NGUYỄN đức tâm NGHIÊN cứu ẢNH HƯỞNG của VIÊN NANG bào CHẾ từ bài THUỐC TRƯỜNG XUÂN CB TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG đực gây SUY GIẢM TINH TRÙNG BẰNG ACID VALPROIC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÂM NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA VIÊN NANG BÀO CHẾ TỪ BÀI THUỐC TRƯỜNG XUÂN CB TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG ĐỰC GÂY SUY GIẢM TINH TRÙNG BẰNG ACID VALPROIC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÂM NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA VIÊN NANG BÀO CHẾ TỪ BÀI THUỐC TRƯỜNG XUÂN CB TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG ĐỰC GÂY SUY GIẢM TINH TRÙNG BẰNG ACID VALPROIC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ & DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Nguyễn Hoàng Ngân HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thiện nhờ nhiều từ giúp đỡ thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè, quan gia đình Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Hồng Ngân, Phó trưởng Bộ môn Dược lý, Học viện Quân Y Người thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình, giúp đỡ tơi nhiều suốt q trình học tập thực để hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn thầy cô giáo Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, Phòng Sau Đại học Trường Đại Học Dược Hà Nội truyền đạt cho phương pháp nghiên cứu khoa học kiến thức chuyên ngành quý báu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo Ban giám hiệu, phòng ban thầy giáo trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, dạy dỗ suốt q trình học tập trường Tơi xin cảm ơn quý Thầy Cô Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đóng góp ý kiến q báu để tơi hồn thành tốt luận văn Tôi xin cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp người động viên, cổ vũ, giúp đỡ nhiều q trình học tập hồn thiện luận văn Cuối cho phép tơi bày tỏ lòng biết ơn tới người thân gia đình ln bên tôi, sẻ chia yêu thương cho nẻo đường Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Đức Tâm MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vô sinh nam 1.1.1 Khái niệm vô sinh 1.1.2 Nguyên nhân vô sinh nam 1.1.3 Các xét nghiệm chẩn đốn vơ sinh nam 1.1.4 Điều trị vô sinh nam suy giảm tinh trùng 1.2 Các thành phần chế phẩm TRƯỜNG XUÂN CB 1.2.1 Tỏa dương 1.2.2 Thạch hộc tía 1.2.3 Ngưu đại lực .11 1.2.4 Sâm cau 12 1.2.5 Ba kích 14 1.2.6 Dâm dương hoắc 15 1.2.7 Câu kỷ tử 17 1.2.8 Lộc nhung 18 1.3 Một số mơ hình gây SGTT động vật thực nghiệm 20 1.3.1 Mơ hình gây suy giảm tinh trùng natri valproat chuột cống trắng đực 20 1.3.2 Mơ hình gây suy giảm tinh trùng stress chuột cống trắng đực 21 1.3.3 Mơ hình gây suy giảm tinh trùng nhiệt chuột cống trắng đực 21 1.3.4 Một số mơ hình gây suy giảm tinh trùng thỏ 21 1.4 Một số nghiên cứu điều trị suy giảm tinh trùng nam giới dược liệu đông dược 22 1.4.1 Các đề tài nghiên cứu nước 22 4.2 Các nghiên cứu giới 23 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng, nguyên vật liệu nghiên cứu 27 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 27 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 28 2.1.3 Phương tiện nghiên cứu 29 2.1.4 Hóa chất nghiên cứu 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu 29 2.2.1 Đánh giá tác dụng dự phòng chế phẩm chuột cống trắng đực gây thiểu tinh trùng natri valproate 29 2.2.2 Đánh giá tác dụng điều trị chế phẩm chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng natri valproate 33 2.3 Xử lý số liệu 35 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1 Kết đánh giá tác dụng dự phòng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng natri valproat 36 3.1.1 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên nồng độ testosteron huyết chuột mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 36 3.1.2 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên số lượng chất lượng tinh trùng chuột mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 37 3.1.3 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên khối lượng quan sinh dục chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 40 3.1.4 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên mô học tinh hồn chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 41 3.2 Kết đánh giá tác dụng điều trị viên nang TRƯỜNG XUÂN CB chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng natri valproat 43 3.2.1 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên nồng độ testosteron huyết chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 43 3.2.2 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên số lượng chất lượng tinh trùng chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 44 3.2.3 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên khối lượng quan sinh dục chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 47 3.2.4 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên mơ học tinh hồn chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 48 Chương BÀN LUẬN 50 4.1 Về mơ hình nghiên cứu 50 4.2 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên nồng độ testosteron huyết chuột 51 4.3 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên số lượng chất lượng tinh trùng chuột 51 4.4 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên khối lượng quan sinh dục lên mơ bệnh học tinh hồn chuột 52 KẾT LUẬN 53 Về tác dụng dự phòng viên nang Trường Xuân CB chuột cống trắng gây suy giảm tinh trùng natri valproat 53 Về tác dụng điều trị viên nang Trường Xuân CB chuột cống trắng gây suy giảm tinh trùng natri valproat 53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần số lượng dược liệu dùng cho bào chế 50 viên nang TRƯỜNG XUÂN CB Bảng 3.1 Nồng độ testosteron huyết chuột mô hình đánh giá tác dụng dự phòng 36 Bảng 3.2 Ảnh hưởng TRƯỜNG XUÂN CB lên mật độ tinh trùng chuột mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 37 Bảng 3.3 Mức độ di động tinh trùng chuột mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 38 Bảng 3.4 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 39 Bảng 3.5 Khối lượng quan sinh dục chuột 40 Bảng 3.6 Đường kính ống sinh tinh lơ nghiên cứu mơ hình đánh giá tác dụng dự phòng 42 Bảng 3.7 Nồng độ testosteron huyết chuột chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 43 Bảng 3.8 Ảnh hưởng TRƯỜNG XUÂN CB lên mật độ tinh trùng mô hình đánh giá tác dụng điều trị 44 Bảng 3.9 Mức độ di động tinh trùng mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 45 Bảng 3.10 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 46 Bảng 3.11 Khối lượng quan sinh dục chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 47 Bảng 3.12 Đường kính ống sinh tinh lơ nghiên cứu mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 49 DANH MỤC ẢNH Ảnh 2.1 Hình ảnh viên nang cứng TRƯỜNG XUÂN CB 27 Ảnh 2.2 Chuột uống thuốc kim đầu tù 28 Ảnh 2.3 Chuột cống trắng đực sử dụng nghiên cứu 29 Ảnh 2.4 Kỹ thuật chọc kim lấy máu tim chuột 31 Ảnh 2.5 Xét nghiệm tinh trùng kính hiển vi 31 Ảnh 3.1 .Hình ảnh mơ học tinh hồn chuột đại điện lơ chuột nghiên cứu (HE, x 400) 41 Ảnh 3.2 Hình ảnh mơ học tinh hồn chuột lơ (HE x 400) 48 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Nấm ngọc cẩu Hình 1.2 Thạch hộc tía Hình 1.3 Ngưu đại lực .11 Hình 1.4 Sâm cau 12 Hình 1.5 Ba kích 14 Hình 1.6 Dâm dương hoắc 15 Hình 1.7 Câu kỷ tử 17 Hình 1.8 Lộc nhung 18 ĐẶT VẤN ĐỀ Vô sinh bệnh mang tính xã hội Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) dự báo, muộn vô sinh bệnh nguy hiểm thứ ba kỷ XXI, đứng sau ung thư bệnh tim mạch Hiện nay, vấn đề muộn có tỷ lệ ngày tăng cao phức tạp Tại nước ta, có khoảng 8% số cặp vợ chồng khơng có khả sinh khơng có can thiệp y tế, tỷ lệ gia đình muộn có xu hướng tăng lên [14], [17], [19] Trong số đó, nguyên nhân dẫn đến vô sinh muộn xuất phát từ nam giới chiếm xấp xỉ 50% , với nguyên gặp chủ yếu suy giảm tinh trùng (SGTT) Việc điều trị vô sinh, muộn suy giảm tinh trùng (SGTT) gặp nhiều khó khăn, chủ yếu SGTT có nhiều nguyên nhân [12], [18] Y học đại đạt nhiều thành tựu điều trị vô sinh SGTT, kết chưa ổn định đa số thuốc sử dụng có tác dụng không mong muốn SGTT thường phải điều trị kéo dài Những năm gần đây, y học cổ truyền Việt Nam ngày phát triển trọng, ngày nhiều đề tài khoa học nghiên cứu khẳng định tác dụng thuốc YHCT điều trị bệnh đặc biệt bệnh vô sinh, muộn với ưu tác dụng phụ [4], [5], [15], [25], [41] Thuốc từ thảo dược thường có tác dụng bổ trợ tốt đem lại hiệu bền vững giá thành phù hợp với mức thu nhập đa số người bệnh cộng đồng Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB Học viện Quân y nghiên cứu bào chế từ thuốc TRƯỜNG XUÂN CB Các dược liệu thuốc “TRƯỜNG XUÂN CB” phối hợp hài hòa dược liệu có tác dụng bổ thận dương bổ thận âm, bổ khí huyết, mạnh gân cốt với thành phần gồm nấm tỏa dương, thạch hộc tía, ngưu đại lực, sâm cau, ba kích, dâm dương hoắc, câu kỷ tử lộc nhung Nhiều nghiên cứu tác giả nước chứng minh tác dụng tăng cường khả sinh tinh dược liệu 3.2.2.2 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên mức độ di động tinh trùng mơ hình đánh giá tác dụng điều trị Kết trình bày bảng 3.9 Bảng 3.9 Mức độ di động tinh trùng mơ hình đánh giá tác dụng điều trị (n = 10) Tỉ lệ đánh giá mức độ di động (%) Lô nghiên cứu Lô (lô chứng) (1) Lô (mơ hình ) (2) Lơ (Lơ trị ) (3) Lô (Lô trị 2) (4) Giá trị p Tiến tới nhanh Tiến tới chậm Không tiến tới Không di động 36,65 ± 8,08 21,35 ± 7,82 33,93 ± 6,93 34,52 ± 10,42 4,63 ± 1,30 7,34 ± 2,95 4,61 ±1,55 5,05 ± 1,65 6,95 ± 1,77 9,89 ± 3,01 7,34 ± 1,92 7,04 ± 1,53 51,77 ± 10,13 61,42 ± 8,19 54,12 ± 8,11 53,39 ± 10,92 p-2< 0,01 p3,4-1> 0,05 p4-3> 0,05 p-2< 0,05 p3,4-1> 0,05 p4-3> 0,05 p-2< 0,05 p3,4-1> 0,05 p4-3> 0,05 P1-2> 0,05 p3,4-1,2> 0,05 p4-3> 0,05 Nhận xét: - Chuột lô có tỷ lệ tinh trùng tiến tới nhanh giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ (p < 0,01), tỉ lệ tinh trùng tiến tới chậm, không tiến tới, không di động tăng có ý nghĩa thống kê so với lơ (p < 0,05) Natri valproat cho uống liều 500 mg/kg/ngày tuần gây suy giảm rõ rệt mức độ di động tinh trùng chuột nghiên cứu - Chuột lơ 3, có tỉ lệ tinh trùng tiến tới nhanh tăng cao rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ (lơ mơ hình) (p < 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô (chứng sinh lý) (p > 0,05); tỉ lệ tinh trùng khơng tiến tới, tiến tới chậm giảm có ý nghĩa thống kê so với lô (lô mô hình) (p < 0,05) Tỉ lệ tinh trùng khơng di động lô 3, giảm so với lô 2, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - So sánh lô 3, khơng thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 45 3.2.2.3 Tác dụng TRƯỜNG XN CB đến tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường mơ hình đánh giá tác dụng điều trị Kết trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường mơ hình đánh giá tác dụng điều trị (n = 10) Tỉ lệ % tinh trùng Lơ nghiên cứu % tăng giảm có hình thái cấu Giá trị p trúc bất thường Lô (lơ chứng) (1) 8,63 ± 2,44 Lơ (mơ hình) (2) 15,92 ± 4,50 Lô (Lô trị 1) (3) 10,65 ± 3,62 Lô (Lô trị 2) (4) 10,24 ± 2,69 Tăng 84,42 % so với lô chứng P1,3,4-2 < 0,01 Giảm 33,09 % so p3,4-1 > 0,05 với lơ mơ hình p4-3 > 0,05 Giảm 35,68 % so với lơ mơ hình Nhận xét: - Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường lơ (lơ mơ hình) tăng rõ rệt so với lơ (lơ chứng), khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Natri valproat cho uống liều 500 mg/kg/ngày tuần làm tăng tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường chuột nghiên cứu - Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường lơ 3, giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ (lơ mơ hình) (p < 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô (lô chứng) (p > 0,05) - So sánh lơ 3, khơng thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 46 3.2.3 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên khối lượng quan sinh dục chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng điều trị Kết tình bày bảng 3.11 Bảng 3.11 Khối lượng quan sinh dục chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị (n = 10) Lô nghiên cứu Lô 1(1) x ± SD Lô (2) x ± SD p2-1 Lô (3) x ± SD p3-1 p3-2 Lô (4) x ± SD p4-1 p4-2 p4-3 Khối lượng quan sinh dục (g/100g thể trọng) Mào Tuyến Đầu Tinh Túi Tuyến Cơ nâng tinh tiền dương hồn tinh cowper hậu mơn hồn liệt vật 0,884 ± 0,152 0,675 ± 0,159 < 0,05 0,846 ± 0,197 > 0,05 0,257 ± 0,031 0,213 ± 0,025 < 0,05 0,251 ± 0,045 > 0,05 0,222 ± 0,059 0,161 ± 0,029 < 0,05 0,209 ± 0,037 > 0,05 0,120 ± 0,029 0,099 ± 0,012 < 0,05 0,109 ± 0,029 > 0,05 0,030 ± 0,014 0,027 ± 0,011 > 0,05 0,029 ± 0,013 > 0,05 0,039 ± 0,016 0,035 ± 0,016 > 0,05 0,037 ± 0,015 > 0,05 0,336 ± 0,067 0,285 ± 0,043 < 0,05 0,333 ± 0,058 > 0,05 < 0,05 0,860 ± 0,211 > 0,05 < 0,05 0,256 ± 0,038 > 0,05 < 0,05 0,212 ± 0,044 > 0,05 < 0,05 0,111 ± 0,035 > 0,05 > 0,05 0,028 ± 0,014 > 0,05 > 0,05 0,038 ± 0,015 > 0,05 < 0,05 0,334 ± 0,064 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 Nhận xét: - Khối lượng tinh hoàn, mào tinh hoàn, túi tinh, tuyến tiền liệt, nâng hậu môn chuột lô mơ hình (lơ 2) có giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (lô 1) (p < 0,05) Khối lượng quan hai lô dùng TRƯỜNG XUÂN CB tăng so với lơ mơ hình (p < 0,05), hồi phục tương đương với lô chứng sinh lý (p > 0,05) - Khối lượng dương vật tuyến cowper lô thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 47 3.2.4 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên mơ học tinh hồn chuột cống trắng đực mơ hình đánh giá tác dụng điều trị 3.2.4.1 Tác dụng TRƯỜNG XN CB lên hình ảnh mơ học tinh hồn chuột mơ hình đánh giá tác dụng điều trị Kết hình ảnh mơ học tinh hồn chuột lơ nghiên cứu thể hình 3.10 (a) (b) (c) (d) Ảnh 3.2 Hình ảnh mơ học tinh hồn chuột lơ (HE x 400) lô 1(a), lô (b), lô 3(c), lô 4(d) Kết hình 3.2 cho thấy: Ở lơ (lơ chứng), ống sinh tinh có kích thước lớn, biểu mơ tinh dày, có đủ loại tế bào dòng tinh: tinh nguyên bào, tinh bào, tiền tinh trùng, tinh trùng Trong đó, lơ (mơ hình), ống sinh tinh kích thước giảm (teo nhỏ), tăng khơng gian kẽ, giảm biểu mô mầm Ở lô (trị 1) lơ (trị 2), kích thước hình ảnh ống sinh tinh gần tương tự lô chứng sinh lý Không gian kẽ dày không đáng kể so với lô chứng 48 3.2.4.2 Tác dụng TRƯỜNG XUÂN CB lên đường kính ống sinh tinh mơ hình đánh giá tác dụng điều trị Kết trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Đường kính ống sinh tinh lô nghiên cứu mô hình đánh giá tác dụng điều trị (n=10) Lơ nghiên cứu Đường kính ống sinh tinh (µm) % tăng giảm Lô (lô chứng) (1) 128,66 ± 6,55 - Lô (mơ hình) (2) 116,72 ± 7,35 Lơ (Lơ trị 1) (3) 126,53 ± 4,59 Lô (Lô trị 2) (4) 127,37 ± 4,07 Giảm 9,28 % so với lơ chứng Tăng 7,58 % so với lơ mơ hình Tăng 8,53 % so với lơ mơ hình Giá trị p P1,3,42 < 0,05 p3,4-1 > 0,05 p4-3 > 0,05 Nhận xét: - Đường kính ống sinh tinh lơ mơ hình giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (p < 0,05) Natrivalproat gây độc lên quan sinh sản chuột cống đực, làm giảm đường kính ống sinh tinh đo hình ảnh mô bệnh học tinh trùng chuột nghiên cứu - So với lơ mơ hình, lơ dùng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB (lô trị 1, lô trị 2) có đường kính ống sinh tinh tăng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB làm hồi phục có tổn thương mơ bệnh học tinh hồn, giúp làm tăng đường kính ống sinh tinh có ý nghĩa thống kê so với lơ gây bệnh không dùng thuốc - So với lô chứng sinh lý, đường kính ống sinh tinh lơ dùng TRƯỜNG XN CB khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB hai mức liều dùng có tác dụng làm hồi phục đường kính ống sinh tinh tương đương với lô chứng sinh lý (p > 0,05) - So sánh lô dùng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB, lô dùng liều cao có đường kính ống sinh tinh cao hơn, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 49 Chương BÀN