CHIẾT TÁCH ASIATICOSIDE TỪ RAU MÁ

CHIẾT TÁCH ASIATICOSIDE TỪ RAU MÁ

ĐỀ TÀI 49 : CHIẾT TÁCH ASIATICOSIDE TỪ RAU

MÁ

GVHD: Th.s Huỳnh Thị Minh Hiền

SVTH: Phan Văn Vĩnh 10046061

Trương Văn Minh Tiến 10040081

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP

TP HỒ CHÍ MINH

KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1 TỔNG QUAN VỀ ĐỀ TÀI

1.3 1.3

1.2 1.2

1.1 1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI

MỤC ĐÍCH VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ VÀ ASIATICOSIDE

Rau má thường

Rau má sen

Rau má thường

1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI

Rau má là dược thực phẩm quí trồng phổ biến ở nhiều quốc gia vùng nhiệt đới nhưng chưa được nghiên cứu nhiều trong việc tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học cao asiticoside

Nghiên cứu chiết tách asiticoside từ rau má là cơ hội phát triển cho sản xuất dược phẩm, mỹ phẩm, thực phẩm dinh dưỡng đáp ứng nhu cầu cần thiết ngày nay

Rau má dại

Rau má mỡ

1.2 MỤC ĐÍCH VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Mục đích là thu nhận asiaticoside

từ rau má

Mục đích là thu nhận asiaticoside

từ rau má

1.3 TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ VÀ ASIATICOSIDE

Rau má tươi

Rau má khô

1.3 TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ VÀ ASIATICOSIDE

RAU

MÁ

STT Tên thành phần hóa học Đơn vị Hàm lượng

STT Tên thành phần hóa học Đơn vị Hàm lượng

Bảng 1.3.1 Thành phần hóa học trong rau má

Chứa một số acid béo, hợp chất saponin

Ngoài ra còn

1.3.TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ VÀ ASIATICOSIDE

1.3.TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ VÀ ASIATICOSIDE

Hình 1.3.1 Cấu trúc phân tử của Asiaticoside

O O

O O

O O

OH

OH

OH

OH OH

HO

2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

HPLC

2.2.1 Định tính

2.2.2 Định lượng

2.3.1 Thành phần hóa học của rau

má

2.3.2 Asiaticosidde trong các bộ phận

rau má

2.3.4 Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi

2.3.5 Ảnh hưởng của thời gian

2.3.6 Lựa chọn thông số thu hồi

2.3.Thành phần và yếu tố ảnh hưởng tới chiết

2.3.3 Ảnh hưởng của dung môi

 Dung môi được bay hơi đến nhiệt độ bay hơi lên trên gặp ống sinh hàn thì hơi được làm lạnh và ngưng tụ lại ngấm dần vào nguyên liệu trích ly các chất trong nguyên liệu.

 Nồng độ của dịch trích ly tăng dần theo thời gian nhờ hệ thống thông nhau giữa phần trụ chiết và bình cầu

 Khi dịch chiết đạt độ cao nhất định sẽ chảy lại bình cầu và tiếp tục đun sôi để bay hơi

 Quá trình này tuần hoàn liên tục, dịch chiết được lấy ra ở bình cầu

 Dung môi được bay hơi đến nhiệt độ bay hơi lên trên gặp ống sinh hàn thì hơi được làm lạnh và ngưng tụ lại ngấm dần vào nguyên liệu trích ly các chất trong nguyên liệu

 Nồng độ của dịch trích ly tăng dần theo thời gian nhờ hệ thống thông nhau giữa phần trụ chiết và bình cầu

 Khi dịch chiết đạt độ cao nhất định sẽ chảy lại bình cầu và tiếp tục đun sôi để bay hơi

 Quá trình này tuần hoàn liên tục, dịch chiết được lấy ra ở bình cầu

2.1.1 NGHUYÊN TẮC CHIẾT SOXHLET

2.1.1 NGHUYÊN TẮC CHIẾT SOXHLET

1 Dung môi chiết

2.1.2 CÁCH TIẾN HÀNH

Cân 3 g bột rau má cho vào giấy lọc buộc kỹ tránh bột chảy ra ngoài =>> cho gói bột vào phần thân của bình chiết Soxhlet, còn dung môi cho khoảng 250 ml vào bình cầu bên dưới =>> chiết ở

t0 sôi của dung môi =>> cho phần dịch vào bình Erlen =>> lọc thô, lọc tinh =>> lấy dịch chiết đi phân tích sắc ký

