Bài viết nghiên cứu và ứng dụng xạ khuẩn trong quản lý bệnh thối nhũn củ khoai môn (Colocasia esculenta) giúp tăng năng suất cây trồng, hỗ trợ cho các nghiên cứu chuyên sâu hơn. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm chi tiết nội dung nghiên cứu.
Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 5/2019 Biological control of the cassava mealybug, Phenacoccus manihoti, in Africa: Review of field studies Integrated Pest Management for Tropical root and tuber crops (Eds Hahn S.K., Caveness F.E.) IITA, Ibadan, Nigeria: 42-50 R Souissi& B Le Ruă, 1997 Effect of host plants on fecundity and development of Apoanagyrus lopezi, an endoparasitoid of the cassava mealybug Phenacoccus manihoti Entomologia Experimentalis et Applicata 82: 235–238 Phản biện: TS Lê Xuân Vị KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA CÁC CHỦNG XẠ KHUẨN ĐỐI VỚI VI KHUẨN Erwinia sp GÂY BỆNH THỐI NHŨN CỦ KHOAI MÔN (Colocasia esculenta) Evaluation Antibacterial Activity of Actinomyces Isolates on Erwinia sp Causing Bacterial Soft Rot Disease on Taro (Colocasia esculenta) Lê Minh Phƣơng , Nguyễn Trƣờng Sơn Lê Minh Tƣờng Ngày nhận bài: 05.8.2019 Ngày chấp nhận: 15.9.2019 Abstract The research was conducted in the laboratory of Plant Protection Department, Can Tho University that were to screen actinomycetes able to control Bacterial soft rot disease on Taro (Colocasia esculenta) caused by Erwinia sp There were 20 per 123 isolates in total that were ability against Erwinia sp in laboratory condition Determination antagonistic ability of 20 actinomyces isolates in controlling Erwinia sp with replications, the results found that isolates CM-AG22, LV-ĐT24, LV-ĐT15 and DH-TV4 have high antagonistic ability with radius of inhibition zones reaches 48.32 mm; 6.40 mm; 5.82 mm and 4.37 mm respectively, at days after inoculation On the other hand, protease activity assay was tested on Casein medium with replications The results found that all testing isolates could produce protease and the CM-AG22 isolate has expressed the highest proteinolytic activity with the protein lyses halo radius of 15.08 mm at days after testing Beside, the lipase activity assay was also checked on Tween 80 agar medium with replications The results indicated that testing isolates could produce lipase and isolates CM-AG22 LV-ĐT15 have expressed the lipidolytic activity, with the lipid lyses halo radius of 14.05 mm and 13.75 mm respectively, at days after testing Keywords: Actinomyces, bacterial soft rot disease on taro, Erwinia sp., lipid, protein * ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, Đồng sông Cửu Long song song với phát triển diện tích trồng khoai mơn loại bệnh hại diễn biến phức tạp ảnh hưởng nghiêm trọng đến suất chất lượng khoai môn Học viên cao học ngành Bảo vệ Thực vật, trường Đại học Cần Thơ Chi cục Trồng trọt Bảo vệ thực vật tỉnh Kiên Giang Khoa Nông Nghiệp, trường Đại học Cần Thơ Trong đó, đáng lo ngại bệnh thối nhũn củ khoai môn vi khuẩn Erwinia sp gây làm thất thu ảnh hưởng trực tiếp đến suất môn Bệnh thường xuất nhiều vào mùa mưa giai đoạn 2,5 tháng tuổi đến thu hoạch đặc biệt gây hại nặng ruộng bón nhiều phân đạm Để đối phó với bệnh, nơng dân phải sử dụng thuốc hóa học dẫn đến ảnh hưởng xấu đến môi trường sức khỏe người tiêu dùng Theo