Đang tải... (xem toàn văn)
1. Tên phòng: Trung tâm Khảo kỉêm nghiệm Giống, sản phẩm cây trồng và phân bón Quốc gia 2. Địa chỉ: Số 6, Nguyễn Công Trứ, Hà Nội 3. Điện thoại: 04. 39713521 Fax: 04. 39712054 4. Đơn vị quản lý trực tiếp: Cục Trồng trọt Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn 5. Quyết định công nhận: 1235QĐTT ngày 15102008 6. Lĩnh vực công nhận: Chất hữu cơ (HC), axit Humic, Fulvic và các hợp chất hữu cơ khác; N, P, K; Ca, Mg, S, Si; Fe, Mn, Zn, Cu, B, Mo, Clorua, Co, Pb, Cd, Hg, As, Ni, Cr; pH, Biuret, axit tự do; Tỷ trọng (đối với phân bón dạng lỏng), độ ẩm, kích thước hạt; E. Coli, Salmonella, Coliform, trứng giun đũa; Vi sinh vật cố định đạm, phân giải lân, phân giải Xenlulo và các loại vi sinh vật, sinh vật có ích khác cho cây trồng; Các chất điều hoà sinh trưởng 9. Các phép thử được công nhận: 1. TCVN 444087: Supe phốt phát đơn, yêu cầu kỹ thuật. 2. TCVN 472789: Phân khoáng: Danh mục chỉ tiêu chất lượng. 3. TCVN 485289: Phân khoáng: Phương pháp xác định thành phần cỡ hạt. 4. TCVN 485389: Phân khoáng: Phương pháp xác định độ bền tĩnh của các hạt. 5. TCVN 26191994: urê nông nghiệp: Yêu cầu kỹ thuật 6. TCVN 26201994: urê nông nghiệp: Phương pháp thử 7. TCVN 58152001: Phân hỗn hợp NPK: Phương pháp thử 8. TCVN 61691996: Phân bón vi sinhThuật ngữ 9. TCVN 68462001: Vi sinh vật họchướng dẫn chung về định lượng 10. TCVN 61662002: Phân bón vi sinh vật cố định nitơ 11. TCVN 61671996: phân bón VSV phân giải hợp chất phốt pho khó tan 12. TCVN 61681996: Phân bón VSV phân giải xenluloza 13. TCVN 61682002: Chế phẩm vi sinh vật phân giải xenlulo 14. E.Coli giả địnhkỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất. 15. TCVN 10781999: Phân lân Canxi magiê (phân lân nung chảy) 16. TCVN 71592002: Phân bón và chất cải tạo đấtphân loại 17. 10TCN 30697: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định phốt pho tổng số. 18. 10TCN 30797: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định phốt pho hữu hiệu. 19. 10TCN 30897: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định kali hoà tan. 20. 10TCN 36099: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định kali hữu hiệu. 21. 10TCN 36199: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định nitơ hữu hiệu. 22. 10TCN 36299: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định một số vi lượng. 23. 10TCN 36399: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định lưu huỳnh 24. 10TCN 36499: Phân tích phân bón: PP. xác định Clorua hoà tan trong nước. 25. 10TCN 36599: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định axit humic và fulvic. http:www.khsdh.udn.vnzipfilesSo3014.2.tnh.uandokhac.pdf http:rumenasia.orgphanvuhaigiao_trinhPP%20phan%20tich%20hoa%20hoc%20TP%20thuc%20an.htm I. PHƯƠNG PHÁP CHỌN MẪU PHÂN TÍCH I.1 KHÁI NIỆM CHUNG I.1.1 Ý nghĩa và nguyên tắc chọn mẫu Để xác định giá trị hoặc thành phần hóa học của một loại thức ăn hay khẩu phần nào đó, trong thực tế việc chọn đại diện để phân tích là rất cần thiết. Đại diện của tổng thể đó được gọi là mẫu. Việc chọn đại diện hay nói cách khác là chọn mẫu có ảnh hưởng lớn đến kết quả của tổng thể. Mẫu được chọn lọc càng đại diện (nhiều mẫu, đồng đều..) số liệu phân tích càng chính xác. Với tầm quan trọng đó, việc lấy mẫu phân tích cần đạt hai nguyên tắc cơ bản sau đây: · Nguyên tắc đồng đều : Mẫu phải được chọn đồng nhất tức có cùng trạng thái và cùng thuộc tính. Ví dụ: Phân tích thành phần hóa học của cám gạo thì cần loại bỏ những phần không phải là cám gạo như trấu, đá, cát, rác.. Trong thực tế việc chọn mẫu đồng đều không phải là công việc dễ dàng. · Nguyên tắc ngẫu nhiên : Nhằm loại bỏ yếu tố chủ quan của người chọn mẫu. Để tiến hành chọn mẫu ngẫu nhiên, chúng ta cần có những quy ước khách quan trước khi tiến hành chọn, ví dụ như: áp dụng quy tắc bốc thăm, quy tắc chẵn lẽ, quy tắc hai mặt đối diện, quy tắc đường chéo hình vuông .. I.1.2 Một số khái niệm 1. Mẫu ban đầu : Là tổng lượng mẫu thô lấy được từ tổng thể (quần thể). Mẫu ban đầu không được đem đi phân tích ngay vì thiếu sự đồng nhất. 2. Mẫu trung bình : Là lượng mẫu ban đầu được loại bỏ phần không đồng nhất và một phần khối lượng. Mẫu trung bình được cất giữ cho việc phân tích sau này. Để có mãu trung bình, tiến hành chọn như sau: · Trộn đều mẫu ban đầu sau khi đã loại bỏ phần không đồng nhất. Dàn đều trên khay hoặc ván phẵng không hút ẩm một lớp không dày quá 2 cm. Kẽ hai đường chéo hình chữ nhật và căn cứ đó để loại bỏ phần mẫu đối xứng. Phần còn lại được trộn đều lần nữa và loại bỏ như trên, làm như vậy đến khi được khối lượng mẫu cần thiết. · Nghiền mịn theo yêu cầu phân tích và bảo quản trong lọ thủy tinh hoặc bình có nắp đậy kín. Nếu mẫu có độ ẩm lớn (>15%) cần sấy khô (£ 10%) để bảo quản. · Ghi nhản rõ ràng: Tên mẫu, khối lượng, ngày lấy, người lấy mẫu, nơi lấy mẫu và có thể các yêu cầu phân tích. 3. Mẫu phân tích: Là lượng mẫu đem phân tích cho mỗi chỉ tiêu. Khối lượng tùy thuộc vào từng phương pháp. I.2 LẤY MẪU CÁC LOẠI THỨC ĂN I.2.1 Thức ăn tinh dạng hạt và bột Thông thường thức ăn dạng này được bảo quản ở hai dạng đóng bao và đổ thành đóng. Vì vậy, việc lấy mẫu để phân tích sẽ được tiến hành khác nhau. I.2.1.1 Trong các bao bì · Dụng cụ : gồm ống xông (sonde) các loại, gậy sắt dài, khay hoặc ván phẵng và dụng cụ thông thường khác. · Lấy mẫu của ³ 5% tổng số bao nhưng không ít hơn 3 bao. Thường quy định như sau : Số bao cần thiết để lấy mẫu: từ 110 bao, lấy tất cả; > 11 bao, lấy 10 bao ngẫu nhiên. Số bao bì được chọn ở các vị trí khác nhau trong kho, nhưng phải chọn theo hàng, theo lô và theo nguyên tắc hình vuông nói trên. Trong mỗi bao cần chọn ít nhất 3 vị trí ở 3 lớp : trên, giữa và đáy bao. · Tiến hành : Dùng ống xông đặt nghiêng gốc 30450 để chọc thủng bao bì, đến độ sâu cần thiết thì quay đầu nhọn lên trên để thức ăn tự chảy ra. Phải tính toán khối lượng mỗi lần lấy làm sao cho tổng khối lượng mẫu ban đầu khoảng 3 kg để có mẫu trung bình là 400500 g (theo vất chất khô). · Mẫu trung bình được chọn theo nguyên tắc đã giới thiệu, được bảo quản và phân tích. I.2.1.2 Trong kho hoặc sàn · Dụng cụ : Gáo dung tích 0,51lit và các dụng cụ thông thường khác. · Nếu thức ăn được bảo quản trong kho hoặc sàn không đóng bao thì lấy ở nhiều điểm khác nhau ở những độ sâu khác nhau để đảm bảo đồng đều. Thông thường mẫu được lấy ở 3 lớp : lớp trên và dưới cách bề mặt và mặt sàn kho it nhất 20 cm. Xác định lát cắt ngang của mỗi lớp, vẽ tưởng tượng 2 đường chéo và vị trí lấy mẫu nằm ở 4 gốc và điểm giao nhau. · Khối lượng mẫu ban đầu khoảng 5 kg và mẫu trung bình 400500 g vật chất khô. I.2.2 Thức ăn thô khô (cỏ khô, rơm rạ..) I.2.2.1 Nguyên tắc Chuẩn bị mẫu phân tích cho thức ăn thô khô là một quá trình chế biến mẫu thu thập đến mẫu đồng nhất phù hợp với việc phân tích. Nói chung, quá trình này gồm làm khô trở lại và nghiền. Hầu hết mẫu thức ăn thu thập được nằm vào một trong các trường hợp sau đây: Đủ độ khô để nghiền và phân tích ngay lập tức (tỷ lệ vật chất khô > 90%). Đủ độ khô để nghiền qua lỗ sàng 46 mm nhưng còn quá ẩm để nghiền mịn. Chưa đủ khả năng nghiền vì độ ẩm còn quá lớn > 15%. Những dạng mẫu này phải được xử lý để phân tích. Loại mẫu và loại máy nghiền được sử dụng để nghiền mẫu phụ thuộc vào độ ẩm ban đầu. Hầu hết thức ăn thô có độ ẩm 1520% có thể nghiền qua lỗ sàng 46 mm, nhưng phải làm khô tiếp để nghiền mịn trước khi phân tích. Trong quá trình chuẩn bị mẫu phân tích cần chú ý tạp nhiễm mẫu và giữ mẫu trong lọ kín tránh ánh sáng và nhiệt. I.2.2.2 Dụng cụ Máy cắt, thái cỏ hoặc Dao, kéo dùng để cắt thực vật (thân, lá..) Túi và các dụng cụ đựng mẫu vật Cân kỹ thuật Máy nghiền với các loại sàng có đường kính lỗ 1mm và 46 mm. Tủ lạnh sâu hoặc tủ lạnh I.2.2.3 Tiến hành · Nếu thức ăn chất thành đống như rơm, cỏ khô thì mẫu phải được lấy ở các vị trí khác nhau trong đống, phía trên cách bề mặt không dưới 20 cm, lớp đáy cách mặt đáy > 20 cm. Mỗi lớp lấy ở nhiều vị trí trên 2 đường chéo hình chử nhật của mặt cắt ngang mỗi lớp.
Trung tâm Khảo kỉêm nghiệm Giống, sản phẩm trồng phân bón Quốc gia Tên phòng: Trung tâm Khảo kỉêm nghiệm Giống, sản phẩm trồng phân bón Quốc gia Địa chỉ: Điện thoại: Fax: Đơn vị quản lý trực tiếp: Quyết định công nhận: Số 6, Nguyễn Công Trứ, Hà Nội 04 39713521 04 39712054 Cục Trồng trọt - Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn 1235/QĐ-TT ngày 15/10/2008 Lĩnh vực công nhận: Chất hữu (HC), axit Humic, Fulvic hợp chất hữu khác; N, P, K; Ca, Mg, S, Si; Fe, Mn, Zn, Cu, B, Mo, Clorua, Co, Pb, Cd, Hg, As, Ni, Cr; pH, Biuret, axit tự do; Tỷ trọng (đối với phân bón dạng lỏng), độ ẩm, kích thước hạt; E Coli, Salmonella, Coliform, trứng giun đũa; Vi sinh vật cố định đạm, phân giải lân, phân giải Xenlulo loại vi sinh vật, sinh vật có ích khác cho trồng; Các chất điều hoà sinh trưởng Các phép thử công nhận: TCVN 4440-87: Supe phốt phát đơn, yêu cầu kỹ thuật TCVN 4727-89: Phân khoáng: Danh mục tiêu chất lượng TCVN 4852-89: Phân khoáng: Phương pháp xác định thành phần cỡ hạt TCVN 4853-89: Phân khoáng: Phương pháp xác định độ bền tĩnh hạt TCVN 2619-1994: urê nông nghiệp: Yêu cầu kỹ thuật TCVN 2620-1994: urê nông nghiệp: Phương pháp thử TCVN 5815-2001: Phân hỗn hợp NPK: Phương pháp thử TCVN 6169-1996: Phân bón vi sinh-Thuật ngữ TCVN 6846-2001: Vi sinh vật học-hướng dẫn chung định lượng 10 TCVN 6166-2002: Phân bón vi sinh vật cố định nitơ 11 TCVN 6167-1996: phân bón VSV phân giải hợp chất phốt khó tan 12 TCVN 6168-1996: Phân bón VSV phân giải xenluloza 13 TCVN 6168-2002: Chế phẩm vi sinh vật phân giải xenlulo 14 E.Coli giả định-kỹ thuật đếm số có xác suất lớn 15 TCVN 1078-1999: Phân lân Canxi magiê (phân lân nung chảy) 16 TCVN 7159-2002: Phân bón chất cải tạo đất-phân loại 17 10TCN 306-97: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định phốt tổng số 18 10TCN 307-97: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định phốt hữu hiệu 19 10TCN 308-97: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định kali hồ tan 20 10TCN 360-99: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định kali hữu hiệu 21 10TCN 361-99: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định nitơ hữu hiệu 22 10TCN 362-99: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định số vi lượng 23 10TCN 363-99: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định lưu huỳnh 24 10TCN 364-99: Phân tích phân bón: PP xác định Clorua hồ tan nước 25 10TCN 365-99: Phân tích phân bón: Phương pháp xác định axit humic fulvic http://www.kh-sdh.udn.vn/zipfiles/So30/14.2.tnh.uan-dokhac.pdf http://rumenasia.org/phanvuhai/giao_trinh/PP%20phan%20tich%20hoa%20hoc%20TP%20thuc %20an.htm I PHƯƠNG PHÁP CHỌN MẪU