Ứng dụng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang trong chẩn đoán trước sinh nhanh phát hiện bất thường số lượng nhiễm sắc thể ở người

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm ứng dụng thành công kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang phát hiện dị bội NST 13, 18, 21, X, Y trong các mẫu dịch ối. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014  ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ĐỊNH LƯỢNG HUỲNH QUANG   TRONG CHẨN ĐỐN TRƯỚC SINH NHANH PHÁT HIỆN   BẤT THƯỜNG SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Ở NGƯỜI  Hồng Hiếu Ngọc*, Phạm Thị Huyền Trang**, Phạm Hùng Vân**, Nguyễn Vạn Thơng***,   Khổng Hiệp***   TĨM TẮT  Đặt vấn đề: Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học phân tử mới được phát triển với mục đích phát  hiện các bất thường số lượng các nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các thai kỳ nguy cơ với thời gian  nhanh hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ. Xuất phát từ nhu cầu trên, nhóm  nghiên cứu của chúng tơi tiến hành ứng dụng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang (QF – PCR) để chẩn  đốn nhanh bất thường số lượng nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y ở người.  Mục tiêu: Ứng dụng thành cơng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang phát hiện dị bội NST 13, 18, 21,  X, Y trong các mẫu dịch ối.  Phương pháp: Tách chiết DNA từ các mẫu dịch ối của các thai kỳ nguy cơ (bất thường double test, triple  test) và có chỉ định của bác sĩ lâm sàng. Sau đó, thực hiện phản ứng PCR định lượng huỳnh quang và cuối cùng  điện di sản phẩm khuếch đại trên hệ thống điện di mao quản. Dữ liệu thơ thu được sẽ được phân tích trên phần  mềm chun dụng để tìm ra bất thường trong mẫu ối.  Kết  quả: Từ tháng 03/2010 đến tháng 01/2011 chúng tơi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ.  Trong đó phát hiện được 10 trường hợp bất thường (16,9%). Các kết quả này đều tương đồng với kết quả nhiễm  sắc thể đồ được thực hiện song song tại bệnh viện Hùng Vương.  Kết luận: Bằng việc ứng dụng kỹ thuật QF‐PCR, chúng tơi đã xây dựng thành cơng qui trình xét nghiệm  chẩn đốn bất thường số lượng nhiễm sắc thể với độ chính xác cao và tiết kiệm thời gian, cung cấp một phương  tiện chẩn đốn cho bác sĩ sản khoa trong việc xác định bất thường số lượng nhiễm sắc thể ở những thai kỳ nguy  cơ cao.  Từ khóa: QF‐PCR, chẩn đốn trước sinh, dị bội thể  ABSTRACT  RAPID PRENAL DIAGNOSIS BY QUANTITATIVE FLUORESCENT POLYMERASE   CHAIN REACTION TO DETECT HUMAN ANEUPLOIDIES IN AMNIOTIC FLUIDS  Hoang Hieu Ngoc, Pham Thi Huyen Trang, Pham Hung Van, Nguyen Van Thong, Khong Hiep,   * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 144 ‐ 149  Background:  Previously,  aneuploidies  were  usually  diagnosed  by  karyotype.  But  this  technique  is  time  consuming and hardly avoid the concern for pregnant women. Based on the development of molecular biology in  medicine, we apply quantitative fluorescent polymerase chain reaction technique (QF‐PCR) to detect aneuploidies  in amniotic fluids from high risk pregnancy with reducing time.  