Phạm Văn Kim (2000), hậu việc lạm dụng thuốc hóa học giết chết vi sinh vật đối kháng với dịch bệnh, 27 Kết nghiên cứu Khoa học từ làm cân sinh thái dịch bệnh dễ bộc phát Do đó, việc áp dụng biện pháp sinh học để phòng trị bệnh cần thiết để bảo vệ môi trường sức khỏe người Trong số vi sinh vật áp dụng lĩnh vực phòng trừ sinh học bệnh xạ khuẩn (Actinomycetes) xem tác nhân có triển vọng việc quản lý số bệnh hại thực vật chúng sở hữu nhiều chế đối kháng với mầm bệnh như: tiết kháng sinh, enzyme ngoại bào, tiết hợp chất chuyển hóa thứ cấp, cạnh tranh, ký sinh … (Lam, 2006) kích thích trồng phát triển (Palaniyandi, 2013) Theo nghiên cứu Yan Min et al., (2000), cho thấy hoạt tính đối kháng 26 chủng Streptomyces sp chống lại vi khuẩn Erwinia carotovora cải bắp Trung Quốc chất kháng sinh Ngoài ra, Zamanian et al., (2005) xác định loài Streptomyces plicatus có khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia carotovora gây hại trồng điều kiện in vitro cách tiết ynzyme protease lipase Gần đây, nhiều nghiên cứu công bố cho xạ khuẩn có khả quản lý bệnh vi khuẩn gây hại trồng vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh khoai lang (Huỳnh Trường Giang, 2017), vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lúa (Nguyễn Thị Mỹ Ngân, 2014), vi khuẩn Xanthomonas campestris pv citri gây bệnh loét cam, quýt (Huỳnh Hào Quang, 2018) Do đó, việc nghiên cứu ứng dụng xạ khuẩn quản lý bệnh thối nhũn củ khoai môn cần thiết cấp bách VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1 Địa điểm vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Địa điểm: Phòng thí nghiệm bệnh cây, Bộ môn Bảo vệ Thực vật, trường Đại học Cần Thơ 2.1.2.Vật liệu: - Mẫu đất dùng để phân lập xạ khuẩn lấy xung quanh rễ khoai môn, lấy sâu cách mặt đất từ 10 – 25 cm - Nguồn vi khuẩn Erwinia sp chủng vi khuẩn nhận từ Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Theo Nguyễn Thu Hồng (2019), chủng vi khuẩn thu thập từ củ khoai môn bị bệnh xã Hội 28 BVTV - Số 5/2019 An Đơng, huyện Lấp Vò, tỉnh Đồng Tháp xác định theo quy trình Kock có triệu chứng điển hình bệnh thối nhũn củ khoai môn vi khuẩn Erwinia sp gây chủng vi khuẩn có khả gây hại nặng số chủng vi khuẩn gây bệnh thối nhũn củ khoai môn phân lập 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Đánh giá khả đối kháng chủng xạ khuẩn Erwinia sp điều kiện phòng thí nghiệm * Thu thập phân lập xạ khuẩn: Thu mẫu đất ruộng trồng khoai mơn có diện tích lớn 1,000m số tỉnh ĐBSCL như: Trà Vinh, An Giang Đồng Tháp Chọn đất gốc khỏe thu độ sâu từ 10 – 25 cm Các mẫu đất ruộng khác cho vào túi nilon riêng mang phòng thí nghiệm tiến hành phân lập theo phương pháp Hsu Lockwook (1975) sau: Cân gam đất + 40 ml nước cất trùng cho vào ống Facol 50 ml Lắc 30 phút Pha -1 -2 -3 -4 loãng nồng độ: 10 ,10 , 10 , 10 Rút 50 µl -3 -4 huyền phù nồng độ 10 10 cho vào đĩa petri chứa môi trường ISP4 Đĩa ủ khoảng - ngày, sau tách ròng cách dùng đũa cấy vi khuẩn khử trùng vạch xạ khuẩn lên đĩa chứa mơi trường MS Sau khoảng tuần, dùng đũa cấy vi khuẩn khử trùng chuyển khuẩn lạc xạ khuẩn tách ròng vào ống nghiệm chứa môi trường MS đổ mặt nghiêng bảo quản C để sử dụng cho thí nghiệm sau * Chuẩn bị thí nghiệm: Các chủng xạ khuẩn nuôi cấy môi trường MS ngày, xác định mật số chuyển huyền phù bào tử xạ khuẩn 10 cfu/ml Vi khuẩn