trên phổ HMBC, t-ơng tác proton hai nhóm metoxi H 4,22 4,11 lần l-ợt với C-9 (C 144,75) với C-10 (C 150,99), t-ơng tác H-8 (H 9,77) với C-9 (c 144,75) với t-ơng tác HMBC hai proton H 8,00/8,10 với C10 (C 150,99) khẳng định hai nhóm metoxi phải nối vào C-9 C-10 Kết so sánh giá trị phổ NMR với giá trị t-ơng ứng berberin (Bảng 1) hoàn toàn phù hợp Phổ ESI-MS xuất píc ion m/z 335,8 [M]+ (positive) hoàn toàn t-ơng ứng phù hợp với công thức phân tử C20H18NO4+ (M = Phựng Vn Minh 36 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip 336) Từ kiện phổ nêu khẳng định đ-ợc hợp chất berberin [8] Bảng 4.1 Kết phổ NMR berberin C Berberin [8] C (ppm) H (ppm) C (ppm) H (ppm) 105,1 7,39 105,52 7,62 s 1a 119,8 - 120,81 - 148,6 - 148,89 - 151,0 - 151,15 - 108,5 6,83 108,39 6,96 s 4a 129,8 - 130,87 - 27,2 3,24 (J = 6,0 27,21 3,28 t (J = 6,0 Hz) 56,3 Hz) 4,88 (J = 6,0 56,23 Hz) 4,95 t (J = 6,0 Hz) 144,1 9,54 145,35 9,77 s 8a 121,8 - 122,29 - 144,1 - 144,75 - 10 150,5 - 150,99 - 11 126,9 7,90 (J = 9,1 127,14 8,10 (J = 9,0 Hz) 12 123,1 Hz) 7,88(J = 9,1 123,53 Hz) 8,00 (J = 9,0 Hz) 12a 133,5 - 134,14 - 13 120,2 8,34 120,45 8,66 s 13a 138,2 - 138,61 - OCH2O 102,3 6,07 102,67 6,11 s Phựng Vn Minh 37 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip 14 61,9 4,19 61,61 4,22 s 15 56,7 4,07 56,71 4,11 s a Đo CD3OD, b125 MHz, c500 MHz Hình 4.1.e Phổ khổi l-ợng ESI-MS 4.2 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất Các phổ NMR gần t-ơng tự nh- phổ t-ơng ứng Nhóm dioxymetylen nối với vòng benzen đ-ợc xác định C 101,07/H 5,94, 5,95 (2 s), hai nhóm metylen C-5 C-6 khung berberin lần l-ợt đ-ợc xác định C 30,53/H 2,73 (m); 3,34 (m) C 51,62/H 3,69 (m); 3,87 (m) Hai nhóm metoxi C Phựng Vn Minh 38 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip 60,98/H 3,94 (s) C 56,40/H 3,87 (s) Nh- vậy, xác định đ-ợc dẫn xuất Điểm khác biệt đ-ợc nhận so sánh phổ NMR hai hợp chất hợp chất có tín hiệu 21 nguyên tử cacbon, nhiều hợp chất nguyên tử cacbon, thay đổi tập trung vào vị trí C-8, C-8a, 12a, 13, 13a O 4a O 1a 13a N CCl3 13 14 OCH3 8a 12a 10 12 11 15 OCH3 Hình 4.2.a Cấu trúc hoá học Bảng 4.2 Kết phổ NMR 8-trichloromethyl7,8-dihydroberberin 8-trichloromethylC 7,8-dihydroberberin [9] C a,b H a,c (ppm) Ca,b Ha,c (ppm) 104,10 7,16 s 104,18 7,16 s 1a 125,00 - 125,10 - 146,71 - 146,76 - 147,44 - 147,49 - Phựng Vn Minh 39 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip 108,12 6.61 s 108,16 6.61 s 4a 128,69 - 128,74 - 30,48 2,72 m/3,34 30,53 2,73 m/3,34 m 51,62 3,69 m/3,87 m m 51,57 3,70 m/3,87 m 73,47 5,64 s 73,56 5,64 s 8a 114,83 - 114,91 - 146,34 - 146,43 - 10 149,65 - 149,70 - 11 114,53 6,97 (J = 8,5 Hz) 114,68 6,97 (J = 8,5 Hz) 12 118,58 6,86 (J = 8,5 Hz) 118,62 