Giá trị của QF-PCR trong chẩn đoán nhanh trước sinh rối loạn số lượng nhiễm sắc thể

Bài viết đề cập đến lệch bội là nguyên nhân quan trọng gây ra sẩy thai và dị tật bẩm sinh. QF-PCR là kỹ thuật mới trong chẩn đoán trước sinh nhằm phát hiện và can thiệp sớm thai bị các bất thường này. Nội dung nghiên cứu với mục tiêu khảo sát giá trị của kỹ thuật QF-PCR trong chẩn đoán nhanh trước sinh các rối loạn số lượng nhiễm sắc thể.

YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc GIÁ TRỊ CỦA QF-PCR TRONG CHẨN ĐỐN NHANH TRƯỚC SINH RỐI LOẠN SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Nguyễn Khắc Hân Hoan*, Phùng Như Toàn*, Quách Thị Hoàng Oanh*, Trần Nguyễn An Phú*, Nguyễn Thị Như Hoàng* Đặt vấn đề: Lệch bội nguyên nhân quan trọng gây sẩy thai dị tật bẩm sinh QF-PCR kỹ thuật chẩn đoán trước sinh nhằm phát can thiệp sớm thai bị bất thường Mục tiêu: Khảo sát giá trị kỹ thuật QF-PCR chẩn đoán nhanh trước sinh rối loạn số lượng nhiễm sắc thể Đối tượng phương pháp: Các trường hợp thai có nguy cao bị rối loạn nhiễm sắc thể đãđược tầm soát phát qua tiền sinh dị tật bẩm sinh, xét nghiệm siêu âm chọc ối chẩn đoán trước sinh nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y kỹ thuật QF-PCR so sánh kết với kỹ thuật tiêu chuẩn vàng karyotype Kết quả: Trong số 400 thai chẩn đốn trước sinh có 36 thai mang rối loạn nhiễm sắc thể (36/400; 9,0%) Kết có tỉ lệ tương hợp 100% với kết karyotype QF-PCR cóđộ nhạy 100% (36/36), độ đặc hiệu 100% (364/364), giá trị tiên đoán dương 100% (36/36) giá trị tiên đoán âm 100% (364/364) Có trường hợp thể khảm (46,XX/45,XO 46,XX/47,XX,+21) QF-PCR cho tín hiệu bất thường khơng thể kết luận QF-PCR phát trường hợp trisomy không biểu chất cấu trúc chúng 46,XX,-13,+t(13;13) 46,XX,dup(18) Thời gian để thu nhận kết từ kỹ thuật QF-PCR trung bình 48 Kết luận: QF-PCR kỹ thuật chẩn đoán nhanh, đáng tin cậy chẩn đoán trước sinh rối loạn số lượng nhiễm sắc thể hạn chế chẩn đốn thể khảm bất thường cấu trúc; đó, cần định thêm kỹ thuật karyotype cho trường hợp Từ khóa: QF-PCR, rối loạn nhiễm sắc thể, chẩn đoán trước sinh, trisomy ABSTRACT VALUES OF QF-PCR IN FAST PRENATAL DIAGNOSIS OF CHROMOSOME DISORDERS Nguyen Khac Han Hoan, Phung Nhu Toan, Quach Thi Hoang Oanh, Tran Nguyen An Phu, Nguyen Thi Nhu Hoang * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - No - 2013: 149 - 156 Introduction: Aneuploidy is an important issue causing miscarriage and congenital abnormalities QFPCR is a new method in prenatal diagnosis of those disorders Objective: To evaluate the values of QF-PCR in fast prenatal diagnosis of chromosome disorders Method: Pregnancies detected at high risk of chromosome disorders via history of congenital abnormalities or biochemistry and ultrasound screening were performed amniocentesis and analysed chromosome 13, 18, 21, X and Y with QF-PCR and compared to gold standard karyotype Result: 400 pregnancies were diagnosed in which 36 fetuses are affected with chromosome disorder (36/400; 9.0%) Results from QF-PCR were 100% concordant with karyotype The