Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8099-1:2009 - ISO 8968-1:2001. Tiêu chuẩn về Sữa - xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng nitơ trong sữa nguyên chất hoặc sữa gầy dạng lỏng theo nguyên tắc Kjeldhal.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8099-1 : 2009 ISO 8968-1 : 2001 SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL Milk - Determination of nitrogen content Part 1: Kjeldahl method Lời nói đầu TCVN 8099-1 : 2009 hoàn toàn tương đương ISO 8968-1 : 2001; TCVN 8099-1 : 2009 Ban kỹ thuật Tiêu chuẩn TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 8099 (ISO 8968) Sữa - Xác định hàm lượng nitơ, gồm phần sau đây: - TCVN 8099-1 : 2009 (ISO 8968-1 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 1: Phương pháp Kjeldahl; - TCVN 8099-2 : 2009 (ISO 8968-2 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 2: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp Macro); - TCVN 8099-3 : 2009 (ISO 8968-3 : 2004), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 3: Phương pháp phân hủy kín (Phương pháp thông dụng nhanh Semi-macro); - TCVN 8099-4 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 4: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ - Phần 4: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein; - TCVN 8099-5 : 2009 (ISO 8968-3 : 2001), Sữa - Xác định hàm lượng nitơ - Phần 5: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ - Phần 5: Phương pháp xác định hàm lượng nitơ phi protein SỮA XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL Milk - Determination of nitrogen content - Part 1: Kjeldahl method CẢNH BÁO - Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng nitơ sữa nguyên chất sữa gầy dạng lỏng theo nguyên tắc Kjeldhal Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 7149-1 (ISO 385-1), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Burret - Phần 1: Yêu cầu chung Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng nitơ (nitrogen content) Phần khối lượng nittơ xác định phương pháp quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Hàm lượng nitơ biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Phần mẫu thử phân hủy hỗn hợp axit sulfuric đậm đặc kali sulfat, đồng (II) sulfat dùng làm chất xúc tác để chuyển nitơ hữu có mặt amoni sulfat Kali sulfat để tăng điểm sôi axit sulfuric tạo hỗn hợp oxi hóa mạnh cho việc phân hủy Bổ sung lượng dư natri hydroxit vào dung dịch phân hủy nguội để giải phóng amoniac Amoniac giải phóng chưng cất dung dịch axit boric dư sau dung dịch chuẩn độ axit clohydric Hàm lượng nitơ tính từ lượng amoniac tạo thành Thuốc thử vật liệu Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước cất nước loại khống nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 5.1 Kali sulfat (K2SO4), không chứa nitơ 5.2 Dung dịch đồng (II) sulfat, c(CuSO4) = 5,0 g/100 ml Hòa tan 5,0 đồng (II) sulfat ngậm năm phân tử nước (CuSO 4.5H2O) nước đựng bình định mức vạch dung tích 100 ml Pha lỗng nước đến vạch trộn 5.3 Axit sulfuric (H2SO4), 95 % đến 98 % phần khối lượng, không chứa nitơ ( 1,84 g/ml) 20 = 5.4 Dung dịch natri hydroxit (NaOH), không chứa nitơ, chứa 50 g natri hydroxit 100 g dung dịch 5.5 Dung dịch chất thị Hòa tan 0,1 g đỏ metyl etanol 95 % (thể tích) Pha lỗng đến 50 ml etanol Hòa tan 0,5 g xanh bromocresol etanol 95 % (thể tích) Pha lỗng đến 250 ml etanol Trộn phần dung dịch đỏ metyl với năm phần dung dịch xanh bromocresol gộp trộn tất phần hai dung dịch 5.6 Dung dịch axit boric, c(H3BO3) = 40,0 g/l Hòa tan 40,0 g axit boric l nước nóng đựng bình định mức vạch dung tích 1000 ml Để bình định mức dung dịch nguội đến 20 0C Pha loãng nước đến vạch, thêm ml dung dịch chất thị (5.5) trộn Bảo quản dung dịch chai thủy tinh borosilicat, dung dịch có màu cam nhạt Trong trình bảo quản dung dịch cần tránh ánh sáng nguồn amoniac Nếu việc chuẩn độ có dùng máy đo pH điện tử khơng cần phải bổ sung dung dịch chất thị vào dung dịch axit boric Mặt khác, đổi màu dùng để kiểm tra quy trình chuẩn độ 5.7 Dung dịch axit clohydric thể tích chuẩn, c(HCl) = (0,1 ± 0,0005) mol/l Khuyến cáo vật liệu có bán sẵn cần nhà sản xuất chuẩn hóa trước để đáp ứng cao yêu cầu CHÚ THÍCH Thơng thường sai số hệ thống (mà tránh được) người phân tích gây pha loãng dung dịch axit gốc đậm đặc xác định độ mol, giảm độ tái lập phương pháp Người phân tích khơng nên sử dụng dung dịch để chuẩn độ có nồng độ cao 0,1 mol/l, làm giảm tổng thể tích chuẩn độ mẫu tăng độ khơng xác đọc burret Điều ảnh hưởng xấu đến độ lặp lại độ tái lập phương pháp Khi dùng axit khác (ví dụ axit sulfuric) thay cho axit clohydric phát sinh sai số Do đó, khơng khuyến cáo sử dụng chất thay 5.8 Amoni sulfat, [(NH4)2SO4], tối thiểu 99,9 % (khối lượng) theo chất khô Ngay trước sử dụng, sấy khô amoni sulfat 102 0C ± 0C không h Để nguội tủ hút ẩm nhiệt độ phòng 5.9 Tryptophan (C11H12N2O2) lysin hydro clorua (C6H15ClN2O2), tối thiểu 99 % (khối lượng) Không sấy khô thuốc thử tủ sấy trước sử dụng 5.10 Sacaroza, có chứa hàm lượng nitơ khơng 0,002 % (khối lượng) Không sấy khô sacaroza tủ sấy trước sử dụng Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 6.1 Nồi cách thủy, trì 38 0C ± 0C 6.2 Bình Kjeldahl, dung tích 500 ml 800 ml 6.3 Cân phân tích, cân xác đến 0,1 mg 6.4 Chất trợ sơi, ví dụ như: đá bọt đỏ, bụi kẽm, mảnh sứ cứng hạt alundum (ví dụ: carbarundum), lưỡng tính có độ tinh khiết cao, có cỡ mesh 10 Khơng sử dụng lại chất trợ sơi dùng CHÚ THÍCH Đơi viên thủy tinh có đường kính khoảng mm sử dụng, không khuyến cáo hiệu sôi không đạt sử dụng hạt alundum sử dụng viên thủy tinh tạo bọt nhiều trình phân hủy 6.5 Buret pipet tự động, phân phối lượng 1,0 ml dung