Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 514:2002 áp dụng cho các loại hạt ngũ cốc như gạo, mì, ngô... cũng như các sản phẩm của ngũ cốc và quy định phép thử xác định hàm lượng đường tổng số và tinh bột bằng phương pháp Lane-Eynon.
TIÊU CHUẨN NGÀNH 10 TCN 514:2002 NGŨ CỐC - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG TỔNG SỐ VÀ TINH BỘT BẰNG PHƯƠNG PHÁP LANE-EYNON Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho loại hạt ngũ cốc gạo, mì, ngơ sản phẩm ngũ cốc quy định phép thử xác định hàm lượng đường tổng số tinh bột phương pháp Lane-Eynon Nguyên tắc Đường khử dịch thuỷ phân đường tan thuỷ phân tinh bột có khả khử Cu +2 hỗn hợp pheling Cu+ (Cu2O) khơng tan, màu đỏ Thể tích dung dịch đường khử cần thiết để khử hồn tồn thể tích định hỗn hợp pheling xác định phương pháp chuẩn độ với chất thị xanh metylen Hàm lượng tinh bột tính hàm lượng glucoza dịch thuỷ phân tinh bột nhân với hệ số chuyển đổi 0,9 Dụng cụ thiết bị - Máy nghiền phòng thí nghiệm - Rây có đường kính lỗ sàng 0,5 mm - Nồi cách thuỷ có điều chỉnh nhiệt độ tự động - Nhiệt kế - Bếp điện - Máy lắc - Cân phân tích có độ xác đến 0,0001g - Bình định mức dung tích 100, 250 500 ml - Buret đầu cong dung tích 50 ml - Pipet 5, 10, 25 50 ml - Bình tam giác dung tích 150, 250 ml - Cốc thuỷ tinh - Phễu lọc đường kính cm - Giấy lọc định lượng Thuốc thử Tất thuốc thử phải có độ phân tích Sử dụng nước cất nước có độ tinh khiết tương đương 4.1 Hỗn hợp thuốc thử pheling: Trộn hai thể tích tương đương dung dịch pheling A (4.2) pheling B (4.3) trước sử dụng 4.2 Dung dịch đồng sunfat (pheling A): Hoà tan 34,639 gam CuSO 4.5H2O nước cất định mức đến 500 ml Nếu thấy dung dịch đục lọc qua giấy lọc 4.3 Dung dịch kali-natri tactrat (pheling B): Hoà tan 173 gam KNaC 4H4O6.4H2O (muối Secnhet) 50 gam NaOH nước cất định mức đến 500 ml Để yên ngày lọc qua giấy lọc 4.4 Dung dịch thị 4.4.1 Dung dịch xanh metylen 1%: Hoà tan gam xanh methylen nước cất định mức đến 100 ml 4.4.2 Dung dịch phenolphtalein 1%: Hoà tan gam phenolphtalein 70 ml ethanol 98%, sau định mức đến 100 ml nước cất 4.5 Dung dịch chì axetat 45%: Hồ tan 225 gam Pb(CH 3COO)2.3H2O nước cất nóng, để nguội định mức đến 500 ml 4.6 Dung dịch kali oxalat 22%: Hòa tan 110 gam K 2C2O4.H2O nước cất định mức đến 500 ml 4.7 Axit clohydric đặc (d=1,19 g/ml) Dung dịch axit clohydric 5% 10% 4.8 Natri hydroxit : Dung dịch 20% dung dịch 1N 4.9 Dung dịch đường chuẩn 4.9.1 Chuẩn bị dung dịch đường chuẩn 1%: Cân xác 9,5 gam đường Saccarose tinh khiết cho vào bình định mức dung tích lít (1000 ml), thêm vào khoảng 100 ml nước cất ml axit clohydric đậm đặc Để yên dung dịch ngày nhiệt độ 20-25 oC ngày nhiệt độ 12-15oC Sau thêm nước cất đến vạch định mức Dung dịch axit