Bài báo này trình bày kết quả việc định danh loài mọt X. crassiusculus và xác định sự xâm nhập của loài mọt đục thân tại một số nước khác nhau.
Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 4/2019 NGHIÊN CỨU ĐỊNH DANH LOÀI VÀ SỰ DI CƢ KHỎI NƠI BẢN ĐỊA CỦA LOÀI MỌT ĐỤC THÂN CHÂU Á Xylosandrus crassiusculus (Motschulky, 1866) (Coleoptera: Curculionidae) Ở AUSTRALIA The Identification Method and Migration of Asian Ambrosia Beetle Xylosandrus crassiusculus (Motschulky, 1866) (Coleoptera: Curculionidae) in Australia 1 Trần Xuân Hƣng , Phạm Quang Thu , Simon A Lawson , Đào Ngọc Quang , Nguyễn Minh Chí Ngày nhận bài: 22.07.2019 Ngày chấp nhận: 09.08.2019 Abstract Xylosandrus crassiusculus (Motschulsky, 1866), a granulate ambrosia beetle, is an important member of the genus Xylosandrus and also known as the Asian ambrosia beetle This species is native to East and South East of Asia such as in Japan, Thailand and Taiwan Currently, this species has spread across almost all regions over the world and to be considered as a high-risk quarantine pest in many countries This study aims to identify to species and discover the migration of ambrosia beetle X crassiusculus The result of this study determined the population structure of X crassiusculus divided into the two main clusters, in which the South East Asia population includes the population in New South Wales, Thailand and Madagasscar; the island population consists of the population in Queensland, North America and South America The phylogenetic determination of X crassiusculus suggested that the trading using wood packing material in shipping may potentially become a migration pathway of X crassiusculus from native ranges to introduced regions Keywords: ambrosia beetle, Xylosandrus crassiusculus, phylogeny ĐẶT VẤN ĐỀ * Mọt đục thân nhóm lồi thuộc cánh cứng (Coleoptera) bao gồm phân họ Scolytinae Platypodinae Các loài mọt đục thân thường mang theo số loài nấm Ambrosiella sp., Ophiostoma sp Graphium sp mảnh lưng ngực, miệng đầu Các loài nấm xâm nhiễm vào trình mọt đào hang, phát triển hình thành hệ sợi bên hang mọt sử dụng làm thức ăn cho sâu non mọt trưởng thành (Vega and Hofstetter, 2014; Schowalter, 2016) Chính vậy, lồi mọt đục thân trở thành loài gây hại nguy hiểm loài ký chủ Mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus (Motschulsky, 1866) biết đến với tên thường gọi mọt đục thân châu Á, loài mọt gây hại phổ biến giống Xylosandrus Đây loài địa châu Á, phạm vi phân bố chủ yếu phía Đơng Đơng Nam châu Á Nhật Bản, Thái Lan Đài Loan (Storer et al., 2017) Tuy nhiên, thơng qua việc vận chuyển hàng hóa thương mại toàn cầu mà loài mọt đục thân X crassiusculus phát tán đến nhiều nơi giới gây hại gần 200 loài ký chủ Do vậy, Forest Protection Research Centre, VAFS University of the Sunshine Coast, Australia 20 loài mọt đục thân xem loài ngoại lai nguy hiểm trở thành đối tượng kiểm dịch thực vật có nguy gây hại cao nhiều nước New Zealand Mỹ (Reding et al., 2011) Lần ghi nhận có mặt lồi X crassiusculus Australia vào năm 2011 Toolara State Forest, Queensland (Hulcr and Cognato, 2013) Chúng phát tán nhanh mà tiếp tục ghi nhận vào năm 2013 Tewantin State Forest, năm 2015 Beerwah năm 2016 Beerburrum State Forest, Queensland (Biosecurity Incident National Communication Network, 2016; IPPO, 2017) Việc mở rộng phạm vi