dịch đồng sulfat (5.2) 6.6 Ống đong chia độ, dung tích 50 ml, 100 ml 500 ml 6.7 Thiết bị phân hủy, giữ bình Kjeldahl (6.2) theo tư nghiêng (khoảng 45 0), có phận gia nhiệt điện đầu đốt khí mà khơng đốt bình cao q mức lượng chứa bình có hệ thống hút khói Nguồn nhiệt điều chỉnh để kiểm soát nhiệt độ tối đa gia nhiệt sử dụng trình phân hủy Làm nóng sơ nguồn nhiệt gia nhiệt để ước lượng Q trình làm nóng sơ phải 10 gia nhiệt sử dụng khí 30 gia nhiệt dùng điện Đối với loại gia nhiệt, xác định việc cài đặt gia nhiệt cho khoảng từ đến làm sôi 250 ml nước với đến 10 hạt trợ sơi có nhiệt độ ban đầu 25 0C Việc cài đặt nhiệt tối đa sử dụng suốt trình phân hủy 6.8 Thiết bị chưng cất, làm thủy tinh borosilicat vật liệu thích hợp khác phù hợp với bình Kjeldahl (6.2) gồm có phận chống bắn tung tóe nối với ngưng có ống phía thẳng ống gắn với đầu thấp Ống nối nắp đậy phải khít chặt tốt làm neopren 6.9 Bình nón, dung tích 500 ml, chia vạch mức 200 ml 6.10 Buret, dung tích 50 ml, chia vạch 0,01 ml, phù hợp với yêu cầu loại A TCVN 7149-1 (ISO 385-1) Cách khác, sử dụng buret tự động đáp ứng yêu cầu 6.11 Bộ chuẩn độ tự động có gắn máy đo pH Máy đo pH cần hiệu chuẩn xác dải pH từ đến theo quy trình hiệu chuẩn pH phòng thử nghiệm thơng thường Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Chuẩn bị mẫu thử Làm ấm mẫu thử nồi cách thủy (6.1) 38 0C Trộn kỹ mẫu thử cách nhẹ nhàng cách đảo chiều chai đựng mẫu mà khơng tạo bọt Làm nguội mẫu đến nhiệt độ phòng trước cân phần mẫu thử (9.1) CHÚ THÍCH Trong Phụ lục A đưa cỡ mẫu sản phẩm khác sữa áp dụng phương pháp Cách tiến hành 9.1 Phần mẫu thử xử lý sơ Cho vào bình Kjeldahl khơ từ đến 10 viên trợ sôi (6.4), 15,0 g kali sulfat (5.1), 1,0 ml dung dịch đồng (II) sulfat (5.2), khoảng ml ± 0,1 ml mẫu thử chuẩn bị (Điều 8) cân xác đến 0,1 mg 25 ml axit sulfuric (5.3) Dùng axit sulfuric để rửa đồng (II) sulfat, kali sulfat mẫu thử dính lại cổ bình cho trơi hết xuống bình Nếu chất phân hủy sót lại cổ bình dùng nước để tráng Trộn nhẹ lượng chứa bình Kjeldahl CHÚ THÍCH Trong Phụ lục A đưa cỡ mẫu sản phẩm khác sữa áp dụng phương pháp 9.2 Tiến hành xác định 9.2.1 Phân hủy Bật hệ thống hút khói thiết bị phân hủy (6.7) trước bắt đầu phân hủy Làm nóng bình Kjeldahl với lượng chứa bên (9.1) thiết bị phân hủy, sử dụng cài đặt nhiệt đủ thấp để đốt phân hủy mà không làm bọt trào lên cổ bình Kjeldahl Phân hủy nhiệt độ cài đặt có khói trắng xuất bình sau khoảng 20 Tăng nhiệt đến nửa nhiệt độ cài đặt tối đa xác định 6.7 tiếp tục đốt nóng 15 Sau 15 min, tăng đến nhiệt độ tối đa cài đặt Sau dịch thủy phân (có màu lục lam) tiếp tục đun h đến 1,5 h nhiệt độ tối đa cài đặt Nếu dung dịch khơng sơi cài đặt nhiệt thấp Tổng thời gian phân hủy nằm khoảng từ 1,8 h đến 2,25 h Để xác định thời gian sôi đặc trưng yêu cầu điều kiện phân tích phòng thử nghiệm, sử dụng dụng