Erwinia sp nuôi cấy đĩa petri chứa môi trường King’s B 48 giờ, cho 5ml nước cất trùng vào đĩa, thu huyền phù, sau tiến hành điều chỉnh để đưa huyền phù có OD600 nm = 0,3 * Thực thí nghiệm: Hòa 50 ml huyền phù vi khuẩn Erwinia sp (OD600 nm = 0,3) 10 ml môi trường King’B lỏng vào đĩa petri, lắc đều, để nguội Sau tạo giếng đĩa petri dụng cụ đục tròn có đường kính mm, dùng pipet hút 10 µl huyền phù xạ khuẩn (mật số 10 cfu/ml) cho Kết nghiên cứu Khoa học vào giếng vừa đục, giếng chủng xạ khuẩn khác Đĩa petri đặt điều kiện nhiệt độ phòng * Chỉ tiêu theo dõi: Đo bán kính vòng vơ khuẩn thời điểm 1, 2, 3, sau ngày bố trí thí nghiệm 2.2.2 Khảo sát khả tiết enzyme protease chủng xạ khuẩn có triển vọng mơi trường thạch * Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên, lần nhắc, nghiệm thức chủng xạ khuẩn vùng rễ có triễn vọng Thí nghiệm thực theo phương pháp Mitra Chakrabartty (2005): Xạ khuẩn sau nuôi cấy đĩa petri ngày môi trường MS, thu huyền phù xạ khuẩn Thực phương pháp pha lỗng, ni cấy xạ khuẩn mơi trường MS, xác định mật số xạ khuẩn cách đếm khuẩn lạc mọc môi trường nuôi cấy chuyển mật số xạ khuẩn cần dùng 10 cfu/ml Xạ khuẩn cấy thành điểm đĩa Petri chứa môi trường Casein, điểm khoanh giấy thấm (có đường kính mm) có tẩm huyền phù xạ khuẩn * Chỉ tiêu theo dõi: Tiến hành đo bán kính vòng phân giải protein thời điểm 3, 5, ngày sau bố trí thí nghiệm Tại thời điểm lấy tiêu thí nghiệm, tiến hành trãi dung dịch TCA (Tricloro acid) lên bề mặt đĩa Petri trí nghiệm, sau để n khoảng 30 giây nhiệt độ phòng xác định hoạt tính protease xạ khuẩn tiết mơi trường thạch cách đo bán kính vùng khơng bắt màu với dung dịch TCA vùng phân giải protein 2.2.3 Khảo sát khả tiết enzyme lipase chủng xạ khuẩn có triển vọng * Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên, lần nhắc, nghiệm thức chủng xạ khuẩn vùng rễ có triễn vọng BVTV - Số 5/2019 Thí nghiệm thực theo phương pháp (Ertuğrul ctv., 2007): Xạ khuẩn sau nuôi cấy đĩa petri ngày môi trường MS, thu huyền phù xạ khuẩn (mật số 10 cfu/ml) Xạ khuẩn cấy thành điểm, điểm khoanh giấy thấm (có đường kính mm) có tẩm huyền phù xạ khuẩn đĩa petri có chứa mơi trường Tween 80 agar * Chỉ tiêu theo dõi: Đo bán kính vòng phân giải lipid thời điểm 3, 5, ngày sau bố trí thí nghiệm 2.4 Xử lý số liệu Số liệu tổng hợp, xử lý sơ phần mềm Excel Thống kê phân tích ANOVA so sánh khác biệt trung bình nghiệm thức theo cách bố trí thí nghiệm phần mềm MSTATC KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khả đối kháng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn củ khoai môn điều kiện phòng thí nghiệm Kết đánh giá nhanh khả đối kháng chủng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn củ khoai mơn cho thấy có 20 chủng xạ khuẩn thực có khả đối kháng tổng số 120 chủng xạ khuẩn thí nghiệm (103 chủng xạ khuẩn phân lập 17 chủng xạ khuẩn nhận từ môn Bảo vệ thực vật) Tiếp tục sử dụng 20 chủng xạ khuẩn để đánh giá khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp điều kiện phòng thí nghiệm với lần lặp lại Kết ghi nhận thơng qua bán kính vòng vơ khuẩn (BKVVK) thời điểm 1, 3, ngày sau bố trí thí nghiệm (NSTN) trình bày bảng Bảng Bán kính (mm) vòng vô khuẩn chủng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp qua thời điểm khảo sát TT Nghiệm thức CM-AG5 CM-AG15 CM-AG22 Bán kính (mm) vòng