NGHIÊN cứu sản XUẤT mẫu NGOẠI KIỂM ĐỊNH NHÓM máu hệ ABO RH

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRƯƠNG THỊ LỆ NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO - RH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2013 - 2017 HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRƯƠNG THỊ LỆ NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO - RH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2013 - 2017 Người hướng dẫn khoa học: HÀ NỘI - 2017 PGS.TS ĐẶNG THỊ NGỌC DUNG CKI ĐỖ THỊ HƯỜNG LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung, cô dành cho quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi đưa lời khuyên quý báu cho không nghiên cứu mà sống Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới CKI Đỗ Thị Hường, người trực tiếp hướng dẫn tôi, ln tận tình hướng dẫn nghiên cứu, giảng giải kiến thức tạo điều kiện tốt giúp tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị nhân viên làm việc phòng xét nghiệm Huyết học - Đơng máu - Trung tâm Kiểm chuẩn chất lượng Xét nghiệm - trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ, giải đáp thắc mắc để tơi thực tốt khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý đào tạo đại học, Bộ môn Sinh lý, Khoa Kỹ thuật y học, trường Đại Học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới cha mẹ, người sinh thành, nuôi dưỡng tôi, người thân, bạn bè bên động viên, chia sẻ, giúp đỡ trình học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Trương Thị Lệ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan khóa luận tơi trực ti ếp th ực d ưới hướng dẫn PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung CKI Đỗ Thị Hường Các số liệu kết đưa khóa luận hồn tồn trung thực, khách quan chưa công bố tài liệu Nếu sai, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Trương Thị Lệ DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT HC : Hồng cầu HCM : Hồng cầu mẫu HGKT: Hiệu giá kháng thể HT : Huyết HTM : Huyết mẫu IQC : Internal Quality Control ISBT : International Society of Blood Transfusion ISO : International Organization for Standardization IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry KN : Kháng nguyên KT : Kháng thể PXN : Phòng xét nghiệm QC : Quality Control WHO : World Health Organization XN : Xét nghiệm MỤC LỤC 6 DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, xét nghiệm yêu cầu cận lâm sàng thường quy bệnh viện Các kết xét nghiệm xác, kịp thời giúp bác sĩ lâm sàng chẩn đoán điều trị kịp thời Do đó, chất lượng xét nghiệm có vai trò quan trọng với cơng tác chăm sóc sức khỏe Xét nghiệm Huyết học xét nghiệm thường quy sử dụng nhiều chẩn đốn điều trị Trong đó, xét nghiệm Định nhóm máu hệ ABO - Rh đóng vai trò vơ quan trọng công tác truyền máu Truyền máu cần thiết điều trị - phẫu thuật, tai biến sản khoa, ghép tạng, bệnh máu Tuy nhiên truyền máu gây nguy tai biến, số tai biến truyền nhầm nhóm máu Truyền nhầm nhóm máu trước thường hay gặp nguyên nhân gây tai biến, để lại hậu nặng nề, đe dọa trực tiếp tính mạng bệnh nhân Để hạn chế tình trạng này, cần thiết phải có kỹ thuật Định nhóm máu xác hiệu Để đạt yêu cầu đó, phòng xét nghiệm, cần phải đặt vấn đề đảm bảo chất lượng xét nghiệm lên hàng đầu Kiểm tra chất lượng xét nghiệm khâu đảm bảo chất lượng nhằm phát sai số, tìm nguyên nhân gây sai số từ đề biện pháp chế ngự hay khắc phục sai số [1] Và nay, nhiều nước giới, việc kiểm tra chất lượng xét