phân bố quần thể nhanh chóng trở thành lồi chiếm ưu so với loài địa khiến cho loài mọt đục thân X crassiusculus trở thành lồi ngoại lai có khả gây hại loài thực vật Australia Tại Australia, có vài điều tra xuất loài mọt đục thân có lồi X crassiusculus khu vực trồng bơ Queensland (Campell and Geering, 2013) Loài mọt đục thân X crassiusculus đánh giá loài ngoại lai có khả gây hại đến trồng, việc nghiên cứu nguồn gốc phát sinh loài mọt đục thân sở việc xác định đường xâm nhập chúng đến nơi Bài báo trình bày Kết nghiên cứu Khoa học kết việc định danh loài mọt X crassiusculus xác định xâm nhập loài mọt đục thân số nước khác PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Các mẫu mọt đục thân thu rừng trồng hỗn giao gỗ lớn Rocky Creek Dam Federal, bang New South Wales Ngoài ra, nghiên cứu sử dụng số mẫu thu từ Beerburrum, bang Queensland, Australia; mẫu thu từ Thái Lan, French Polynesia, Madagascar, Canada, Mỹ, Argentina Pháp 2.2 Định danh loài mọt đục thân Sau thu thập mẫu trường, mẫu mọt phân loại bảo quản cồn 95% o C, định danh hai phương pháp phương pháp hình thái học phương pháp sinh học phân tử Cả hai phương pháp tiến hành phòng thí nghiệm sinh học thuộc trường Đại học Southern Cross, bang New South Wales, Australia Định danh phương pháp hình thái học Tất mẫu mọt soi kính soi Olympus SC50 chụp ảnh phần mềm Olympus Cellsens V1.18 (Olympus Corporation, Japan) Ảnh chụp góc bao gồm góc nhìn từ xuống, góc bên cạnh góc từ phía đầu Các đặc điểm đối chiếu với khóa phân loại loài mọt đục thân Xyleborini: “Ambrosia Beetles (Xyleborini): An identification tool to the world genera” (Hulcr and Smith, 2010) Đồng thời, Tiến sỹ Justin Bartlett, chuyên gia phân loại lồi bọ cánh cứng Cục Nơng lâm thủy sản an toàn sinh học, bang Queensland, giúp đỡ định danh loài mọt đục thân Định danh phương pháp sinh học phân tử Từ mẫu mọt định danh phương pháp hình thái học, định danh phương pháp sinh học phân tử dựa đoạn gen ty thể cytochrome coxidase subunit I (COI) tiến hành để khẳng định loài mọt đục thân X crassiusculus sử dụng cho phân tích nguồn gốc phát sinh lồi Tách chiết DNA từ mẫu mọt đục thân Nghiên cứu sử dụng 10 mẫu mọt đục thân X crassiusculus thu để tách chiết DNA theo phương pháp Landi et al., (2017) Với BVTV - Số 4/2019 mẫu mọt xử lý sơ bộ, rửa cồn bảo quản nước vô trùng để khô Chỉ lấy mô chân, đầu phần bụng để tách DNA giúp giảm nguy bị nhiễm vi sinh vật khác Tách chiết DNA sử dụng Isolate II Genomic DNA Kit (Bioline, U.K.) theo hướng dẫn nhà sản xuất điều chỉnh cho phù hợp với mẫu mọt đục thân Sản phẩm DNA sau tách chiết bảo quản -20°C thực phản ứng khuếch đại gen (PCR) Thực TM phản ứng PCR sử dụng Kit MyTaq HS DNA Polymerase (Bioline, U.K.) với mồi trước LCO1490 (5’-GGTCAACAAATCAT AAAGATA TTGG-3’) mồi sau HCO2413 (5’CATCTAAAAA TTTTAATT CCAGT-3’); HCO 2773 (5’-GGATAA TCTCTATATCGAC GAGG TAT-3’) (Folmer et al., 1994) Phản ứng PCR thực máy chu trình nhiệt S100 thermal cycler (Bio-Rad, USA) với điều kiện nhiệt độ cụ thể cụ thể với chu trình: tăng đến 94 °C phút; sau 49 °C phút, 72 °C phút Tiếp sau có 34 chu trình lặp lại cuối giữ 72 °C phút Để đánh giá chất lượng sản phẩm tách chiết DNA, sản phẩm PCR chạy điện di máy điện di Bio-Rad, sau chụp ảnh máy Molecular Imager Gel Doc XR phần mềm Image Lab (Bio-Rad, USA) Trước thực giải trình tự, sản phẩm tinh Kit ExoSAP-IT PCR Product