vơ khuẩn qua thời điểm khảo sát NSTN NSTN NSTN NSTN NSTN 0,00 j 1,37 ef 1,12 ef 0,00 h 0,00 f 0,62 hi 1,37 ef 1,57 d 1,85 e 1,65 e 7,82a 8,05a 8,10a 8,60a 8,32a 29 Kết nghiên cứu Khoa học Bán kính (mm) vòng vơ khuẩn qua thời điểm khảo sát NSTN NSTN NSTN NSTN NSTN Nghiệm thức TT BVTV - Số 5/2019 DH-TV4 6,42 c 6,05 c DH-TV5 1,87 LV-ĐT6 0,30 LV-ĐT15 5,02 LV-ĐT20 2,22 LV-ĐT23 0,82 10 LV-ĐT24 7,30 b 11 TC-AG2 0,45 hij 0,00 i 0,00 i 0,00 h 0,00 f 12 TC-AG3 0,00 j 0,47 gh 0,00 i 0,00 h 0,00 f 13 TC-AG4 0,45 ij 0,00 i 0,00 i 0,00 h 0,00 f 14 TC-AG5 0,12 ij 0,00 i 0,00 i 0,00 h 0,00 f 15 TC-AG11 1,32 f 1,52 e 1,27 16 TC-AG22 1,80 e 1,47 ef 0,87 17 TC-TV1 0,25 ij 0,00 i 0,00 18 TC-TV2 0,47 hij 0,30 hi 19 TĐ16 1,12 0,70 g 20 TTr7 0,50 e ij d 1,12 f 0,62 0,50 gh 0,00 5,50 e gh 5,82 c d 5,77 1,15 f 0,97 1,30 ef 1,65 7,05 b fg hij 1,27 5,45 h i c 4,37 h 0,00 f 0,00 h 0,00 f 5,82 c 0,35 d g 0,12 h 6,87 b e d 0,00 6,22 c fg 6,92 b ef d 0,87 0,00 f 0,00 f 6,40 b 0,00 f 0,00 h 0,00 f i 0,00 h 0,00 f 0,00 i 0,00 h 0,00 f 0,00 i 0,00 h 0,00 f 0,92 fg 0,00 h 0,00 f g f Mức ý nghĩa ** ** ** ** ** CV (%) 12,09 11,54 8,83 8,84 10,61 Ghi chú: Các số cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan, ** khác biệt mức ý nghĩa 1% Ở thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm (NSTN), ghi nhận 18 chủng thể khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp với BKVVK dao động từ 0,12 đến 7,82 mm Trong đó, chủng CM-AG22 có BKVVK cao 7,82 mm, chủng xạ khuẩn LV-ĐT24, DH-TV4, LV-ĐT15 có BKVVK 7,30 mm; 6,42 mm; 5,02 mm cao khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức lại Ở thời điểm NSTN, ghi nhận 16 chủng xạ khuẩn thể khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp chủng xạ khuẩn CM-AG22 trì khả đối kháng mạnh với BKVVK 8,05 mm, tiếp đến chủng LV-ĐT24 có BKVVK 7,05 mm cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức lại Kết tương tự thời điểm NSTN, chủng xạ khuẩn CM-AG22 LV-ĐT24 thể khả đối kháng cao với BKVVK 8,1 mm 30 6,92 mm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức lại Đến NSTN, có chủng xạ khuẩn thể khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp CM-AG22, LV-ĐT24, DHTV4, LV-ĐT15, LV-ĐT20, DH-TV5, TC-AG22 TC-AG11; đó, chủng xạ khuẩn CM-AG22, LV-ĐT24, DH-TV4 có BVVVK cao 8,6mm; 6,87 mm 6,22 mm cao khác biệt ý nghĩa so với chủng lại Đến thời điểm NSTN, khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp chủng xạ khuẩn giảm dần chủng xạ khuẩn thể khả đối kháng Trong đó, chủng CM-AG22 trì khả đối kháng cao với BKVVK 8,32 mm, chủng LV-ĐT24 có BKVVK 6,4 mm, LV- ĐT15 có BKVVK 5,82 mm, chủng DH-TV4 có BKVVK 4,37 mm cao khác biệt có ý nghĩa thống kê với chủng lại (Hình 1) Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 5/2019 Hình Khả đối kháng chủng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối củ khoai mơn thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Nhìn chung, 20 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn củ khoai môn mức độ khác qua thời điểm khảo sát Nổi bật chủng xạ khuẩn CM-AG22, LV-ĐT24, DH-TV4 LV-ĐT15 thể khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp tốt với BKVVK cao thời gian trì khả đối kháng bền vững đến thời điểm ngày sau thí nghiệm Khả đối kháng xạ khuẩn vi khuẩn gây bệnh trồng nhiều nghiên cứu trước chứng minh Huỳnh