nghiệm trở thành quy định tiến hành bắt buộc phòng xét nghiệm y học Kiểm tra chất lượng xét nghiệm bao gồm hai hoạt động - nội kiểm ngoại kiểm Ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm Bộ Y tế ban hành thành quy định quản lý chất lượng xét nghiệm, mặt chuyên môn, công cụ để đánh giá độ tin cậy xét nghiệm phát sai số [2] 10 71 Nhận xét: 26/26 kết Rất tốt, đạt 100% CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Bàn luận quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm Tham khảo quy trình chuẩn bị mẫu HT theo tài liệu hướng dẫn thực ngoại kiểm WHO [9], kết hợp với sản xuất thực nghiệm giai đoạn 1, đưa quy trình sản xuất mẫu HT ngoại kiểm Quy trình chúng tơi có số điểm khác sau: nghiên cứu chúng tơi cụ thể hóa thời gian để bình huyết tương bể điều nhiệt 37°C 15 phút, cục đơng hình thành, ngồi việc khuấy đũa thủy tinh máy khuấy từ, chúng tơi dùng đũa thủy tinh cắt cục đơng thành mảnh nhỏ để thu thể tích HT lớn Ngồi ra, chúng tơi thực thêm XN định nhóm máu, HGKT nghiệm pháp Coombs gián tiếp để đánh giá, so sánh mẫu huyết tương pool mẫu HT sau chuyển Chất lượng mẫu huyết tương pool thu đảm bảo độ trong, vẩn đục, khơng có kết tủa, khơng có váng Sau chuyển huyết tương thành HT, HT đảm bảo độ trong, không kết tủa, không váng trước Trong giai đoạn, mẫu huyết tương pool HT khơng có khác biệt kết nhóm máu, mức độ ngưng kết cho kết XN Coombs âm tính Như vậy, bước đầu kết luận quy trình sản xuất mẫu HT thử nghiệm đạt yêu cầu Tham khảo quy trình sản xuất panel HC sàng lọc KT bất thường Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương [29], chúng tơi đưa quy trình sản xuất mẫu HC ngoại kiểm với bước tương tự, nhiên có điểm khác panel 71 72 HC Viện Huyết học pha dung dịch Cellstab, nghiên cứu chúng tơi, HC pha dung dịch bảo quản Alsever Trong nghiên cứu chúng tôi, mẫu HC trước rửa sau rửa có màu đỏ tươi, nhất, khơng có váng hay đông dây Mẫu HC pool sau rửa giữ nguyên mức độ ngưng kết 4(+) HC trước rửa cho kết nghiệm pháp Coombs trực tiếp âm tính Do kết luận tính kháng nguyên bề mặt HC không thay đổi q trình rửa Như vậy, kết luận quy trình sản xuất mẫu HC thử nghiệm chúng tơi đạt yêu cầu Trong trình sản xuất đánh giá mẫu, chúng tơi nhận thấy có số điểm cần lưu ý Trước tiến hành sản xuất, cần phải rửa hấp sấy dụng cụ, tránh làm nhiễm bẩn cho mẫu ngoại kiểm Cần phải lựa chọn khối HC chế phẩm huyết tương cẩn thận, loại bỏ mẫu có nhiễm HIV, HBV, HCV, mẫu HC có váng nổi, đổi màu, đơng dây hay mẫu huyết tương chứa HC vỡ, huyết tương đục Khi pha HC, cần sử dụng ống đong để thu mẫu HC thể tích với nồng độ mong muốn, dùng XN HCT để kiểm tra nồng độ mẫu HC điều chỉnh cần trước chia mẫu Khi chuyển huyết tương thành HT, cần khuấy đều, dùng đũa khuấy thủy tinh cắt cục đơng thành mảnh nhỏ, sau cho vào tủ lạnh để qua đêm để thu nhiều thể tích HT Các bước quy trình sản xuất thực tủ sạch, tránh tối đa yếu tố môi trường ảnh hưởng đến chất lượng mẫu thử nghiệm Chúng thực quy trình sản xuất cẩn thận tuân thủ ngun tắc an tồn phòng XN Mẫu HC HT thu nhất, đảm bảo độ trong, khơng có tán huyết, đơng dây hay nhiễm trùng Tất kết phản ánh quy trình sản xuất chúng tơi đạt u cầu, lơ mẫu HC HT thử nghiệm sẵn sàng cho bước kiểm tra độ đồng độ ổn định 4.2 Bàn luận kết giai đoạn 4.2.1 Độ đồng Phương pháp đánh giá độ đồng nhất: đáp ứng theo yêu cầu hướng dẫn thực ngoại kiểm Huyết học nhóm máu WHO [9], ISO 72 73 13528:2015 [33], ISO 17043:2010 [39], vào thời điểm lơ mẫu vừa sản xuất, chọn từ 10 mẫu cách ngẫu nhiên (đảm bảo tính đại diện cho lơ), thực XN định nhóm máu XN HCT mẫu HC thực XN định nhóm máu HGKT mẫu HT Với XN định tính định nhóm máu, so sánh với kết mong đợi Với XN định lượng đo HCT, thực đánh giá độ đồng cách sử dụng t - test ANOVA - test Sử dụng t - test để kiểm tra khoảng tin cậy 95%, có hay khơng khác biệt mang ý nghĩa thống kê kết đo lần kết đo lần thời điểm đánh giá, sử dụng ANOVA - test để kiểm tra khoảng tin cậy 95%, có hay khơng khác biệt mang ý nghĩa thống kê cặp kết mẫu kiểm tra Với XN HGKT, đánh giá độ đồng theo tiêu chí : ống đánh giá có kết ngưng kết 1(+) khơng có sai biệt từ nồng độ pha loãng trở lên Trong giai đoạn thử nghiệm lần 1, lơ mẫu HC, kết định nhóm phương pháp HTM cho 10 mẫu HC lô nhóm O, Rh(D) dương, với ngưng kết 4(+) HTM Anti D Kết hoàn toàn phù hợp với kết mong đợi So sánh kết HCT mẫu lần chạy lặp lại với 10 mẫu lần chạy lặp lại khơng có khác biệt (p>0.05 F0.05) Tại thời điểm tuần tuần, kết HCT có khác biệt mang ý nghĩa thống kê so với kết ban đầu (p0.05 F0.05), lơ mẫu kiểm tra độ ổn định hay lô mẫu kiểm tra điều kiện bảo quản 20 - 25°C lại cho thấy có khác biệt Điều giải thích rằng, q trình vận chuyển giữ cho mẫu đảm bảo chất lượng cho PXN phân tích, nhiên nhiều ảnh hưởng đến chất lượng mẫu, làm giảm giá trị HCT Tương tự, mẫu kiểm tra điều kiện bảo quản 20 25°C, nhiệt độ ảnh hưởng đến chất lượng mẫu Do vậy, sau sản xuất, mẫu ngoại kiểm cần bảo quản điều kiện - 8°C, giữ mẫu đảm bảo nhiệt độ trình vận chuyển, đồng thời trình vận chuyển cần nhẹ nhàng, cẩn thận, nhằm đảm bảo PXN nhận 78 79 mẫu với chất lượng tốt nhất, đảm bảo trình phân tích khách quan, xác Trong giai đoạn này, đánh giá độ ổn định mẫu HT kiểm tra, quy định giá trị mong đợi cho mức độ ngưng kết nhóm máu từ 1(+) trở lên, thấp so với giai đoạn Điều giải thích do, giai đoạn này, sử dụng HCM tự sản xuất, sau thời gian định, HC giảm chất lượng, kéo theo giảm chất lượng tính KN bề mặt HC, khiến cho mức độ ngưng kết với KT mẫu HT kiểm tra giảm theo 4.3.3 Bàn luận kết phân tích phòng xét nghiệm Mỗi PXN đồng ý tham gia thử nghiệm nhận mẫu với mã mẫu khác nhau, mã mẫu gồm mẫu HT mẫu HC PXN tiến hành phân tích phương pháp phân tích đăng kí với đơn vị cung cấp thử nghiệm, gửi kết cho đơn vị cung cấp thử nghiệm thời gian quy định Thời gian từ sản xuất mẫu đến nhận lại kết từ PXN 1-10 ngày, đáp ứng yêu cầu thời gian đặt giai đoạn Tất PXN tham gia đánh giá sơ chất lượng mẫu thử nghiệm họ nhận đảm bảo chất lượng,đảm bảo cho q trình phân tích khách quan Giá trị ấn định thiết lập dựa 80% đồng thuận PXN tham gia thử nghiệm Trong thử nghiệm đánh giá kết phân tích nhóm máu hệ ABO, 21/26 kết Rất tốt chiếm đến 80,8% Có 2/26 kết Tốt chiếm 7,7%, PXN phân tích sai kết ngưng kết với HCM O mẫu Có 2/26 kết Phù hợp chiếm 7,7%, PXN không kết luận nhóm mẫu 1/26 kết Khơng phù hợp chiếm khoảng 3,8%, PXN không kết luận nhóm cho mẫu 79 80 Thử nghiệm đánh giá kết phân tích hệ nhóm máu Rh cho kết 26/26 PXN cho kết Rất tốt, đạt 100% KẾT LUẬN Hồn thiện quy trình sản xuất mẫu hồng cầu mẫu huyết cho ngoại kiểm Định nhóm máu hệ ABO - Rh Mẫu hồng cầu huyết thu đảm bảo chất lượng để đánh giá độ đồng ổn định Các lô mẫu hồng cầu huyết đồng nhất, ổn định thời gian tuần điều kiện bảo quản - 8°C, lơ mẫu HC 3-5% bảo quản dung dịch Alsever tỏ ổn định lô HC lại Sản xuất cung cấp thử nghiệm mẫu ngoại kiểm Định nhóm máu hệ ABO