Cleanup Reagent (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) Sản phẩm PCR tinh gửi tới AGRF Sanger Sequencing Service (AGRF, Australia) để giải trình tự, sử dụng Bigdye Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, U.S.A) Với trình tự nhận xếp chỉnh sửa nucleotid Geneious v.7.0 (Kearse et al., 2012) Sau trình tự so sánh với trình tự GenBank với cơng cụ BLAST (Altschul et al.,1990) 2.3 Phân tích nguồn gốc phát sinh lồi Tất trình tự gen lồi mọt X crassiusculus công bố sở liệu Genbank Các trình tự đoạn gen ty thể (COI) loài X crassiusculus từ vùng địa lý khác lựa chọn để phân tích nguồn gốc phát sinh lồi Trình tự gen lồi Xylosandrus monteithi, Cnestus bimaculatus Euwallacea fornicatus sử dụng nhóm ngồi để đối chiếu 21 Kết nghiên cứu Khoa học Bộ liệu trình tự gen xếp dựa chương trình trực tuyến MAFFT v Online Service (Katoh and Standley, 2013) Kết xem chỉnh sửa thủ công phần mềm MEGA v (Kumar et al., 2016) Phân tích nguồn gốc phát sinh lồi dựa hai thuật tốn Maximum Likelihood (ML) Maximum Parsimony Đối với thuật toán MP phân tích phần mềm PAUP v 4.0b10 (Swofford, 2003) with với 1000 lần lặp ngẫu nhiên để chọn phân loại tốt Đối với thuật toán ML, sử dụng PhyML v 3.0 để phân tích (Guindon Guscuel, 2003) với độ tin cậy xác định dựa 1000 lần lặp ngẫu nhiên Tất phân loại sau phân tích hiển thị MEGA v (Kumar et al., 2016) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc điểm hình thái loài mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus Loài: Xylosandrus crassiusculus (Motschulsky, 1866) (Xyleborini, Scolytinae, Curculionidae, Coleoptera) BVTV - Số 4/2019 Tên đồng nghĩa: Phloeotrogus crassiusculus Motschulsky, 1866 Đặc điểm hình thái: Lồi mọt đục thân X crassiusculus lồi giống Xylosandrus có hai chân trước rộng tách biệt Đặc điểm phân biệt rõ với lồi khác tộc Xyleborini thường có hai chân trước sát nhau, điển lồi thuộc giống Anisandrus có hình dạng giống với lồi thuộc giống Xylosandrus hai chân trước chúng không tách biệt Lồi mọt đục thân X crassiusculus có kích thước nhỏ, chiều dài thể từ 1,95 đến 2,45 mm, có màu nâu đỏ, phía cuối cánh cứng có màu nâu đậm Mảnh lưng ngực trước có kích thước to gần kích thước cánh cứng Râu đầu có dạng hình chùy, đốt với đốt cuối phình to Phía cuối cánh cứng có nhiều chấm nhỏ li ti Trên cánh cứng có đường sọc lơng cứng thẳng Nhìn từ xuống, đầu giấu hồn tồn mảnh lưng ngục trước (hình 1) A C B D Hình (A-B) Mọt Xylosandrus crassiusculus (C) Chấm nhỏ phía cuối cánh cứng (D) Hai chân trước tách biệt nhìn từ phía bụng (Hình B C J.S Bartlett chụp) 22 Kết nghiên cứu Khoa học Định danh sinh học phân tử Từ trình tự xi ngược sau giải mã cắt chỉnh sửa để tạo thành đoạn có độ dài khoảng 750 cặp base sử BVTV - Số 4/2019 dụng để so sánh với trình tự sở liệu Genbank Kết so sánh trình tự DNA lồi mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus trình bày bảng 1: Bảng Kết so sánh trình tự lồi mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus với sở liệu Genbank TT Loài X crassiusculus X crassiusculus X crassiusculus X crassiusculus Ký hiệu mẫu QLD 01 QLD 02 Federal Rocky Creek Đối với mẫu thu New South Wales Federal Rocky Creek tỷ lệ tương đồng đạt 94% 93% so với mã tham chiếu KX035196.1 với thông tin sau: KX035196.1: Loài Xylosandrus crassiusculus độ dài 16875 cặp base Bảo tàng Lịch sử tự nhiên, Vương quốc