Nghiên cứu này được sử dụng trên 43 chủng nấm men phân lập từ dịch âm đạo trong nghiên cứu. Tách chiết ADN của các chủng nấm men bằng bộ kit tách chiết QIAamp ADN Mini kit. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR-RFLP ĐỂ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI NẤM MEN PHÂN LẬP Ở ĐƢỜNG SINH DỤC n Khắc Lc** Ng ; ĐặngThị Thu***; Nguyễn Duy Bắc** TÓM TẮT ấm men N ấ ấ QIAamp cặp mồ I ,I , Đ c) K N Msp I Nấ *T K (H , , ấ C albicans, C tropicalis , N M ấ ấ , C parasilosis K C glabrata, C krusei, -RFLP USING PCR-RFLP METHOD TO IDENTIFY OF YEAST SPECIES COLLECTED FROM VAGINA FLUID HUMAN SUMMARY This study was performed on 43 clinical samples collected from vagina fluid Genomic DNA was extracted from the specimens by using QIAamp DNA Mini Kit (Hilden, Germany) Primers were designed from sequences surrounding the ITS-1 and ITS4 regions to be used for PCR and then the PCR products were digested by MspI restriction enzyme Identification of yeast species was based on different digested fragments on 2% agarose electrophoresis after they were stained with ethidium bromide The study results showed that 36 samples were C albicans, 04 C glabrata, 01 C krusei, 01 C parasilosis, 01 C tropicalis * Key words: Yeasts; Vagina fluid; PCR-RFLP ĐẶT VẤN ĐỀ , , Candida sp Nấ ấ ấ ấ (HI ấ Candida sp ặ , , ặ , I , N (BN) , N Candida Đ , sp ấ Candida sp , , ấ Candida sp , ấ * Viện Đại học Mở ** Học viện Quân y *** Đại học Bách khoa Hà Nội Người phản hồi: (Corresponding): Đỗ Ng c Ánh (dranhk61@gmail.com) ậ bà : 25/12/2013 ày phản biện đá bà báo: 16/1/2014 bà báo đ ng: 20/1/2014 34 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 , Candida sp , ặ ấ ấ p gel Dolphin Doc (Wealtec, M ), b Candida sp , Candida albicans Candida non-albican ấ , ấ Candida ấ Candida non-albicans, , ấ ấ , non-albicans Candida sp., nh ấ - Sinh ph ấ ng Sabouraud, dung d ch NaCl 0,9%, dung d ch m , N ng s (QIAGEN, M ), gel agarose, dung d ch TBE 0,5%, dung d ch enzym gi i h n MspI ( , ất c n thi - Cặp mồi cho ph n ng PCR: cặp mồi ITS1 (forward, 5’-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G- ’ I ( , 5’-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC- ’ c ch n ( HM , Phƣơng pháp nghiên cứu * Phân ập phân oại n m men thử nghiệm huyết thanh: Đ kh c ph c h n ch , ( ấ p L ấ - t , * Tách ADN hực ph n n PCR N UI GEN (M ) N «n cho ph n nh ph n ph n ng PCR gồm: Master mix, ADN t ng s , mồ c cất kh ion v ph n ỳ 94oC 5 ỳ, chu kỳ gồm o o 94 ,5 , oC o ỳ 72 C B o qu n s n ph m ph n ng PCR 4oC *C hạn n ph PCR u nấ ấ Candida sp N , - L , ấ c nh m m c B c u n n kỹ thuật RFLPPCR xác nh hành ph n oà n n phân ập n nh c ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu 43 m u nấ p t N N , H nh m u nấ nl ấ nh vi th Vật liệu nghiên cứu - D ng c : (G system 9700 AB - Applied Biosystem, M ), M (H , Đ c), PCR v i cặp mồi I I i enzym gi i h n MspI nhi 37oC n c a hỗn d gồ s n ph ,9 c kh , m TM Tango , MspI S n ph n di ki i s n ph m PCR ch agarose 2% n th i thang ADN chu n 100 bp (Fermentag) * ác nh oà n n ựa vào n ph PCR n k ch h c n ph c hạn ấ , TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 ( H M , B n K MspI MspI C albicans 535 297,238 C glabrata 871 557,314 C tropicallis 524 340,184 C krusei 510 261,249 C guilliermondii 608 371,155, 82 C parapsilosis 520 520 *Đa ể h Kết ác Y ch - Th 12 - 2013 * phân ch u: t 5- nh i n ằn kỹ - Labo - H c vi n K Candida sp * ế qu nh anh n huậ PCR- RFLP: u: L N Nấm, B n y ấ ë an n h ên c u: - Đ w H nh n ệu L , ấ , C albicans Candida non-albicans (04 Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, 01 Candida tropicalis w KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đ c i cứu c ối tƣợng nghiên * Tu ≤ i: BN (11,6 ấ N - 35 (74,42%); 36 - 45 tu i: BN ,95 ≥ i: BN ( *N ấ phân ập n , (5 , a n t , H ( , N b H nh N M N c t gi i h PCR c a m ( ,N N ,N ,N 5( c s n ph ng 520 bp , N i h n TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 Đ iv s n ph s n ph m c t gi i h 55 N , ng 900 bp, ng ấ ấm v , Do v , t gi i h n s n ph m PCR b i enzym MspI , ấ d , nh c , ấ ấ SH Mirhendi (2001) (h nh K , C albican ( ,7 C non-albican ( C glabrata, C krusei, C parasilosis, C tropicalis) , ấ Candida sp J ( 995 , ấ Candida sp N , ấ C albicans, 25% C tropicalis, 8% C glabrata, 7% C parapsilosis, 4% C krusei, ấ N un , Arnaldo L ( , ấ C albicans ,9 C tropicalis 20,9%; C parapsilosis 20,5%; C glabrata 4,9%; C krusei , ấ ặ a b H nh : ( c ( , N ( N N , M N , BÀN LUẬN ấ , , H , SH Mirhendi , ( ặ ấ sau ặ M S.A , ấ N ( ấ Candida sp N N , , sp , ( , , ấ Candida ấ , ấ , Đ ấ M I M I , ấ L -PCR ( , I AND , ặ MspI [4] Theo (2001), cặp mồ I L - ấ H H ph h , , ấ N ng 500 - 900 bp ch a m t n 18S, m t ph , I , I a h u i vi nấ nh , , , 43 ấ K ấ Candida albicans ( ấ Candida non-albicans ( N , ấ TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 L Candida albicans non-albicans K L ấ Candida Candida non- SH Mirhendi et al A PCR-RFLP method to Identification of the Important Opportunistic Fungei: Candida Species, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus and Fusarium solani Iranian J Publ Health 2001, Vol 30, No - 4, pp.103-1-6 S.A Ayatollahi Mousavi et al Rapid molecular diagnosis for Candida species using PCR-RFLP Biotechnology 2007, (4), pp.593-587 albicans, KẾT LUẬN - L ấ glabrata, parasilosis, C albicans, C krusei, C tropicalis C C TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Bách Quan CS K c G ng d H c vi N ất b , -386 i h c - Alireza Farasat et al Identification of Candida species screened from catheter using patients with PCR-RFLP method European Journal of Experimental Biology 2012, (3), pp.651-656 John R Wingard Importance of Candida species other than C albicans as pathogens in oncology patients CID 1995, 20 (Jenuary), pp 115-125 Arnaldo L Colombo et al Epidemiology of Candidemia in Brazil: a Nationwide sentinel surveillance of Candidemia in eleven Medical Centers Journal of Clinical Microbiology 2006, Vol 44, No 8, Aug, pp.2816-2823 Tr n uân Ma CS Vi nấm y h c T Đ i h Y c TP HCM kh o 2004, tr.107-120 ... PCR 4oC *C hạn n ph PCR u nấ ấ Candida sp N , - L , ấ c nh m m c B c u n n kỹ thuật RFLPPCR xác nh hành ph n oà n n phân ập n nh c ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên... GCG G- ’ I ( , 5’-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC- ’ c ch n ( HM , Phƣơng pháp nghiên cứu * Phân ập phân oại n m men thử nghiệm huyết thanh: Đ kh c ph c h n ch , ( ấ p L ấ - t , * Tách ADN hực ph n... parapsilosis 520 520 *Đa ể h Kết ác Y ch - Th 12 - 2013 * phân ch u: t 5- nh i n ằn kỹ - Labo - H c vi n K Candida sp * ế qu nh anh n huậ PCR- RFLP: u: L N Nấm, B n y ấ ë an n h ên c u: - Đ w H nh n ệu L