Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8099-4:2009 - ISO 8968-4:2001 trình bày về sữa - xác định hàm lượng nitơ - phần 4: phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein trong sữa nguyên chất hoặc sữa gầy dạng lỏng.
TIÊU CHUẨN QUÓC GIA TCVN 8099-4 : 2009 ISO 8968-4 : 2001 SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 4: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ PHI PROTEIN Milk - Determination of nitrogen content - Part 4: Determination of non-protein-nitrogen content Lời nói đầu TCVN 8099-4 : 2009 hoàn toàn tương đương với ISO 8968-4 : 2001; TCVN 8099-4 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 8099 (ISO 8968), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ, gồm phần sau đây: - TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl; - TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 2: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp Macro); - TCVN 8099-3 : 2009 (ISO 8968-3 : 2004), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 3: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp thông dụng nhanh Semi-macro); - TCVN 8099-4 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 4: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein; - TCVN 8099-5 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 5: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ protein SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 4: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ PHI PROTEIN Milk - Determination of nitrogen content - Part 4: Determination of non-protein-nitrogen content CẢNH BÁO - Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy dịnh trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein sữa nguyên chất sữa gầy dạng lỏng Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl; TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 2: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp Macro); Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng nitơ phi protein (non-protein-nitrogen content) Phần khối lượng nitơ xác định phương pháp quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Hàm lượng nitơ phi protein biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Protein phần mẫu thử kết tủa cách bổ sung dung dịch axit tricloaxetic cho nồng độ cuối axit tricloaxetic hỗn hợp khoảng 12 % Protein sữa kết tủa lọc dịch lọc lại có chứa thành phần nitơ phi protein Hàm lượng nitơ dịch lọc xác định phương pháp quy định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) CHÚ THÍCH Khi hàm lượng nitơ tổng số mẫu sữa xác định được, hàm lượng nitơ protein tính theo chênh lệch hàm lượng nitơ tổng số hàm lượng nitơ protein Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích, nước cất nước loại khống nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác Các thuốc thử quy định để xác định hàm lượng nitơ tổng số nêu TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) thuốc thử sau Phòng thử nghiệm định sử dụng phương pháp quy định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) 5.1 Dung dịch axit tricloaxetic (CCl3COOH) Hòa tan 15,0 g axit tricloaxetic nước bình định mức vạch dung tích 100 ml Thêm nước đến vạch Không sử dụng nồng độ lượng axit tricloaxetic khác với quy định Khi sử dụng nồng độ lượng axit tricloaxetic khác với quy định giá trị trung bình hiệu phòng thử nghiệm khác 5.2 Dung dịch axit clohydric thể tích chuẩn, c(HCl) = (0,1 ± 0,0001) mol/l Khuyến cáo vật liệu có bán sẵn cần nhà sản xuất chuẩn hóa trước để đáp ứng cao u cầu CHÚ THÍCH Thơng thường sai số hệ thống (mà tránh được) người phân tích gây pha lỗng dung dịch axit gốc đậm đặc xác định độ mol, giảm độ tái lập phương pháp Người phân tích khơng nên sử dụng dung dịch để chuẩn độ có nồng độ cao 0,01 mol/l, làm giảm tổng thể tích chuẩn độ mẫu tăng độ khơng xác đọc buret Điều ảnh hưởng xấu đến độ lặp lại độ tái lập phương pháp Khi dùng axit khác (ví dụ axit sulfuric) thay cho axit clohydric phát sinh sai số Do đó, khơng khuyến cáo sử dụng chất thay Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị phòng thử nghiệm thông thường với thiết bị, dụng cụ quy định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2), tùy thuộc vào phương pháp chọn cụ thể sau: 6.1 Nồi cách thủy, trì 38 oC ± oC 6.2 Bình nón, dung tích 125 ml 6.3 Pipet, dung tích 10 ml 20 ml 6.4 Phễu lọc, thủy tinh, đường kính 75 cm 6.5 Giấy lọc, khơng chứa nitơ, đường kính 15 cm (ví dụ: Whatman số 11) loại tương đương 6.6 Cốc có mỏ, dung tích 50 ml Lấy mẫu Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình, vận chuyển bảo quản Chuẩn bị mẫu thử Làm ấm mẫu thử nồi cách thủy (6.1) để 38 oC Trộn kỹ mẫu thử cách nhẹ nhàng cách đảo chiều chai đựng mẫu mà không tạo bọt Làm nguội mẫu đến nhiệt độ phòng trước cân phần mẫu thử (9.1) Cách tiến hành 9.1 Phần mẫu thử Dùng pipet lấy 10 ml ± 0,1 ml mẫu thử chuẩn bị (Điều 8) cho vào bình nón (6.2) cân xác đến 0,1 mg, cân lại xác đến 0,1 mg CHÚ THÍCH Trong Phụ lục A TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) có đưa