PHÂN TÍCH I.1 KHÁI NIỆM CHUNG I.1.1 Ý nghĩa nguyên tắc chọn mẫu Để xác định giá trị thành phần hóa học loại thức ăn hay phần đó, thực tế việc chọn đại diện để phân tích cần thiết Đại diện tổng thể gọi mẫu Việc chọn đại diện hay nói cách khác chọn mẫu có ảnh hưởng lớn đến kết tổng thể Mẫu chọn lọc đại diện (nhiều mẫu, đồng ) số liệu phân tích xác Với tầm quan trọng đó, việc lấy mẫu phân tích cần đạt hai ngun tắc sau đây: · Nguyên tắc đồng : Mẫu phải chọn đồng tức có trạng thái thuộc tính Ví dụ: Phân tích thành phần hóa học cám gạo cần loại bỏ phần cám gạo trấu, đá, cát, rác Trong thực tế việc chọn mẫu đồng công việc dễ dàng · Nguyên tắc ngẫu nhiên : Nhằm loại bỏ yếu tố chủ quan người chọn mẫu Để tiến hành chọn mẫu ngẫu nhiên, cần có quy ước khách quan trước tiến hành chọn, ví dụ như: áp dụng quy tắc bốc thăm, quy tắc chẵn lẽ, quy tắc hai mặt đối diện, quy tắc đường chéo hình vuông I.1.2 Một số khái niệm Mẫu ban đầu : Là tổng lượng mẫu thô lấy từ tổng thể (quần thể) Mẫu ban đầu không đem phân tích thiếu đồng Mẫu trung bình : Là lượng mẫu ban đầu loại bỏ phần không đồng phần khối lượng Mẫu trung bình cất giữ cho việc phân tích sau Để có mãu trung bình, tiến hành chọn sau: · Trộn mẫu ban đầu sau loại bỏ phần không đồng Dàn khay ván phẵng không hút ẩm lớp không dày cm Kẽ hai đường chéo hình chữ nhật để loại bỏ phần mẫu đối xứng Phần lại trộn lần loại bỏ trên, làm đến khối lượng mẫu cần thiết · Nghiền mịn theo yêu cầu phân tích bảo quản lọ thủy tinh bình có nắp đậy kín Nếu mẫu có độ ẩm lớn (>15%) cần sấy khô (≤ 10%) để bảo quản · Ghi nhản rõ ràng: Tên mẫu, khối lượng, ngày lấy, người lấy mẫu, nơi lấy mẫu u cầu phân tích Mẫu phân tích: Là lượng mẫu đem phân tích cho tiêu Khối lượng tùy thuộc vào phương pháp I.2 LẤY MẪU CÁC LOẠI THỨC ĂN I.2.1 Thức ăn tinh dạng hạt bột Thông thường thức ăn dạng bảo quản hai dạng đóng bao đổ thành đóng Vì vậy, việc lấy mẫu để phân tích tiến hành khác I.2.1.1 Trong bao bì · Dụng cụ : gồm ống xơng (sonde) loại, gậy sắt dài, khay ván phẵng dụng cụ thông thường khác · Lấy mẫu ≥ 5% tổng số bao khơng bao Thường quy định sau : Số bao cần thiết để lấy mẫu: từ 1-10 bao, lấy tất cả; > 11 bao, lấy 10 bao ngẫu nhiên Số bao bì chọn vị trí khác kho, phải chọn theo hàng, theo lô theo nguyên tắc hình vng nói Trong bao cần chọn vị trí lớp : trên, đáy bao · Tiến hành : Dùng ống xơng đặt nghiêng gốc 30-450 để chọc thủng bao bì, đến độ sâu cần thiết quay đầu nhọn lên để thức ăn tự chảy Phải tính tốn khối lượng lần lấy cho tổng khối lượng mẫu ban đầu khoảng kg để có mẫu trung bình 400-500 g (theo vất chất khơ) · Mẫu trung bình chọn theo nguyên tắc giới thiệu, bảo quản phân tích I.2.1.2 Trong kho sàn · Dụng cụ : Gáo dung tích 0,5-1lit dụng cụ thông thường khác · Nếu thức ăn bảo quản kho sàn khơng đóng bao lấy nhiều điểm khác độ sâu khác để đảm bảo đồng Thông thường mẫu lấy lớp : lớp cách bề mặt mặt sàn kho it 20 cm Xác định lát cắt ngang lớp, vẽ tưởng tượng đường chéo vị trí lấy mẫu nằm gốc điểm giao · Khối lượng mẫu ban đầu khoảng kg mẫu trung bình 400-500 g vật chất khơ I.2.2 Thức ăn thô khô (cỏ khô, rơm rạ ) I.2.2.1 Nguyên tắc Chuẩn bị mẫu phân tích cho thức ăn thơ khơ q trình chế biến mẫu thu thập đến mẫu đồng phù hợp với việc phân tích Nói chung, q trình gồm làm khơ trở lại nghiền Hầu hết mẫu thức ăn thu thập nằm vào trường hợp sau đây: - Đủ độ khơ để nghiền phân tích (tỷ lệ vật chất khô > 90%) - Đủ độ khô để nghiền qua lỗ sàng 4-6 mm ẩm để nghiền mịn - Chưa đủ khả nghiền độ ẩm q lớn > 15% Những dạng mẫu phải xử lý để phân tích Loại mẫu loại máy nghiền sử dụng để nghiền mẫu phụ thuộc vào độ ẩm ban đầu Hầu hết thức ăn thơ có độ ẩm 15-20% nghiền qua lỗ sàng 4-6 mm, phải làm khơ tiếp để nghiền mịn trước phân tích Trong q trình chuẩn bị mẫu phân tích cần ý tạp nhiễm mẫu giữ mẫu lọ kín tránh ánh sáng nhiệt I.2.2.2 Dụng cụ Máy cắt, thái cỏ Dao, kéo dùng để cắt thực vật (thân, ) Túi dụng cụ đựng mẫu vật Cân kỹ thuật Máy nghiền với loại sàng có đường kính lỗ 1mm 4-6 mm Tủ lạnh sâu tủ lạnh I.2.2.3 Tiến hành · Nếu thức ăn chất thành đống rơm, cỏ khơ mẫu phải lấy vị trí khác đống, phía cách bề mặt khơng 20 cm, lớp đáy cách mặt đáy > 20 cm Mỗi lớp lấy nhiều vị trí đường chéo hình chử nhật mặt cắt ngang lớp · Nếu thức ăn đóng kiện, khối lấy nhiều kiện, khối khơng 5% tổng số Làm cho tổng khối lượng mẫu ban đầu khơng kg vật chất khơ · Mẫu có độ ẩm 15%: Loại bỏ bụi, rể chặt ngắn 1-2 cm Nghiền mẫu qua lỗ sàng 4-6 mm Loại bỏ mẫu theo nguyên tắc chéo ô vuông đến khối lượng cần thiết (khoảng 500 g khô) Nếu mẫu chưa đủ khơ để nghiền qua lỗ sàng 1mm sấy tiếp tủ sấy microwave · Mẫu có độ ẩm 15%: Loại bỏ phần khơng đồng mẫu chặt ngắn đến 1-2 cm (Cỏ ủ silơ có độ dài 1-2 cm khơng cần chặt) Để mẫu vào plastic khay trộn Loại bỏ mẫu theo nguyên tắc chéo ô vuông đến khối lượng cần thiết (khoảng 500 g khô) Sấy mẫu phần mẫu chọn đến khô (ẩm độ 510%) Chú ý: Mẫu dùng để phân tích sắc tố, vitamin số hợp chất dễ bị phá hủy bay nhiệt độ cao phải làm khơ nhiệt độ thầp, thường sấy chân không sấy điều kiện nhiệt độ âm (qua Nitơ lỏng tủ lạnh sâu) I.2.3 Thức ăn thô tươi ủ si-lô I.2.3.1 Nguyên tắc Thức ăn thô tươi ủ si-lơ thức ăn có hàm lượng nước cao (50-90%) chất dễ bị bay a-xit béo thức ăn ủ si-lô Việc lấy, làm khô nghiền mẫu phải tiến hành điều kiện khác với loại thức ăn nói I.2.3.2 Tiến hành · Nếu cỏ đồng phải thu cắt theo nguyên tắc đường chéo ô vuông It điểm (5 m 2) ruộng chọn để thu cắt mẫu Nếu thức ăn ủ si-lơ lấy nhiều lớp ủ khác nhau, đảm bảo đồng trường hợp rơm, cỏ khô chất đống · Sau lấy mẫu ban đầu việc lấy mẫu trung bình phải tiến hành hàm lượng nước, a-xit beo bay phải xác định tức · Sấy khơ mẫu nghiền mịn cho việc thực hiên phân hóa học khác I.2.4 Thức ăn lỏng nhiều nước · Mẫu lấy dụng cụ chứa khác nhau, đảm bảo đồng Trước lấy mẫu phải trộn dịch dụng cụ chứa Lấy nhiều điểm khác Trộn mẫu ban đầu thật lấy mẫu trung bình vơi khối lượng khoảng 1-1,5 kg Đậy kín bình chứa mẫu Nếu bảo quản lâu cần thêm chất chống lên men nấm phoc- ma-lin 5%, hỗn hợp tô-lu-en clo-rô-phoc 1:1, · Không bảo quản mẫu tủ lạnh tủ lạnh sâu I.2.5 Thức ăn củ, · Chọn mẫu với thức ăn củ, thường dễ bị chủ quan người lấy Để tránh ảnh hưởng chọn phải có quy định tỷ lệ chọn loại củ, độ to, nhỏ, già, non, v.v · Rửa đất đai, để nước bổ dọc củ, thành nhiều phần tương đương sau chọn phần củ, trộn để lấy mẫu trung bình · Băm nhỏ nghiền nhỏ mẫu trung bình Xác định hàm lượng nước trước sấy khơ tồn mẫu trung bình (khối lượng 400-500 g khô) ÁP DỤNG MS-EXCEL TRONG VIỆC LẤY MẪU Bảng số ngẫu nhiên Bảng số ngẫu nhiên thành lập máy tính (các bảng số ngẫu nhiên trình bày sách thống kê sinh học) Có cách đọc bảng số ngẫu nhiên: - Theo hàng dọc hay hàng ngang: chọn hay nhiều số tùy theo cỡ mẫu, số trùng bỏ qua, số xem số 10 Ví dụ, kho thức ăn có chứa số bao thức ăn cần lấy mẫu ≤ 10 bao cần lấy mẫu bao đọc bảng số ngẫu nhiên máy tính sau: Cỡ mẫu n ≤ 10 33 81 72 91 25 ⇒ 3, 8, 1, Cỡ mẫu n ≤ 100 ⇒ 33, 81, 72, 91, 25 - Theo trình tự hàng dọc số cần lấy mẫu hàng Chương trình vi tính: Từ tổng thể biến số X, chương trình tự động chọn n biến số ngẫu nhiên X 1, X2, X3, , Xn Biến số ngẫu nhiên Xi (I= 1, 2, , n) có phân phối biến số X Ap dụng MS- EXCEL * Cách thành lập bảng số ngẫu nhiên Excel a Nhấp đơn lệnh Tools lệnh Data Analysis b Trong menu Data Analysis, chọn chương trình Random Number Generation nhấp nút OK xuất sau (xem hình dưới): Number of Variables: (Số cột) Number of Random Numbers: ( Số hàng) Distribution: Loại phân phối (Uniform, normal, Bernoulli, Binomial, Poisson, Patterned, Discrete) Parameters (Thông số) Between and 100000 Random seed (Mầm ngẫu nhiên) Output options (Đầu ra) Ví dụ: Bảng số ngẫu nhiên lấy từ MS - Excel 79104 39094 92376 7321 64415 58379 17631 55849 25062 20472 11188 99936 25752 97882 5560 41896 9977 58815 50084 21863 42943 876 22303 46120 39064 31068 494 32017 39665 95178 87954 97668 56508 9745 29646 74419 46736 99661 11884 70379 34925 94568 85635 62981 47813 87176 4062 48805 77325 6607 Ap dụng lấy mẫu (Sampling) Ví dụ: kho hàng có chứa 12 bao bột cá, lấy ngẫu nhiên bao Lập danh sách tên: đặt nhãn tên (có thể chọn tên sinh viên tham gia thực tập lấy mẫu) theo số tiện lợi Đặt tên số bao, có 12 tên Đống khối tên cột B, nhấp đơn lệnh Data lệnh Sort để xếp theo vần ABC (hoặc nhấp nút A-Z Toolbars) Lấy mẫu gồm số ngẫu nhiên từ tổng thể 12 sô Cách làm sau (xem hình dưới): a Nhấp đơn lệnh Tools lệnh Data Analysis b Trong menu Data Analysis, chọn Sampling nhấp OK c Trong menu Sampling, ấn định chi tiết: - Input range (Phạm vi đầu vào) - Sampling Method (phương pháp lấy mẫu): Random (Ngẫu nhiên) với cỡ mẫu (Number of Sample: 3) - Output range (Phạm vi đầu ra) VI XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG KHOÁNG VI.1 KHOÁNG TỔNG SỐ VI.1.1 Nguyên lý Khoáng tổng số phần lại sau chất hữu bị đốt cháy nhiệt độ 550-600 0C VI.1.2 Dụng cụ, hóa chất · Lò nung điều chỉnh nhiệt độ ± 50C · Chén nung sứ ni-ken VI.1.3 Tiến hành · Xác định khối lượng chén nung : Nung cốc nhiệt độ 550-600 0C 2-3 giờ, làm nguội bình hút ẩm 45 phút cân Lặp lại đến có trọng lượng khơng đổi · Khống hóa : Cân 1-2 g mẫu vào chén biết khối lượng, nung nhiệt độ 100 0C đến hết khói đen bay tăng nhiệt độ đến 5500C kéo dài 3-4 · Xác định khối lượng khống : Mẫu sau khống hóa xong (mẫu trắng đều, vết đen xen kẽ thêm 10 ml nước cất nóng nung tiếp) đem để nguội bình hút ẩm 45 phút cân Lặp lại việc nung (khoảng giờ) cân đến khối lượng khơng đổi VI.1.4 Tính kết Hàm lượng khống tổng số (total ash-TA) tính theo cơng thức sau : TA, % = (Wa - Wt)/W x 100 Trong : Wa khối lượng mẫu chén sau khống hóa, g Wt khối lượng chén, g W khối lượng mẫu, g VI.2 KHỐNG KHƠNG TAN TRONG A-XIT VI.2.1 Nguyên lý Phần lại khống sau hòa tan a-xit clo-hy-dric loảng gọi khống khơng tan a-xit Nó bao gồm khống khơng tan phần khơng chứa khống cát, đá VI.2.2 Dụng cu, hóa chất · Dung dịch HCl 10% : Hòa tan 10 ml HCl đặc 100 ml nước cất vừa đủ · Lò nung VI.2.3 Tiến hành · Chuẩn bị mẫu : Mẫu khoáng tổng số đem dùng cho việc phân tích · Hòa tan mẫu khoáng tổng số với 10 ml dung dịch HCl 10%, quấy nhẹ cho tan hết mức · Đem nung tiếp nhiệt độ 5500C 2-3 · Để nguội bình hút ẩm 45 phút · Cân khối lượng · Lặp lại việc nung cân đến khối lượng khơng đổi VI.2.4 Tính kết Hàm lượng khống khơng tan (Insoluble ash - IA) tính theo công thức sau : IA, % = (Wa - Wt)/W x 100 Trong : Wa khối lượng mẫu chén sau hòa tan, g Wt khối lượng chén, g W khối lượng mẫu, g VI.