Objective: Detecting aneuploidies in amniotic fluids from high risk pregnancy.   Method:  DNA  from  amniotic  cells  were  extracted  and  then  performed  QF‐PCR.  The  fluorescent‐labeled  amplicons were detected by capillary electrophoresis system. Then, these raw data were analyzed by specific software.  * Bộ mơn Hố Sinh, Khoa Y, Đại học Y Dược TPHCM, ** Cơng ty Nam Khoa, *** Bệnh viện Phụ Sản Hùng Vương  Tác giả liên lạc: ThS. BS. Hồng Hiếu Ngọc  ĐT: 0988937406  Email: hoanghieungoc@yahoo.com  144 Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014  Nghiên cứu Y học Results: From 03/2010 to 01/2011, we have 64 amniotic fluid samples.  There  are  10  cases  (16.9%)  with  aneuploidies  including  3  cases  of  trisomy  21,  3  cases  of  trisomy  18,  1  case  of  Turner  syndrome,  3  cases  of  Klinfelter syndrome. These results share the similarity of karyotype that also performed simultaneously at Hung  Vuong Hospital.  Conclusions: By applying QF‐PCR, we have built up the examination to detect aneuploidies from amniotic  fluids successfully. Since, we open up the new trend of rapid prenatal diagosis in Vietnam.  Keywords: QF‐PCR, prenatal diagnosis, aneuploidy.  ĐẶT VẤN ĐỀ  Bất  thường  số  lượng  nhiễm  sắc  thể  là  nguyên  nhân  thường  gặp  nhất  của  dị  tật  bẩm  sinh, ảnh hưởng lên 1 trong 165 trẻ sơ sinh(7). Sự  bất thường nhiễm sắc thể ảnh hưởng lên thai kỳ,  gây  dị  tật  bẩm  sinh  hoặc  sẩy  thai.  Khoảng  một  nửa các trường hợp sẩy thai tự nhiên ở ba tháng  đầu  là  do  nguyên  nhân  nhiễm  sắc  thể.  Bất  thường  nhiễm  sắc  thể  phát  hiện  bằng  chọc  ối  chiếm  30  –  35%  theo  sau  việc  siêu  âm  thấy  bất  thường(11, 14). Bất thường nhiễm sắc thể được chia  thành bất thường về cấu trúc và số lượng nhiễm  sắc  thể.  Bất  thường  về  số  lượng  có  thể  là  thêm  hẳn một bộ nhiễm sắc thể (đa bội) hoặc là thừa,  thiếu  một  nhiễm  sắc  thể  (dị  bội)  thì  gặp  nhiều  hơn  là  bất  thường  về  cấu  trúc  nhiễm  sắc  thể  ‐  chiếm đến khoảng 95% các trường hợp(13).  Các trường hợp đa bội có thể là do rối loạn  trong q trình phân chia của trứng hay thường  gặp hơn là 2 tinh trùng được thụ tinh vào cùng  một trứng. Trái lại, dị bội vẫn là do khơng phân  ly nhiễm sắc thể trong q trình tạo giao tử của  trứng, cho thấy ngun nhân liên quan đến tuổi  mẹ cao là chủ yếu. Đa số các trường hợp thụ thai  tam  bội  là  do  một  trứng  được  thụ  tinh  với  hai  tinh trùng. Vì vậy, thể tam bội thường có dạng  nhiễm  sắc  thể  đồ  là  69,XXX;  69,XXY;  hay  69,XYY. Hầu hết các thai kỳ tam bội đều bị sẩy  vào  ba  tháng  đầu  hoặc  thời  điểm  đầu  của  ba  tháng giữa. Khoảng 7% trường hợp sẩy thai xác  định trên lâm sàng là do tam bội. Lượng alpha –  fetoprotein  trong  huyết  thanh  mẹ  thường  được  lượng giá cho thai kỳ nghi ngờ tam bội(10).  