Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8099-5:2009 - ISO 8968-5:2001

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8099-5:2009 - ISO 8968-5:2001. Tiêu chuẩn về Sữa - xác định hàm lượng nitơ - phần 5: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ protein. Mời các bạn cùng tham khảo.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8099-5 : 2009 ISO 8968-5 : 2001 SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 5: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ PROTEIN Milk - Determination of nitrogen content - Part 5: Determination of protein-nitrogen content Lời nói đầu TCVN 8099-5 : 2009 hoàn toàn tương đương với ISO 8968-5 : 2001 TCVN 8099-5 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 8099 (ISO 8968), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ, gồm phần sau đây: - TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl; - TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 2: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp Macro); - TCVN 8099-3 : 2009 (ISO 8968-3 : 2004), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 3: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp thông dụng nhanh Semi-macro); - TCVN 8099-4 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 4: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein; - TCVN 8099-5 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 5: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ protein SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 5: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ PROTEIN Milk - Determination of nitrogen content - Part 5: Determination of protein-nitrogen content CẢNH BÁO - Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn qui định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp xác định hàm lượng nitơ protein sữa nguyên chất sữa gầy dạng lỏng Phương pháp gián tiếp để tính tốn mô tả tiêu chuẩn Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 2: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp Macro) TCVN 8099-4 : 2009 (ISO 8968-4 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 4: Xác định hàm lượng nitơ phi protein 3 Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng nitơ protein (protein-nitrogen content) Phần khối lượng nitơ xác định phương pháp qui định tiêu chuẩn trực tiếp gián tiếp CHÚ THÍCH: Hàm lượng nitơ protein biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Protein phần mẫu thử kết tủa cách bổ sung dung dịch axit tricloaxetic cho nồng độ cuối axit tricloaxetic hỗn hợp khoảng 12 % Lọc để tách kết tủa protein (kết tủa chứa hàm lượng nitơ phi protein) Hàm lượng nitơ protein dịch lọc xác định phương pháp qui định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích, nước cất nước loại khống nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có qui định khác Các thuốc thử qui định để xác định hàm lượng nitơ tổng số nêu TCVN 8099 - (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) thuốc thử sau Phòng thử nghiệm định phương pháp sử dụng 5.1 Dung dịch axit tricloaxetic (CCl3COOH) Hòa tan 15,0 g axit tricloaxetic nước bình định mức vạch dung tích 100 ml Thêm nước đến vạch Không sử dụng nồng độ lượng axit tricloaxetic khác với qui định Khi sử dụng nồng độ lượng axit tricloaxetic khác với qui định giá trị trung bình hiệu phòng thử nghiệm khác 5.2 Dung dịch axit clohydric thể tích chuẩn, c(HCl) = (0,1 ± 0,0005) mol/l Khuyến cáo vật liệu có bán sẵn cần nhà sản xuất chuẩn hóa trước để đáp ứng cao yêu cầu Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị phòng thử nghiệm thơng thường với thiết bị, dụng cụ qui định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) cụ thể sau: 6.1 Nồi cách thủy, trì 38 0C ± 0C 6.2 Pipet, dung tích ml 6.3 Phễu lọc, thủy tinh, đường kính 75 cm 6.4 Giấy lọc, khơng chứa nitơ, đường