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MUỐI TRONG THỨC ĂN VI.3.1 Hoá chất, dụng cụ Dung dịch cromat kali (K2CrO4) 10%: hòa tan 10g K2CrO4 nước cất bình định mức 100ml Dung dịch AgNO3 0,1N : hòa tan 1,7g AgNO bình định mức 100ml, thêm giọt HNO đậm đặc nước cất vạch Giữ lọ sẩm màu Giấy lọc sấy khô, gấp nếp VI.3.2 Tiến hành Cân 5g mẫu cho vào bình định mức 250ml, thêm vào lượng nhỏ nước cất Lắc 30 phút (dùng máy lắc tốt) Để yên, thêm nước tới vạch lắc Lọc qua giấy lọc khô gấp nếp Dịch lọc dùng để phân tích Hút 25ml dịch lọc cho vào bình tam giác 100ml, thêm giọt cromat kali 10% Định phân dung dịch AgNO3 0,1N xuất màu đỏ nâu bền VI.3.3 Tính kết Hàm lượng NaCl tự mẫu thức ăn tính theo công thức sau đây: 0,0058 x V x a NaCl % = - x 100 Wxb 0,0058 : hệ số quy đổi hàm lượng NaCl tương ứng với ml AgNO3 V : thể tích AgNO3 0,1N dùng để chuẩn độ, ml; a : tổng dung dịch mẫu, ml (250); b : thể tích dung dịch mẫu dùng phân tích, ml (25); W : trọng lượng mẫu, g (5) 0,1N dùng để chuẩn độ; Trở Mục lục VII XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAN-XI TRONG THỨC ĂN VII.1 PHƯƠNG PHÁP KHỐNG HĨA KHƠ VII.1.1 Ngun lý Can-xi mẫu, sau loại bỏ chất hữu hòa tan a-xit clo-hyd-ric làm kết tủa dạng can-xi ơ-xa-lát (CaC2O4) Hòa tan kết tủa a-xit sul-fu-ric loảng dư hình thành a-xit ơ-xa-lic với lượng tương ứng với lượng can-xi có mẫu Xác định lượng a-xit ô-xa-lic pec-man-ga-nat ka-li biết nồng độ VII.1.2 Dụng cụ · Lò nung · Chén sứ · Phểu lọc giấy lọc khơng tro VII.1.3 Hóa chất · HNO3 đậm đặc, D20 = 1,4 · HCl (1+3): pha phần a-xit clo-hyd-ric đậm đặc với phần nước cất theo thể tích · (NH4)2C2O4 dung dịch 4,2%: Hòa tan 4,2 g tinh khiết nước cất vừa đủ 100 ml · NH4OH dung dịch (1+1) (1+50): Hòa tan phần NH4OH với 50 phần nước cất theo thể tích · KMnO4 dung dịch 0,1N (xem phụ lục) · Mê-tin đỏ (Methyl red, xem phụ lục) VII.1.4 Tiến hành Chuẩn bị mẫu thử: · Cân g mẫu nghiền mịn với SiO sứ, vô hóa đến hết chất hữu Đun phần lại 40 ml HCl (1+3) vài giọt HNO Chuyển tồn vào bình định mức 250 ml, để nguội, thêm nước cất đến vạch mức lắc Kết tủa can-xi ô-xa-lat: · Lấy pi-pet hut 25 ml dịch vào bình định mức cho nước cất vừa đủ 100 ml, thêm giọt methyl đỏ Điều chỉnh pH đến 5,6 NH4OH (1+1) xuất màu da cam sáng Nếu thêm vài giot HCl (1+3) cho xuất màu da cam trở lại Tiếp tục thêm giọt HCl Màu chuyển sang hồng (pH 2,5-3), màu da cam Thêm nước cất vừa đủ 150 ml, đem đun thêm từ từ dung dịch (NH 4)2C2O4 4% nóng Nếu màu đỏ chuyển qua da cam vàng thêm HCl đến màu chuyển qua hồng Để qua đêm đợi kết tủa hình thành Lọc rửa kết tủa chuẩn độ : · Lọc nhẹ nhàng qua giấy lọc không tro, phểu lọc đáy xốp rữa kết tủa NH 4OH (1+50) Đặt giấy lọc phểu lọc chứa kết tủa vào bình định mức hòa tan kết tủa 125 ml nước cất ml H 2SO4 Đun nóng 700C chuẩn độ với KMnO4 0,1N đến xuất màu hồng nhạt Sự có mặt giấy làm chuyển màu giây lát Điều chỉnh với mẫu trắng tính tốn lượng can-xi VII.1.5 Tính kết Hàm lượng can-xi mẫu tính theo cơng thức sau: Ca % = 0,002 x Y x 250/25 x 100/w (1) Trong : Y lượng KMnO4 0,1N, ml 0,002 hệ số can-xi tương ứng với ml KMnO4 0,1N w : lượng mẫu phân tích (2 g) 250: tổng lượng dịch thử (ml) 25 lượng dịch thử đem phân tích Chú ý: Cần đưa lượng can-xi giá trị mẫu khô tuyệt đối cách chia (1) với tỷ lệ vật chất khô mẫu VII.2 PHƯƠNG PHÁP KHỐNG HĨA ẨM VII.2.1 Ngun lý Xem phương pháp VII.2.2 Chuẩn bị dịch thử · (a) Cân 2,5 g mẫu vào bình ken-đan (Kjeldahl) dung tích 500 800 ml Thêm 20-30 ml HNO đặc, đun nhẹ 30-45 phút để ơ-xy hóa chất hữu dễ bị ô-xy Làm nguội dung dịch them 10 ml dung dịch HClO4 70-72% Đun nhẹ, điều khiển lửa cần, đến dung dịch màu gần màu khói trắng đặc xuất Không để khô, nguy hiểm Làm nguội từ từ, thêm 50 ml nước đun để loại bỏ khói NO2 Làm nguội, pha loảng dung dịch, lọc vào binh định mức dung tích 250 ml, thêm nước cất đến vạch mức lắc · (b) Cân 2,5 g mẫu nghiền mịn SiO khoáng hóa Cho vào mẫu 40 ml HCl (1+3) vài giọt HNO để tạo kết tủa, đun nhẹ, chuyển vào bình định mức 250 ml, để nguội, thêm nước cất đến vạch mức lắc nhẹ cho tan VII.2.3 Tiến hành xác định · Lấy pipét hút lượng dịch thử (a) (b) (khoảng 10-25 ml- tùy thuộc lượng Ca mẫu thử) vào bình định mức 100 ml thêm nước cất đến vạch mức Nhỏ vào giọt mê-tin đỏ tiếp tục bước “Điều chỉnh pH ” phần VII.2.4 Tính kết Xem phương trình (1) Trở Mục lục VIII PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH PHỐT PHO VIII.1 PHƯƠNG PHÁP QUANG SẮC KẾ VIII.1.1 Nguyên lý Phốt có mẫu sau vơ hóa chuyển thành a-xit phốt-pho mô-lip-đic bị khử để thành phôtpho mô-lip-đat màu xanh lơ bền vững Màu hợp chất tỷ lệ với lượng phơt-pho có mẫu xác định máy so màu quang học VIII.1.2 Dụng cụ Ngồi dụng cụ thơng thường cho phân tích khống, cần thêm máy so màu với bước sóng 400 nm độ dày cu-vét ≤ 15 mm VIII.1.3 Hóa chất Mơ-lip-đơ-va-nat: Hòa tan 40 g (NH4)2MoO4.4H2O 400 ml nuớc cất nóng làm lạnh Hòa g NH mê-ta-va-na-đat 250 ml nước cất nóng làm lạnh, thêm 250 ml dung dịch HClO 70% Vừa nhỏ giọt vừa lắc dung dịch mô-lip-đat vào mê-ta-va-na-đat thêm nước cất đủ lít Dung dịch phơt-pho chuẩn: Hòa tan 8,788 g KH2PO4 nước thêm nước cất vừa đủ lít (dung dịch 1: ml chứa mg P) Khi xây dựng đường chuẩn phân tích pha loảng 50 ml dung dịch lít nước cất vừa đủ (dung dịch 2: 1ml chứa 0,1 mg P) HCl dung dịch (1+3) : Xem phần phân tích can-xi Xây dựng đường chuẩn Lấy 5, 8, 10 15 ml dung dịch chuẩn (tương ứng 0,5; 0,8; 1,5 mg P 100 ml dung dịch) vào bình định mức 100 ml Thêm 20 ml mô-lip-đô-va-na-đat nước cất đến vạch, lắc Để yên 10 phút đọc %T bước sóng 400 nm