cụ cụ thể, chọn mẫu sữa có hàm lượng protein cao, chất béo cao xác định hàm lượng protein dùng khoảng thời gian sôi khác (1 h đến 1,5 h) sau làm Kết trung bình protein tăng theo thời gian sôi giảm thời gian sôi dài Chọn thời gian sôi để thu protein tối đa Tại thời điểm kết thúc phân hủy, dịch phân hủy phải không chứa vật liệu chưa phân hủy Để dịch phân hủy nguội đến nhiệt độ phòng bình cầu mở nắp để tủ hốt riêng rẽ khoảng 25 Nếu bình cầu để bếp để làm nguội phải khoảng thời gian dài để đạt nhiệt độ phòng Dịch phân hủy phải dạng lỏng có kết tủa đáy bình sau làm nguội 25 Không để qua đêm dịch phân hủy chưa pha lỗng bình cầu Dịch phân hủy chưa pha lỗng có kết tinh giai đoạn khó để đưa kết tinh trở lại trạng thái lỏng CHÚ THÍCH Việc kết tinh nhiều sau 25 thất thoát axit q mức q trình phân hủy cho kết thử nghiệm thấp Việc thất thoát axit mức hút khói mạnh thời gian phân hủy dài từ việc cài đặt nhiệt độ tối đa gia nhiệt không Thêm 300 ml nước vào bình Kjeldahl dung tích 500 ml 400 ml nước dùng bình Kjeldahl dung tích 800 ml Dùng nước để tráng rửa cổ bình Trộn kỹ lượng chứa bình để hòa tan phần kết tinh Thêm đến 10 viên trợ sôi (6.4) Để cho hỗn hợp nguội trở lại đến nhiệt độ phòng trước chưng cất Dịch phân hủy pha lỗng đậy kín lại giữ lúc để chưng cất 9.2.2 Chưng cất Bật ngưng tụ nước thiết bị chưng cất (6.8) Thêm 75 ml dung dịch natri hydroxit (5.4) vào dịch phân hủy pha lỗng (9.2.1) cách rót cẩn thận xuống cổ bình Kjeldahl nghiêng để tạo lớp đáy bầu bình Cần có lớp phân cách rõ hai dung dịch Để giảm khả thất thoát amoniac, sau bổ sung dung dịch natri hydroxit vào bình Kjeldahl nối bình vào thiết bị chưng cất (6.8) Đầu ống ngưng ngập 50 ml dung dịch axit boric (5.6) đựng bình nón (6.9) Xốy mạnh bình Kjeldahl để trộn kỹ lượng chứa bình khơng thấy lớp phân cách dung dịch bình Đặt bình bếp, bật bếp để nhiệt độ đủ cao để làm sôi hỗn hợp Tiếp tục chưng cất bắt đầu sôi không sau tháo bình Kjeldahl tắt bếp Tắt ngưng Tráng phía phía đầu ống ngưng nước, thu lấy nước rửa cho vào bình nón trộn Tốc độ chưng cất phải cho thu 150 ml dịch phân hủy trước bắt đầu sơi khơng Tổng thể tích bình nón phải khoảng 200 ml Nếu lượng dịch phân hủy thu nhỏ 150 ml dùng lượng 300 ml nước để pha lỗng dịch phân hủy Bình ngưng phải giữ nhiệt độ dung dịch bình nón khơng vượt q 35 0C trình chưng cất sử dụng phương pháp so màu điểm kết thúc 9.2.3 Chuẩn độ Dùng buret (6.5) chuẩn độ lượng chứa bình nón (9.2.2) axit clohydric (5.7) Điểm kết thúc đạt dung dịch có vết màu hồng Đọc buret xác đến 0,05 ml Khi sử dụng máy khuấy từ nên rọi sáng giúp cho việc nhìn thấy điểm kết thúc Cách khác, chuẩn độ lượng chứa bình nón (9.2.2) axit clohydric (5.7) sử dụng máy chuẩn độ tự động hiệu chuẩn có gắn máy đo pH (6.11) Điểm kết thúc chuẩn độ đạt 4,6 điểm uốn đường chuẩn độ (điểm uốn) Đọc máy chuẩn độ tự động lượng