Anh cung cấp vào ngày 07/04/2016 Đối với mẫu Queensland QLD 01 QLD 02 tỷ lệ tương đồng 100% so với mã tham chiếu GU808710.1 với thơng tin sau: GU808710.1: Lồi Xylosandrus crassiusculus tách từ đoạn gen ty thể Cytochrome oxidase subunit I (COI) Chiều dài % độ tương đồng 100 % 100 % 94% 93% E value 0 0 Mã tham chiếu GU808710.1 GU808710.1 KX035196.1 KX035196.1 đoạn gen 585 cặp base Khoa côn trùng học, Đại học bang Michigan, Mỹ cung cấp vào ngày 16/2/2010 3.2 Xác định di cƣ thơng qua phân tích nguồn gốc phát sinh lồi Cả hai thuật tốn phân tích ML MP cho thấy khơng có khác biệt đáng kể hình dạng phân loại, phân loại dùng thuật toán ML thể phân tách nhỏ mẫu loài Cây phân loại theo kết phân tích ML trình bày sau (hình 2) Hình Cây phân loại phân tích nguồn gốc phát sinh lồi phƣơng pháp Maximum Likelihood 23 Kết nghiên cứu Khoa học Kết phân tích ML cho thấy chứng phân tách rõ rệt quần thể loài mọt đục thân X crassiusculus thành hai nhóm với độ tin cậy 99% Tất mẫu từ Thái Lan, French Polynesia Madagascar hình thành nhóm (Cluster 1) với mẫu thu từ New South Wales, Australia Trong đó, mẫu từ Canada, Mỹ, Argentina Pháp với mẫu thu đươc từ Queensland, Australia (Xc02) hình thành nhóm (Cluster 2) Chỉ có khoảng cách nhỏ khác biệt gen thấy mẫu thu từ Pháp với độ thay đổi 0,01 Phân tích nguồn gốc phát sinh lồi nghiên cứu hoàn toàn trùng khớp với phân tích thực 198 mẫu mọt X crassiusculus từ 20 khu vực khác khắp giới cho thấy phân tách quần thể lồi mọt thành 02 nhóm chủ đạo Theo kết phân tích Storer et al (2017), nhóm thứ có tên nhóm quần thể Đơng Nam Á (South East Asia population) bao gồm mẫu thu từ Thái Lan, Indonesia Ngoài mẫu thu từ khu vực khác Trung Quốc, chí Châu phi (Madagascar) Châu Đại dương (Papua New Guinea) nằm nhóm quần thể Đơng Nam Á Nhóm thứ hai nhóm quần thể đảo (island population) bao gồm nước Nhật Bản, Khu vực Bắc Mỹ Nam Mỹ (Storer et al., 2017) Như vậy, thấy từ quần thể địa có di cư sang khu vực khác trình di cư chúng phân tách thành nhóm riêng biệt Với khu vực đặc trưng chúng lại có thay đổi để thích nghi với điều kiện hoàn cụ thể Ngoài ra, dựa phân tích nguồn gốc phát sinh lồi từ mẫu thu Australia cho thấy quần thể mọt X crassiusculus Australia phân tách thành hai quần thể mọt riêng biệt là: (1) Quần thể mọt đục thân New South Wales có nguồn gốc từ quần thể Đơng Nam Á (2) Quần thể mọt đục thân Queensland có nguồn gốc từ quần thể đảo, từ đảo thuộc Nhật Bản lục địa châu Mỹ Phân tích phân loại cho thấy khoảng cách gen hai nhóm Cluster Cluster 0,14, nhiên khoảng cách hai kiểu gen Xc01 Xc02 thu Australia 0,20 Điều cho thấy khác biệt lớn nguồn gốc quần thể mọt đục thân Australia với mẫu thu New South Wales thuộc nhóm Chuster mẫu thu Queensland thuộc nhóm Cluster 24 BVTV - Số 4/2019 Phân tích hai mẫu thu hai địa điểm khác New South Wales (Rocky Creek Federal) đồng kiểu gen (Xc01) với độ tin cậy 98% Tuy nhiên, lại khác biệt mẫu lại nhóm Cluster với độ tin cậy 75% Hai nhóm quần thể lồi X crassisuculus xác định riêng biệt so với loài sử dụng làm tham chiếu X compactus X germanus Xyleborus ferruginus Các mẫu mọt thu Australia có nguồn gốc phát sinh từ hai nhóm quần thể chủ yếu giới, điều cho thấy xâm nhập lồi mọt vào Australia liên quan đến đường vận chuyển hàng hóa với nước Mỹ, Canada hay nước Đông Nam Á Vận chuyển hàng hóa quốc tế có liên quan đến nhiều loài ngoại lai