Trường Giang, (2017) phân lập tuyển chọn 21 tổng số 198 chủng xạ khuẩn phân lập từ đất có khả đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh khoai lang Trong đó, chủng xạ khuẩn TTr44, TT9, TT11, TT11 cho hiệu đối kháng cao trì đến NSTN với bán kính vòng vơ khuẩn 4,51mm, 3,37mm, 3,25 mm Theo Nguyễn Xuân Cảnh ctv., (2017) nghiên cứu sử dụng phương pháp khuyếch tán đĩa thạch xác định 05 chủng số 192 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng lại vi khuẩn Erwinia carotovora gây bệnh thối nhũn trồng, chủng L2.5 có hoạt tính mạnh Phạm Minh Lý, (2016) ghi nhận chủng xạ khuẩn LV-ĐT1, LM-HG6, TÔ-VL5, TS-AG4, BT-CT1, BT-CT5 có khả đối kháng với vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lúa thơng qua chế tiết enzym ngoại bào protease, lipase cellulase Như vậy, chủng CM-AG22, LV-ĐT15, DHTV4 LV-ĐT24 cho khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh thối nhũn củ khoai môn cao tổng số 20 chủng xạ khuẩn thí nghiệm chủng xạ khuẩn tiếp tục sử dụng thí nghiệm 3.2 Khả tiết enzyme protease chủng xạ khuẩn triển vọng Khả tiết enzyme protease chủng xạ khuẩn có triển vọng mơi trường thạch đánh giá thơng qua bán kính vòng phân giải protein qua thời điểm 3, 5, ngày sau thí nghiệm (NSTN) trình bày Bảng Ở thời điểm NSTN, tất chủng xạ khuẩn bắt đầu thể khả phân giải protein thơng qua bán kính vòng phân giải dao động từ 3,86 mm đến 5,66 mm Trong đó, chủng CM-AG22, LV-ĐT15 có bán kính vòng phân giải lớn 5,66 mm 5,21 mm, cao khác biệt ý nghĩa thống kê mức 1% so với chủng lại Đến thời điểm NSTN, tất chủng xạ khuẩn gia tăng đáng kể mức độ phân giải protein với bán kính vòng phân giải lớn mm; đó, chủng xạ khuẩn CM-AG22 có bán kính vòng phân giải cao với 8,83 mm khơng khác biệt ý nghĩa thống kê so với hai chủng xạ khuẩn LV-ĐT15 DH-TV4 với bán kính vòng phân giải 8,51 mm; 8,19 mm Thấp chủng LV-ĐT24 với bán kính vòng phân giải 6,15 mm Ở thời điểm NSTN, khả phân giải protein chủng xạ khuẩn môi trường chứa chất casein tiếp tục có xu hướng tăng, với bán kính dao động từ 10,47 mm – 12,12 mm, đặc biệt chủng xạ khuẩn không khác biệt ý nghĩa thống kê với 31 Kết nghiên cứu Khoa học mức 1% Ở thời điểm NSTN (Hình 2), tất chủng xạ khuẩn tiếp tục gia tăng đáng kể mức độ phân giải, cao chủng xạ BVTV - Số 5/2019 khuẩn CM-AG22 với bán kính vòng phân giải 15,08 mm khác biệt ý nghĩa thống kê với tất chủng xạ khuẩn thí nghiệm lại Bảng Khả phân giải protein chủng xạ khuẩn triển vọng Xạ khuẩn CM-AG22 LV-ĐT15 DH-TV4 LV-ĐT24 Mức ý nghĩa CV (%) Bán kính vòng phân giải protein (mm) qua thời điểm NSTN NSTN NSTN NSTN 5,66a 8,83a 10,80 15,08a 5,21a 8,51ab 11,05 12,53 c 4,50 b 8,19 b 12,12 14,25 b 3,86 b 6,15 c 10,47 12,18 c ** ** ns ** 10,67 5,57 11,15 3,19 Ghi chú: Các số cột theo sau nhiều chữ giống khơng khác biệt qua phép kiểm định Duncan, ** khác biệt mức ý nghĩa 1% Nhìn chung, chủng xạ khuẩn thí nghiệm có khả tiết enzyme protease phân giải protein với nhiều mức độ khác chủng CM-AG22 có bán kính vòng phân giải cao kéo dài đến thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Hình Vòng phân giải protein chủng xạ khuẩn thí nghiệm thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Theo Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề (1998) protein thành phần cấu tạo vách tế bào vi khuẩn vậy, khả phân giải protein tiêu quan trọng