Dị  bội  nhiễm  sắc  thể  thường  là  dư  hay  thiếu  một  chiếc  nhiễm  sắc  thể  (nhiễm  sắc  thể  thường  hay  nhiễm  sắc  thể  giới  tính)  gây  ra  Sản Phụ Khoa dạng  trisomy  hay  monosomy.  Hấu  hết  các  dạng  trisomy  nhiễm  sắc  thể  thường  hay  một  vài  loại  trisomy  của  nhiễm  sắc  thể  X  là  do  khơng  phân  ly  nhiễm  sắc  thể  trong  q  trình  tạo  trứng  và  tỉ  lệ  mắc  các  loại  bất  thường  nhiễm  sắc  thể  này  thường  liên  quan  đến  tuổi  mẹ(9). Đối với hội chứng Kleinfelter 47, XXY thì  tỉ  lệ  không  phân  ly  nhiễm  sắc  thể  ở  tế  bào  trứng hay tinh trùng thì chiếm tỉ lệ bằng nhau,  có khi tỉ lệ gặp ở tinh trùng chiếm tỉ lệ hơi cao  hơn  (57%).  Khơng  giống  như  trisomy  các  loại  nhiễm  sắc  thể  thường  khác,  monosomy  X  lại  thường gặp ở những phụ nữ trẻ(13).  Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học  phân tử mới được phát triển với cùng một mục  đích  phát  hiện  các  bất  thường  số  lượng  các  nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các  thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn  đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm  sắc  thể  đồ.  Hiện  tại,  kỹ  thuật  QF  –  PCR  được  dùng  trong  chẩn  đoán  nhanh  bất  thường  số  lượng  nhiễm  sắc  thể  13,  18,  21,  X,  Y  ở  người.  Trong  phạm  vi  nghiên  cứu  này,  chúng  tơi  tiến  hành ứng dụng kỹ thuật trên để chẩn đốn bất  thường dị bội thể 13, 18, 21, X, Y trên các mẫu ối  được  thu  thập  tại  thành  phố  Hồ  Chí  Minh.  Từ  đó,  đánh  giá  khả  năng  phát  triển  của  kỹ  thuật  chẩn đoán trước sinh nhanh này tại Việt Nam.  ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Mẫu bệnh phẩm  Mẫu  dịch  ối  từ  các  thai  kỳ  nguy  cơ  có  chỉ  định chọc ối làm nhiễm sắc thể đồ từ bác sĩ lâm  sàng.  Mẫu  được  để  ở  nhiệt  độ  2  –  8oC  cho  đến  khi làm xét nghiệm. Tiêu chuẩn loại trừ là mẫu  đã được trữ đơng.  145 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Trích biệt DNA tế bào ối  Phương  pháp  tách  chiết  DNA  được  thực  hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Lấy 1000  μl  dịch  ối  cho  vào  1  tube  Eppendorf,  ly  tâm  14.000  rpm  trong  3  phút  để  làm  lắng  tế  bào  ối.  Dịch  nổi  được  bỏ  đi,  thêm  vào  200  μl  PBS  để  thuần nhất tế bào ối trở lại. Sau đó, chúng tơi sử  dụng  bộ  tách  chiết  DNA  bằng  kit  thương  mại  QIAGEN  DNA  Blood  Mini  kit.  Nồng  độ  DNA  thích hợp cho phản ứng QF‐PCR là 1 – 10 ng nên  sau khi đo nồng độ DNA, có thể tiến hành pha  lỗng  nếu  DNA  mẫu  có  nồng  độ  cao  hơn  tiêu  chuẩn đề ra.  Thực hiện kỹ thuật QF‐PCR.   Kỹ  thuật  QF  –  PCR  giúp  khuếch  đại,  phát  hiện, phân tích trình tự đoạn lặp lại ngắn (STR)  nằm trên các cặp nhiễm sắc thể 13,  18,  21,  X,  Y  dựa trên các cặp mồi đặc hiệu được thiết kế sao  cho  vùng  trình  tự  lặp  lại  được  nằm  giữa  hai  đoạn mồi xi và ngược. Ngồi ra, ở đầu ở của  các đoạn mồi xi cũng được gắn thêm các màu  huỳnh  quang  nhằm  giúp  phát  hiện  sản  phẩm  khuếch  đại  bằng  phương  pháp  điện  di  mao  quản.  