xâm hại đến nơi nhờ loại chất liệu đóng gói kiện hàng hóa gỗ mang theo Ví dụ Sirex noctilio Ips grandicollis hai loài ngoại lai xâm hại đến rừng thông Australia theo đường (Lawson et al., 2018) Theo báo cáo phân tích mối nguy sinh học hàng hóa nhập có khoảng 30% kiện hàng đóng gói gỗ có chứa loài ngoại lai cần kiểm dịch thực vật Tuy nhiên, sử dụng biện pháp kiểm tra bề ngồi khơng thể phát lồi ngoại lai (Biosecurity Australia, 2001) Bên cạnh việc nhập gỗ từ Trung Quốc số nước Đông Nam Á tăng lên đáng kể giai đoạn 2014 - 2015, chiếm tới 86% đồ gỗ nội thất 61% sản phẩm gỗ khác (Lawson et al., 2018) Do vậy, sản phẩm gỗ chưa xử lý sử dụng gỗ để đóng gói kiện hàng đường xâm nhập, làm gia tăng hội lan truyền cho loài ngoại lai loài mọt X crassiusculus di cư xâm nhập vào khu vực địa chúng giống Australia Mặc dù loài mọt đục thân X crassiusculus bước đầu ghi nhận xuất chúng loài ngoại lai Australia với mức độ gây hại thấp Tuy nhiên loài ngoại lai tiềm trở thành loài ngoại lai xâm hại xảy Mỹ Israel (Storer et al., 2013) KẾT LUẬN Đã định danh loài mọt đục thân X crassiusculus phương pháp hình thái học phương pháp sinh học phân tử với kết so sánh trình tự đạt từ 93% đến 100% Phân tích nguồn gốc phát sinh loài quần thể mọt đục thân X crassiusculus cho thấy di cư Kết nghiên cứu Khoa học chúng đến khu vực địa lý khác khu vực địa Australia theo nhóm quần thể riêng biệt quần thể Đơng Nam Á quần thể đảo Riêng Australia, quần thể mọt đục thân X crassiusculus có xuất hai nhóm nhóm quần thể Đơng Nam Á bao gồm mẫu thu New South Wales nhóm quần thể đảo gồm mẫu thu Queensland Việc xác định nguồn gốc phát sinh loài loài mọt đục thân xâm nhập vào Australia cách độc lập từ khu vực Đông Nam Á từ khu vực châu Mỹ Lời cảm ơn Nhóm tác giả xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Phó Giáo Sư Doland Nichols, trường Đại học Southern Cross giúp đỡ nhiệt tình trình thu thập mẫu Australia Đồng thời, nhóm tác giả gửi lời cảm ơn đến Tiến sỹ Justin Barrlet, Cục Nông lâm thủy sản an toàn sinh học, bang Queensland giúp đỡ việc giám định mẫu mọt thu Australia TÀI LIỆU THAM KHẢO Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W & Lipman, D.J., 1990 Basic local alignment search tool Journal Molecular Biology 215:403-410 Australia, B., 2001 Import risk analysis (IRA) for sawn coniferous timber from Canada, New Zealand and the United States IRA Issues Paper Canberra: Biosecurity Australia Biosecurity Incident National Communication Network (NCN), 2016) Granulate ambrosia beetle National Talking Points Department og Agriculture and Water Resorce, Australian Government Campbell, P & Geering, A., 2013 Biosecurity Capacity Building for the Australian Avocado Industry – Laurel Wilt Queensland, Australia: Queensland Department of Employment, Economic Development and Innovation Cognato, A I., Hulcr, J., Dole, S A., & Jordal, B H., 2011 Phylogeny of haplo–diploid, fungus‐ growing ambrosia beetles (Curculionidae: Scolytinae: Xyleborini) inferred from molecular and morphological data Zoologica Scripta, 40(2), 174-186 EPPO, 2017 Xylosandrus crassiusculus (Coleoptera: Scolytidae) ngày 18/02/2018 https://www.eppo.int/QUARANTINE/Alert_List/insects/ xylosandrus_crassiusculus.htm Folmer, O., Black, M., Hoeh, W., Lutz, R., & Vrijenhoek, R., 1994 DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates Mol