hố sử dụng vài tháng 4.9.2 Trung hoà pha lỗng dung dịch đường chuẩn tới nồng độ thích hợp trước dùng tiến hành sau: Dùng pipet hút 50 ml dung dịch đường chuẩn 1% (4.9.1) cho vào bình định mức dung tích 200 ml, thêm tiếp khoảng 100 ml nước cất Dùng phenolphtalein làm chất thị, trung hoà dung dịch đường chuẩn dung dịch NaOH 1N đến xuất màu hồng Sau đó, thêm giọt dung dịch HCl 1N đến màu hồng Thêm nước cất đến vạch mức trộn 1ml dung dịch đường chuẩn ứng với 2,5 mg đường khử Chuẩn hoá, xác định hệ số pheling Lấy bình tam giác dung tích 150 ml, dùng pipet cho vào bình 10 ml hỗn hợp pheling ( 3.1), thêm tiếp 10-20 ml nước cất, lắc 5.1 Định phân sơ bộ: Thêm vào bình thứ 2-3 giọt thị xanh metylen, lắc đặt lên bếp điện có lưới amiăng, điều chỉnh nhiệt độ cho sau 1-2 phút dung dịch sơi Tiếp tục đun từ buret nhanh chóng nhỏ dung dịch đường chuẩn (4.9.2) vào bình màu xanh thị Tổng thời gian định phân khơng q phút 5.2 Định phân chính: Dựa vào số ml dịch đường tiêu hao biết trình định phân sơ ta tiến hành định phân sau: Từ buret chứa dung dịch đường chuẩn (4.9.2) nhỏ xuống bình thứ hai gần hết lượng đường chuẩn cần tiêu tốn biết thí nghiệm sơ (5.1), bớt lại 0,5-1 ml Đun sôi nhẹ phút, để mẫu sôi , thêm tiếp 2-3 giọt thị xanh metylen (chú ý tránh nhỏ vào thành bình) Tiếp tục nhỏ từ từ dung dịch đường chuẩn vào hỗn hợp sôi màu xanh thị dung dịch màu đỏ Cu 2O có từ trước thêm thị Ghi thể tích dung dịch đường chuẩn tiêu tốn q trình định phân Thơng thường thể tích 20,37 ± 0,05 ml (đối với 10 ml hỗn hợp pheling) Nếu sai khác mức cần phải kiểm tra lại thuốc thử pheling Ta có hệ số F dung dịch pheling sau: F= a x 2,5 Trong đó: a số ml dung dịch đường chuẩn tiêu tốn chuẩn độ 10ml hỗn hợp dung dịch pheling Lấy mẫu chuẩn bị mẫu 6.1 Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 5451-91 (ISO 950-1979) 6.2 Từ mẫu thử lấy theo 6.1, tiến hành nghiền khoảng 100 gam mẫu đến kích thước lọt hồn tồn qua mắt sàng 0,5 mm Xác định đường tổng số 7.1 Chuẩn bị dung dịch chiết đường tan Từ mẫu phân tích nghiền nhỏ theo mục 6.2, cân xác đến 0,1mg khoảng 2-3 gam mẫu cho vào cốc thuỷ tinh bình cầu dung tích 150 ml, thêm khoảng 50-60 ml nước cất nóng 40oC lắc máy lắc tốc độ 200 vòng/phút thời gian 15-20 phút, cần đậy nút để mẫu khỏi bắn ngồi Sau lọc cẩn thận qua giấy lọc định lượng cho tồn nước lọc vào bình định mức 100 ml Rửa phần không tan giấy lọc 2-3 lần nước cất nóng, làm nguội dung dịch thêm nước cất đến vạch định mức, trộn Dung dịch nhận phần dịch chiết đường tan mẫu thử 7.2 Thuỷ phân dung dịch chiết Dùng pipet hút xác 50 ml dịch chiết đường tan (7.1) cho vào bình tam giác dung tích 150 ml, thêm tiếp ml dung dịch HCl 10%, lắc thuỷ phân nồi cách thuỷ nhiệt độ 7080oC 30 phút, lắc mẫu Làm lạnh