Trong  giai  đoạn  lũy  thừa  sớm  của  phản  ứng  khuếch  đại,  lượng  sản  phẩm  khuếch  đại  được  tạo  ra  tỉ  lệ  với  lượng  DNA  có  trong  mẫu  ban  đầu.  Yếu  tố  tiên  quyết  cho  sự  thành  cơng  của  kỹ  thuật  là  lượng  DNA  thích  hợp  cho  vào  trong một phản ứng và số chu kỳ nhiệt của phản  ứng PCR.  Chúng tôi sử dụng bộ kit AneufastTM QF –  PCR  kit  của  hãng  Molgentix  gồm  có  6  loại  master  mix  là  S1,  S2,  MXY,  M13,  M18,  M21  khuếch đại các marker trên từng loại nhiễm sắc  thể như sau:  Bảng 1: Các loại dấu ấn được sử dụng trong bộ kit QF‐PCR  S1 AMXY D21S1414 D21S1446 D13S631 D13S305 D18S535 D18S391 S2 SRY X22 DXYS218 HPRT D21S1411 D21S1435 D13S634 D13S258 D18S386 D18S390 MXY SRY AMXY HPRT SBMA* DXS6803* DXS6809* DXS8377* Hai bộ mix S1, S2 cho phép phân tích đồng  thời  bốn  dấu  ấn  của  mỗi  nhiễm  sắc  thể  số  13,  21, 18, hai trình tự lặp lại ngắn trên giả nhiễm  sắc  thể  thường  (X22,  DXY218),  Amelogenin  (AMXY) và SRY. Sau khi chạy PCR trên 2 loại  mix S1, S2, sản phẩm khuếch đại sẽ được trộn  chung và điện di mao quản cùng một lượt. Bốn  loại master mix còn lại (còn gọi là dấu ấn phụ)  dùng  để  chạy  bổ  sung  khi  kết  quả  phân  tích  S1S2 cho biết bốn dấu ấn của từng loại nhiễm  sắc thể đều ở dạng đồng hợp. Khi đó, kết quả  của  marker  phụ  tương  ứng  sẽ  cho  kết  quả  rõ  ràng  hơn  hoặc  là  củng  cố  thêm  kết  quả  bất  thường  có  được  từ  phân  tính  S1S2.  QF‐PCR  được  thực  hiện  theo  chu  kỳ  nhiệt  như  sau:  146 M21 D21S1411 D21S1435 D21S1437* D21S1412* D21S1008* M18 D18S386 D18S391 D18S858* D18S499* D18S1002* M13 D13S631 D13S634 D13S742* D13S628* hoạt  hóa  men  Taq  polymerase  95oC/15  phút,  biến  tính  95oC/40  giây,  bắt  cặp  60oC/90  giây,  kéo  dài  72oC/40  giây,  kéo  dài  cuối  cùng  60oC/60 phút. Sản phẩm có thể được giữ ở 4oC  đến khi bắt đầu điện di mao quản.  Điện di mao quản sản phẩm khuếch đại.   Sản phẩm QF – PCR là những đoạn DNA có  chiều  dài  khác  nhau,  được  đánh  dấu  huỳnh  quang  ở  một  mạch  đơn  theo  nguyên  tắc  như  sau:  Nếu  chiều  dài  đoạn  DNA  khác  nhau  giữa  các  dấu  ấn  thì  màu  huỳnh  quang  giống  nhau.  Nếu  chiều  dài  DNA  được  khuếch  đại  giống  nhau  ở  hai  loại  dấu  ấn  khác  nhau  thì  sẽ  đánh  dấu bằng các màu huỳnh quang khác nhau. Khi  điện  di,  đoạn  ngắn  sẽ  chạy  đển  đầu  đọc  laser  Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014  trước  và  đoạn  dài  sẽ  chạy  đến  sau.  Tín  hiệu  được  ghi  nhận  bằng  phần  mềm  chuyên  dụng  Data Collection Version 3.0 của hãng ABI.  Phân tích kết quả QF‐PCR.   Sử dụng phần mềm phân tích Gene Marker  phiên  bản  1.91.  Mẫu  được  xem  là  đạt  khi  xuất  hiện đủ các tín hiệu của thang chuẩn, phân tích  rõ các tín hiệu của các đoạn khuếch đại,  cường  độ  huỳnh  quang  cao.  Phần  mềm  sẽ  tính  tốn  dựa trên diện tích và cường độ huỳnh quanh để  tính ra tỉ lệ của các dấu ấn tương ứng của từng  loại  nhiễm  sắc  thể  13,  18,  21,  X,  Y.  