6,86 (J = 8,5 Hz) 12a 129,30 - 129,39 - 13 97,46 6,10 s 97,54 6,09 s 13a 137,55 - 137,62 - OCH2O 101,03 5,94 s/5,95 s 101,07 5,94 s/5,95 s 9-OCH3 60,95 3,94 s 60,98 3,94 s 10OCH3 56,30 3,87 s 56,40 3,87 s 8-CCl3 105,50 - 105,56 - a Đo CDCl3, b125 MHz, c500 MHz Phựng Vn Minh 40 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Hình 4.2.b Phổ 1H-NMR Sự thay píc C 145,35 (của 1) píc C 73,56 (của 2) với xuất thêm tín hiệu cacbon bậc bốn C 105,56 cho thấy nhóm -CCl3 đ-ợc nối vào C-8 [9] Với thay này, độ dch chuyển hoá học bị thay đổi So sánh giá trị phổ NMR với 8-trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (Bảng 2) điều kiện dung môi đo hoàn toàn trung khớp Kết so sánh đ-ợc kiểm chứng thêm phổ HSQC, HMBC ESI-MS Nh- công thức phân tử C21H18NO4Cl3 (M = 455) phù hợp với Phựng Vn Minh 41 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip xuất píc ion m/z 418, 419, 420 [MCl]+, 336 [M-CCl3]+ (positive) phổ ESI-MS Những kiện phổ cho thấy hợp trichloromethyl-7,8-dihydroberberin chất [9] Đây là 8lần hợp chất đ-ợc thông báo tìm thấy trình phân lập alkaloid hoàng liên ô rô Hình 4.2.c Phổ Phựng Vn Minh 42 13 C-NMR Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Hình 4.2.d Phổ Khúa lun tt nghip 13 C-NMR phổ DEPT Hình 4.2.e Phổ khối l-ợng ESI-MS Phựng Vn Minh 43 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip Ch-ơng KT LUN Bằng ph-ơng pháp sắc ký kết hợp, hợp chất alkaloid đ-ợc phân lập từ hoàng liên ô rô Các hợp chất là: + Berberin (1) + 8-Trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (2) Cấu trúc hợp chất đ-ợc xác định nhờ vào ph-ơng pháp phổ đại nh- phổ cộng h-ởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT 135 DEPT 90) phổ khối l-ợng phun mù điện tử (ESI) Cấu trúc hóa học O O 4a 2 O 1a 13a O N 4a 1a 13a N CCl3 13 13 14 14 OCH3 8a 12a 12 10 8a 12a 12 10 11 11 15 OCH3 15 OCH3 Berberin (1) Phựng Vn Minh OCH3 8-Trichloromethyl-7,8dihydroberberin (2) 44 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni Khúa lun tt nghip TI LIU THAM KHO [1] Phytochemistry of Alkaloid - Dr Avnish Upadhyway [2] Alkaloid chemistry, John Wiley & Sons, New York [3] Dr Ame Pictet (1904) The Vegetable Alkaloids With particular reference to their chemical constitution London: Chapman & Hall [4] R H F Manske, H L Holmes, The Alkaloids, Academic Press, 1950- 1994 [5] ng v Cng Bi ging dc liu, Nh xut bn Y Hc [6] Bich, D H., Chung, D Q., Chuong, B X., Dong, N T., Dam, D T., Hien, P V., Lo, V N., Mai, P D., Man, P K., Nhu, D T., Tap, N., Toan, T., 2004 Medicinal Vietnam Hanoi Plants Science and Animals and in Technology Publishing House, Vol 2, p 956-957 [7] Võ Văn Chi, 1997 Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 566-576 [8] Janssen R