sensitivity, specificity, negative predictive value and positive predictive value were 100% (36/36), 100% (364/364), 100% (36/36) and 100% (364/364), respectively There were two mosaicsm cases including 46,XX/45,XO and 46,XX/47,XX,+21 which were inconclusive with QF-PCR Two trisomy cases detected by QF-PCR were 46,XX,-13,+t(13;13) and 46,XX,dup(18) Average turn around time of QF-PCR was 48 hours Conclusion: QF-PCR is a fast and reliable * Khoa Xét nghiệm Di truyền Y học, Bệnh viện Từ Dũ Tác giả liên lạc:TS.Nguyễn Khắc Hân Hoan ĐT: 0918182834 , Email: drhoan@gmail.com 149 NghiêncứuYhọc YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 method in prenatal diagnosis of chromosome disorders but limited in detecting mosaicsm and structural abnormalities Karyotype is necessary in such cases Keywords: QF-PCR, chromosome disorder,prenatal diagnosis, trisomy ĐẶTVẤNĐỀ Đối tượng Bất thường nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân gây dị tật bẩm sinh, chậm phát triển tâm thần, thể chất, rối loạn giới tính sẩy thai tự nhiên Trong đó, phổ biến trisomy 21 (hội chứng Down), trisomy 18 (hội chứng Edward), trisomy 13 (hội chứng Patau) bất thường NST giới tính hội chứng Turner (45,XO), hội chứng Klinefelter (47,XXY) Bất thường số lượng NST thường tăng theo tuổi thai phụ lỗi không phân ly NST trình tạo giao tử dẫn đến thừa thiếu NST(9) Đối tượng chọn mẫu thai phụ đến khám thai Bệnh viện Từ Dũ định xét nghiệm karyotype tế bào ối để CĐTS thai có nguy cao bị rối loạn số lượng NST 21, 13, 18 NST giới tính nhiều yếu tố sau: tiền sử sinh bị bất thường nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y dị tật bẩm sinh; siêu âm có dấu hiệu lệch bội NST có dị tật bẩm sinh; xét nghiệm sàng lọc trước sinh cho kết nguy cao Việc chẩn đoán trước sinh (CĐTS) bất thường NST kỹ thuật nuôi cấy tế bào ối lập karyotype đãđược thực từ năm 1966 nhiều công thời gian Kỹ thuật FISH có suất nhiều cơng khảo sát nhanh NST 13, 18, 21, X, Y Gần đây, phương pháp di truyền phân tử QF-PCR (quantitative fluorescent polymerase chain reaction) đãđược phát triển để chẩn đoán nhanh bất thường NST cách khảo sát vàđịnh lượng trình tự STR (short tandem repeat) đặc trưng NST cặp mồi huỳnh quang(1) Phương pháp cho kết nhanh vòng 48 giờ, cóđộ nhạy vàđộ đặc hiệu cao, với ưu điểm bật suất cao giá thành thấp Mục tiêu nghiên cứu Khảo sát giá trị phương pháp QF-PCR Bệnh phẩm 10ml dịch ối chọc hút hướng dẫn siêu âm thai 16 – 22 tuần Bệnh phẩm đạt chất lượng quan sát mắt thường không thấy lẫn máu chia thành phần: 8ml dùng để lập karyotype tế bào ối 2ml dùng để ly trích DNA thực kỹ thuật QF-PCR Nuôi cấy tế bào ối lập karyotype Tế bào dịch ối nuôi cấy mơi trường Amniomax có bổ sung FBS (Gibco, Life Technologies, Mỹ) điều kiện 370C, 5% CO2 Sau – 10 ngày, thu hoạch tế bào Demecolcine, trypsin EDTA 1/125 NaCl 0,9% Tế bào sau thu hoạch cố định Carnoy, chuẩn bị tiêu bản, nhuộm GTGbanding phân tích hệ thống Metasystem sử dụng phần mềm Ikaros (MetaSystems, Đức) Ít 20 cụm NST phân tích xếp karyotype theo hướng dẫn Hiệp hội Di truyền tế bào lâm