chất chuẩn độ sử dụng CHÚ THÍCH Vết hồng quan sát pH 4,3 4,6 hệ thống chất thị dung dịch axit boric % quy định phương pháp Thực tế, tốc độ thay đổi pH phụ thuộc vào HCl 0,1 mol/l thêm vào nhanh dải pH Trong hệ thống khoảng 0,05 ml dung dịch HCl 0,1 mol/l thay đổi 0,3 đơn vị pH dải pH từ 4,3 đến 4,6 CHÚ THÍCH Các thống kê thực phòng thử nghiệm phòng thử nghiệm phương pháp xác định sử dụng điểm kết thúc chuẩn độ màu So sánh kết thử nghiệm cuối cùng, kể kết phép thử trắng thu với điểm kết thúc pH 4,6 với điểm kết thúc chuẩn độ màu cho thấy khơng có chênh lệch đáng kể 9.3 Phép thử trắng Luôn chuẩn độ mẫu trắng axit clohydric (5.7) dùng buret (6.5) máy chuẩn độ tự động có gắn máy đo pH (6.11) sử dụng phần mẫu thử Tiến hành thử mẫu trắng theo quy trình 9.1 đến 9.2.3 Thay phần mẫu thử ml nước khoảng 0,85 g sacaroza (5.10) Ghi lại giá trị thử trắng Nếu giá trị phép thử trắng thay đổi phải tìm nguyên nhân CHÚ THÍCH Mục đích việc sử dụng sacaroza phép thử trắng chuẩn thu hồi để đóng vai trò chất hữu để tiêu thụ lượng axit sulfuric trình phân hủy tương đương với phần mẫu thử Nếu lượng axit sulfuric tự sót lại điểm kết thúc phân hủy thấp độ thu hồi nitơ hai phép thử độ thu hồi 9.4.2 9.4.3 thấp Tuy nhiên, lượng axit lại có mặt giai đoạn cuối phân hủy đủ để giữ tất nitơ, điều kiện nhiệt độ thời gian q trình phân hủy khơng đủ để giải phóng tất nitơ khỏi mẫu, độ thu hồi nitơ 9.4.2 chấp nhận độ thu hồi nitơ 9.4.3 thấp Lượng chất chuẩn độ sử dụng phép thử trắng phải luôn lớn Các phép thử trắng phòng thử nghiệm cần quán theo thời gian Các giá trị mẫu trắng điển hình thấp 0,2 ml CHÚ THÍCH Nếu mẫu trắng có màu hồng trước bắt đầu chuẩn độ có sai sót Thơng thường trường hợp bình nón khơng nước từ khơng khí ẩm ngưng tụ mặt dụng cụ ngưng chảy vào bình ngưng gây nhiễm bẩn 9.4 Các phép thử độ thu hồi 9.4.1 Độ quy trình cần kiểm tra thường xuyên phép thử độ thu hồi sau đây, tiến hành theo 9.1 đến 9.2.3 9.4.2 Kiểm tra để chắn nitơ khơng bị thất cách sử dụng phần mẫu thử 0,12 g amoni sulfat (5.8) với 0,85 g sacaroza (5.10) CHÚ THÍCH Kiểm tra độ thu hồi amoni sulfat không cho thông tin khả phân hủy để giải phóng nitơ liên kết cấu trúc protein Phần trăm nitơ thu hồi phải khoảng 99,0 % 100 % tất vị trí thiết bị Đối với độ thu hồi nhỏ 99 % nồng độ chất chuẩn độ cao giá trị nêu thất nitơ q trình phân hủy chưng cất Có thể sử dụng hỗn hợp amoni sulfat lượng nhỏ axit sulfuric (lượng lại cuối giai đoạn phân hủy) bình Kjeldahl Pha lỗng tiếp lượng nước thêm lượng natri hydroxit chưng cất Nếu độ thu hồi nitơ thấp việc thất nitơ thiết bị chưng cất trình phân hủy Khả ống nối hệ thống cổ truyền bị hở chưng cất đầu tip ngưng không ngập axit boric Cần kiểm tra thiết bị quy trình 9.4.3 trước kiểm tra độ thu hồi Khi độ thu hồi nitơ vượt 100 % khơng có việc thất nitơ, mà có số nguyên nhân sau: a) amoni sulfat