để quản lý mầm bệnh vi khuẩn gây Khả tiết enzyme protease xạ khuẩn hướng triển vọng phòng trị bệnh trồng vi khuẩn gây Qua kết thí nghiệm cho thấy chủng xạ khuẩn thí nghiệm gia tăng đáng kể mức độ phân giải protein theo thời gian Trong đó, chủng CM-AG22 cho khả phân giải protein cao so với chủng khác qua 32 thời điểm khảo sát Kết lần khẳng định khả tiết enzyme protease xạ khuẩn phổ biến Cụ thể, theo nghiên cứu Nguyễn Thị Mỹ Ngân (2014), chủng xạ khuẩn đối kháng với vi khuẩn Xanthomonasoryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lúa điều kiện phòng thí nghiệm điều tiết enzyme protease Theo Huỳnh Trường Giang (2017), chủng xạ khuẩn TTr44, TT9, TT11 TT11 đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh khoai lang có khả tiết enzyme protease Trong đó, Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 5/2019 chủng TTr44 có bán kính vòng phân giải protein cao thời điểm đặc biệt thời điểm NSTN với bán kính phân giải 14,52 mm Gần đây, theo Phạm Minh Lý (2016), ghi nhận chủng xạ khuẩn LV-ĐT1, LM-HG6, TÔVL5, TS-AG4, BT-CT1, BT-CT5 có khả đối kháng với vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lúa thông qua chế tiết enzym ngoại bào protease, lipase cellulase 3.3.2 Khả tiết enzyme lipase chủng xạ khuẩn có triển vọng Khả tiết enzyme lipase chủng xạ khuẩn có triển vọng môi trường thạch đánh giá thông qua bán kính vòng phân giải lipase qua thời điểm 3, 5, ngày sau thí nghiệm (NSTN) trình bày Bảng Bảng Khả phân giải lipid chủng xạ khuẩn qua thời điểm STT Xạ khuẩn LV-ĐT15 CM-AG22 DH-TV4 LV-ĐT24 Mức ý nghĩa CV (%) Bán kính vòng phân giải lipid (mm) qua thời điểm NSBT NSBT NSBT NSBT 5,09a 8,53a 11,14a 14,05a 4,39ab 6,97 b 10,87ab 13,75a 3,84 b 5,35 c 9,72 c 11,71 b 3,08 c 4,64 c 9,95 bc 12,34 b ** * ** ** 9,31 10,18 4,83 4,91 Ghi chú: Các số cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan, ** khác biệt mức ý nghĩa 1%, * khác biệt mức ý nghĩa 5% Thời điểm NSTN, tất chủng xạ cho khả phân giải lipid với bán kính vòng phân giải dao động từ 3,08 – 5,09 mm Chủng LV-ĐT15 có bán kính vòng phân giải 5,09 mm không khác biệt ý nghĩa thống kê so với chủng CM-AG22 có bán kính vòng phân giải cao so với chủng xạ khuẩn lại Đến thời điểm NSTN, chủng xạ khuẩn thí nghiệm có bán kính vòng phân giải lipid tiếp tục tăng cao Trong đó, chủng LV-ĐT15 có khả tiết enzyme lipase cao với bán kính vòng phân giải 8,53 mm Tiếp chủng CM-AG22 với bán kính vòng phân giải 6,97 mm khác biệt ý nghĩa thống kê với chủng xạ khuẩn thí nghiệm lại Ở thời điểm NSTN, khả phân giải lipid chủng xạ khuẩn tăng vượt trội dao động khoảng 9,95 – 10,87 mm Trong đó, chủng LV-ĐT15 có bán kính vòng phân giải 11,14 mm không khác biệt ý nghĩa thống kê so với chủng CM-AG22 có bán kính vòng phân giải cao so với chủng xạ khuẩn lại Ở thời điểm NSTN (hình 3), vòng phân giải lipid tiếp tục tăng lên dao động từ 11,71 – 14,05 mm Trong đó, chủng LV- ĐT15 trì khả tiết lipase cao nhất, với bán kính vòng phân giải 14,05 mm không khác biệt ý nghĩa so với chủng CM-AG22 có bán kính vòng phân giải 13,75 mm khác biệt ý nghĩa thống kê so chủng xạ khuẩn lại Qua kết thí nghiệm cho thấy, chủng xạ khuẩn thí nghiệm có khả tiết enzyme lipase tăng dần qua thời điểm khảo sát Trong đó, chủng xạ khuẩn LV-ĐT15 CM-AG22 có bán kính vòng phân giải lipid cao kéo dài đến thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Theo Nguyễn Lân Dũng ctv., (2002), lipid thành phần quan trọng màng sinh chất hay màng tế bào chất (Cytoplasmic membrane, CM) vi khuẩn tương tự sinh vật khác Như vậy, việc ức chế tiêu diệt mầm bệnh thông qua chế tiết enzyme lipase phân giải lipid vách tế bào mầm bệnh xạ khuẩn có khả đáng xem xét kết thí nghiệm chứng minh chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với tác nhân gây bệnh thối nhũn củ khoai môn thông qua chế tiết enzyme lipase phân giải lipid 33 Kết nghiên cứu Khoa học màng sinh chất hay màng tế bào chất vi khuẩn Erwinia sp Theo nghiên cứu Huỳnh Hào Quang (2017), cho thấy chủng xạ khuẩn CT07HG, LM13-HG, CT09-HG, CTA1-HG, HB3-BL CT2-HG có khả đối kháng với vi khuẩn BVTV - Số 5/2019 Xanthomonas campestris pv citri gây bệnh loét cam, quýt có khả tiết enzyme lipase chủng CTA1-HG có bán kính vòng phân giải lipid cao số chủng xạ khuẩn thí nghiệm Hình Vòng phân giải lipid chủng xạ khuẩn thí nghiệm thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: - Có 20 tổng số 123 chủng xạ khuẩn thí nghiệm có khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn củ khoai môn Trong đó, chủng CM-AG22, LV-ĐT24, LV-ĐT15 DH-TV4 có hiệu đối kháng mạnh ổn định - Cả chủng CM-AG22, LV-ĐT24, LV-ĐT15 DH-TV4 có khả tiết enzyme protease chủng CM-AG22 có bán kính vòng phân giải cao kéo dài đến thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm - Cả chủng CM-AG22, LV-ĐT24, LV-ĐT15 DH-TV4 có khả tiết enzyme lipase chủng CM-AG22 LV-ĐT15 có bán kính vòng phân giải cao kéo dài đến thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Kiến nghị: khảo sát khả phòng trị bệnh thối nhũn củ khoai môn chủng xạ khuẩn điều kiện nhà lưới TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Xuân Cảnh, Nguyễn Thị Khánh, Phạm Hồng Hiển, 2017 Nghiên cứu chủng xạ khuẩn có khả 34 đối kháng với vi khuẩn Erwinia carotovora gây bệnh thối nhũn số loại trồng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 7(80)/2017 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến Phạm Văn Tỵ, 2002 Vi sinh vật học Nhà xuất giáo dục 523 trang Huỳnh Trường Giang, 2017 Khảo sát khả phòng trị bệnh héo xanh khoai lang vi khuẩn Ralstonia solanacearum chủng xạ khuẩn Luận văn tốt nghiệp cao học chuyên ngành bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ 89 trang Nguyễn Thu Hồng, 2019 Xác định tác nhân gây bệnh thối chao khoai môn đánh giá hiệu lực số loại thuốc hóa học điều kiện phòng thí nghiệm Luận văn tốt nghiệp Đại học chun ngành Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ 46 trang Phạm Văn Kim, 2000 Giáo trình Vi sinh học đại cương Khoa Nơng Nghiệp Sinh Học ứng Dụng Trường Đại học Cần Thơ 159 trang Phạm Minh Lý, 2016 Khảo sát số chế đối kháng với vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa chủng xạ khuẩn triển vọng Luận văn tốt nghiệp kỹ sư chuyên ngành Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 5/2019 bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ 82 trang Nguyễn Thị Mỹ Ngân, 2014 Khảo sát khả phòng trị xạ khuẩn vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae Luận văn tốt nghiệp cao học ngành bảo vệ thực vật Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ 112 trang Huỳnh Hào Quang, 2018 Khảo sát số chế đối kháng với vi khuẩn Xanthomonas campestris pv