sàng (2,16) Sau 14 – 21 ngày, kết karyotype ghi nhận so sánh với kết từ QF-PCR chẩn đốn trước sinh nhiễm sắc thể 13, Ly trích DNA thực QF-PCR 18, 21, giới tính từ mẫu dịch ối DNA ly trích từ tế bào dịch ối phương pháp cột lọc sử dụng QIAamp DNA mini blood kit (Qiagen GmbH, Hilden, Đức) DNA sau cô lập đánh giá nồng độ vàđộ tinh máy Biophotometer Plus (Eppendorf GmbH, Hamburg, Đức) với bước ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu test chẩn đoán 150 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc sóng 260/280nm lưu trữ 40C trước thực QF-PCR -300C sau phân tích kết quả(15) Kỹ thuật QF-PCR dựa nguyên lý giai đoạn sớm phản ứng PCR, đó, khối lượng DNA tạo từ alen locus STR tỉ lệ thuận với khối lượng DNA đích mẫu ban đầu Vì thế, sản phẩm STR đặc hiệu NST phân tách đoạn cho đỉnh huỳnh quang với tỉ số chiều cao đỉnh 1:1 trường hợp dị hợp tử cho đỉnh huỳnh quang trường hợp đồng hợp tử Đối với trường hợp trisomy, NST biểu đỉnh huỳnh quang với tỉ số 1:1:1 (trisomy alen) biểu đỉnh với tỉ số 2:1 1:2 (trisomy alen) (hình 1)(6,13) Hình 1.Biểu diễn kết phân tích số lượng NST kỹ thuật QF-PCR 720C x 30 phút 26 chu kỳ; 720C x 30 phút Xét nghiệm QF-PCR thực Sản phẩm PCR lưu trữ 40C kit Devyser Complete (Devyser AB, Stockholm, Thụy Điển) Mỗi mẫu khảo sát lúc 32 locus STR đặc hiệu cho NST 13, 18, 21, X, Y chứa hỗn hợp PCR (bảng 1)(8) Sự diện locus 18D hỗn hợp PCR nhằm kiểm tra khả nhầm lẫn mẫu Locus T1 T3 dùng để so sánh số lượng NST X với NST NST 1,5ul sản phẩm PCR trộn với 14,5 uL Hi-Di Formamide, 0,5 ul GeneScan 600 Liz Size Standard điện di phân tách đoạn hệ thống giải trình tự ABI 3500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, Mỹ) Kết điện di phân tích phần mềm GeneMarker 1.85 (SoftGenetics, State College, PA, Mỹ) dựa vào tiêu chuẩn xác định số lượng NST Hướng dẫn thực hành tốt QF-PCR Hội di truyền tế bào lâm sàng (ACC) Hội di truyền phân tử lâm sàng (CMGS) (3) Sau 48 thực hiện, kết QF-PCR tất mẫu nghiên cứu so sánh với kết karyotype tương ứng Phản ứng QF-PCR bao gồm 20ul hỗn hợp PCR 5ul DNA (3ng/ul) chứa ống 0,2ml PCR thành mỏng sử dụng máy luân nhiệt Master Cycler Pro (Eppendorf GmbH, Hamburg, Đức) với chu trình luân nhiệt: 950C x 15 phút; 940C x 30 giây + 580C x 90 giây + Bảng Các locus đặc hiệu NST xét nghiệm QF-PCR sử dụng kit Devyser Complete Kí hiệu 13A 13B 13C 13D Locus Vị trí NST Độ dài (bp) Hỗn hợp PCR (14 locus) D13S742 13q12.12 232-327 D13S634 13q21.32 365-435 D13S628 13q31.3 425-474 D13S305 13q13.3 435-505 Màu Lục Xanh Vàng Lục Kí hiệu Locus Vị trí NST Độ dài (bp) 21G D21S1446 21q22.3 430-490 21H D21S1442 21q21.3 362-420 21J D21S2055 21q22.2 385-485 X1 DXS1187 Xq26.2 120-170 X2 DXS981 Xq13.1 262-300 Màu Lục Vàng Xanh Lục Lục 151 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc Kí hiệu Locus Vị trí NST Độ dài (bp) 13K D13S1492 13q21.1 113-185 18B D18S978 18q12.3 195-230 18C D18S535 18q12.3 300-350 18D* D18S386 18q22.1 338-430 18M GATA178F11 18p11.32 350-410 18P D18S1364 18q22.1 130-205 21A D21S1435 21q21.3 150-208 21B D21S11 21q21.1 215-290 21C