đến nhiệt độ phòng Sau trung hồ dung dịch NaOH 20% với thị phenolphtalein tiến hành dung dịch đường chuẩn (Xem 4.9 2) Dịch mẫu thử sau thuỷ phân trung hoà chuyển hoàn tồn vào bình định mức dung tích 200 ml Khử tạp chất có dịch mẫu cách thêm 2ml chì axetat 45%, để yên phút Nếu thấy xuất lớp chất lỏng suốt lớp cặn việc khử tạp chất xong Loại ion Pb2+ dư cách thêm 2,5 ml dung dịch kali oxalat 22% Lắc đều, để lắng kết tủa 10 phút Kiểm tra việc loại ion Pb2+ cách cho cẩn thận vài giọt kali oxalat vào thành bình, khơng thấy vẩn đục lớp chất lỏng tiếp xúc với có nghĩa loại hết ion Pb 2+ mẫu Thêm nước cất đến vạch định mức, lắc lọc qua giấy lọc định lượng Dịch lọc thu dung dịch đường khử sau thuỷ phân Dung dịch nạp vào buret có đầu cong để định phân Việc chuẩn độ tiến hành theo phương pháp chuẩn 7.3 Tiến hành chuẩn độ Khi chưa biết nồng độ đường khử dung dịch mẫu thử (7.1), trước tiên cần chuẩn độ sơ để biết pha lỗng thích hợp 7.3.1 Định phân sơ Hút xác 10ml hỗn hợp pheling (4.1) cho vào bình tam giác dung tích 150 ml Nhỏ từ buret 15 ml dung dịch đường khử mẫu thử (7.2), lắc đun đến sơi bếp điện có lưới amiăng Để sôi nhẹ 15 giây Nếu hỗn hợp mầu xanh chứng tỏ lượng đường dư, cần pha lỗng dung dịch đường khử (7.2) đến nồng độ thích hợp Nếu mầu xanh, cho thấy thuốc thử pheling chưa bị khử hoàn toàn, cần tiếp tục nhỏ dung dịch đường khử mẫu thử vào hỗn hợp sơi mầu xanh nhạt Thêm - giọt dung dịch xanh metylen tiếp tục chuẩn độ mầu xanh chất thị Ghi thể tích dung dịch đường khử ( 7.2) tiêu tốn trình chuẩn độ Tổng thời gian định phân tốt không phút 7.3.2 Định phân Dựa vào số ml dịch đường tiêu hao biết trình định phân sơ ta tiến hành định phân sau: Dùng pipet hút xác 10 ml hỗn hợp thuốc thử pheling ( 4.1) cho vào bình tam giác dung tích 150 ml, thêm tiếp 20 ml nước cất, lắc Từ buret nhỏ xuống bình tam giác gần hết lượng thể tích cần thiết dung dịch đường khử mẫu thử (7.2) biết định phân sơ bộ, bớt lại 0,5 - ml Đun đến sơi bếp điện có lưới amiăng Để sơi nhẹ 15 giây nhanh chóng thêm dung dịch đường mẫu thử mầu xanh nhạt Sau thêm - giọt xanh metylen hoàn thành việc chuẩn độ cách nhỏ tiếp dung địch đường đến mầu xanh chất thị Ghi tổng thể tích dung dịch đường khử mẫu thử tiêu tốn trình chuẩn độ 7.3.3 Tính tốn kết Hàm lượng đường tổng số tính % khối lượng (X 1) tính theo cơng thức: Trong đó: F hệ số tương ứng dung dịch pheling V1 thể tích dịch chiết đường tan , tính ml V2 thể tích dịch chiết đường khử sau thuỷ phân, tính ml V0 thể tích dịch chiết đường tan đem thuỷ phân axit, tính ml T tổng thể tích dịch dung dịch đường khử dùng để chuẩn độ 10ml hỗn hợp pheling, tính ml m khối lượng mẫu thử, tính g Kết phép thử hệ số trung bình lần xác định song song tính đến số lẻ thứ hai sau dấu phẩy