LUẬN 4.1 Về mô hình nghiên cứu Mơ hình gây bệnh động vật thực nghiệm có vai trò quan trọng nghiên cứu đánh giá tác dụng chế phẩm Các phương pháp sử dụng để gây suy giảm tinh trùng động vật thực nghiệm bao gồm: gây suy giảm tinh trùng đột biến gen; nhiệt; stress, tia xạ, hóa chất, thuốc… [31], [36], [37] Các mơ hình mơ hình nghiên cứu tin cậy, gây suy giảm tinh trùng chuột cống trắng đực tác nhân gây bệnh khác Ngồi mơ hình nghiên cứu thực chuột cống trắng đực, tiến hành nghiên cứu động vật khác, thỏ… Mơ hình gây suy giảm tinh trùng đột biến gen có độ xác độ tin cậy cao, nhiên chưa thấy tiến hành nghiên cứu Việt Nam Các mơ hình gây suy giảm tinh trùng stress, chế độ ăn, thường đòi hỏi kỹ thuật phức tạp, thời gian kéo dài, động vật thường có nhiều bệnh lý rối loạn khác kèm theo Các mơ hình gây suy giảm tinh trùng nhiệt, hóa chất, tia xạ thường gây tình trạng suy giảm sinh sản nặng, thường kèm theo suy giảm miễn dịch, suy chức số quan khác, dẫn đến tử vong Trong nghiên cứu này, chúng tơi sử dụng mơ hình gây suy giảm tinh trùng chuột cống trắng natri valproat Natri valproat thuốc chống động kinh sử dụng rộng rãi lâm sàng Thuốc gây ảnh hưởng đến chức sinh sản với đích tác dụng từ vùng đồi - tuyến yên, gây bệnh cảnh suy giảm sinh sản gần với bệnh lý suy giảm sinh sản thứ phát nam giới Nishimura cs (2000) dùng natri valproat liều 500 mg/kg/ngày tuần làm giảm số sinh sản, làm giảm số lượng tinh trùng, giảm tốc độ di động tinh trùng, thay đổi hình thái cấu trúc tinh hồn chuột cống đực trưởng thành [38] Mơ hình gây suy giảm tinh trùng natri valproat mơ hình sở nghiên cứu có uy tín nước [6], [39], [41]… sử dụng nghiên cứu cho thấy tính ổn định phù hợp mơ hình Với mơ hình này, chúng tơi đánh giá tác dụng dự phòng (cho chuột dùng 50 TRƯỜNG XUÂN CB song song với trình dùng natri valproat để gây suy giảm tinh trùng); tác dụng điều trị (cho chuột dùng TRƯỜNG XUÂN CB sau gây suy giảm tinh trùng) 4.2 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên nồng độ testosteron huyết chuột Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB liều 420mg/kg/ngày 840mg/kg/ngày đánh giá tác dụng dự phòng đánh giá tác dụng điều trị làm tăng nồng độ Testosteron máu chuột Kết tương tự kết số nghiên cứu khác: thuốc bổ thận có tác dụng tăng tiết testosteron huyết Theo Đậu Xuân Cảnh: “Hải mã, nhân sâm liều 120mg/100g TLCT làm tăng tiết testosteron chuột cống trắng đực” [5]; Mona H Hetta (2007): “Dịch chiết Hyphaene thebaica L Mart (Doum) liều 25mg/kg TLCT sử dụng 60 ngày có tác dụng tăng testosteron huyết chuột cống đực giới hạn an toàn” Testosteron tăng sinh cho thuốc bổ thận có tác dụng tăng cường khả tiết toàn tuyến sinh dục Ở lô dùng liều cao, viên nang Trường Xuân CB làm tăng nồng độ Testosteron máu cao so với lô dùng liệu thấp, cho thấy tác dụng viên nang Trường Xuân CB có xu hướng tác dụng tăng theo mức liều Tuy nhiên, khác biệt chưa đạt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Với tác dụng thể rõ mức liều thấp, tăng lên khơng có ý nghĩa thống kê nâng mức liều lên gấp đơi, mức liều dùng có tác dụng để tính liều sử dụng lâm sàng mức liều thấp Việc sử dụng mức liều cao cần nghiên cứu đánh giá thêm 4.3 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên số lượng chất lượng tinh trùng chuột Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB liều 420mg/kg/ngày 840mg/kg/ngày đánh giá tác dụng dự phòng đánh giá tác dụng điều trị làm tăng mật độ tinh trùng, tăng khả di động tinh trùng, giảm tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường Như vậy, chuột uống TRƯỜNG XUÂN 51 CB cải thiện rõ rệt số lượng chất lượng tinh trùng Theo chúng tơi dự đốn, thuốc bổ thận nói chúng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB nói riêng có tác dụng tăng sinh testosteron nội sinh giới hạn an toàn (do tăng cường khả tiết tuyến sinh dục), đồng thời làm tăng tính kích thích nội tiết tố sinh dục Ngồi ra, yếu tố vi lượng chế phẩm từ dược liệu q thuốc có vai trò