bị nhiễm bẩn; b) nồng độ thực chất chuẩn độ thấp so với giá trị nêu; c) việc hiệu chuẩn buret để chuẩn độ có sai sót; d) nhiệt độ chất chuẩn độ cao so với nhiệt độ hiệu chuẩn buret; e) tốc độ chuẩn độ buret vượt tốc độ tối đa buret hiệu chuẩn 9.4.3 Kiểm tra hiệu quy trình phân hủy cách sử dụng 0,16 g lysin hydro clorua 0,18 g tryptophan (5.9) với 0,67 g sacaroza (5.10) Ít 98 % nitơ phải thu hồi Nếu độ thu hồi thấp 98 %, sau thu hồi từ 99 % đến 100 % amoni sulfat, nhiệt độ thời gian phân hủy chưa đủ (thực quy trình 9.2.1, đoạn thích) có vật liệu chưa phân hủy hết (nghĩa hóa than) bình Kjeldahl Đánh giá cuối tính thực tốt có tham gia vào chương trình thử nghiệm thành thạo, thơng số thống kê phòng thử nghiệm phòng thử nghiệm ước tính dựa phân tích mẫu sữa 9.4.4 Các kết thấp phép thử độ thu hồi (hoặc cao 100 % 9.4.2) cho thấy có sai sót quy trình và/hoặc nồng độ dung dịch axit clohydric (5.7) khơng 10 Tính biểu thị kết 10.1 Tính hàm lượng nitơ 10.1.1 Tính hàm lượng nitơ mẫu thử, wN, sử dụng công thức sau đây: wN = 1,4007( Vs Vb ) x M r m wN hàm lượng nitơ mẫu, tính phần trăm khối lượng (%); Vs thể tích dung dịch axit clohydric (5.7) dùng phép xác định (9.2.3), xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Vb thể tích dung dịch axit clohydric (5.7) dùng phép thử trắng, xác đến 0,05 ml, tính mililít (ml); Mr nồng độ mol/l axit clohydric (5.7), lấy xác đến bốn chữ số thập phân; m khối lượng phần mẫu thử (9.1), cân xác đến 0,1 mg, tính gam (g) 10.1.2 Biểu thị kết xác đến bốn chữ số thập phân, cần để tính tốn Đối với kết cuối cùng, biểu thị hàm lượng nitơ đến ba chữ số thập phân hàm lượng protein đến hai chữ số thập phân Khơng làm tròn kết thu tính giá trị cuối phép thử CHÚ THÍCH Điều đặc biệt giá trị sử dụng để tính tốn tiếp Một ví dụ giá trị thử nghiệm riêng lẻ thu từ phép thử phân tích nhiều mẫu dùng để tính tốn thống kê thực phương pháp độ lệch phòng phòng thử nghiệm Một ví dụ khác giá trị sử dụng làm chuẩn để hiệu chuẩn thiết bị (ví dụ: máy phân tích sữa dùng tia hồng ngoại) có giá trị từ nhiều mẫu sử dụng tính tốn đơn giản hồi qui bội số Khi giá trị thu khơng làm tròn trước dùng để tính tốn 10.2 Tính hàm lượng protein thơ 10.2.1 Tính hàm lượng protein thô mẫu thử, wp, sử dụng công thức sau đây: wp = wN x 6,38 wp hàm lượng protein thơ, tính phần trăm khối lượng (%); wN hàm lượng nitơ mẫu thử, tính phần trăm khối lượng lấy đến bốn chữ số thập phân (10.1) (%) 6,38 hệ số để chuyển đổi nitơ thành protein thô 10.2.2 Báo cáo kết thu protein thô đến ba chữ số thập phân, cần để tính tốn tiếp Đối với kết cuối (10.1) biểu thị kết đến hai chữ số thập phân 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các giá trị giới hạn lặp lại giới hạn tái lập thu từ kết phép thử liên phòng thử nghiệm phù hợp với ISO 57251) Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp đưa [5], [6] Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử nghiệm độc lập, đơn lẻ thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt 0,006 % hàm lượng nitơ (0,038 % hàm lượng protein thô) 1) ISO 5725 : 1986 (hiện hủy bỏ) sử dụng để thu số liệu độ chụm 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử nghiệm đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp vượt 0,0077 % hàm lượng nitơ (0,049 % hàm lượng protein thô) 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết thử; - kết thử nghiệm thu được; - thỏa mãn yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu được; - thỏa mãn yêu cầu độ thu hồi nêu kết cuồi thu PHỤ LỤC A (Tham khảo) QUY TRÌNH CẢI BIẾN ĐỂ PHÂN TÍCH CÁC SẢN PHẨM SỮA KHÁC KHI KHƠNG CĨ TIÊU CHUẨN RIÊNG CHO SẢN PHẨM ĐÓ A.1 Yêu cầu chung Quy trình mơ tả tiêu chuẩn tối ưu hóa hiệu thực phương pháp đánh giá cho việc phân tích sữa bò Nếu khơng có tiêu chuẩn cụ thể hành phòng thử nghiệm sử dụng quy trình với sửa đổi nhỏ, để xác định hàm lượng nitơ sản phẩm sữa Tuy nhiên, cần lưu ý quy trình tính thực việc sử dụng chưa đánh giá hiệu lực A.2 Cách tiến hành Từ mẫu đại diện chuẩn bị trên, cân lấy lượng mẫu thử u cầu, xác đến 0,1 g theo mơ tả Tiến hành xác định hàm lượng nitơ sử dụng phương pháp quy định 9.1 đến 9.4 Các lượng axit sulfuric (5.3) dung dịch natri hydroxit (5.4) dùng để phân hủy chưng cất không thay đổi Việc thay đổi tỷ lệ axit với thành phần khác cách tăng lượng axit làm giảm điểm sôi ban đầu hỗn hợp phân hủy điều nên tránh Cần sử dụng cỡ mẫu thích hợp làm việc với thuốc thử quy định tiêu chuẩn Phần mẫu thử thích hợp mẫu thử ước lượng sau Lượng protein tối ưu bình Kjeldahl phải từ 0,15 g đến 0,30 g bình tất mẫu thử Do đó, trung bình mẫu phomat Cheddar chứa 24,00 % protein, khối lượng phần mẫu thử cần khoảng từ 0,0625 g đến 1,25 g Việc định sử dụng khối lượng phần mẫu thử lượng trung bình điểm cuối thấp dải điểm cuối cao dải, tùy thuộc vào có lượng axit tiêu thụ trình phân hủy thành phần mẫu (nghĩa chất béo cacbohydrat) lại Phương pháp mô tả việc bổ sung 25 ml (khoảng 46 g) axit sulfuric vào phần mẫu thử bình Kjeldahl Ở cuối giai đoạn phân hủy, cần có khoảng 15 g axit sulfuric lại để giữ tất nitơ Cần lưu ý axit sulfuric tiêu tốn cho phần mẫu thử bị thất thoát bay q trình phân hủy Lượng thất bay lượng tiêu tốn cho chất hữu phần mẫu thử Lượng axit lại cuối phụ thuộc vào hai trình Việc thất nhiều axit bay (do hút khói q mạnh q trình phân hủy cổ bình bị q nóng) làm cho lượng axit nhỏ sót lại cuối giai đoạn phân hủy cho dù cỡ mẫu Chỉ lượng nhỏ axit lại làm kết tinh dịch phân hủy sau làm nguội 25 độ thu hồi nitơ thu thấp Cream chứa 40 % chất béo ví dụ sản phẩm gặp khó khăn Trong trường hợp hàm lượng nitơ protein mẫu thấp hàm lượng chất béo cao Giả sử mẫu cream trung bình chứa 40 % chất béo, 1,9 % protein 2,9 % lactoza Để đạt 0,15 g protein Kjeldahl (6.2), cần sử dụng phần mẫu thử 7,89 g Phần mẫu thử chứa 3,16 g chất béo lượng mẫu tiêu tốn 56,9 g (khoảng 30,9 ml) axit sulfuric phân hủy mà không bị thất thoát axit sulfuric bay (dựa vào giả sử g chất béo tiêu tốn 18 g axit sulfuric suốt trình phân hủy) Đây ví dụ lượng mẫu thử cần phải giảm để có lượng đủ axit sulfuric giữ lại phân hủy Trong trường hợp mẫu thử cream, cần sử dụng chất chuẩn độ có nồng độ thấp (ví dụ: 0,01 mol/l) Trong trường hợp lượng mẫu thử cần phải giảm để có đủ lượng axit sulfuric lại cuối giai đoạn phân hủy Lượng sacaroza yêu cầu phép thử trắng tiêu chuẩn độ thu hồi sản phẩm sữa bò xác định sau: Trước tiên, phải ước lượng hàm lượng gần chất béo, protein cacbohydrat loại mẫu thử khoảng khối lượng phần mẫu thử sử dụng phân hủy Thứ hai, trình phân hủy g chất béo tiêu tốn khoảng 18 g axit sulfuric, g protein tiêu tốn khoảng g axit sulfuric g cacbohydrat tiêu tốn khoảng g axit sulfuric Dựa vào thông tin đây, tính lượng axit tiêu tốn phần mẫu thử lượng sacaroza yêu cầu để tiêu tốn lượng axit trình phân hủy Lượng sacaroza tính cần sử dụng phép thử trắng tiêu chuẩn thu hồi amoni sulfat Đối với tiêu chuẩn thu hồi nitơ axit amin (9.4.3), giảm lượng sacaroza lượng axit mà tiêu tốn (tính theo protein) lysin hydro clorua tryptophan Giả sử độ thu hồi nitơ phân hủy thiết bị sử dụng cho mẫu thử khơng phải sữa, khơng có thực nghiệm độ thu hồi để xây dựng điều kiện để đạt mức dư tương tự axit sulfuric điểm cuối phân hủy THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] ISO 5725 : 1986 Precision of test method of Determination of repetability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory test (đã hủy) [3] TCVN 6910-1 : 2001 (ISO 5725-1 : 1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Các định nghĩa nguyên tắc chung [4] TCVN 6910-2 : 2001 (ISO 5725-2 : 1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp để xác định độ lặp lại độ tái lặp phương pháp đo tiêu chuẩn [5] BANO, D.M, CLARK, J.L., C.E and FLEMING, J.R Kjeldahl method for determination of total nitrogen content of milk: Collaborative study J Assoc Off Anal Chem., 73, 1990, pp 849-859 [6] LYNCH, J.M, BARBANO, D.M and FLEMING, J.R Performance evaluation of direct forced-air total solids and Kjeldahl total nitrogen method: 1990 through 1995 J Assoc Off Anal Chem., 80, 1997, pp 1038-1043 ... inter-laboratory test (đã hủy) [3] TCVN 691 0-1 : 2001 (ISO 572 5-1 : 1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Các định nghĩa nguyên tắc chung [4] TCVN 691 0-2 : 2001 (ISO 572 5-2 ... rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn. .. loại A TCVN 714 9-1 (ISO 38 5-1 ) Cách khác, sử dụng buret tự động đáp ứng yêu cầu 6.11 Bộ chuẩn độ tự động có gắn máy đo pH Máy đo pH cần hiệu chuẩn xác dải pH từ đến theo quy trình hiệu chuẩn pH