Nghiên cứu đặt vấn đề về khoảng phân nửa dân số thế giới nhiễm helicobacter pylori. Tỉ lệ nhiễm thay đổi tùy theo vùng địa lý, dân số và điều kiện kinh tế. Những yếu tố liên quan đến tỉ lệ nhiễm H. pylori bao gồm điều kiện sống và thói quen vệ sinh của người dân. Hiện tại có rất ít nghiên cứu về tỉ lệ nhiễm H. pylori trong cộng đồng ở Việt Nam, đặc biệt là nghiên cứu trên dân cư bình thường ở miền Nam Việt Nam và với bộ kít sử dụng kháng nguyên là các chủng H. pylori phân lập tại chỗ trên người Việt.
SỬ DỤNG IN HOUSE ELISA KÍT ĐỂ ĐIỀU TRA TẦN SUẤT NHIỄM HELICOBACTER PYLORI Ở SINH VIÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUỐC TẾ - ĐH QUỐC GIA TP HCM Hà Mai Dung* * Trường Đại Học Quốc tế - Đại Học Quốc Gia TP HCM Địa liên hệ: TS BS Hà Mai Dung Điện thoại: 0937957058 Email: hmdung@hcmiu.edu.vn, mdungha@yahoo.com.au TÓM TẮT Đặt vấn ñề: Khoảng phân nửa dân số giới nhiễm Helicobacter pylori Tỉ lệ nhiễm thay ñổi tùy theo vùng ñịa lý, dân số ñiều kiện kinh tế Những yếu tố liên quan ñến tỉ lệ nhiễm H pylori bao gồm điều kiện sống thói quen vệ sinh người dân Hiện có nghiên cứu tỉ lệ nhiễm H pylori cộng ñồng Việt Nam, ñặc biệt nghiên cứu dân cư bình thường miền nam Việt Nam với kít sử dụng kháng nguyên chủng H pylori phân lập chỗ người Việt Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 161 sinh viên trường Đại Học Quốc Tế - Đại Học Quốc gia TP HCM kiểm tra tình trạng nhiễm H pylori với in house ELISA kít Viện Vệ sinh Dịch Tễ Trung ương Hà Nội chế tạo kít ñã ñược chuẩn hóa người Việt ñể có ñược ñộ nhạy cảm (94,1%) ñộ chuyên biệt (97,8%) tốt Kết quả: Tỉ lệ nhiễm H pylori mẫu 42,2%, khơng có khác biệt có ý nghĩa nam nữ hay vùng thường trú khác miền Nam So với số liệu nghiên cứu khác Việt Nam, tỉ lệ tương ñối thấp Kết luận: Đây nghiên cứu tỉ lệ nhiễm H pylori cộng ñồng với kít chuẩn hóa người Việt Tỉ lệ nhiễm 42,2% mẫu tương ñối thấp so với nghiên cứu khác ñặc ñiểm riêng biệt mẫu Từ khóa: Helicobacter pylori, in house ELISA, sinh viên trường Đại học Quốc Tế ABSTRACT USING AN IN HOUSE ELISA TEST KIT TO EXAMINE THE PREVALENCE OF HELICOBACTER PYLORI INFECTION AMONG INTERNATIONAL UNIVERSITY - HCMC NATIONAL UNIVERSITY’S STUDENTS Ha Mai Dung Background: Helicobacter pylori has infected about a haft of the world population and this infection prevalence has been affected by many factors including economic status, geographical locations and populations Those factors are supposed to affect the H pylori prevalence by relating to hygienic conditions and habits So far there were only few studies investigating the H pylori prevalence in normal Vietnamese population especially in the South of Vietnam and with the kit developed with the local strains from Vietnamese Subjects and methods: The in house ELISA test kit developed by National Institute of Hygiene and Epidemiology in Ha Noi was used to examine the H pylori infection prevalence among 161 International University - HCMC National University’s students The kit has been already validated in