Rh cho 16 phòng xét nghiệm, thu lại 26 kết để tiến hành phân tích kết gửi lại báo cáo cho phòng xét nghiệm tham gia 80 81 KIẾN NGHỊ Với quy trình sản xuất đạt yêu cầu, sản xuất mẫu hồng cầu mẫu huyết cho ngoại kiểm Định nhóm máu đảm bảo chất lượng, xin kiến nghị đưa quy trình vào thực tiễn nhằm nâng cao chất lượng xét nghiệm Định nhóm máu phòng xét nghiệm Huyết học - Truyền máu Mỗi lần kiểm tra độ ổn định, nên thực hồng cầu mẫu mới, với hồng cầu mẫu có tiêu chuẩn chất lượng, đánh giá dựa xét nghiệm hiệu giá kháng thể huyết mẫu 81 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO Gs Đỗ Đình Hồ, Gs Phạm Thị Mai (2006) Bảo đảm kiểm tra chất lượng xét nghiệm Hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất Y học Hà Nội Bộ Y tế (2013) Thông tư 01/2013/TT-BYT, hướng dẫn thực quản lý chất lượng xét nghiệm sở khám bệnh, chữa bệnh Trần Hữu Tâm (2012) Nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm, Nhà xuất Y học Thành phố Hồ Chí Minh, tr.12 PGS TS Nguyễn Nghiêm Luật cộng (2003) Thực tập Hóa sinh, Nhà xuất Y học, tr.84 Trần Hữu Tâm (2012) Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm, Nhà xuất Y học Thành phố Hồ Chí Minh Miller W.G., Jones G.R.D., Horowitz G.L cộng sự, (2011) Proficiency Testing/External Quality Assessment: Current Challenges and Future Directions Clin Chem, 57(12), 1670-1680 Westgard JO (2010) Basic QC Practices Third edition Training in Statistical Quality Control for Medical Lab CLSI GP26-A4 Quality Management System: A Model for Laboratory Services; Approved Guideline - Fourth Edition WHO Geneva External Quality Asessment of Transfution Laboratory Practice: Guidelines on Establishing an EQA Scheme in Blood Group 10 Serology Trung tâm Kiểm chuẩn chất lượng Xét nghiệm - Trường Đại học Y 11 Hà Nội Sổ tay khách hàng chương trình ngoại kiểm Vi sinh PGS.TS Phạm Quang Vinh (2013) “Hệ thống nhóm máu ứng dụng truyền máu”, Huyết học - Truyền máu bản, Nhà xuất Y học 12 Hà Nội, tr.36-51 Bùi Thị Mai An, Vũ Đức Bình Nguyễn Anh Trí (2014) “Đặc điểm vai trò số nhóm máu hồng cầu phát hiện”, Một số chuyên đề Huyết học - Truyền máu, 5, NXB Y học, tr.62-74 82 83 13 Phạm Quang Vinh (2006) “Hệ nhóm máu ABO, Rh, hệ khác an tồn truyền máu”, Bài giảng Huyết học - Truyền máu, NXB Y học Hà 14 Nội, tr.280-298 Storry (2014) “Discovery new blood group systems - Lucks, 15 serendipyti and hard work”, Transfusion, Today, March 2014,18, tr.8 American Association of Blood Banks (AABB) (2005) “ABO, H and Lewis Blood Groups and Structurally Related Antigens”, Technical 16 Mannual 15th edition, tr.289-313 American Association of Blood Banks (AABB) (2002) “Red Cells Antigen - Antibody Reaction and Their Detection”, Technical Mannual 17 14th edition, tr.203-228 Bùi Thị Mai An Nguyễn Anh Trí (2014) “Những phát minh tiến lĩnh vực bảo đảm an toàn truyền máu giới Việt Nam”, Một số chuyên đề Huyết học - Truyền máu, 5, NXB Y học Hà 18 Nội, tr.38-41 American Association of Blood Banks (1993) “Rh and LW Blood”, 19 Technical Mannuall 11th edition, tr.203-228 E Smart, B Armstrong Walker et al (2008) “Blood group 20 systems”, ISBT Science Series, tr.68-92 Bùi Thị Mai An (2010) “Đặc điểm số hệ nhóm máu hồng cầu mối liên quan với bệnh lý”, Một số chuyên đề Huyết học - Truyền máu, 21 3, NXB Y học Hà Nội, tr.102-116 Trần Ngọc Quế (2013) Nghiên cứu xây dựng ngân hàng máu Viện Huyết học - Truyền máu TW, Luận án tiến sỹ Y học, Trường Đại 22 học Y