cỡ mẫu sản phẩm khác sữa áp dụng phương pháp 9.2 Tiến hành xác định 9.2.1 Kết tủa lọc Dùng pipet lấy 40 ml ± 0,5 ml dung dịch axit tricloaxetic (5.1) cho vào bình nón có chứa phần mẫu thử (9.1) Cân bình với phần mẫu thử xác đến 0,1 mg Xoay bình để trộn lượng chứa bên Để yên cho kết tủa lắng xuống Lọc lượng chứa bình nón qua giấy lọc (6.5) phễu lọc (6.4) Thu lấy toàn dịch lọc vào bình nón (6.2) khơ Dịch lọc phải khơng có kết tủa Nếu khơng, cần lặp lại quy trình tạo phần kết tủa lọc với phần mẫu thử Nếu phép thử giống hệt thực lặp lại, mẫu thử phải thực hai quy trình tạo kết tủa lọc riêng rẽ 9.2.2 Chuẩn bị dịch lọc Xoay bình nón (9.2.1) để trộn kỹ lượng chứa bên Dùng pipet lấy 20 ml dịch lọc cho vào cốc có mỏ (6.6) dung tích 50 ml cân Rót phần dịch lọc có mỏ sang bình Kjeldahl ống phân hủy có chứa chất trợ sơi, kali sulfat dung dịch đồng (II) sulfat quy định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) Cân cốc khơng chứa mẫu, xác đến 0,1 mg Phòng thử nghiệm chọn TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) để sử dụng 9.2.3 Phân hủy chưng cất Thêm lượng thích hợp axit sulfuric vào bình Kjedahl ống phân hủy tiếp tục thực quy trình phân hủy chưng cất theo TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 89682) 9.2.4 Chuẩn độ Whatman ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn ISO khơng ấn định phải sử dụng sản phẩm Chuẩn độ amoniac giải phóng cách sử dụng quy trình quy định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2), thay axit clohydric 0,1 mol/l dung dịch axit clohydric 0,01 mol/l (5.2) 9.3 Phép thử trắng Phân hủy, chưng cất chuẩn độ mẫu trắng gồm khoảng 0,1 g sacaroza 16 ml ± 0,5 ml dung dịch axit tricloaxetic (5.1) Luôn chuẩn độ mẫu trắng loại thuốc thử thiết bị sử dụng phần mẫu thử Tiến hành thử mẫu trắng theo TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) Thay mẫu thử 16 ml ± 0,5 ml dung dịch axit tricloaxetic (5.1) 0,1 g sacaroza Ghi lại giá trị thử trắng Nếu giá trị phép thử trắng thay đổi phải tìm ngun nhân 10 Tính biểu thị kết 10.1 Tính hàm lượng nitơ 10.1.1 Tính hàm lượng nitơ mẫu thử, wNp , sử dụng công thức sau đây: wnp 1,4007(Vs Vb ) M r m f mm /(mt 0,065mm ) wnp hàm lượng nitơ phi protein (NPN) mẫu, tính phần trăm khối lượng (%); Vs thể tích dung dịch axit clohydric (5.1) dùng phép xác định, xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Vb thể tích dung dịch axit clohydric (5.1) dùng phép thử trắng, xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Mr nồng độ mol/l axit clohydric (5.1), lấy xác đến bốn chữ số thập phân; mf khối lượng 20 ml dịch lọc (9.2.2), cân xác đến bốn chữ số thập phân; mm khối lượng phần mẫu thử (9.1), cân xác đến 0,1 mg, tính gam (g); mt khối lượng phần mẫu thử có bổ sung 40 ml dung dịch axit tricloaxetic (9.2.1), cân xác đến 0,1 mg, tính gam (g); 0,065 hệ số dựa giả sử sữa chứa hàm lượng chất béo khoảng 3,5 % protein đích thực 3,0 % (như 0,035 + 0,030 =0,065) CHÚ THÍCH Hệ số 0,065 mẫu số cần điều chỉnh sản phẩm sữa phân tích có dạng lỏng với thành phần khác (ví dụ: sản phẩm sữa nguyên chất sữa gầy sữa đặc) 10.2 Biểu thị kết xác đến bốn chữ số thập phân, cầu để tính toán Đối với kết cuối cùng, biểu thị hàm lượng nitơ phi protein thu đến ba chữ số thập phân hàm lượng phi protein đến hai chữ số thập phân Khơng làm tròn kết thu tính giá trị cuối phép thử CHÚ THÍCH Điều đặc biệt giá trị sử dụng để tính tốn tiếp Một ví dụ giá trị thử nghiệm riêng lẻ thu từ phép phân tích nhiều mẫu dùng để tính tốn thống kê thực phương pháp độ lệch phòng phòng thử nghiệm Một ví dụ khác giá trị sử dụng làm chuẩn để hiệu chuẩn thiết bị (ví dụ: máy phân tích sữa dùng tia hồng ngoại) có giá trị từ nhiều mẫu sử dụng tính tốn đơn giản hồi qui bội số Khi giá trị thu khơng làm tròn trước dùng để tính tốn 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các giá trị giới hạn lặp lại giới hạn tái lập thu từ kết phép thử liên phòng thử nghiệm phù hợp với ISO 57252 Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử độc lập, đơn lẻ thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt 0,0025 % hàm lượng NPN 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp vượt 0,0052 % hàm lượng NPN 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết thử; - kết thử nghiệm thu được; - thỏa mãn yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu - thỏa mãn yêu cầu độ thu hồi nêu kết cuối thu ISO 5725:1986 (hiện bị hủy) sử dụng để lấy liệu độ chụm ... nitơ tổng số nêu TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) thuốc thử sau Phòng thử nghiệm định sử dụng phương pháp quy định TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) 5.1 Dung dịch... (II) sulfat quy định TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) Cân cốc khơng chứa mẫu, xác đến 0,1 mg Phòng thử nghiệm chọn TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) để sử dụng 9.2.3... chưng cất theo TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 89682) 9.2.4 Chuẩn độ Whatman ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn ISO khơng ấn định