Sự sai khác giá trị hai lần phân tích song song không phép vượt 0,5% Xác định tinh bột 8.1 Thuỷ phân tinh bột Cân xác đến 0,1mg từ 1-2 g mẫu thử chuẩn bị theo 6.2 Tiến hành chiết rút lượng đường tan nước cất nóng theo 7.1 Khẽ chọc thủng giấy lọc chuyển hồn tồn phần khơng tan phễu vào bình tam giác hay bình cầu dung tích 150 ml 50 ml dung dich HCl 5% Đậy kín bình nút cao su có lắp ống sinh hàn hồi lưu đun cách thuỷ hỗn hợp 34 Thử thuỷ phân hoàn toàn dung dịch iot Làm nguội, trung hoà hỗn hợp dung dịch NaOH 20% với thị phenolphtalein, sau chuyển hồn tồn hỗn hợp vào bình định mức 250 ml, kết tủa tạp chất dung dịch chì axetat 45% loại bỏ ion Pb 2+ dư dung dịch kali oxalat 22% ( xem 7.2) Định mức đến 250 ml nước cất Lắc lọc qua giấy lọc định lượng Dịch lọc thu dung dịch đường khử sau thuỷ phân tinh bột 8.2 Tiến hành chuẩn độ Khi chưa biết nồng độ đường khử dung dịch thuỷ phân tinh bột, trước tiên cần chuẩn độ sơ để biết pha lỗng thích hợp Việc chuẩn độ tiến hành theo phương pháp chuẩn 8.2.1 Định phân sơ Tiến hành tương tự 7.3.1 8.2.2 Định phân Dùng pipet hút xác 10 ml hỗn hợp pheling (4.1) cho vào bình tam giác dung tích 150 ml, thêm tiếp 20 ml nước cất, lắc Từ buret nhỏ xuống bình tam giác gần hết lượng đường khử cần thiết biết định phân sơ bộ, bớt lại 0,5-1ml Đun nóng đến sơi nhẹ bếp điện có lưới amiăng Để sơi 15 giây nhanh chóng thêm tiếp dung dịch màu xanh nhạt Sau thêm 2-3 giọt xanh metylen hồn thành việc chuẩn độ cách nhỏ tiếp dung dịch đường khử màu xanh thị Ghi tổng thể tích dung dịch đường khử mẫu thử tiêu tốn trình chuẩn độ Tổng thời gian chuẩn độ tốt không phút 8.3 Tính kết Hàm lượng tinh bột tính % khối lượng (X2) tính theo cơng thức: Trong đó: F hệ số pheling V tổng thể tích dung dịch sau thuỷ phân, tính ml T tổng thể tích dung dịch đường khử mẫu thử dã dùng để chuẩn độ l0 ml hỗn hợp pheling, tính ml m khối lượng mẫu thử, tính g 0,9 hệ số chuyển đổi đường glucoza tinh bột Kết phép thử hệ số trung bình hai lần xác định song song biểu thị đến số lẻ thứ sau dấu phẩy Sự sai khác giá trị hai lần phân tích song song khơng phép vượt q 0,5% ... đường chuẩn tiêu tốn chuẩn độ 10ml hỗn hợp dung dịch pheling Lấy mẫu chuẩn bị mẫu 6.1 Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 5451-91 (ISO 950-1979) 6.2 Từ mẫu thử lấy theo 6.1, tiến hành nghiền khoảng 100 ... đường chuẩn vào hỗn hợp sôi màu xanh thị dung dịch màu đỏ Cu 2O có từ trước thêm thị Ghi thể tích dung dịch đường chuẩn tiêu tốn q trình định phân Thơng thường thể tích 20,37 ± 0,05 ml (đối với 10. .. Dung dịch đường chuẩn 4.9.1 Chuẩn bị dung dịch đường chuẩn 1%: Cân xác 9,5 gam đường Saccarose tinh khiết cho vào bình định mức dung tích lít (100 0 ml), thêm vào khoảng 100 ml nước cất ml axit clohydric