D21S1411 21q22.3 245-345 21D D21S1444 21q22.13 440-495 Hỗn hợp PCR (19 locus) 13E D13S800 13q22.1 180-230 13F D13S252 13q12.2 255-320 18D* D18S386 18q22.1 338-430 18G D18S1002 18q11.2 325-380 18J D18S976 18p11.31 430-487 Màu Vàng Vàng Xanh Lục Vàng Lục Xanh Xanh Vàng Xanh Vàng Xanh Lục Xanh Vàng KẾTQUẢ Từ tháng 9/2010 đến tháng 12/2012, có tổng cộng 400 mẫu dịch ối 398 thai phụ đơn thai trường hợp song thai chọn làm bệnh phẩm nghiên cứu Tuổi thai chọc ối 16 – 25 tuần, đó, trường hợp thai 16 – 18 tuần chiếm 68,5% (274/400) Tuổi thai phụ chọc ối 19 – 46 tuổi, trung bình 31,5 tuổi, tuổi từ 35 trở lên chiếm 33,1% (132/399) Nơi cư ngụ thai phụ trải khắp 37 tỉnh - thành phố, đó, thành phố Hồ Chí Minh chiếm 36,3% Tất thai phụ định chọc ối để CĐTS thai có nguy cao rối loạn NST Trong đó, thai kỳ có nguy cao ≥ 1/250 phát qua xét nghiệm sàng lọc quý (double test combined test) qua xét nghiệm sàng lọc quý (triple test) chiếm tỉ lệ 54,8% (219/400) Các trường hợp thai kỳ có bất thường hình thái học có dấu hiệu lệch bội NST siêu âm khe mơi, chẻ vòm, bất sản xương mũi xương mũi ngắn, dị tật tim, dãn não thất, chân khoèo, nang vùng cổ, thoát vị rốn, xương đùi ngắn, đa ối chiếm 36,5% (146/400) Trong 400 mẫu nghiên cứu, có 396 mẫu ghi nhận kết QF-PCR vòng 48 giờ, mẫu ghi nhận kết sau tuần phải thực 152 Kí hiệu X3 X9 XY2 Locus Vị trí NST Độ dài (bp) Màu XHPRT Xq26.2-26.3 265-308 Vàng Xq27.1-q27.2 DXS2390 312-357 Vàng DXYS267 Xq21.31 175-217 Xanh Yp11.31 XY3 DXYS218 Xp22.33 215-260 Lục Yp11.32 AMEL AMELX Xp22.2 X = 104 Xanh AMELY Yp11.2 Y = 110 ZFYX ZFY Yp11.31 151-160 Vàng ZFX Xp22.11 SRY SRY Yp11.31 233 Xanh T1 7q34 = 179 Lục Xq13 X = 200 T3 3p24.2 = 133 Xanh Xq21.1 X = 137 18D* để kiểm tra nhầm lẫn mẫu hỗn hợp PCR thêm công đoạn nuôi cấy tế bào ối để loại trừ nhiễm máu mẹ mẫu kết luận số lượng NST Có 36/400 trường hợp (9,0%) cho kết bất thường với trisomy 21 chiếm 2,8% (11/400), trisomy 18 chiếm 2,5% (10/400), trisomy 13 chiếm 1,5% (6/400) monosomy X chiếm 0,5% (2/400) (bảng 2) Hai mẫu cho kết QF-PCR bất thường kết luận số lượng NST gồm trường hợp không kết luận số lượng NST 21 trường hợp không kết luận số lượng NST X (bảng 2) Khi đối chiếu với kết karyotype, trường hợp thứ có dạng trisomy 21 thể khảm 46,XX/47,XX,+21 với tỉ số 3:1 Trường hợp thứ hai thực kỹ thuật karyotype mẫu bị nhiễm nấm q trình ni cấy tế bào ối nên kỹ thuật FISH sử dụng để khảo sát với kết monosomy X thể khảm 46,XX/45,X0 với tỉ số 2:3 (hình 2) Mức độ tương hợp kết QF-PCR kết karyotype đạt 100% Tuy nhiên, QFPCR biểu chất cấu trúc NST trường hợp trisomy gồm trường hợp trisomy 18 NST 18 bị nhân đôi (46,XX,dup(18)) trường hợp trisomy 13 chuyển đoạn hòa nhập tâm (46,XX,13,+t(13;13)) (bảng 2) YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc Hình Kết QF-PCR trường hợp trisomy 21 thể khảm 46,XX/47,XX,+21 Các locus 21G, 21J, 21H có dạng alen không đạt tỉ số 1:1:1; 1:2 2:1 Bảng 2.Sự tương hợp kết xét nghiệm QF-PCR karyotype Karyotype Kết Số lượng 364 Kết Số lượng 364 46,XY 46,XX 201 163 36 Disomy,XY Disomy,XX 201 163 36 47,XY,+13 47,XX,+13 