Vietnamese to get the highest values of sensitivity (94.1%) and specificity (97.8%) Results: The results showed that the overall rate of the infection was 42.2%; no significant differences were found between male and female subjects or between different resident locations in the South Compare to other studies conducted in Vietnam, the low rate from this study may reflect the special features of the study subjects: Young, high economic and educational status Conclusion: This study examined the rate of H pylori infection in healthy population with the in house ELISA kit validated in Vietnamese The rate of 42.2% was relatively low compare to other studies because of the special characteristics of the study subjects Keywords: Helicobacter pylori, in house ELISA, International University students ĐẶT VẤN ĐỀ Từ lúc ñược phát Marshall and Warren vào năm 1982(11), H pylori ñã ñược nghiên cứu sâu rộng giới Ngày H pylori xem tác nhân gây bệnh quan trọng chế bệnh sinh bệnh lý viêm loét dày tá tràng ung thư dày(6) Tỉ lệ nhiễm H pylori giới trung bình khoảng 50%(13) Có thể nói việc nhiễm H pylori thường xảy giai ñoạn niên thiếu tình trạng nhiễm khuẩn kéo dài suốt đời trừ có liệu pháp điều trị diệt 215 khuẩn tận gốc Tỉ lệ nhiễm H pylori gia tăng theo tuổi cao nước ñang phát triển so với nước ñã phát triển(12, 2, 8) Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Immunoglobulin G (ELISA IgG) kỹ thuật thích hợp việc điều tra dịch tễ học nhiễm H pylori cộng đồng độ nhạy cảm cao, dễ thực với số lượng lớn bệnh phẩm rẻ tiền so với kỹ thuật Immunoblot Tuy nhiên, kit ELISA ñược chuẩn bị với kháng nguyên từ chủng H pylori chỗ ñã qua chuẩn hóa với dân số chỗ cho kết chuẩn đốn cao độ nhạy cảm độ đặc hiệu(3) Ở Việt Nam, có số ñiều tra tỉ lệ nhiễm H pylori kỹ thuật ELISA với kit thương mại từ nước khác chưa chuẩn hóa ñối tượng người Việt Tác giả Hoàng Thị Thu Hà cộng với giúp ñỡ Viện Karolinska Thụy Điển ñã phát triển ELISA in house test kit với chủng H pylori phân lập từ bệnh nhân Việt Nam chuẩn hóa người Việt từ hai vùng dân cư phía bắc Hà Nội Hà Tây(4) Hiện tất nghiên cứu tần suất nhiễm H pylori phía Nam thực đối tượng có bệnh lý dày tá tràng khơng có nghiên cứu nhiễm H pylori cộng ñồng; ñặc biệt với với kít sử dụng kháng nguyên chủng H pylori từ người Việt Nam Đó lý muốn thực nghiên cứu này: Sử dụng kít với kháng nguyên từ bệnh nhân Việt Nam mẫu dân số miền nam bình thường sinh viên theo học trường Đại Học Quốc Tế - Đại Học Quốc Gia TP HCM để xem có khác biệt so với nghiên cứu khác nước ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 161 sinh viên ñang theo học trường Đại Học Quốc Tế-Đại Học Quốc Gia TP HCM thơng báo đề tài nghiên cứu, tự nguyện ký giấy tham gia nghiên cứu, ñiền thông tin cá nhân cho máu Tất mẫu ñược thu thập tháng 9/2009 Các mẫu máu ñược ly trích lấy huyết giữ -200C cho ñến lúc thử nghiệm Phương pháp nghiên cứu Phản ứng ELISA phát kháng thể IgG kháng H pylori ñược thực theo tiến trình sau: ELISA immunoassay chuẩn bị với kháng ngun tồn thân