H A M., Lousberg, R J J C., Wijkens, Assignment resonances P., of of Kruk, H and some C., The and 13 Theuns, C-NMR isoquinoline H spectrum G., of alkaoids, Phytochemistry, Vol 28(10), 2833-2839 (1989) Phựng Vn Minh 45 Lp K32C Khoa Húa hc Trung i hc s phm H Ni [9] Khúa lun tt nghip Marek, R, Seckarova, P., Hulova, D., Marek, J., Dostal, J., and Sklenar, V., Palmatine and berberine isolation artifacts, J Nat Prod Vol 66, 481-486 (2003) Sách Đỏ Việt Nam - Phần Thực Vật, Nhà Xuất [10] Khoa học Công nghệ, 2007, trang 133 [11] Schiff, P L., Bisbenzylisoquinoline alkaloids, J Nat Prod, 60, 934-953 (1997) Phựng Vn Minh 46 Lp K32C Khoa Húa hc [...]... Hoàng liên rô Họ: Hoàng mộc (Berberidaceae) Ng-ời giám định: TS Ninh Khắc Bản Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật Mô tả: Cây hoàng liên rô có tên khoa học là Mahonia nepalensis thuộc DC họ 1821 Hoàng (Berberidaceae) là [5] Hình 1.1 Hoàng liên rô Mahonia nepalensis DC 1821 mộc cây bụi, cao từ 2-3 m, gỗ thân và rễ màu vàng Lá kép lông chim lẻ, dài từ 15-35 cm, mỗi bên có 7 lá chét, không cuống,... trong không gian phân tử Nhờ vào các t-ơng tác trên phổ này mà từng phần của phân tử cũng nh- toàn bộ phân tử đ-ợc xác định về cấu trúc - Phổ NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy): Phổ này biểu diễn các t-ơng tác xa trong không gian của các proton không kể đến các liên kết mà chỉ tính đến khoảng cách nhất định trong không gian Dựa vào kết quả phổ này có thể xác định cấu trúc không gian của phân. .. học các hợp chất hữu cơ đ-ợc xác định nhờ vào các ph-ơng pháp phổ kết hợp Tuỳ thuộc vào cấu trúc hoá học của từng chất mà ng-ời ta sử dụng ph-ơng pháp phổ cụ thể nào Cấu trúc càng phức tạp thì yêu cầu phối hợp các ph-ơng pháp phổ càng cao Trong một số tr-ờng hợp, để xác định chính xác cấu trúc hoá học của các hợp chất, ng-ời ta phải dựa vào các ph-ơng pháp bổ xung khác nh- chuyển hoá hoá học, kết hợp. .. giữa, 4-5 noãn Quả thịt, 1 hạt Cây ra hoa vào tháng 10-11, mùa quả chín tháng 11-12 Cây th-ờng mọc ở rừng núi đá vôi ở độ cao 1400 m Cây chịu bóng, hơi -a sáng và th-ờng mọc lẫn với các cây gỗ khác Trên thế giới, cây phân bố nhiều ở Trung Quốc Việt Nam, cây mọc nhiều ở vùng Hà Giang Đây là cây có nguồn gen quý, hiếm và độc đáo của Việt Nam 2.2 Ph-ơng pháp phân lập các hợp chất 2.2.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC)... Rf của các chất) , mà hệ số này trong khoảng 1/20-1/30 Trong sắc kí cột, việc đ-a chất lên cột hết sức quan trọng Tuỳ thuộc vào l-ợng chất và dạng chất mà ng-ời ta có thể đ-a chất lên cột bằng các ph-ơng pháp khác nhau Nếu l-ợng chất nhiều và chạy thô, thì phổ biến là tẩm chất vào silica gel rồi làm khô, tơi hoàn toàn, đ-a lên cột Nếu tách tinh, thì đ-a