46,XX,-13,+t(13;13) 47,XY,+18 47,XX,+18 46,XX,dup(18) 47,XY,+21 47,XX,+21 45,XO 47,XXX 47,XXY 69,XXX 1 T13,XY T13,XX T18,XY T18,XX 5 T21,XY T21,XX Monosomy X XXX XXY Triploidy, XXX 1 Bình thường Bất thường Trisomy 13 Trisomy 18 Trisomy 21 Monosomy X Trisomy X Klinefelter Triploidy QF-PCR Tỉ lệ % tương hợp 100 100 153 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc Khảm Karyotype Kết 69,XXY FISH: 46,XX/45,XO, tỉ lệ 2:3 46,XX/47,XX,+21, tỉ lệ 3:1 Tổng Có mẫu bị ngoại nhiễm DNA mẹ phát QF-PCR với hình ảnh đỉnh cóđộ cao khơng Tổng độ cao tín hiệu thấp với tín hiệu cao tất locus có đỉnh Sau tuần nuôi cấy tế bào ối Số lượng 1 400 QF-PCR Kết Triploidy, XXY Không kết luận Số lượng Tỉ lệ % tương hợp 400 để loại trừ máu mẹ, mẫu tế bào thu hoạch, ly trích DNA thực lại xét nghiệm QF-PCR hình ảnh nhiễm DNA mẹ khơng (hình 3) Hình Kết QF-PCR mẫu dịch ối nhiễm DNA mẹ trước (trái) sau (phải) nuôi cấy tế bào ối để loại trừ máu mẹ BÀNLUẬN thai phụ định chọc ối xét Trong nghiên cứu này, đa số thai phụ nghiệm sàng lọc quý quý thai kỳ chọc ối chẩn đốn rối loạn NST cóđộ tuổi cho kết nguy cao ≥ 1/250 có bất 35 tuổi lứa tuổi mang thai phổ biến thường hình thái học, có dấu hiệu lệch bội Việt Nam Những thai phụ không cư NST siêu âm ngụ thành phố Hồ Chí Minh mà khắp Các rối loạn số lượng NST thường tăng nước bệnh viện Từ Dũ bệnh viện tuyến cuối theo tuổi thai phụ lỗi không phân ly phụ sản, phục vụ cho nhân dân nước NST trình tạo giao tử dẫn đến thừa Xét nghiệm sinh hóa siêu âm hai thiếu NST Những rối loạn phương tiện không xâm lấn hữu ích thường dạng đơi dạng việc sàng lọc bất thường NST thai nhằm khảm(9) 400 mẫu bệnh phẩm dịch ối phát trường hợp thai cần nghiên cứu cỡ mẫu đủ lớn để chọc ối khảo sát NST để có kết chẩn loại bất thường NST trao đổi đoạn, đoán xác định Vì vậy, hầu hết trường hợp nhân đoạn, thể khảm xuất 154 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 NghiêncứuYhọc Việc so sánh kết từ kỹ thuật QF-PCR Trong 400 mẫu bệnh phẩm, có mẫu có với kết từ kỹ thuật tiêu chuẩn vàng kiểu gen thể khảm kỹ thuật QF-PCR karyotype giúp đánh giáđược ưu điểm kết luận loại bất thường Trường hợp 1: QF-PCR: phương pháp chẩn đoán nhanh, xem mẫu không kết luận trường đơn giản, xác; phát hầu hết hợp bị bỏ sót QF-PCR cóđộ nhạy 94,4% lệch bội NST phổ biến; khả trả lời kết (34/36), độ đặc hiệu 100% (364/364), giá trị tiên cho bệnh nhân đạt đến 99,5% (398/400), cao đoán dương 100% (34/34) giá trị tiên đoán so với xét nghiệm karyotype dịch ối; không âm 99,5% (364/366) Trường hợp 2: xếp có trường hợp âm tính giả dương tính giả mẫu khơng thể kết luận vào nhóm lệch bội xảy Chỉ vòng 48 giờ, QF-PCR (vì thực tế mẫu có tín hiệu QF-PCR khơng cho kết CĐTS rối loạn NST bình thường) QF-PCR cóđộ nhạy 100% 396 mẫu dịch ối khơng lẫn máu mẹ, mẫu bị (36/36), độ đặc hiệu 100% (364/364), giá trị tiên ngoại nhiễm DNA mẹ phải tuần ghi đoán dương 100% (36/36), giá trị tiên đoán âm nhận kết Như vậy, khả trả lời 100% (364/364) (bảng 3) Do đó, kết kết nhanh kỹ thuật QF-PCR góp phần nghiên cứu phù hợp với kết báo làm giảm đáng kể