Xây dựng đường chuẩn dựa vào mật độ quang học nồng độ P VIII.1.4 Tiến hành xác định P mẫu Chuẩn bị mẫu thử : Cân g mẫu vào chén sứ, nung nhiệt độ 600 0C (đến có màu trắng đều) Làm nguội thêm 40 ml HCl (1+3) nhiều giọt HNO đặc, sau đun sơi nhẹ Để nguội, thêm nước cất, lọc qua bình định mức 200 ml thêm nước cất vừa đủ Hiện màu đo mật độ quang: Lấy lượng dịch thử vừa phải tương ứng lượng P 0,5-1,5 mg% vào bình định mức 100 ml Thêm 20 ml môlip-đô-va-na-đat điều chỉnh nước đến vạch mức Để yên 10 phút cho xuất màu đọc %T bước sóng 400 nm Xác định mg P dựa đường chuẩn xây dựng VIII.1.5 Tính kết qủa P% = mg P dịch thử/(g mẫu x 10) VIII.2 PHƯƠNG PHÁP THỂ TÍCH VIII.2.1 Ngun lý Phơt-pho có mẫu vơ hóa chuyển dạng phốt-phát mơ-lip-đát (NH 4)3PO4.12MoO4 Định lượng kết tủa ba-zơ biết nồng độ Lượng ba-zơ tiêu tốn tương ứng với lượng P có mẫu VIII.2.2 Hóa chất Dung dịch Mơ-lip-đat: Hòa tan 100 g MoO hỗn hợp 144 ml NH4OH 271 ml nước Để nguội rót từ từ vào hỗn hợp khác chứa 489 ml HNO 1148 ml nước Làm ấm 400C không thấy kết tủa vàng (nếu có kết tủa màu phải lọc bỏ) Dịch để dùng lâu dài Hoặc pha trực tiếp từ Mô-lip-đát a-môn dung dịch 10% Dung dịch Mơ-lip-đát a-xit hóa: Lấy 100 ml dung dịch ml HNO 3., khuây đều, lọc trước dùng Dung dịch NaOH : Hòa tan 324,03 ml dung dịch xút 1N lít (100 ml dung dịch trung hòa 32,4 ml a-xit 1N; ml = 1mg 1%P2O5 sở 0,1 g mẫu) Dung dịch a-xit chuẩn : HCl HNO3 H2SO4 0,1N Các thị màu VIII.2.3 Tiến hành Chuẩn bị mẫu thư : Mẫu thử chuẩn bị phân tích can-xi Kết tủa phốt-pho : · Lấy dịch thử tương đương với 0,4 g mẫu lượng P 5%; 0,2 g mẫu P từ 5-20% 0,1 g mẫu P > 20% Thêm 5-10 ml HNO3 NH4OH xuất kết tủa, làm loảng với 75-100 ml nuớc điều chỉnh nhiệt độ 25-300 Nếu mẫu không cho kết tủa với NH 4OH kiểm tra trung hòa, thêm từ từ dung dịch xút · Thêm 20 -35 ml dung dịch mơ-lip-đat a-xit hóa (tùy thuộc hàm lượng P 2O5 có dịch thủ Lắc để yên 30 phút nhiệt độ phòng đợi kết tủa Lọc rửa kết tủa chuẩn độ: · Lọc kết tủa qua giấy lọc không tro rửa lần 25-30 ml nước cất Chuyển hết kết tủa qua giấy lọc rửa nước cất lạnh, cho 1giọt phê-nol-phta-lê-in xuất màu hồng Chuyển toàn giấy lọc kết tủa vào bình định mức hòa tan dung dịch kiềm chuẩn dư · Chuẩn độ lượng kiềm dư a-xit VIII.2.4 Tính kết Hàm lượng phơt-pho (%P) tính theo công thức sau : P, %= 0,000135 x Y x a/b x 100/w Trong : 0,000135 g P tương ứng với ml NaOH 0,1N; Y : lượng NaOH tiêu tốn (Lượng đem hòa tan kết tủa - Lượng a-xit chuẩn độ); a: tổng lượng dịch thử (ml); b: lượng dịch thử đem phân tích (ml) w : số g mẫu đem phân tích VIII.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG SI-LIC Phương pháp áp dụng chủ yếu cho loại thức ăn nhiều xơ VIII.3.1 Nguyên lý Silic phần lại sau hòa tan hỗn hợp chất khống có thức ăn dung dịch a-xit brơ-mic loảng VIII.3.2 Hóa chất · A-xit brơ-mic 48%: Hòa tan 48 ml HBr đậm đặc nước cất vừa đủ 100 ml · A-xê-tôn VIII.3.3 Tiến hành · Chuẩn bị mẫu: Khoáng lấy từ kết khống hóa ADF · Thêm nhiều giọt dung dịch a-xit brô-mic 48% (không ml) đủ làm ướt mẫu · Để yên 1-2 giờ, thêm a-xit có màu đỏ xuất · Loại bỏ a-xit cách sử dụng máy chân không · Rửa a-xê-tôn lần Khơng dùng nước · Để khơ khống hóa mẫu nhiệt độ 5000C từ 10-15 phút · Để nguội bình hút ẩm 10-15 phút xác đinh khối lượng · Lặp lại bước khống hóa cân đến khối lượng khơng đổi VIII.3.4 Tính kết Hàm lượng % si-lic (Si) có mẫu tính theo công thức sau: Si, % = (Wa - Wt)/W x 100 Trong đó: Wa khối lượng cốc xơ sau nung, g Wt khối lượng cốc, g W khối lượng mẫu, g Trở Mục lục IX ĐỊNH LƯỢNG A-XIT LĂC-TIC (CH3-CHOH-COOH) Phương pháp áp dụng cho thức ăn ủ si-lô thức ăn lên men IX.1 PHƯƠNG PHÁP SO MÀU IX.1.1 Nguyên lý Oxy hóa a-xit lăc-tic đồng sul-phat, mơi truờng a-xit sul-phu-ric thành a-xê-tal-đê-hyt A-xê-talđê-hyt kết hợp với 4-Hy-đrô-xy-bi-phê-nyl (4-hydroxybiphenyl) với tham gia Ion Cu 2+, cho màu tím xác định màu quang phổ kế IX.1.2 Dng c, vt liu v húa cht: ă Quang ph k hoc quang sc k ă Dung dch CuSO4 4% ă H2SO4 m c ă H2SO4 10% ă Dung dịch chì a-xê-tat bazic: · Chì a-xê-tat - Pb(CH3COOH) 300 g · Chi ô-xyt bột 100 g · Nước cất 700 ml Nghiền nát chì a-xê-tat, cho vào chậu sứ với chì ơ-xyt nước cất, khý đến tan hồn ton Lc v bo qun chai nỳt kớn ă Dung dịch 4-Hy-đrô-xy-bi-phê-nyl 0,75%: · 4-Hy-đrô-xy-bi-phê-nyl 0,75 g · NaOH 2% vừa đủ 100 ml IX.1.3 Xây dựng biểu đồ chuẩn · Pha dung dịch chuẩn li-ti lăc-tat (D1: ml tương đương 1mg a-xit lăc-tic) : Li-ti lăc-tat 106,5mg H2SO4 1N 20 ml Nước cất vừa đủ 100 ml Hòa tan li-ti lăc-tat 50 ml nước cất Cho thêm 20 ml H2SO4 1N, thêm nước cất vừa đủ 100 ml · Pha dung dịch chuẩn li-ti lăc-tat (D2: ml tương đương với 10 µg a-xit lăc-tic): Pha loảng D1 100 lần cách lấy ml D1 hòa vào nước cất vừa đủ 100 ml · Xây dựng biểu đồ chuẩn: · Lấy ống nghiệm rót vào loại dung dịch sau (bảng): Dung dịch D2, ml Ống 0,1 Ống 0,2 Ống 0,3 Ống 0,4 Ống 0,5 Nước cất, ml CuSO4 4%, ml H2SO4 đậm đặc, ml 0,4 0,03 0,3 0,03 0,2 0,03 0,1 0,03 0,03 · Lắc ống nghiệm, đun sôi phút nồi cất thủy làm nguội nhiệt độ thường vòi nước lạnh · Cho tiếp vào ống 0,05 ml 4-Hy-đrô-xy-bi-phê-nyl Để yên 30 phút đun tiếp 90 giây nồi cất thủy Làm nguội vòi nước lạnh · Đo mật độ quang với bước sóng 575 nm vẽ biểu đồ mật độ quang ống nghiệm chứa đến µg a-xit lăc-tic Trường hợp khơng có li-ti lăc-tat làm với mẫu biết nồng độ a-xit lăc-tic IX.1.4 Tiến hành · Chuẩn bị dịch thử : cân 10 g mẫu, thêm nước cất đủ 100 ml, khuấy để yên 30-60 phút Lọc lấy phần trong, rữa bả nước cất cho đủ 100 ml dịch lọc Dịch lọc coi dịch thử · Kết tủa ô-xy a-xit ơ-xy phê-nol: Cho vào bình định mức dung tích 50 ml : 10 ml dịch thử 10 ml chì a-xê-tat ba-zic Lắc đều, cho thêm nước cất vừa đủ 50 ml Lắc tiếp Giữ nhiệt độ 1- 40C cho chì ma-lat kết tủa Lọc bỏ kết tủa · Lấy ml dịch lọc vào bình định mức dung tích 100 ml với it nước cất khoảng 10 ml H 2SO4 10% để loại chì dư Thêm nước cất vừa đủ 100ml ly tâm dịch lọc · Cho vào ống nghiệm ống 1ml dịch lọc 2, 0,03ml CuSO 4% ml H2SO4 đậm đặc Lắc đều, để vào nồi chưng cất thủy sôi phút để ô-xy hóa a-xit lăc-tic thành a-xê-tal-đê-hyt Làm nguội nhiệt độ thường vòi nước lạnh · Tạo màu: cho 0,05ml 4-Hy-đrô-xy-bi-phê-nyl vào ống nghiệm để yên 30 phút nhiệt độ phòng Đun sơi 90 giây nồi chưng cất thủy để hòa tan thuốc thử dư Làm ngi vòi nước lạnh · Đo độ tắt quang học với bước sóng 575 nm ống nghiệm IX.1.5 Tính kết Mật độ quang học a-xê-tal-đê-hyt xác định hiệu số mật độ quang học ống nghiêm So sánh kết biểu đồ chuẩn để xác định nồng độ a-xit lăc-tic Nồng độ a-xit lắc-tic ghi nồng độ có g mẫu, cần phải quy đổi để có nồng độ 100 g mẫu IX.2 XÁC ĐỊNH A-XIT HỮU CƠ (THEO VIGNER) Phương pháp sử dụng loại thức ăn ủ si-lô, thức ăn lên men IX.2.1 Nguyên lý A-xit hữu có thức ăn ủ si-lơ thơng thường gồm a-xit a-xê-tic, bu-ty-ric, prô-pi-ô-nic lăc-tic dạng tự liên kết Các a-xit dễ bị bay nhiệt độ khác Định lượng loại a-xit xút biết nồng độ IX.2.2 Hóa chất · NaOH 0,1 N · H2SO4 đặc · Chỉ thị màu phê-nol-phta-lê-in 1% IX.2.3 Tiến hành Bước 1: Chuẩn bị dịch thử · Cân 10 g mẫu nghiền nhỏ, cho vào bình định mức lít, thêm nước cất đến vạch mức, quấy đều, đun sôi 20 phút để nguội · Thêm 0,5 ml tô-lu-en clo-rơ-phooc để làm tan a-xit béo có mẫu, quấy phút để yên 12 · Lọc bỏ bả, dịch thu gọi dịch thử Bước 2: Xác định a-xit tự toàn phần · Cho vào bình tam giác dung tích 200 ml bình 50 ml dịch thử vài giọt phê-nol-phta-lê-in · Chuẩn độ NaOH 0,1 N đến xuất màu hồng bền 30 giây (nếu dung dịch màu tối lấy quỳ tím làm thỉ-màu xanh mạ) · Tính độ a-xit tồn phần (Xo) theo cơng thức: Xo = 2.k.y Trong đó: k = 0,822; y lượng NaOH 0,1N chuẩn độ; hệ số chuyển đổi NaOH 0,1 N thành 0,05N Bước 3: Xác định a-xit tự · Lấy bình tam giác dung tích 350 ml, cho vào bình thứ 200 ml dịch thử chưng cách thủy thu vào bình 100 ml Thêm 100 ml nước cất vào bình 2, lắc chưng cách thủy thu 100 ml vào bình tiếp tục đến bình Mỗi bình lại 100 ml với nồng độ a-xit khác · Chuẩn độ bình 2, với NaOH 0,1 N · Xác định nồng độ a-xit tự sau · X1 = 2.k V1 (đối với dịch chưng cất lần bình 2) · X2 = 2.k.V2 (đối với dịch chưng cất lần bình 3) · X3 = 2.k.V3 (đối với dịch chưng cất lần bình 4) · V1, V2 V3 lượng NaOH 0,1 N chuẩn độ Bước : Xác định tổng a-xit tự liên kết · Sử dụng bình tam giác dung tích 350 ml, chưng cách thủy bình chứa 200 ml dịch thử ml H2SO4 đặc thu 100 ml dịch vào bình Thêm 100 ml nước cất vào bình chưng cách thủy thu 100 ml vào bình 3, tiếp tục để thu 100 ml dịch vào bình · Chuẩn độ dung dịch bình 2,3 NaOH 0,1 N · Tính kết qủa a-xit tự liên kết sau : · Y1 = 2.k.V1 (đối với dịch chưng cất lần bình 2) · Y2 = 2.k.V2 (đối với dịch chưng cất lần bình 3) · Y3 = 2.k.V3 (đối với dịch chưng cất lần bình 4) · V1, V2 V3 lượng NaOH 0,1 N dùng để chuẩn độ Bước 5: Tính kết · A,% = 0,5943 (X2+X3) - 0,02059X1 a-xit a-xê-tic tự · B,% = 0,04541X1 - 0,043824(X2+X3) a-xit bu-ti-ric tự · a,% = 0,05943(Y2 + Y3) - 0,02059Y2 a-xit a-xê-tic tự liên kết · b,% = 0,04541Y1 - 0,043824(Y2 + Y3) a-xit bu-ti-ric tự liên kết · L,% = 0,09Xo - 0,0225 l a-xit lắc-tic, đó: l = 3,962(X2 + X3) - 1,3724X1 + 2,0641X1 - 1,992(X2 + X3) · Hàm lượng a-xit hữu toàn phần a + b + L Bảng xác định giá trị thức ăn ủ si-lô qua a-xit hữu Chất lượng pH Lắc – tíc Tốt Trung bình Xấu 4,0-4,2 4,3-4,6 4,7-5,0 1,5-1,6 0,9-1,0 0,2-0,3 A-xê-tic tự 0,6-0,7 0,4-0,5 0,2-0,3 Trở Mục lục X XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAROTEN A-xê-tic liên kết 0,2-0,3 0,4-0,5 0,6-0,7 Bu-ti-ric tự 0 0,2-0,4 Bu-ti-ric liên kết 0,1-0,5 >0,6 X.1 Ngun lý Dựa vào tính hòa tan caroten dung môi hữu axeton Mẫu ngâm dung dịch axeton qua đêm (để hạn chế tiếp xúc caroten với ánh sáng oxi hóa) cho vào máy lắc, lắc liên tục vòng Lọc dung dịch qua phễu ngăn lớp thủy tinh natri sulphat khan rửa lại mẫu qua dung dịch axeton dịch lọc khơng màu X.2 Hóa chất dụng cụ Axeton, ether dầu hỏa, natri sulphat khan, oxit nhôm, β-caroten chuẩn Cột hấp thụ, phểu chiết, phểu Bushner, máy hút chân không, máy so màu quang học X.3 Tiến hành phân tích X.3.1 Chuẩn bị cột hấp thụ: - Nếu khơng tìm cột hấp phụ chun dùng cho sắc ký nên dùng buret 50 ml có đường kính 1cm, cắt đọan dài 12 cm - Kỹ thuật nhồi bơng: lót lớp đáy cột lớp thủy tinh dày 1cm Trong cốc 50ml, cho oxit nhơm họat tính hòa với n-hexan ether dầu hỏa, rót oxit nhơm n-hexan qua phểu vào cột Cẩn thận để cột không bị khô cách thêm n-hexan vào X.3.2 Chiết mẫu: Cân khỏang 0.5 g mẫu trạng thái gần khơ cho vào bình tam giác 50ml, thêm vào 10ml axeton, đậy nút kín Cho vào tủ lắc, lắc liên tục để qua đêm Cho dịch lọc qua phểu có lót lớp bơng thủy tinh Na2SO4 khan vào bình định mức 50ml Đảm bảo mẫu luôn giữ lớp dung môi dày 1-2 cm để tránh caroten bị oxi hóa Tiến hành rửa axeton dịch chiết khơng