lớn giúp cải thiện số lượng chất lượng tinh trùng Tác dụng viên nang Trường Xuân CB có xu hướng tác dụng tăng theo mức liều, nhiên khác biệt chưa đạt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Kết cho thấy mức liều dùng có tác dụng để tính liều sử dụng lâm sàng mức liều thấp việc sử dụng mức liều cao cần nghiên cứu đánh giá thêm 4.4 Về tác dụng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB lên khối lượng quan sinh dục lên mô bệnh học tinh hoàn chuột Các dược liệu thuốc TRƯỜNG XUÂN CB nhìn chung có tác dụng bổ thận dương, dưỡng thận âm Y học đại có nhiều nghiên cứu đánh giá tác dụng làm tăng cường hoạt tính androgen số dược liệu số chúng, ba kích, dâm dương hoắc…Sự kết hợp vị thuốc thuốc tạo nên tác dụng bổ dương, thể rõ hoạt tính androgen với tăng nồng độ testosteron máu đồng thời làm tăng khối lượng quan sinh dục Trong nghiên cứu này, tác dụng độc natri valproat nên quan sinh dục chuột bị biến đổi, nhìn chung nhỏ đi, song hành với nồng độ testosteron giảm xuống Viên nang TRƯỜNG XUÂN CB liều 420mg/kg/ngày 840mg/kg/ngày đánh giá tác dụng dự phòng đánh giá tác dụng điều trị làm hồi phục rõ biến đổi gây natri valproat Như viên nang TRƯỜNG XUÂN CB không bảo vệ hồi phục chức quan sinh dục (thông qua số nồng độ testosteron số số lượng chất lượng tinh trùng), mà bảo vệ hồi phục hình thái quan sinh dục 52 KẾT LUẬN Về tác dụng dự phòng viên nang Trường Xuân CB chuột cống trắng gây suy giảm tinh trùng natri valproat Viên nang Trường Xuân CB liều 420 mg/kg/ngày 840 mg/kg/ngày cho chuột cống trắng uống tuần đồng thời với trình gây suy giảm tinh trùng natri valproat 500mg/kg/ngày Kết cho thấy chế phẩm có tác dụng phòng chống suy giảm tinh trùng gây natri valproat, làm nồng độ testosterol máu, mật độ tinh trùng, độ di động tinh trùng, khối lượng quan sinh dục (tinh hoàn, mào tinh hoàn, túi tinh, tuyến tiền liệt, nâng hậu môn) lô gây độc dùng chế phẩm cao hơn, tỷ lệ tinh trùng có hình thái bất thường thấp so với lơ mơ hình (lơ gây độc khơng uống chế phẩm) (p < 0,05), tương đương so với lô chứng khơng gây độc (p > 0,05) Hình ảnh mơ bệnh học lô uống chế phẩm gần tương tự lô chứng không gây độc, khác biệt rõ so với lơ mơ hình Về tác dụng điều trị viên nang Trường Xuân CB chuột cống trắng gây suy giảm tinh trùng natri valproat Sau gây suy giảm tinh trùng natri valproat uống 500mg/kg/ngày tuần, chuột cống trắng đực cho uống viên nang Trường Xuân CB liều 420 mg/kg/ngày 840 mg/kg/ngày tuần sau Kết cho thấy chế phẩm có tác dụng điều trị tình trạng suy giảm tinh trùng gây natri valproat, làm nồng độ testosterol máu, mật độ tinh trùng, độ di động tinh trùng, khối lượng quan sinh dục (tinh hoàn, mào tinh hoàn, túi tinh, tuyến tiền liệt, nâng hậu môn) cao hơn, tỷ lệ tinh trùng có hình thái bất thường thấp so với lơ mơ hình (lơ gây độc khơng uống chế phẩm) (p < 0,05), hồi phục tương đương với lô chứng không gây độc (p > 0,05) Hình ảnh mơ bệnh học lơ uống chế phẩm hồi phục tương đương so với lô chứng không gây độc, khác biệt rõ so với lơ mơ hình 53 KIẾN NGHỊ Có thể triển khai nghiên cứu đánh giá tác dụng chế phẩm lâm sàng, tác dụng dược lý khác chế phẩm, nhằm nâng cao giá trị viên nang TRƯỜNG XUÂN CB Từ kết thu được, hướng tới việc triển khai dự án sản xuất chuyển giao cơng nghệ để đưa sản phẩm sử dụng rộng rãi cộng đồng 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Chu Quốc Trường, Nguyễn Văn Vụ, Nguyễn Gia Bình (2000), “Nghiên cứu yếu tố vi lượng hội chứng dương hư”, Thông tin y dược học cổ truyền, Bộ y tế -Viện Y học cổ truyền Việt Nam, số 100, tr 4-6 Dương Thị Ly Hương (2012) Nghiên cứu tác dụng lên chức sinh sản độc tính rễ Bá bệnh (Euricoma Longifolia J.) thu hái Việt Nam động vật thực nghiệm, Luận án Tiến sĩ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Đồn Minh Thụy, Trương Việt Bình, Trần Qn Anh (2009), Bước đầu đánh giá tác dụng viên nang Hồi Xn Hồn tinh dịch đồ bệnh nhân vơ sinh nam (do Thận dương hư) Tạp chí y học thực hành (668) – số 