Mẫu  được  xem  là  không  đạt  khi  không  xuất  hiện  đầy  đủ  các  tín  hiệu  của  thang  chuẩn  hay  các  tín  hiệu  huỳnh quang khuếch đại của dấu ấn các allele bị  thiếu.  KẾT QUẢ  Từ  tháng  03/2010  đến  tháng  01/2011  chúng  tơi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ.  Nghiên cứu Y học Trong  đó  phát  hiện  được  10  trường  hợp  bất  thường  (16,9%).  Tỉ  lệ  thực  hiện  kỹ  thuật  QF  –  PCR thành cơng là 100% trên tất cả 64 mẫu dịch  ối. Tất cả 64 mẫu này khi được ly trích DNA tế  bào ối, thực hiện phản ứng QF – PCR và điện di  mao quản cho tín hiệu huỳnh quang đẹp. Thực  hiện  chế  độ  phân  tích  bằng  phần  mềm  GeneMarker phiên bản 1.91 đều thành cơng với  64 mẫu.  Trong số 64 mẫu được thực hiện QF – PCR,  có 26 mẫu cho kết quả là nữ bình thường chiếm  tỉ  lệ  40,6%,  29  mẫu  cho  kết  quả  là  nam  bình  thường chiếm tỉ lệ 45,3%. QF – PCR đã phát hiện  được  10  trường  hợp  bất  thường  gồm  3  mẫu  trisomy  21,  3  mẫu  mang  hội  chứng  Klinefelter  (XXY), 3 mẫu trisomy 18 (hội chứng Edward), 1  mẫu phát hiện monosomy X (hội chứng Turner).  Khi  so  sánh  với  kết  quả  nhiễm  sắc  thể  đồ  thì  chúng  tơi  thấy  QF‐PCR  đạt  độ  nhạy  và  độ  đặc  hiệu là 100%.    Hình 1: Kết quả trisomy 21 của một mẫu ối được thực hiện bằng kỹ thuật QF‐PCR  Sản Phụ Khoa 147 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014   Hình 2: Kết quả trisomy 21 trên dấu ấn phụ  Bảng 2: Kết quả so sánh giữa QF‐PCR và nhiễm sắc thể đồ  QF (40,6%) Nhiễm sắc thể đồ N XX XY T21 T18 XO XXY 64 29 (45,3%) 64 26 3(4,7%) 26 (40%) 3(4,7%) 29 (45%) (1,6%) 3(4,7%) 3(4,7%) 3(4,7%) (1,6%) (4,7%) BÀN LUẬN  Chúng tôi đã thực hiện kỹ thuật QF‐PCR cho  kết quả tương đồng với kỹ thuật nhiễm sắc thể  đồ 100%. Đồng thời, kỹ thuật QF‐PCR đưa ra kết  quả  nhanh  và  đáng  tin  cậy  trong  vòng  24  giờ.  Những  bất  thường  dị  bội  thể  thường  gặp  đã  được phát hiện thành công trong tất cả các mẫu.  Các  thao  tác  trong  kỹ  thuật  QF  khá  đơn  giản,  thực hiện nhanh. Vì vậy, ưu điểm đầu tiên của  kỹ  thuật  QF  là  ít  tốn  thời  gian  hơn  so  với  kỹ  thuật nhiễm sắc thể đồ.  Kỹ  thuật  QF  cơ  bản  được  dựa  trên  là  kỹ  thuật  PCR  kinh  điển  trong  đó  cải  tiến  thêm  về  khả năng khuếch đại được nhiều loại DNA đích  khác nhau trong 1 phản ứng PCR đồng thời các  loại mồi xi được đánh dấu bởi các màu huỳnh  quanh khác nhau giúp phát hiện được sản phẩm  khuếch đại bằng hệ thống điện di mao quản và  phân biệt từng nhóm sản phẩm khuếch đại dựa  148 trên  màu  huỳnh  quang  và  chiều  dài  đoạn  khuếch đại. Kết quả điện di phát hiện các đỉnh  huỳnh  quang  được  ghi  nhận  bằng  phần  mềm  đọc  tín  hiệu  chun  dụng.  Bên  cạnh  đó,  phần  mềm  phân  tích  (GeneMarker  phiên  bản  1.91)  giúp  ta  tính  tốn  được  cường  độ  màu  huỳnh  quang và diện tích các đỉnh từ đó tính ra được tỉ  lệ  bình  thường  hay  bất  thường  của  mẫu.  Điều  này giúp cho việc nhận định kết quả QF vơ cùng  khách quan, khơng phụ thuộc vào cái nhìn cảm  quan của người làm thí nghiệm.  Dịch ối có đơi khi khơng tránh khỏi bị lẫn tế  bào  máu  mẹ;  tùy  thuộc  vào  lượng  máu  mẹ  bị  nhiễm  vào  nhiều  hay  ít  mà  kết  quả  QF  khơng  hoặc có thể sai lệch. Nếu lượng máu mẹ nhiễm  chỉ chiếm khoảng dưới 20% tổng lượng tế bào ối  thu  thập  được  thì  kết  quả  QF  sẽ  khơng  bị  ảnh  hưởng. Đối với những mẫu ối bị nhiễm máu mẹ  nhiều, ta có thể ni cấy để loại đi tế bào máu.  Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014  Sau đó mới dùng dịch cấy tế bào này thực hiện  kỹ thuật QF – PCR.  Kỹ thuật QF‐PCR chỉ khảo  sát  5  loại  nhiễm  sắc thể là nhiễm sắc thể số 13, 18, 21, X, Y bởi vì  tỉ lệ dị tật bẩm sinh liên quan đến bất thường số  lượng  nhiễm  sắc  thể  của  5  loại  này  chiếm  tỉ  lệ  cao nhất (95%). So với tác giả Maj A.Hulten(8) đã  thực nghiên cứu trên dịch ối bằng kỹ thuật QF‐ PCR thì kết quả của chúng tơi cũng cho thấy có  sự  tương  đồng  về  độ  tin  cậy,  nguy  cơ  của  việc  chẩn  đoán  sai  là  rất  thấp.  Một  tác  giả  khác  là  Chrysanthy  Bili(1)  đã  tiến  hành  nghiên  cứu  trên  1100 mẫu ối thuộc dân số Hy Lạp và cũng đưa  ra  được  kết  luận  là  kỹ  thuật  QF‐PCR  rất  hiệu  quả trong chẩn đốn trước sinh và nên đựa vào  thực hiện như một xét nghiệm thường qui. Tuy  nghiên cứu của chúng tơi thực hiện trên cỡ mẫu  nhỏ  nhưng  cũng  giúp  xác  định  ban  đầu,  kỹ  thuật QF‐PCR hồn tồn có thể thực hiện được  thành công tại Việt Nam.  KẾT LUẬN  Việc  ứng  dụng  kỹ  thuật  sinh  học  phân  tử  vào  lĩnh  vực  chẩn  đoán  trước  sinh  nhanh  dần  trở nên hiệu quả và ngày càng được tin cậy. Kỹ  thuật QF‐PCR có độ nhạy, độ đặc hiệu và tỷ lệ  thất  bại  tương  đương  với  kỹ  thuật  karyotype  trong chẩn đốn dị bội các nhiễm sắc thể thường  gặp nên có thể sử dụng đối với các thai phụ do  tuổi  mẹ  cao  hay  bất  thường  trên  siêu  âm  mà  khơng cần thực hiện tầm sốt sinh hố. Với thời  gian trả kết quả ngắn trong 1 đến 2 ngày, chính  xác và khả năng tự động hố cao, kỹ thuật QF‐ PCR  có  thể  ứng  dụng  thường  quy  trong  chẩn  đốn trước sinh để có kết quả chẩn đốn lệch bội  sớm giảm tình trạng lo lắng cho thai phụ.  Do  thời  gian  và  kinh  phí  có  hạn  nên  đề  tài  chỉ  được  thực  hiện  trên  cỡ  mẫu  nhỏ  và  cách  chọn mẫu là thuận tiện. Tuy nhiên, kết quả thu  được chứng minh rằng đề tài đã được thực hiện  thành công. Chúng tôi mong muốn thực hiện đề  tài  này  với  phạm  vi  mẫu  lớn  hơn  trên  sản  phụ  Việt Nam để từ đó tìm ra những kinh nghiệm có  Nghiên cứu Y học thể  áp  dụng  trên  người  Việt  Nam,  nâng  khả  năng  chẩn  đoán  trước  sinh  bằng  kỹ  thuật  sinh  học phân tử nói chung lên một tầm cao mới.  TÀI LIỆU THAM KHẢO  10 11 12 13 14 Bili  C,  Divane  A,  Apessos  A,  Konstantinos  T,  Apostolos  A,  Ioanmis  B,  et  al  (2002).  Prenatal  diagnosis  of  common  aneuploidies  using  quantitative  fluorescent  PCR.  Prenatal  Diagnosis, 22: 360 ‐ 365.   Cirigliano  V,  Ejarque  M,  Canadas  MP,  Lloveras  E,  Plaja  A,  Perez  Md,  et  al  (2011).  