Mar Biol Biotechnol, 3(5), 294-299 Fungiflora, O S., & Gascuel, O., 2003 A simple, BVTV - Số 4/2019 fast and accurate method to estimate large phylogenies by maximum-likelihood Syst Biol, 52, 696704 Hulcr, J., & Cognato, A I., 2013 Xyleborini of New Guinea, a taxonomic monograph (coleoptera: curculionidae: scolytinae) Entomological Society of America 10 Hulcr, J., & Smith, S., 2010 Xyleborini ambrosia beetles: an identification tool to the world genera URL: http://itp.lucidcentral.org/ id/wbb/ xyleborini/index.htm 11 Katoh, K., & Standley, D M., 2013 MAFFT multiple sequence alignment software version 7: improvements in performance and usability Mol Biol Evol, 30(4), 772-780 doi:10.1093/molbev/mst010 12 Kumar, S., Stecher, G., & Tamura, K., 2016 MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets Mol Biol Evol, 33(7), 1870-1874 doi:10.1093/molbev/msw054 13 Kearse M, Moir R, Wilson A, Stones-Havas S, Cheung M, Sturrock S, Buxton S, Cooper A, Markowitz S, Duran C, Thierer T, Ashton B, Meintjes P, Drummond A 2012 Geneious Basic: an integrated and extendable desktop software platform for the organization and analysis of sequence data Bioinformatics28:1647–1649 doi:10.1093/bioinformatics/bts199 14 Landi, L., Gómez, D., Braccini, C L., Pereyra, V A., Smith, S M., & Marvaldi, A E., 2017 Morphological and Molecular Identification of the Invasive Xylosandrus crassiusculus (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae) and Its South American Range Extending Into Argentina and Uruguay Annals of the Entomological Society of America, 110(3), 344-349 15 Lawson, S., Carnegie, A., Cameron, N., Wardlaw, T., & Venn, T., 2018 Risk of exotic pests to the Australian forest industry Australian Forestry, 81(1), 3-13 16 Reding, M E., Schultz, P B., Ranger, C M., & Oliver, J B., 2011 Optimizing ethanol-baited traps for monitoring damaging ambrosia beetles (Coleoptera: Curculionidae, Scolytinae) in ornamental nurseries Journal of Economic Entomology, 104(6), 2017-2024 17 Schowalter, T D., 2016 Chapter - Species Interactions In Insect Ecology (Fourth edition) Academic Press, (pp 249-290): 18 Storer, C., Payton, A., McDaniel, S., Jordal, B., & Hulcr, J., 2017 Cryptic genetic variation in an inbreeding and cosmopolitan pest, Xylosandrus crassiusculus, revealed using ddRADseq Ecology and Evolution 19 Swofford, D L 2000 PAUP*: Phylogenetic analysis using parsimony (* and other methods) Version 4Sinauerunderland, MA Swofford, DL (2000) PAUP*: Phylogenetic analysis using parsimony (* and other methods) Version, 20 Vega, F E., & Hofstetter, R W., 2014 Bark beetles: biology and ecology of native and invasive species Academic Press 390p Phản biện: TS NCVCC Nguyễn Văn Liêm 25 ...Kết nghiên cứu Khoa học kết việc định danh loài mọt X crassiusculus xác định xâm nhập loài mọt đục thân số nước khác PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Các mẫu mọt đục thân thu... loại loài bọ cánh cứng Cục Nơng lâm thủy sản an tồn sinh học, bang Queensland, giúp đỡ định danh loài mọt đục thân Định danh phương pháp sinh học phân tử Từ mẫu mọt định danh phương pháp hình thái... dụng để so sánh với trình tự sở liệu Genbank Kết so sánh trình tự DNA lồi mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus trình bày bảng 1: Bảng Kết so sánh trình tự lồi mọt đục thân Xylosandrus crassiusculus