7/2009 Đậu Xuân Cảnh (2002) “Nghiên cứu tác dụng hải mã hải mã nhân sâm lên số chức sinh sản chuột đực”, Luận văn thạc sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội Đậu Xuân Cảnh (2007), “Nghiên cứu tác dụng hải mã nhân sâm lên cấu trúc-chức hệ thống sinh sản chuột đực“, Luận án tiến sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội Đậu Thùy Dương (2018) Nghiên cứu độc tính tác dụng chức sinh sản OS35 thực nghiệm , Luận án Tiến sĩ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr 309, 837, 848, 850, 863, 862, 878, 911, 937-45 Hải Thượng Lãn Ơng (2001), Hải Thượng Lãn Ơng Y tơng tâm lĩnh, Tái nguyên bản, NXB Y học, tập 1-2, tr.265-75, 423-24, 432-41, 550-71 Hồ Mạnh Tường (2006), Lý thuyết Nam khoa bản, Hội Nội tiết sinh sản Vơ sinh thành phố Hồ Chí Minh, NXB Y học, tr 19-26, 69-83 10 Hồ Mạnh Tường (2010), “Khả sinh sản nam giới, “Quo Vadis”, Y học sinh sản, Nội san-Hội Nội tiết & Vô sinh TP Hồ Chí Minh, số 13, tr 13-17 11 Lê Trung Hải (2015), “Vô sinh, muộn số vấn đề cần quan tâm đơn vị Quân đội”, Tạp chí y học Quân sự, số 305 (3-4/2015) 12 Lê Thế Vũ (2009), ‘‘Nghiên cứu số nguyên nhân vô sinh nam’’, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa cấp II, Trường Đại học Y Hà Nội, tr 73-74 13 Lê Minh Hoàng, Nguyễn Duy Bắc, Nguyễn Hoàng Ngân (2018), “Đánh giá tác dụng cải thiện chức sinh tinh bột cao khô đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris (L.exfr.) Link) thực nghiệm”, Tạp chí Y Dược học Cần Thơ – số 13-14, tr 357-360 14 Nguyễn Thị Xiêm, Lê Thị Phương Lan (2002), “Vô sinh, vô sinh nam”, Vô sinh, NXB Y học, Hà Nội, tr 15 Phan Hồi Trung (2004), “Nghiên cứu tính an toàn tác dụng thuốc “Sinh tinh thang” đến số lượng, chất lượng tinh trùng”, Luận án tiến sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội 16 Phan Anh Tuấn, Trần Văn Hướng, Nguyễn Thanh Hương (2016), Nghiên cứu tác dụng cao Tỏa dương (Balanophora Laxiflora HemsL.) lên số số chức sinh sản chuột cống đực gây suy giảm sinh sản Natri valproat Tạp chí nghiên cứu Y dược học cổ truyền Việt Nam, số 48/2016 17 Trần Quán Anh, Trần Thị Trung Chiến, Lê Văn Vệ (2009), “Vô sinh nam giới”, Bệnh học giới tính nam, NXB Y học tr 253-323 18 Trần Quán Anh, Nguyễn Bửu Triều, Trần Thị Trung Chiến (2005) “Bước đầu nghiên cứu nguyên nhân đánh giá kết điều trị vô sinh nam giới”, Tạp chí y học Việt Nam, tập 313, số đặc biệt, tr 886-93 19 Tổng cục trị Quân đội nhân dân Việt Nam (2015) “Hướng dẫn số 2318/HD-CT việc hỗ trợ người muộn, vô sinh công tác Quân đội” 20 Trần Thị Trung Chiến (2009) “Giải phẫu sinh lý mô học hệ sinh sản nam”, Bệnh học giới tính nam, NXB Y học (2002) tr 123-87 21 Trần Bích Cơn (2005), “Chứng can đởm thấp nhiệt”, Chẩn đoán phân biệt chứng hậu đông y, Nguyễn Thiên Quyến tuyển dịch từ tài liệu Viện nghiên cứu Trung y, NXB Văn hóa dân tộc, tr 636-41 22 Trần Văn Hanh (2003), “Nghiên cứu siêu cấu trúc tinh trùng bình thường người Việt Nam”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 449-450 23 Trần Văn Hanh, Dương Đình Trung, Quản Hồng Lâm(2005), “Nghiên cứu siêu cấu trúc tinh trùng 100 người Việt Nam bị thiểu số lượng chất lượng tinh trùng”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, NXB khoa học kỹ thuật, tr 495-497 24 Vương Khánh Kỳ (2005), Chẩn đoán phân biệt chứng hậu đông y, Nguyễn Thiên Quyến tuyển dịch từ tài liệu Viện Nghiên cứu Trung y, NXB Văn hóa dân tộc, tr 449-56, 473-476 25 Viện Y học cổ truyền quân đội (2002) “Chứng bệnh vô sinh nam giới”, Kết hợp đông, tây y chữa số bệnh khó, NXB Y học, tr 278-87 26 Viện Y học Trung y Bắc Kinh (Dương Hữu Nam, Dương Trọng Hiếu lược dịch) (1994), Phương tễ học giảng nghĩa, NXB Y học (2002) tr 126, 173, 284, 294, 287, 378, 456 Tiếng nước 27 Abel E L., Moore C et al (1989), “Effects of Cocaine hydrocloride on Reproductive Function and Sexual Behavior of Male Rats and on the Behavior of Their Offspring”, J Andriol, 10, pp 17 28 Amerlar R D and Hotchkiss R S (1963), “Congenital Aplasia of the Epididymis and Vas Deferens: Effect on Semen”, Fertil Steril, 14, pp 44 29 Azza H El-Medany and Hanan H Hagar (2002), Effect of fluconazole on the fertility of male rabbits, Arzneim.