citri gây bệnh loét cam, quýt chủng xạ khuẩn triển vọng Luận văn tốt nghiệp cao học ngành bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ 58 trang Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998 Giáo trình bệnh nông nghiệp Nhà Xuất Nông nghiệp Hà Ni 10 Erturul, S., Dửnmez, G., and Takaỗ, S., 2007 Isolation of lipase producing Bacillus sp from olive mill wastewater and improving its enzyme activity Journal of Hazardous Materials, 149(3), 720-724 11 Hsu, S., Lockwood, J., 1975 Powered chitin agar as a selective medium for enumeration of actinomycetes in water and soil Apllied microbiology, 29 (3), 422-426 12 Lam, K.S, 2006 Discovery of novel metabolites from marine Actinomycetes Current Opinion in Microbiology, 9: 245–251 13 Mitra, P., and P Chakrabartty, (2005) An extracellular protease with depilation activity from Streptomyces nogalator Journal of Scientific and Industrial Research, 64 (12), 978 14 Palaniyandi, S A., S H Yang, L Zhang and J W Suh, 2013 Effects of actinobacteria on plant disease suppression and growth promotion Appl Microbiol Biotechnol 97: 9621 - 9636 15 Yan-Min, V., T Da Quun, T Shi Min and Z Ding, 2000 The antagonism of 26 strains Streptomyces sp against several vegetables pathogens Hebaei Agric Univ., 23: 65 - 68 16 Zamanian S., Shahidi Bonjar G.H., Saadoun I., 2005 First report of antibacterial properties of a new (strain 101) against Erwinia carotovora from Iran Biotechnology, 4: 114-120 Phản biện: TS Nguyễn Huy Chung KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN BỆNH NE NGỌN GÂY HẠI THUỐC LÁ TẠI TÂY NINH Results of Diagnotic Curl Leaves and Crooked Tip to The Side Disease on Tobacco Plant in Tay Ninh Province Nguyễn Văn Chín Hà Viết Cƣờng Ngày nhận bài: 15.8.2019 Ngày chấp nhận: 20.9.2019 Abstract In 2019, Tobacco instutute collected 07 disease samples with curl leaves and crooked tip to the side symptom in growing tobacco Tay Ninh to diagnose in Research centre for Tropical plant pathology – Vietnam national university of Agriculture Results of diagnosis determined two virus species that cause the same disease symptom on tobacco plant, including Tomato yellow leaf curl Kanchanaburi virus (TYLCkaV) and Pepper yellow leaf curl Indonesia virus (PepYLCIDV) They belong to Begomovirus genus and are spread by insect - Bemisia tabaci Gennadius Pepper yellow leaf curl Indonesia virus is a virus species that is detected the first times in Vietnam Keywords: Tobacco, virus, Begomovirus, Tomato Viện Thuốc yellow leaf curl Kanchanaburi virus (TYLCkaV) and Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Pepper yellow leaf curl Indonesia virus (PepYLCIDV) 35 ... hình bệnh thối nhũn củ khoai môn vi khuẩn Erwinia sp gây chủng vi khuẩn có khả gây hại nặng số chủng vi khuẩn gây bệnh thối nhũn củ khoai môn phân lập 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Đánh giá khả. .. Hình Khả đối kháng chủng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối củ khoai mơn thời điểm ngày sau bố trí thí nghiệm Nhìn chung, 20 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh. .. khả đối kháng chủng xạ khuẩn vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn củ khoai mơn cho thấy có 20 chủng xạ khuẩn thực có khả đối kháng tổng số 120 chủng xạ khuẩn thí nghiệm (103 chủng xạ khuẩn phân