màu ngưng Điều chỉnh dịch lọc vừa đủ 50ml (gọi V1) Lấy 10ml từ dung dịch V1, gọi V2, làm khô dịch chiết nồi chưng cach thủy nhiệt độ khỏang 45oC, áp suất thấp Nên sử dụng khí nitrogen để tránh caroten bị oxy khơng khí oxi hóa Sau axeton bốc hết, nhanh chóng cho vào 5ml n-hexan lắc cho hỗn hợp sắc tố - caroten tan dung môi Lấy dung dịch V2 xử lý cho vào cột hấp thụ, tráng rửa vật chứa phểu hứng lượng tối thiểu n-hexan, khỏang 5ml cho tất vào cột sắc ký Mở khóa buret mức tối đa cho dung dịch qua cột sắc ký, lúc sau ta thấy vệt vàng cam xuất dần xuống bên Dùng ống nghiệm khô 20ml để hứng dung dịch caroten thu bên dưới, kiểm tra cách thử phản ứng định tính caroten antimon triclorua bảo hòa chloroform phản ứng âm tính, ngừng rửa cột Điều chỉnh dung dịch đồng phân caroten qua cột sắc ký thể tích 20 ml, gọi V , đem so màu dung dịch V3 bước sóng 440nm Đọc kết đường cong chuẩn ta có nồng độ caroten/ml dung dịch Hàm lương caroten kg thức ăn tính theo cơng thức sau: V1 x V3 x C Caroten = x 1000 V2 x W Với X : mg caroten /kg thức ăn V1: thể tích dịch chiết hổn hợp sắc tố aceton (V1 = 50ml) V2: thể tích dịch chiết đem xử lý (10ml) V3: thể tích dung dịch đồng phân caroten thu qua cột sắc ký ( 20ml) C: mg caroten tương ướng với ml dung dịch đem so W: khối lượng mẫu (g) Trở Mục lục PHỤ LỤC I PHA CHẾ MỘT SỐ HÓA CHẤT THƠNG THƯỜNG IX.3 ĐỘ TINH KHIẾT CỦA HĨA CHẤT · Trong phân tích thường xãy loại sai số : sai số phương pháp đưa lại nghĩa giá trị phân tích gần giống với giá trị thực tê (chính xác) sai số lặp lại nghĩa khác lần phân tích giưã phòng thí nghiệm Loại sai số thứ hai thường hóa chất, thao tác phân tích, thiết bi đem lại Để hạn chế sai số việc sử dụng hóa chất vơ quan trọng · Một số nhãn mác hóa chất cần ý Viết tắt AR, PA CP, P ACS USP NF Tech Prac Ý nghĩa Hóa chất phân tích Tinh khiết hóa học Tiêu chuẩn Hiệp hội hóa chất Mỹ Hóa dược Mỹ Cơng ước quốc gia (Hóa dược) Tinh khiết kỹ thuật Tinh khiết thương mại Độ tinh khiết Rất cao Rất cao Rất cao Rất cao Trung bình Thấp Phù hợp cho thương mại Rất nhiều hóa chất có nhãn “Độ tinh khiết cao” khơng đạt tiêu chuẩn dễ hút nước Vì vậy, số hóa chất coi “Hóa chất chuẩn” bảng sau : Thành phần Can-xi Sắt Clo Na-tri Ka-li Ma giê Phốt Chất ơ-xi hóa khử A-xit ba-zơ Crơm Hóa chất tiêu chuẩn CaCO3 FeSO4(NH4)2SO4.6H2O NaCl (khơ); AgNO3 (AgCl) NaCl (khô) KCl (khô) MgNH4PO4 MgNH4PO4 K2Cr2O7; Na2S2O3.5H2O; Fe(NH4)2SO4.5H2O KHC8H4O4 (Ka-li bi-ph-ta-lat); Na2CO3; A-xit suc-xi-nic (khô) K2Cr2O7 ; LiCrEDTA.3H2O IX.4 MỘT SỐ HĨA CHẤT THƠNG THƯỜNG HCl 1N (1 ml = 0,3646 g HCl): Hòa 85 ml HCl đậm đặc (D 20=1,19) vào nước cất vừa đủ lít Xác định hệ số hiệu chỉnh điều chỉnh nồng độ Pha loại HCl có nồng độ nhỏ 0,1N; 0,05N, v.v cách làm loảng dung dịch 10 hay 20 lần xác định lại hệ số hiệu chỉnh Chú ý: A-xit clo-hy-dric 1N hay 0,1N pha từ ống chuẩn H2SO4 1N (1ml = 0,04904 g H2SO4): Rót từ từ lắc 30 ml H 2SO4 đậm đặc (D20 =1,84) vào 1020 ml nước cất Xác định hệ số hiệu chỉnh điều chỉnh nồng độ Có thể pha nồng độ thấp 0,1N; 0,05N từ H2SO4 Chú ý: A-xit sulfuric 1N hay 0,1N pha từ ống chuẩn NaOH 1N (1 ml = 0,04 g NaOH): Cân 40 g NaOH tinh khiết hòa với 50 ml nước cất, để yên sau 10 giờ, gạn bỏ phần cặn pha loảng với nước cất đun sơi để nguội vừa đủ lít Xác định hệ số hiệu chỉnh với a-xit o-xa-lic 1N hiệu chỉnh Bảo quản để tránh hâp thu CO2 khơng khí Có thể pha chế thành dung dịch có nồng độ thấp Chú ý: NaOH dễ bị hút ẩm nên cân 40 g tinh thể Dung dịch I ốt 0,1N (1 ml = 0,01269 g I2) Hòa tan 13 g Iốt tinh thể dung dịch chứa 36 g KI 56 ml nước cất, lắc để tan hết thêm nước cất vừa đủ lít Xác định hệ số hiệu chỉnh với Na-tri Thio-sul-fat 0,1N hồ tinh bột thị màu.Bảo quản lọ thủy tinh màu, đậy nút kín tránh ánh sáng KMnO4 0,1N (1 ml = 0,003161 g KMnO 4) Hòa tan khoảng 3,3 g KMnO tinh thể 500 ml nước cất, lắc cho tan hết thêm nước cất vừa đủ lít Đun sơi dung dịch 10 phút, để nguội, đậy nút để yên khoảng ngày Lọc qua phểu thủy tinh xốp Xác định hệ số hiệu chỉnh bảo quản bình thủy tinh màu để tránh ánh sáng Chú ý: Dung dịch KMnO4 0,1N chuẩn bị từ ống chuẩn Na2S2O3 0,1N (1 ml = 0,02482 g Na2S2O3.5H2O) Hòa tan 26 g Na-tri Thio-sul-fat 0,1 g Na 2S2O3 vào nước cất sôi để nguội vừa đủ lít Để yên nơi tối khoảng 10 ngày, xuất kết tủa gạn bỏ Hiệu chỉnh với dung dịch Iốt 0,1N thị hồ tinh bột Bảo quản kín, tránh khí CO2 từ khơng khí Pha số chất thị chất xúc tác: · Methyl đỏ 1%: g methyl đỏ 100 ml cồn methylic Khoảng pH đổi màu 4,2-6,3 Vùng đổi màu: từ đỏ sang vàng · Phenolphtalein 1%: g phenolphtalein 100 ml cồn Khoảng pH đổi màu 8,2-10 Vùng đổi màu: không màu sang đỏ · Methyl da cam 0,1%: 0,1 g methyl da cam 100 ml nước Khoảng pH đổi màu 3-4,5 Vùng đổi màu : đỏ sang vàng · Ta-si-rô : Hai cách pha · Pha từ dung dịch A B: · Dung dịch A: 0,1 g methyl đỏ pha cồn 95 độ vừa đủ 100 ml, đun cách thủy đến tan hết · Dung dịch B: Lấy ml methylene blue nồng độ 1% nuớc pha vừa đủ với 100 ml cồn 95 độ · Hỗn hợp dung dịch với tỷ lệ 1:1, ta có Ta-si-rơ với khoảng đổi màu pH =5,5; màu xanh lục pH > 5,5 màu tím pH 0,1% sinh nứt nguội tính rèn nóng giảm Mỗi mác thép quy định giới hạn thành phần nguyên tố hợp kim: cacbon, mangan, silic, photpho, crom, nicken, molipden Theo TCVN 1776-75 phân loại mác thép, gang theo thành phần P sau: Gang đúc: 0,1-0,3% P Gang luyện thép: 0,1-0,4% P Thép cacbon: