Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm ứng dụng thành công kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang phát hiện dị bội NST 13, 18, 21, X, Y trong các mẫu dịch ối. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ĐỊNH LƯỢNG HUỲNH QUANG TRONG CHẨN ĐỐN TRƯỚC SINH NHANH PHÁT HIỆN BẤT THƯỜNG SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Ở NGƯỜI Hồng Hiếu Ngọc*, Phạm Thị Huyền Trang**, Phạm Hùng Vân**, Nguyễn Vạn Thơng***, Khổng Hiệp*** TĨM TẮT Đặt vấn đề: Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học phân tử mới được phát triển với mục đích phát hiện các bất thường số lượng các nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ. Xuất phát từ nhu cầu trên, nhóm nghiên cứu của chúng tơi tiến hành ứng dụng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang (QF – PCR) để chẩn đốn nhanh bất thường số lượng nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y ở người. Mục tiêu: Ứng dụng thành cơng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang phát hiện dị bội NST 13, 18, 21, X, Y trong các mẫu dịch ối. Phương pháp: Tách chiết DNA từ các mẫu dịch ối của các thai kỳ nguy cơ (bất thường double test, triple test) và có chỉ định của bác sĩ lâm sàng. Sau đó, thực hiện phản ứng PCR định lượng huỳnh quang và cuối cùng điện di sản phẩm khuếch đại trên hệ thống điện di mao quản. Dữ liệu thơ thu được sẽ được phân tích trên phần mềm chun dụng để tìm ra bất thường trong mẫu ối. Kết quả: Từ tháng 03/2010 đến tháng 01/2011 chúng tơi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ. Trong đó phát hiện được 10 trường hợp bất thường (16,9%). Các kết quả này đều tương đồng với kết quả nhiễm sắc thể đồ được thực hiện song song tại bệnh viện Hùng Vương. Kết luận: Bằng việc ứng dụng kỹ thuật QF‐PCR, chúng tơi đã xây dựng thành cơng qui trình xét nghiệm chẩn đốn bất thường số lượng nhiễm sắc thể với độ chính xác cao và tiết kiệm thời gian, cung cấp một phương tiện chẩn đốn cho bác sĩ sản khoa trong việc xác định bất thường số lượng nhiễm sắc thể ở những thai kỳ nguy cơ cao. Từ khóa: QF‐PCR, chẩn đốn trước sinh, dị bội thể ABSTRACT RAPID PRENAL DIAGNOSIS BY QUANTITATIVE FLUORESCENT POLYMERASE CHAIN REACTION TO DETECT HUMAN ANEUPLOIDIES IN AMNIOTIC FLUIDS Hoang Hieu Ngoc, Pham Thi Huyen Trang, Pham Hung Van, Nguyen Van Thong, Khong Hiep, * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 144 ‐ 149 Background: Previously, aneuploidies were usually diagnosed by karyotype. But this technique is time consuming and hardly avoid the concern for pregnant women. Based on the development of molecular biology in medicine, we apply quantitative fluorescent polymerase chain reaction technique (QF‐PCR) to detect aneuploidies in amniotic fluids from high risk pregnancy with reducing time. Objective: Detecting aneuploidies in amniotic fluids from high risk pregnancy. Method: DNA from amniotic cells were extracted and then performed QF‐PCR. The fluorescent‐labeled amplicons were detected by capillary electrophoresis system. Then, these raw data were analyzed by specific software. * Bộ mơn Hố Sinh, Khoa Y, Đại học Y Dược TPHCM, ** Cơng ty Nam Khoa, *** Bệnh viện Phụ Sản Hùng Vương