trực tiếp chất lên cột bằng cách hoà tan chất bằng... l-ợng chất nhiều hơn lên bản, và sau khi chạy sắc kí, ng-ời ta có thể cạo riêng phần silica gel có chứa chất cần tách rồi giải hấp phụ bằng dung môi thích hợp để thu đ-ợc từng chất riêng biệt Có thể phát hiện chất trên bản mỏng bằng đèn tử ngoại, bằng chất hiện màu đặc tr-ng cho từng lớp chất hoặc sử dụng dung dịch H2SO4 10% 1.4 ng dụng một số ph-ơng pháp hoá lý để xác định cấu trúc của các hợp chất. .. chiết) Sau khi loại dung môi d-ới áp suất giảm, thu đ-ơc 15 gam dịch cô clorofoc và 15 gam dịch cô n-butanol Từ 15 gam dịch cô n-butanol, sau khi tiến hành phân lập bằng ph-ơng pháp sắc ký cột nhồi silica gel với hệ dung môi n-hexan: Axeton (gradien từ 50/ đến 50/50, v/v) thu đ-ợc 3 phân đoạn ký hiệu là HLC2A (3g), HLC2B (5g) và HLC2C (5g) Phân đoạn HLC2B (5g) đ-ợc tiến hành phân lập trên sắc ký Phựng... tức là phụ thuộc vào hỗn hợp chất cụ thể Trong sắc kí, tỷ lệ giữa quãng đ-ờng đi của chất cần tách so với quãng đ-ờng đi của dung môi gọi là Rf, với mỗi một chất sẽ có một Rf khác nhau Nhờ vào sự khác nhau về Rf này mà ta có thể tách từng chất ra khỏi hỗn hợp Tỉ lệ chất so với tỉ lệ chất hấp phụ cũng rất quan trọng và tuỳ thuộc vào yêu cầu tách Nếu tách thô thì tỉ lệ này thấp (từ 1/5 1/10), còn nếu... Các ph-ơng pháp kết hợp này còn đặc biệt hữu hiệu khi phân tích thành phần của hỗn hợp chất (nhất là phân tích thuốc trong ngành d-ợc) 1.4.3 Phổ cộng h-ởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR) Phổ cộng h-ởng từ hạt nhân là một ph-ơng pháp phổ hiện đại và hữu hiệu nhất hiện nay Với việc sử dụng kết hợp các kỹ thuật phổ NMR một chiều và hai chiều, các nhà nghiên cứu có thể xác định... Transfer) Phổ này cho ta các tín hiệu phân loại các loại cacbon khác nhau Trên phổ DEPT , tín hiệu của các cacbon bậc bốn biến mất Tín hiệu của CH và CH3 nằm về một phía và của CH2 về một phía trên phổ DEPT 135O Trên phổ DEPT 90O chỉ xuất hiện tín hiệu phổ của các CH 1.4.5 Phổ 2D-NMR Đây là các kỹ thuật phổ hai chiều, cho phép xác định các t-ơng tác của các hạt nhân từ của phân tử trong không gian hai chiều ... ph-ơng pháp sắc ký kết hợp, hợp chất alkaloid đ-ợc phân lập từ hoàng liên ô rô Các hợp chất là: + Berberin (1) + 8-Trichloromethyl-7,8-dihydroberberin (2) Cấu trúc hợp chất đ-ợc xác định nhờ... ESI-MS Những kiện phổ cho thấy hợp trichloromethyl-7,8-dihydroberberin chất [9] Đây là 8lần hợp chất đ-ợc thông báo tìm thấy trình phân lập alkaloid hoàng liên ô rô Hình 4.2.c Phổ Phựng Vn Minh... nepalensis Tên tiếng Việt: Hoàng liên rô Họ: Hoàng mộc (Berberidaceae) Ng-ời giám định: TS Ninh Khắc Bản Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Mô tả: Cây hoàng liên rô có tên khoa học Mahonia nepalensis