Clinical  application  of  multiplex  quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF ‐ PCR)  for  the  rapid  prenatal  detection  of  common  chromosome  aneuploidies. Molecular Human Reproduction, 7: 1001 ‐ 1006.  Cirigliano V, Sherlock J, Conway G, Quilter C, Rodeck C, &  Adinolfi  M  (1999).  Rapid  detection  of  chromosome  X  and  Y  aneuploidies  by  quantitative  fluorescent  PCR.  Prenatal  Diagnosis, 19: 1099 ‐ 1103.  Cirigliano  V,  Voglino  G,  Ordonez  E,  Marongiu  A,  Canadas  M,  Ejarque  M,  et  al  (2009).  Rapid  prenatal  diagnosis  of  common chromosome aneuploidies by QF ‐ PCR, results of 9  years of clinical experience. Prenatal Diagnosis, 29: 40 ‐ 49.  Dupont  A, Vaeth  M, Videbech  P  (1986).  Mortality  and  life  expectancy  of  Down’s  synfrome  in  Denmark.  J  Ment  Defic  Res, 30: 111 ‐ 120.  Hook  EB  (1981).  Rates  of  chromosomal  abnormalities  at  different maternal ages. Obstet Gynecol, pp.58 ‐ 292.  Hsu  LYF  (1986).  Prenatal  diagnosis  of  chromosome  abnormalities; in Milunsky A (ed): Genetic Disorders and the  Fetus, ed 2. New York, Plenum Press,, pp 115–183.   Hulten  NA,  Dhanjal  S,  &  Pertl  B  (2003).  Rapid  and  simple  prenatal  diagnosis  of  common  chromosome  disorders:  advantages  and  disadvantages  of  the  molecular  methods  FISH and QF ‐ PCR. Reproduction, 126: 279 ‐ 297.   Kalousek  DK, Barrett  IJ, McGillivray  BC  (1989).  Placental  mosaicism  and  intrauterine  survival  of  trisomies  13  and  18.  Am J Genet, 44(3): 338‐43  OʹBrien WF, Knuppel RA, Kousseff B, Sternlicht D, Nichols P  (1988).  Elevated  maternal  serum  alpha  ‐  fetoprotein  in  triploidy. Obstet Gynecol, 71: 994‐995.   Platt  LD, DeVore  GR, Lopez  E, Herbert  W, Falk  R, Alfi  O  (1986).  Role  of  amniocentesis  in  ultrasound  detected  fetal  malformations. Obstet Gynecol, 68(2): 153‐155.  Warburton D (1987). Chromosomal causes of fetal death. Clin  Obstet Gynecol, 30: 268‐277.  Warburton D, Kline J, Stein Z, Susser M (1980). Monosomy X.  A  chromosomal  anomaly  associated  with  young  maternal  age. Lancet, 1: 167‐169.   Williamson  RA, Weiner  CP, Patil  S, Benda  J, Varner  MW, Abu‐Yousef  MM.  (1987).  Abnormal  pregnancy  sonogram.  Selective  indication  for  fetal.  Obstet  Gynecol,  69:  15‐20.   Ngày nhận bài báo:       Ngày phản biện nhận xét bài báo:     Ngày bài báo được đăng:   01/11/2013  26/11/2013  05/01/2014    Sản Phụ Khoa 149 ... thấy  bất thường( 11, 14). Bất thường nhiễm sắc thể được chia  thành bất thường về cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể.   Bất thường về  số lượng có  thể là  thêm  hẳn một bộ nhiễm sắc thể (đa bội) hoặc là thừa, ... ĐẶT VẤN ĐỀ  Bất thường số lượng nhiễm sắc thể là  nguyên  nhân  thường gặp  nhất  của  dị  tật  bẩm  sinh,  ảnh hưởng lên 1 trong 165 trẻ sơ sinh( 7). Sự  bất thường nhiễm sắc thể ảnh hưởng lên thai kỳ, ... các  bất thường số lượng các  nhiễm sắc thể và giúp chẩn đốn trước sinh các  thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn  đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ.  Hiện