Tác giả liên lạc: ThS. BS. Hồng Hiếu Ngọc ĐT: 0988937406 Email: hoanghieungoc@yahoo.com 144 Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học Results: From 03/2010 to 01/2011, we have 64 amniotic fluid samples. There are 10 cases (16.9%) with aneuploidies including 3 cases of trisomy 21, 3 cases of trisomy 18, 1 case of Turner syndrome, 3 cases of Klinfelter syndrome. These results share the similarity of karyotype that also performed simultaneously at Hung Vuong Hospital. Conclusions: By applying QF‐PCR, we have built up the examination to detect aneuploidies from amniotic fluids successfully. Since, we open up the new trend of rapid prenatal diagosis in Vietnam. Keywords: QF‐PCR, prenatal diagnosis, aneuploidy. ĐẶT VẤN ĐỀ Bất thường số lượng nhiễm sắc thể là nguyên nhân thường gặp nhất của dị tật bẩm sinh, ảnh hưởng lên 1 trong 165 trẻ sơ sinh(7). Sự bất thường nhiễm sắc thể ảnh hưởng lên thai kỳ, gây dị tật bẩm sinh hoặc sẩy thai. Khoảng một nửa các trường hợp sẩy thai tự nhiên ở ba tháng đầu là do nguyên nhân nhiễm sắc thể. Bất thường nhiễm sắc thể phát hiện bằng chọc ối chiếm 30 – 35% theo sau việc siêu âm thấy bất thường(11, 14). Bất thường nhiễm sắc thể được chia thành bất thường về cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể. Bất thường về số lượng có thể là thêm hẳn một bộ nhiễm sắc thể (đa bội) hoặc là thừa, thiếu một nhiễm sắc thể (dị bội) thì gặp nhiều hơn là bất thường về cấu trúc nhiễm sắc thể ‐ chiếm đến khoảng 95% các trường hợp(13). Các trường hợp đa bội có thể là do rối loạn trong q trình phân chia của trứng hay thường gặp hơn là 2 tinh trùng được thụ tinh vào cùng một trứng. Trái lại, dị bội vẫn là do khơng phân ly nhiễm sắc thể trong q trình tạo giao tử của trứng, cho thấy ngun nhân liên quan đến tuổi mẹ cao là chủ yếu. Đa số các trường hợp thụ thai tam bội là do một trứng được thụ tinh với hai tinh trùng. Vì vậy, thể tam bội thường có dạng nhiễm sắc thể đồ là 69,XXX; 69,XXY; hay 69,XYY. Hầu hết các thai kỳ tam bội đều bị sẩy vào ba tháng đầu hoặc thời điểm đầu của ba tháng giữa. Khoảng 7% trường hợp sẩy thai xác định trên lâm sàng là do tam bội. Lượng alpha – fetoprotein trong huyết thanh mẹ thường được lượng giá cho thai kỳ nghi ngờ tam bội(10). Dị bội nhiễm sắc thể thường là dư hay thiếu một chiếc nhiễm sắc thể (nhiễm sắc thể thường hay nhiễm sắc thể giới tính) gây ra Sản Phụ Khoa dạng trisomy hay monosomy. Hấu hết các dạng trisomy nhiễm sắc thể thường hay một vài loại trisomy của nhiễm sắc thể X là do khơng phân ly nhiễm sắc thể trong q trình tạo trứng và tỉ lệ mắc các loại bất thường nhiễm sắc thể này thường liên quan đến tuổi mẹ(9). Đối với hội chứng Kleinfelter 47, XXY thì tỉ lệ không phân ly nhiễm sắc thể ở tế bào trứng hay tinh trùng thì chiếm tỉ lệ bằng nhau, có khi tỉ lệ gặp ở tinh trùng chiếm tỉ lệ hơi cao hơn (57%). Khơng giống như trisomy các loại nhiễm sắc thể thường khác, monosomy X lại thường gặp ở những phụ nữ trẻ(13). Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học phân tử mới được phát triển với cùng một mục đích phát hiện các bất thường số lượng các nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ. Hiện tại, kỹ thuật QF – PCR được dùng trong chẩn đoán nhanh bất thường số lượng nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y ở người. Trong phạm vi nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành ứng dụng kỹ thuật trên để chẩn đốn bất thường dị bội thể 13, 18, 21, X, Y trên các mẫu ối được thu thập tại thành phố Hồ Chí Minh. Từ đó, đánh giá khả năng phát triển của kỹ thuật chẩn đoán trước sinh nhanh này tại Việt Nam. ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu bệnh phẩm Mẫu dịch ối từ các thai kỳ nguy cơ có chỉ định chọc ối làm nhiễm sắc thể đồ từ bác sĩ lâm sàng. Mẫu được để ở nhiệt độ 2 – 8oC cho đến khi làm xét nghiệm. Tiêu chuẩn loại trừ là mẫu đã được trữ đơng. 145 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Trích biệt DNA tế bào ối Phương pháp tách chiết DNA được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Lấy 1000 μl dịch ối cho vào 1 tube Eppendorf, ly tâm 14.000 rpm trong 3 phút để làm lắng tế bào ối. Dịch nổi được bỏ đi, thêm vào 200 μl PBS để thuần nhất tế bào ối trở lại. Sau đó, chúng tơi sử dụng bộ tách chiết DNA bằng kit thương mại QIAGEN DNA Blood Mini kit. Nồng độ DNA thích hợp cho phản ứng QF‐PCR là 1 – 10 ng nên sau khi đo nồng độ DNA, có thể tiến hành pha lỗng nếu DNA mẫu có nồng độ cao hơn tiêu chuẩn đề ra. Thực hiện kỹ thuật QF‐PCR. Kỹ thuật QF – PCR giúp khuếch đại, phát hiện, phân tích trình tự đoạn lặp lại ngắn (STR) nằm trên các cặp nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y dựa trên các cặp mồi đặc hiệu được thiết kế sao cho vùng trình tự lặp lại được nằm giữa hai đoạn mồi xi và ngược. Ngồi ra, ở đầu ở của các đoạn mồi xi cũng được gắn thêm các màu huỳnh quang nhằm giúp phát hiện sản phẩm khuếch đại bằng phương pháp điện di mao quản. Trong giai đoạn lũy thừa sớm của phản ứng khuếch đại, lượng sản phẩm khuếch đại được tạo ra tỉ lệ với lượng DNA có trong mẫu ban đầu. Yếu tố tiên quyết cho sự thành cơng của kỹ thuật là lượng DNA thích hợp cho vào trong một phản ứng và số chu kỳ nhiệt của phản ứng PCR. Chúng tôi sử dụng bộ kit AneufastTM QF – PCR kit của hãng Molgentix gồm có 6 loại master mix là S1, S2, MXY, M13, M18, M21 khuếch đại các marker trên từng loại nhiễm sắc thể như sau: Bảng 1: Các loại dấu ấn được sử dụng trong bộ kit QF‐PCR S1 AMXY D21S1414 D21S1446 D13S631 D13S305 D18S535 D18S391 S2 SRY X22 DXYS218 HPRT D21S1411 D21S1435 D13S634 D13S258 D18S386 D18S390 MXY SRY AMXY HPRT SBMA* DXS6803* DXS6809* DXS8377* Hai bộ mix S1, S2 cho phép phân tích đồng thời bốn dấu ấn của mỗi nhiễm sắc thể số 13, 21, 18, hai trình tự lặp lại ngắn trên giả nhiễm sắc thể thường (X22, DXY218), Amelogenin (AMXY) và SRY. Sau khi chạy PCR trên 2 loại mix S1, S2, sản phẩm khuếch đại sẽ được trộn chung và điện di mao quản cùng một lượt. Bốn loại master mix còn lại (còn gọi là dấu ấn phụ) dùng để chạy bổ sung khi kết quả phân tích S1S2 cho biết bốn dấu ấn của từng loại nhiễm sắc thể đều ở dạng đồng hợp. Khi đó, kết quả của marker phụ tương ứng sẽ cho kết quả rõ ràng hơn hoặc là củng cố thêm kết quả bất thường có được từ phân tính S1S2. QF‐PCR được thực hiện theo chu kỳ nhiệt như sau: 146 M21 D21S1411 D21S1435 D21S1437* D21S1412* D21S1008* M18 D18S386 D18S391 D18S858* D18S499* D18S1002* M13 D13S631 D13S634 D13S742* D13S628* hoạt hóa men Taq polymerase 95oC/15 phút, biến tính 95oC/40 giây, bắt cặp 60oC/90 giây, kéo dài 72oC/40 giây, kéo dài cuối cùng 60oC/60 phút. Sản phẩm có thể được giữ ở 4oC đến khi bắt đầu điện di mao quản. Điện di mao quản sản phẩm khuếch đại. Sản phẩm QF – PCR là những đoạn DNA có chiều dài khác nhau, được đánh dấu huỳnh quang ở một mạch đơn theo nguyên tắc như sau: Nếu chiều dài đoạn DNA khác nhau giữa các dấu ấn thì màu huỳnh quang giống nhau. Nếu chiều dài DNA được khuếch đại giống nhau ở hai loại dấu ấn khác nhau thì sẽ đánh dấu bằng các màu huỳnh quang khác nhau. Khi điện di, đoạn ngắn sẽ chạy đển đầu đọc laser Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 trước và đoạn dài sẽ chạy đến sau. Tín hiệu được ghi nhận bằng phần mềm chuyên dụng Data Collection Version 3.0 của hãng ABI. Phân tích kết quả QF‐PCR. Sử dụng phần mềm phân tích Gene Marker phiên bản 1.91. Mẫu được xem là đạt khi xuất hiện đủ các tín hiệu của thang chuẩn, phân tích rõ các tín hiệu của các đoạn khuếch đại, cường độ huỳnh quang cao. Phần mềm sẽ tính tốn dựa trên diện tích và cường độ huỳnh quanh để tính ra tỉ lệ của các dấu ấn tương ứng của từng loại nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y. Mẫu được xem là không đạt khi không xuất hiện đầy đủ các tín hiệu của thang chuẩn hay các tín hiệu huỳnh quang khuếch đại của dấu ấn các allele bị thiếu. KẾT QUẢ Từ tháng 03/2010 đến tháng 01/2011 chúng tơi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ. Nghiên cứu Y học Trong đó phát hiện được 10 trường hợp bất thường (16,9%). Tỉ lệ thực hiện kỹ thuật QF – PCR thành cơng là 100% trên tất cả 64 mẫu dịch ối. Tất cả 64 mẫu này khi được ly trích DNA tế bào ối, thực hiện phản ứng QF – PCR và điện di mao quản cho tín hiệu huỳnh quang đẹp. Thực hiện chế độ phân tích bằng phần mềm GeneMarker phiên bản 1.91 đều thành cơng với 64 mẫu. Trong số 64 mẫu được thực hiện QF – PCR, có 26 mẫu cho kết quả là nữ bình thường chiếm tỉ lệ 40,6%, 29 mẫu cho kết quả là nam bình thường chiếm tỉ lệ 45,3%. QF – PCR đã phát hiện được 10 trường hợp bất thường gồm 3 mẫu trisomy 21, 3 mẫu mang hội chứng Klinefelter (XXY), 3 mẫu trisomy 18 (hội chứng Edward), 1 mẫu phát hiện monosomy X (hội chứng Turner). Khi so sánh với kết quả nhiễm sắc thể đồ thì chúng tơi thấy QF‐PCR đạt độ nhạy và độ đặc hiệu là 100%. Hình 1: Kết quả trisomy 21 của một mẫu ối được thực hiện bằng kỹ thuật QF‐PCR Sản Phụ Khoa 147 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Hình 2: Kết quả trisomy 21 trên dấu ấn phụ Bảng 2: Kết quả so sánh giữa QF‐PCR và nhiễm sắc thể đồ QF (40,6%) Nhiễm sắc thể đồ N XX XY T21 T18 XO XXY 64 29 (45,3%) 64 26 3(4,7%) 26 (40%) 3(4,7%) 29 (45%) (1,6%) 3(4,7%) 3(4,7%) 3(4,7%) (1,6%) (4,7%) BÀN LUẬN Chúng tôi đã thực hiện kỹ thuật QF‐PCR cho kết quả tương đồng với kỹ thuật nhiễm sắc thể đồ 100%. Đồng thời, kỹ thuật QF‐PCR đưa ra kết quả nhanh và đáng tin cậy trong vòng 24 giờ. Những bất thường dị bội thể thường gặp đã được phát hiện thành công trong tất cả các mẫu. Các thao tác trong kỹ thuật QF khá đơn giản, thực hiện nhanh. Vì vậy, ưu điểm đầu tiên của kỹ thuật QF là ít tốn thời gian hơn so với kỹ thuật nhiễm sắc thể đồ. Kỹ thuật QF cơ bản được dựa trên là kỹ thuật PCR kinh điển trong đó cải tiến thêm về khả năng khuếch đại được nhiều loại DNA đích khác nhau trong 1 phản ứng PCR đồng thời các loại mồi xi được đánh dấu bởi các màu huỳnh quanh khác nhau giúp phát hiện được sản phẩm khuếch đại bằng hệ thống điện di mao quản và phân biệt từng nhóm sản phẩm khuếch đại dựa 148 trên màu huỳnh quang và chiều dài đoạn khuếch đại. Kết quả điện di phát hiện các đỉnh huỳnh quang được ghi nhận bằng phần mềm đọc tín hiệu chun dụng. Bên cạnh đó, phần mềm phân tích (GeneMarker phiên bản 1.91) giúp ta tính tốn được cường độ màu huỳnh quang và diện tích các đỉnh từ đó tính ra được tỉ lệ bình thường hay bất thường của mẫu. Điều này giúp cho việc nhận định kết quả QF vơ cùng khách quan, khơng phụ thuộc vào cái nhìn cảm quan của người làm thí nghiệm. Dịch ối có đơi khi khơng tránh khỏi bị lẫn tế bào máu mẹ; tùy thuộc vào lượng máu mẹ bị nhiễm vào nhiều hay ít mà kết quả QF khơng hoặc có thể sai lệch. Nếu lượng máu mẹ nhiễm chỉ chiếm khoảng dưới 20% tổng lượng tế bào ối thu thập được thì kết quả QF sẽ khơng bị ảnh hưởng. Đối với những mẫu ối bị nhiễm máu mẹ nhiều, ta có thể ni cấy để loại đi tế bào máu. Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Sau đó mới dùng dịch cấy tế bào này thực hiện kỹ thuật QF – PCR. Kỹ thuật QF‐PCR chỉ khảo sát 5 loại nhiễm sắc thể là nhiễm sắc thể số 13, 18, 21, X, Y bởi vì tỉ lệ dị tật bẩm sinh liên quan đến bất thường số lượng nhiễm sắc thể của 5 loại này chiếm tỉ lệ cao nhất (95%). So với tác giả Maj A.Hulten(8) đã thực nghiên cứu trên dịch ối bằng kỹ thuật QF‐ PCR thì kết quả của chúng tơi cũng cho thấy có sự tương đồng về độ tin cậy, nguy cơ của việc chẩn đoán sai là rất thấp. Một tác giả khác là Chrysanthy Bili(1) đã tiến hành nghiên cứu trên 1100 mẫu ối thuộc dân số Hy Lạp và cũng đưa ra được kết luận là kỹ thuật QF‐PCR rất hiệu quả trong chẩn đốn trước sinh và nên đựa vào thực hiện như một xét nghiệm thường qui. Tuy nghiên cứu của chúng tơi thực hiện trên cỡ mẫu nhỏ nhưng cũng giúp xác định ban đầu, kỹ thuật QF‐PCR hồn tồn có thể thực hiện được thành công tại Việt Nam. KẾT LUẬN Việc ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử vào lĩnh vực chẩn đoán trước sinh nhanh dần trở nên hiệu quả và ngày càng được tin cậy. Kỹ thuật QF‐PCR có độ nhạy, độ đặc hiệu và tỷ lệ thất bại tương đương với kỹ thuật karyotype trong chẩn đốn dị bội các nhiễm sắc thể thường gặp nên có thể sử dụng đối với các thai phụ do tuổi mẹ cao hay bất thường trên siêu âm mà khơng cần thực hiện tầm sốt sinh hố. Với thời gian trả kết quả ngắn trong 1 đến 2 ngày, chính xác và khả năng tự động hố cao, kỹ thuật QF‐ PCR có thể ứng dụng thường quy trong chẩn đốn trước sinh để có kết quả chẩn đốn lệch bội sớm giảm tình trạng lo lắng cho thai phụ. Do thời gian và kinh phí có hạn nên đề tài chỉ được thực hiện trên cỡ mẫu nhỏ và cách chọn mẫu là thuận tiện. Tuy nhiên, kết quả thu được chứng minh rằng đề tài đã được thực hiện thành công. Chúng tôi mong muốn thực hiện đề tài này với phạm vi mẫu lớn hơn trên sản phụ Việt Nam để từ đó tìm ra những kinh nghiệm có Nghiên cứu Y học thể áp dụng trên người Việt Nam, nâng khả năng chẩn đoán trước sinh bằng kỹ thuật sinh học phân tử nói chung lên một tầm cao mới. TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 14 Bili C, Divane A, Apessos A, Konstantinos T, Apostolos A, Ioanmis B, et al (2002). Prenatal diagnosis of common aneuploidies using quantitative fluorescent PCR. Prenatal Diagnosis, 22: 360 ‐ 365. Cirigliano V, Ejarque M, Canadas MP, Lloveras E, Plaja A, Perez Md, et al (2011). Clinical application of multiplex quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF ‐ PCR) for the rapid prenatal detection of common chromosome aneuploidies. Molecular Human Reproduction, 7: 1001 ‐ 1006. Cirigliano V, Sherlock J, Conway G, Quilter C, Rodeck C, & Adinolfi M (1999). Rapid detection of chromosome X and Y aneuploidies by quantitative fluorescent PCR. Prenatal Diagnosis, 19: 1099 ‐ 1103. Cirigliano V, Voglino G, Ordonez E, Marongiu A, Canadas M, Ejarque M, et al (2009). Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies by QF ‐ PCR, results of 9 years of clinical experience. Prenatal Diagnosis, 29: 40 ‐ 49. Dupont A, Vaeth M, Videbech P (1986). Mortality and life expectancy of Down’s synfrome in Denmark. J Ment Defic Res, 30: 111 ‐ 120. Hook EB (1981). Rates of chromosomal abnormalities at different maternal ages. Obstet Gynecol, pp.58 ‐ 292. Hsu LYF (1986). Prenatal diagnosis of chromosome abnormalities; in Milunsky A (ed): Genetic Disorders and the Fetus, ed 2. New York, Plenum Press,, pp 115–183. Hulten NA, Dhanjal S, & Pertl B (2003). Rapid and simple prenatal diagnosis of common chromosome disorders: advantages and disadvantages of the molecular methods FISH and QF ‐ PCR. Reproduction, 126: 279 ‐ 297. Kalousek DK, Barrett IJ, McGillivray BC (1989). Placental mosaicism and intrauterine survival of trisomies 13 and 18. Am J Genet, 44(3): 338‐43 OʹBrien WF, Knuppel RA, Kousseff B, Sternlicht D, Nichols P (1988). Elevated maternal serum alpha ‐ fetoprotein in triploidy. Obstet Gynecol, 71: 994‐995. Platt LD, DeVore GR, Lopez E, Herbert W, Falk R, Alfi O (1986). Role of amniocentesis in ultrasound detected fetal malformations. Obstet Gynecol, 68(2): 153‐155. Warburton D (1987). Chromosomal causes of fetal death. Clin Obstet Gynecol, 30: 268‐277. Warburton D, Kline J, Stein Z, Susser M (1980). Monosomy X. A chromosomal anomaly associated with young maternal age. Lancet, 1: 167‐169. Williamson RA, Weiner CP, Patil S, Benda J, Varner MW, Abu‐Yousef MM. (1987). Abnormal pregnancy sonogram. Selective indication for fetal. Obstet Gynecol, 69: 15‐20. Ngày nhận bài báo: Ngày phản biện nhận xét bài báo: Ngày bài báo được đăng: 01/11/2013 26/11/2013 05/01/2014 Sản Phụ Khoa 149 ... thấy bất thường( 11, 14). Bất thường nhiễm sắc thể được chia thành bất thường về cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể. Bất thường về số lượng có thể là thêm hẳn một bộ nhiễm sắc thể (đa bội) hoặc là thừa, ... ĐẶT VẤN ĐỀ Bất thường số lượng nhiễm sắc thể là nguyên nhân thường gặp nhất của dị tật bẩm sinh, ảnh hưởng lên 1 trong 165 trẻ sơ sinh( 7). Sự bất thường nhiễm sắc thể ảnh hưởng lên thai kỳ, ... các bất thường số lượng các nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ. Hiện