Hà Nội Anstee D.J (1998) “Antigens on red cells” The International Journal of 23 Transfusion Medicine, 74), 255-257 Daniels G, Anstee D.J, Cartron J.P et al (1996) “ISBT working party on terminology for red cell surface antigens” Blood Group Terminology 24 1995, 69), 265-279 Helmut S.B (2000) “Chemical and biochemical - basis of antigen specificifi” Human Blood Group, 54-622 83 84 25 Bùi Thị Mai An, Phạm Quang Vinh, Nguyễn Thị Thu Hà cộng (2006) Nghiên cứu số nhóm máu hệ hồng cầu người cho máu 26 viện Huyết học - Truyền máu TW Y học thực hành,545, 365-367 PGS.TS Đỗ Doãn Lợi, PGS.TS Phạm Quang Vinh (2012), Thực 27 hành Huyết học - Truyền máu S Bejrachandra, J Saipin, O Nathalang, U Siriboonrit, E Rungroung, S Udee (2006) External quality assessment scheme in red 28 blood cell serology: a 5-year experience in Thailand Patravee Soisangwan (2010) REQAS in BGS - VTN Project Summary 29 Report PGS.TS Nguyễn Anh Trí - Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương (2010) Hoàn thiện quy trình sản xuất, bảo quản cung cấp panel hồng cầu cho sở cung cấp máu toàn quốc để nâng cao chất 30 lượng dịch vụ truyền máu GS.TSKH Đỗ Trung Phấn (2009) Kỹ thuật xét nghiệm Huyết học 31 Truyền máu ứng dụng lâm sàng, NXB Y học “Xác định thể tích khối hồng cầu”, Thực tập sinh lý học, NXB Y học Hà 32 33 Nội, tr.51-52 Scope I ILAC Discussion Paper on Homogeneity and Stability Testing Iso 13528 (2015) statistical methods for use in proficiency testing by 34 interlaboratory comparison Thompson Michael, Ellison Stephen LR Wood Roger (2006) The international harmonized protocol for the proficiency testing of analytical chemistry laboratories (IUPAC Technical Report) Pure and 35 Applied Chemistry, 78 (1), 145-196 Trần Hữu Tâm, Trương Quân Thụy, Vũ Thị Như Oanh (2016) “Áp dụng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm định nhóm máu để sản xuất kiểm tra độ đồng hồng cầu”, Tạp chí Y học thực hành, số 36 1/2016, tr.11-13 Trần Hữu Tâm cộng - Trung tâm Kiểm chuẩn Xét nghiệm Thành phố Hồ Chí Minh (2016) “Kết phân tích hai tiêu chuẩn chất 84 85 lượng quan trọng mẫu huyết kiểm tra chất lượng xét nghiệm Định nhóm máu”, Tạp chí Y học Việt Nam,tập 443, tháng 6-số 2/năm 37 2016, tr.100-103 Trần Hữu Tâm cộng - Trung tâm Kiểm chuẩn Xét nghiệm Thành phố Hồ Chí Minh (2016) “Độ ổn định ba mươi ngày hồng cầu mẫu ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm Định nhóm 38 máu”, Tạp chí Y học thực hành, số 5/2016, tr.77-79 M J McAteer, L J Dumont, J Cancelas, N Rugg, R Vassallo, P Whitley, S Graminske & K Friedman (2010) Multi-institutional randomized control study of haemolysis in stored red cell units prepared 39 manually or by an automated system ISO 17043 (2010) Conformity assessment - General requirements for proficiency testing 85 ... ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm Định nhóm máu cần nghiên cứu phát triển Nhằm đảm bảo xác xét nghiệm Định nhóm máu hệ ABO - Rh, thực đề tài Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm Định nhóm máu hệ. .. kiểm Định nhóm máu hệ ABO - Rh với mục tiêu: Sản xuất mẫu hồng cầu mẫu huyết cho ngoại kiểm Định nhóm máu hệ ABO - Rh Cung cấp thử nghiệm mẫu ngoại kiểm Định nhóm máu hệ ABO - Rh cho 15 phòng xét... nhóm máu với 423 KN nhóm máu khác [12] Trong hệ thống nhóm HC hệ nhóm máu ABO phát coi quan trọng nhất, ngồi có hệ nhóm máu Rh đóng vai trò quan trọng truyền máu 1.2.2 Hệ nhóm máu ABO 20 21 Hệ