lo âu cho thai phụ gia cáo trước đây(7,14) đình(5) Bảng So sánh kết từ QF-PCR với kết từ karyotype QF-PCR Lệch bội Bình thường Tổng Trường hợp Karyotype Lệch bội Bình thường 34 364 36 364 Tổng 34 366 400 Lệch bội Bình thường Trường hợp Karyotype Lệch bội Bình thường 36 0 364 36 364 Tổng 36 364 400 Dù xem tiêu chuẩn vàng bào lập karyotype thường từ 10 – 21 chẩn đoán rối loạn NST, xét nghiệm karyotype ngày nên gây gánh nặng tâm lý cho thai có tỉ lệ chẩn đốn sai 0,6%, đó, chủ phụ làm cho việc chấm dứt thai kỳ yếu sai sót NST giới tính nhiễm tế bào bất thường bị muộn hơn(17) mẹ phân tích sai (đơi bỏ sót Các locus STR có tính chất đặc trưng cho trisomy monosomy) Tỉ lệ trả cá thể Vì vậy, mẫu dịch ối thai bị lời kết nuôi cấy tế bào bị thất bại nhiễm DNA từ mẹ kết QF-PCR từ 0,4% đến 1,4% Ngoài ra, karyotype có diện tín hiệu phụ với tỉ lệ phát bất thường cấu không phù hợp Đây ưu điểm vượt trội trúc mức độ nhỏ < 4Mb Trong đó, đối kỹ thuật QF-PCR so với phương pháp chẩn với hầu hết thai phụ chọc ối thai có đốn lệch bội khác karyotype, FISH, nguy cao bị lệch bội NST, bất thường MLPA, đặc biệt trường hợp thai nữ(6) (2,4,10,11,12) cấu trúc phát cách tình cờ Ngồi ra, nghiên cứu có trường chúng không tăng theo tuổi mẹ hợp song thai buồng ối, không rõ số lượng khơng phải làđích nhắm đến chương trình Dịch ối buồng ối chọc hút sàng lọc Hơn nữa, thời gian để nuôi cấy tế thực xét nghiệm riêng biệt Kết QF- (18) 155 NghiêncứuYhọc YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số3*2013 PCR cho thấy thai có alen giống PCR Assessment on 18,000 consecutive clinical samples Mol Hum Reprod, 10(11), 839-846 Cirigliano V, Voglino G, Marongiu A, Canadas P, Ordonez E, Lloveras E, et al (2006) Rapid prenatal diagnosis by QF-PCR: evaluation of 30,000 consecutive clinical samples and future applications Ann N Y Acad Sci, 1075, 288-298 Cirigliano V, Voglino, G, Ordonez E, Marongiu A, Paz Canadas M, Ejarque M, et al (2009) Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies by QFPCR, results of years of clinical experience Prenat Diagn, 29(1), 40-49 Devyser (2012) Devyser Complete v2 ART No 8-A011.2 Instruction for Use: Stockholm Ferguson-Smith MA & Yates JR (1984) Maternal age specific rates for chromosome aberrations and factors influencing them: report of a collaborative european study on 52 965 amniocenteses Prenat Diagn, Spec No, 5-44 Garver KL, Marchese SL & Boas EG (1976) Amniotic fluid culture failure: possible role of syringes New England Journal of Medicine, 295, 286-290 Griffiths MJ, Miller PR & Stibbe HM (1996) A false positive diagnosis of Turner syndrome by amniocentesis Prenatal Diagnosis, 16(5), 463-466 Hsu LYF (1992) Prenatal diagnosis of chromosomal abnormalities through amniocentesis (3rd ed.) Johns Hopkins University Press: Baltimore Mann K, Ogilvie C, Mountford R & McAnulty C (2007) QF-PCR for the diagnosis of aneuploidy best practice guidelines Association for Clinical Cytogenetics and Clinical Molecular Genetics Society Nicolini, U., Lalatta, F., Natacci, F., Curcio, C & Bui, T H (2004) The