kính 15 cm (ví dụ: giấy Whatman số 11)) loại tương đương 6.5 Pipet tự động bơm pittông, phân phối 10 ml Lấy mẫu Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Chuẩn bị mẫu thử Làm ấm mẫu thử nồi cách thủy (6.1) để 38 0C Trộn kỹ mẫu thử cách nhẹ nhàng cách đảo chiều chai đựng mẫu mà khơng tạo bọt Làm nguội mẫu đến nhiệt độ phòng trước cân phần mẫu thử (9.1) 1) Whatman ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thông tin tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn ISO không ấn định phải sử dụng sản phẩm 9 Cách tiến hành 9.1 Phần mẫu thử Dùng pipet lấy 5,0 ml ± 0,1 ml mẫu thử chuẩn bị (Điều 8) cho vào bình Kjeldahl ống phân hủy khơ, cân xác đến 0,1 mg Cân mẫu thử xác đến 0,1 mg Thêm 5,0 ml ± 0,1 ml nước vào bình ống, tráng hết phần mẫu thử dính cổ bình ống CHÚ THÍCH 1: Có thể sử dụng bình Kjeldahl ống phân hủy tùy thuộc vào phương pháp chọn CHÚ THÍCH 2: Trong Phụ lục A TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) có đưa cỡ mẫu sản phẩm khác sữa áp dụng phương pháp 9.2 Phương pháp xác định trực tiếp 9.2.1 Kết tủa lọc Dùng pipet lấy 40 ml ± 0,5 ml dung dịch axit tricloaxetic (5.1) cho vào bình Kjeldahl ống phân hủy có chứa phần mẫu thử (9.1) xoay bình để trộn lượng chứa bên Để yên cho kết tủa lắng xuống Lọc lượng chứa bình nón qua giấy lọc (6.4) phễu lọc (6.3) Thu lấy toàn dịch lọc vào bình nón khơ Một số phần kết tủa sót lại bình Kjeldahl ống phân hủy số nằm giấy lọc Không cần thiết phải lấy tồn phần kết tủa khỏi bình ống phân hủy Ngay sau rót xong hỗn hợp không để phần kết tủa bị khơ lại cổ bình ống, dùng pipet tự động (6.5) bổ sung 10 ml axit tricloaxetic (5.1) Dùng dung dịch để tráng rửa hết kết tủa dính lại cổ bình ống phân hủy Xoay bình để trộn kỹ lượng chứa bên bình Rót hết lượng chứa bình ống qua giấy lọc Cho phần dịch lọc vào phần dịch lọc thu trước đựng bình nón Sau tráng cổ bình ống 10 ml dung dịch axit tricloaxetic xoay bình để trộn Rót lượng chứa bình ống lần thứ ba qua loại giấy lọc, cho phần dịch lọc vào phần thu trước đựng bình nón Dịch lọc thu phải khơng có kết tủa Tại giai đoạn dịch lọc không cần thiết loại bỏ theo cách thích hợp Nếu phép thử giống hệt thực lặp lại, mẫu thử phải thực hai qui trình tạo kết tủa lọc riêng rẽ 9.2.2 Chuẩn bị dịch lọc Mang găng tay nhấc cẩn thận giấy lọc khỏi phễu lọc gấp kín giấy lọc chứa phần kết tủa Nếu sót lại kết tủa bên bên ngồi miệng bình Kjeldahl ống phân hủy dùng giấy lọc gấp để lau kết tủa thả giấy lọc vào bình Kjeldahl ống phân hủy 9.2.3 Phân hủy chưng cất Thêm lượng thích hợp chất trợ sơi, kali sulfat, dung dịch đồng xúc tác axit sulfuric vào bình Kjeldahl ống phân hủy tiếp tục thực qui trình phân hủy chưng cất theo TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) Phòng thử nghiệm chọn phương pháp qui định TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001) TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001) để sử dụng 9.2.4 Phép thử trắng Tiến hành phép thử trắng, lấy giấy lọc (6.4) rửa dung dịch axit tricloaxetic (5.1) thay cho phần mẫu thử mô tả 9.2.1 tiến hành theo 9.2.3 Luôn chuẩn độ mẫu trắng loại thuốc thử sử dụng thiết bị sử dụng phần mẫu thử Ghi lại giá trị thử trắng Nếu giá trị phép thử trắng thay đổi phải tìm nguyên nhân 9.3 Phương pháp gián tiếp Cách khác, hàm lượng nitơ protein mẫu thử tính phương pháp xác định gián tiếp cổ điển Lấy hàm lượng nitơ tổng số xác định phương pháp qui định TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2) trừ hàm lượng nitơ phi protein mẫu thử xác định phương pháp qui định TCVN 8099-4 (ISO 8968-4) Kết thu hàm lượng nitơ protein nhân với 6,38 cho hàm lượng protein thực 10 Tính biểu thị kết 10.1 Tính hàm lượng nitơ 10.1.1 Tính hàm lượng nitơ mẫu thử, wpn, theo công thức sau đây: wpn = 1,4007( V s V b ) x M r m wpn hàm lượng nitơ protein mẫu, tính phần trăm khối lượng (%); Vs thể