Hình 2.1.2.1 Bộ chiết

soxhlet

2.1.2 CÁCH TIẾN HÀNH

Hình 2.1.2.2 Sơ đồ thu nhận asiaticoside thô qui mô phòng thí

nghiệm

Dung môi: ethanol, n-hexan

Hệ chiết:ethanol:nước

2.2 2.2

ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG BẰNG HPLC

 Cột: C18

 Pha động: Methanol : nước ( 60:40 )

 Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút

 Bước sóng: 220nm

 Nhiệt độ cột = nhiệt độ phòng

 Mẫu asiaticoside chuẩn

có nồng độ 0,496 mg/ml pha trong methanol

Hình 2.2.1 Sơ đồ nguyên lý của máy sắc ký lỏng cao áp

2.2.1 ĐỊNH TÍNH ASIATICOSIDE

Sự tồn tại của Asiaticoside được

ghi nhận khi thời gian lưu và hình

dạng phổ tương đồng với thời gian

lưu và hình dạng asiaticoside

chuẩn

Hình 2.2.1 Hình dạng không gian ba chiều của phổ asiaticoside chuẩn

2.2.2 ĐỊNH LƯỢNG ASIATICOSIDE

Hàm lượng asiaticoside (X) của mẫu

sẽ được tính dựa vào nồng độ của

asiaticoside chuẩn thông qua diện

tích peak chuẩn và diện tích peak ghi

nhận được của mẫu theo công thức:

• K: Thể tích của dịch chiết asiaticoside ml

THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA RAU MÁ

Bảng 2.3.1.1 Thành phần hóa học có trong rau

má

Từ kết quả phân tích cho thấy: nước, cellulose, chất béo gây cản trở chiết=>xử lý: sấy 800C để tách

ẩm, dùng n-hexan

để tách béo -> lọc thô, lọc tinh

2.3.2 ASIATICOSIDE TRONG CÁC BỘ PHẬN RAU MÁ

• Asiaticoside thường tập trung

ở bộ phận nào đó nên cần khảo sát để có sự lựa chọn hợp lý

• Cân 3 g bột rau má ( thân, rễ,

lá ), dung môi chiết là methanol : nước là 75:25 , t0 chiết là t0sôi, thời gian chiết là 5h

Hình 2.3.1 Asiaticoside trong từng bộ phận

Ta thấy lá là bộ phận chứa nhiều asiaticoside nhất nên chọn lá cho các nghiên cứu sau

ẢNH HƯỞNG CỦA DUNG MÔI

Hình 2.3.3.1 Ảnh hưởng của dung môi đến

thu nhận asiaticoside

 Dung môi là yếu tố có vai trò quyết định

 Độ phân cực của dung môi, độ nhớt,

sức căng bề mặt là những yếu tố ảnh

hưởng đến quá trình chiết

 Khảo sát 3 dung môi: ethanol, methanol,

ethyl acetat với điều kiện chiết như sau:

Nhiệt độ chiết là nhiệt độ sôi của mỗi

dung môi, thời gian chiết là 5h

Kết quả: methanol chiết tốt hơn ethanol nhưng lại độc hơn nên ta chọn ethanol

2.3.3

ẢNH HƯỞNG CỦA TỈ LỆ DUNG MÔI

Như vậy độ cồn 90 là thích hợp nhất

cho quá trình chiết soxhlet

2.3.5 ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN

• Sử dụng pH để bay

hơi của nước sau đó

chiết với điều kiện:

LỰA CHỌN THÔNG SỐ ĐỂ THU HỒI ASIATICOSIDE CAO

2.3.6

Qua những thí nghiệm qui hoặch, thực nghiệm, và các thí nghiệm tại phòng thí nghiệm ta lựa chọn điều kiện chiết như sau để thu hồi asiaticoside cao nhất:

 Độ cồn 85

 Thời gian chiết 4h

 pH = 6

 Nhiệt độ 810C