-Forsch./Drug Res 52(8), pp 636-640 30 Ali Esmail Al Snafi, Ráid M.H Al Salih and Abbas Muhsin Abbas Endocrine (2013) Reproductive Effects of Antiepileptic Drugs in Male Rats Global Journal of Pharmacology (1): pp 95-98 31 Alaaeldin A Hamza and Amr Amin (2007) Apium graveolens modulate Sodium Valproate – Induced Reproductive Toxicity in rats Journal of experimental zoology 307A pp 199-206 32 Andrew S Crimmel, Chad S Conner, Manoj Monga (2001), “Withered Yang: a Review of Traditional Chinese Medical Treatment of Male Infertility and Erectile Dysfuntion”, Journal of Andrology, American Society of Andrology, Vol 22, No.2, pp 173- 81 33 Bairy L, Paul V, Rao Y (2010) Reproductive toxicity of sodium valproate in male rats Indian J Pharmacol Apr;42(2):90-4 doi: 10.4103/02537613.64503 34 Dickey R P., Pyrzak R., Lu P Y et al.(1999), “Comparison of the sperm quality necessary for successful intrauterine insemination with World Health Organization threshold values for normal sperm”, Fertil Steril 71(4), pp 684-689 35 Evans H J et al (1981), “Sperm Abnormalities in Cigarette Smoking”, Lancet, 1, pp 627 36 Ebru ALDEMİR1, Fisun AKDENİZ2 (2009) Effects of Valproate on Male Reproductive Functions Turkish Journal of Psychiatry 37 Gulsah Bitgul, Isil Tekmen, Didem Keles, and Gulgun Oktay (2013) Protective Effects of Resveratrol against Chronic Immobilization Stress on Testis ISRN Urol 2013; 2013: 278720 Published online 2013 Nov doi: 10.1155/2013/278720 PMCID: PMC3836419 38 Nishimura T., Sakai M., Yonezawa H (2000), “Effects of valproic acid on fertility and reproductive organs in male rats”, The Journal of Toxicological Sciences, 25(2), pp 85-93 39 Minh Hoang Le, Duy Bac Nguyen, Pham Xuan Phong, Hoang Ngan Nguyen (2018), “Evaluating the effect of improving sperm production of Vietnamese deer antler on experimental animals” ACADEMY Journal, 10(12), pp 8-27 40 Mona H Hetta (2007), “Effect of Hyphaene thebaica L Mart (Doum) fruits on spermatogenesis”, International Workshop on Herbal Medicinal Plants and Traditional herb Remedies, 20-21 September, Hanoi, Vietnam 41 Truong Viet Binh, Doan Minh Thuy, Quan Hoang Lam, Vu Manh Hung (2010), “Studying the Effects of Hoixuanhoan Capsule in the White rat’s Testicular Function Induced by Heat”, The Second Conference on Traditional medicine in ASEAN Countries, Full report, Hanoi, Vietnam10/2010 42 Trevor G Cooper (2009), “What does Semen Analysis Really Tell Us? ”, 9th International Congress of Andrology, March 7-19, Barcelona, Spain 43 Trevor G Cooper, Elizabeth Noonan, Sigrid von Eckardstein, Jacques Auger, H W Gordon Baker, Hermann M Behre, Trine B Haugen, Thinus Kruger, Christina Wang, Michael T Mbizvo, and Kirsten M Vogelsong (2010), “World Health Organization reference values for human semen characteristics”, Human Reproduction, 16(3), pp 231-245 44 World Health Organization (2000), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 45 WHO (2001), General guidelines for methodologies on research and evaluational of tradition medicine, World Health Organization ... TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÂM NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA VIÊN NANG BÀO CHẾ TỪ BÀI THUỐC TRƯỜNG XUÂN CB TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG ĐỰC GÂY SUY GIẢM TINH TRÙNG BẰNG ACID VALPROIC. .. dự phòng viên nang TRƯỜNG XUÂN CB chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng natri valproat Đánh giá tác dụng điều trị viên nang TRƯỜNG XUÂN CB chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng natri... tác dụng chế phẩm thực nghiệm Xuất phát từ lý trên, nhóm nghiên cứu tiến hành đề tài Nghiên cứu ảnh hưởng viên nang bào chế từ thuốc TRƯỜNG XUÂN CB chuột cống trắng đực gây suy giảm tinh trùng