tích dung dịch axit clohydric (5.2) dùng phép xác định, xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Vb thể tích dung dịch axit clohydric (5.2) dùng phép thử trắng, xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Mr nồng độ mol/l axit clohydric (5.2), lấy xác đến bốn chữ số thập phân; m khối lượng phần mẫu thử (9.1), cân xác đến 0,1 mg, tính gam (g) 10.1.2 Biểu thị kết xác đến bốn chữ số thập phân, cần để tính tốn Đối với kết cuối cùng, biểu thị hàm lượng nitơ protein thu đến ba chữ số thập phân hàm lượng protein đến hai chữ số thập phân Khơng làm tròn kết thu tính giá trị cuối phép thử CHÚ THÍCH: Điều đặc biệt giá trị sử dụng để tính tốn tiếp Một ví dụ giá trị thử nghiệm riêng lẻ thu từ phép thử phân tích nhiều mẫu dùng để tính tốn thống kê thực phương pháp độ lệch phòng phòng thử nghiệm Một ví dụ khác giá trị sử dụng làm chuẩn để hiệu chuẩn thiết bị (ví dụ: máy phân tích sữa dùng tia hồng ngoại) có giá trị từ nhiều mẫu sử dụng tính tốn đơn giản hồi qui bội số Khi giá trị thu khơng làm tròn trước dùng để tính tốn 10.2 Tính hàm lượng protein thực 10.2.1 Tính hàm lượng protein thực mẫu thử, w p, theo công thức sau đây: wp = wpn x 6,38 wp hàm lượng protein thực, tính phần trăm khối lượng (%); wpn hàm lượng nitơ protein mẫu thử, tính phần trăm khối lượng lấy đến bốn chữ số thập phân (10.1) (%) 6,38 hệ số để chuyển đổi nitơ thành protein thực 10.2.2 Biểu thị kết xác đến bốn chữ số thập phân, cần để tính tốn Đối với kết cuối (xem 10.1), biểu thị kết đến hai chữ số thập phân 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các giá trị giới hạn lặp lại giới hạn tái lập thu từ kết phép thử liên phòng thử nghiệm phù hợp với ISO 57252 Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp đưa [5] [6] Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu 11.2 Độ lặp lại ISO 5725:1986 (hiện bị hủy bỏ) sử dụng để lấy liệu độ chụm Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử độc lập, đơn lẻ thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt 0,0038 % hàm lượng nitơ protein (0,024 % hàm lượng protein thực) 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp vượt 0,0092 % hàm lượng nitơ protein (0,059 % hàm lượng protein thực) 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn TCVN 8099-1 (ISO 8968-1) TCVN 8099-2 (ISO 8968-2); - chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy chọn cố mà ảnh hưởng đến kết thử; - kết thử nghiệm thu được; - thỏa mãn yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu - thỏa mãn yêu cầu độ thu hồi nêu kết cuối thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] ISO 5725 : 1986 Precision of test method - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter - Laboratory test (đã hủy) [3] TCVN 6910-1 : 2001 (ISO 5725-1 : 1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Các định nghĩa nguyên tắc chung [4] TCVN 6910-2 : 2001 (ISO 5725-2 : 1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp để xác định độ lặp lại độ tái lặp phương pháp đo tiêu chuẩn [5] AOAC International, Official Method of Analysis, 16 th edn., 1995, Method 991.20, 991.21, 999.22 and 991.23 [6] BARBANO, D.M and LYNCH, J.M Direct and indirec determination of true protein content in milk by Kjeldahl analysis: Collaborative study J Assoc Off Anal Chem., 74, 1991, pp 281-288  ... chưng cất theo TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) Phòng thử nghiệm chọn phương pháp qui định TCVN 809 9-1 : 2009 (ISO 896 8-1 : 2001) TCVN 809 9-2 : 2009 (ISO 896 8-2 : 2001) để sử... định phương pháp qui định TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ) trừ hàm lượng nitơ phi protein mẫu thử xác định phương pháp qui định TCVN 809 9-4 (ISO 896 8-4 ) Kết thu hàm lượng nitơ... ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn TCVN 809 9-1 (ISO 896 8-1 ) TCVN 809 9-2 (ISO 896 8-2 ); - chi