introduction of QF-PCR in prenatal diagnosis of fetal aneuploidies: time for reconsideration Hum Reprod Update, 10(6), 541-548 Qiagen (2010) QIAamp DNA Mini and Blood Mini Handbook (3rd ed.) Rooney DE (2001) Human cytogenetics constitutional analysis A practical approach (3rd ed.) Oxford University Press: Oxford Simoni G, Brambati B, Danesino C, Rossella F, Terzoli GL, Ferrari M, et al (1983) Efficient direct chromosome analyses and enzyme determinations from chorionic villi samples in the first trimester of pregnancy Hum Genet, 63(4), 349-357 Warburton D (1991) De novo balanced chromosome rearrangements and extra marker chromosomes identified at prenatal diagnosis: clinical significance and distribution of breakpoints Am J Hum Genet, 49(5), 995-1013 tất locus khảo sát Vì thế, kết luận trường hợp song thai hợp tử Trong đó, karyotype kết luận hợp tử dù kết thai 46,XX Như vậy, khả đánh giá trường hợp đa thai hay nhiều hợp tử ưu điểm khác kỹ thuật QF-PCR, giúp loại trừ nhầm lẫn mẫu, theo dõi tiên lượng thai lâm sàng KẾTLUẬN 10 QF-PCR kỹ thuật chẩn đoán nhanh, đáng tin cậy CĐTS rối loạn số lượng 11 NST hạn chế chẩn đoán thể khảm bất thường cấu trúc Trong xu hướng phát 12 triển phương pháp chẩn đoán trước sinh nay, kỹ thuật QF-PCR giữ vai 13 trò quan trọng thay cho kỹ thuật chẩn đốn khác Các trường hợp có tiền sử rối loạn cấu trúc NST cần khảo sát 14 thêm phương pháp karyotype Cảm ơn: Sở Khoa học & Công nghệ TPHCM hỗ trợ phần kinh phí cho nghiên cứu TÀILIỆUTHAMKHẢO 156 Adinolfi M, Pertl B & Sherlock J (1997) Rapid detection of aneuploidies by microsatellite and the quantitative fluorescent polymerase chain reaction Prenat Diagn, 17(13), 1299-1311 Association for Clinical Cytogenetics (2009) ProfessionalGuidelinesforClinicalCytogenetics:GeneralBes tPracticeGuidelines www.cytogenetics.org.uk Association for Clinical Cytogenetics and Clinical Molecular Genetics Society (2012) QF-PCR for the diagnosis of aneuploidy best practice guidelines v3.01 www.cmgs.org Association of Clinical Cytogeneticists (1990) National external quality assessment scheme in clinical cytogenetics 1988/89 Association for Clinical Cytogeneticists, UK, 9-21 Cirigliano V, Voglino G, Canadas MP, Marongiu A, Ejarque M, Ordonez E, et al (2004) Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies by QF- 15 16 17 18 Ngày nhận bài: 10/05/2013 Ngày phản biện đánh giá báo: 18/05/2013 Ngày báo đăng: 27/09/2013 ... mẫu, theo dõi tiên lượng thai lâm sàng KẾTLUẬN 10 QF-PCR kỹ thuật chẩn đoán nhanh, đáng tin cậy CĐTS rối loạn số lượng 11 NST hạn chế chẩn đoán thể khảm bất thường cấu trúc Trong xu hướng phát... bị rối loạn số lượng NST 21, 13, 18 NST giới tính nhiều yếu tố sau: tiền sử sinh bị bất thường nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y dị tật bẩm sinh; siêu âm có dấu hiệu lệch bội NST có dị tật bẩm sinh; ... (364/364), giá trị tiên ngoại nhiễm DNA mẹ phải tuần ghi đoán dương 100% (36/36), giá trị tiên đoán âm nhận kết Như vậy, khả trả lời 100% (364/364) (bảng 3) Do đó, kết kết nhanh kỹ thuật QF-PCR góp