vi khuẩn bất hoạt sóng siêu âm (sonicated) từ loại chủng H pylori phân lập ñược bệnh nhân viêm loét dày tá tràng người Việt Nam 01 chủng NCTC 11638 Kháng nguyên H pylori ñược pha lỗng dd PBS pH 7,4 theo nồng độ 80µg/ml Dung dịch kháng ngun pha lỗng cho vào giếng nhựa ELISA, phủ kín nhựa giấy bạc giữ nhiệt ñộ phòng qua đêm Huyết bệnh nhân pha lỗng 1:100 dung dịch ñệm Phosphate buffered saline (PBS) with Bovine serum albumin (BSA) tween-20, sau tiếp tục pha lỗng 1:10 PBS có chứa 90µg/ml kháng nguyên Campylobacter jejuni (từ chủng phân lập ñược lâm sàng) ñể loại bỏ phản ứng chéo kháng thể Huyết bệnh nhân pha lỗng cho vào lỗ nhựa ñã gắn kháng nguyên H pylori Có hai chứng dương hai chứng âm (chuẩn quốc tế) ñược sử dụng mẫu huyết ñược làm hai lần nhựa Cộng hợp men kháng thể dê kháng IgG người ñược sử dụng ñể phát kháng thể IgG kháng H pylori Kết ñược ñọc máy ñọc ELISA, sử dụng bước sóng 405nm Giá trị cut-off value với OD (Optical Density) = 0,22 chuẩn hóa trước đối tượng người Việt nghiên cứu trước với độ nhạy cảm 94,1% ñộ chuyên biệt 97,8%(4) Các kết ñược phân tích phần mềm SPSS 17 KẾT QUẢ Đặc điểm mẫu nghiên cứu Tổng số sinh viên tham gia nghiên cứu 161 với số lượng nam 66 (41,0%) thấp so với số lượng nữ 95 (59,0%), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p=0,5; χ2 test) Tuổi mẫu phân bố từ 19 ñến 28, nhiên ña số nằm lứa tuổi từ 20 ñến 23 (86,3%) (bảng 1) Tuổi trung bình 20,6 Bảng 1: Phân bố tuổi giới mẫu nghiên cứu (n=161) Tuổi Nam Nữ Tổng số Tỉ lệ % 19 3,1 20 26 48 74 46,0 21 10 14 24 14,9 22 12 20 12,4 23 11 20 12,4 24 5 10 6,2 216 25 3,1 26 1 0,6 27 1 0,6 28 1 0,6 95 161 Tổng số 66 41,0 59,0 100 100 (%) Tỉ lệ nhiễm H pylori Tỉ lệ dương tính nam 43,9% khơng khác biệt so với nữ 41,1% Tỉ lệ dương tính chung 42,2% Bảng 2: Tỉ lệ nhiễm H pylori Âm tính Dương tính Tổng cộng n % n % 37 56,1 29 43,9 66 Nam 56 58,9 39 41,1 95 Nữ 42,2 161 Tổng cộng 93 57,8 67 Mối liên hệ tỉ lệ nhiễm H pylori nơi cư ngụ sinh viên mẫu trước vào trường ñại học Trong tổng số 161 sinh viên mẫu, số lượng cư ngụ TP Hồ Chí Minh 89 chiếm 55,3% Nếu gọi miền Nam nói chung bao gồm TPHCM, miền đơng miền tây nam bộ, số lượng mẫu 142 chiếm 88,2% Miền Trung miền Bắc chiếm số lượng nhỏ 15 (9,3%) (2,5%) Tỉ lệ nhiễm H pylori miền nam nói chung 41,6% khơng khác biệt so với tỉ lệ nhiễm chung mẫu 42,2% (bảng 3) Tỉ lệ nhiễm miền Đông Nam Bộ có thấp 32,4% miền Bắc có cao 50% nhiên số lượng ñối tượng nghiên cứu khu vực nhỏ nên khác biệt ý nghĩa thống kê Nói chung khác biệt tỉ lệ nhiễm H pylori vùng khác mẫu khơng có ý nghĩa thống kê (p=0,7; χ2 test) (bảng 3) Bảng 3: Mối liên hệ tỉ lệ nhiễm H pylori nơi cư ngụ sinh viên mẫu Nơi cư ngụ Số lượng Tỉ lệ nhiễm H pylori TP Hồ Chí Minh 89 (55,3%) 40 (44,9%) Miền Đông Nam 37 (23,0%) 12 (32,4%) Miền Tây nam 16 (9,9%) (43,8%) Miền Trung 15 (9,3%) (46,7%) Miền Bắc (2,5%) (50%) Miền Nam nói 142 (88,2%) 59 (41,6%) chung So sánh với số nghiên cứu khác ngồi nước Tỉ lệ nhiễm H pylori người bình thường nước ñã phát triển thường nhỏ 50% nước ñang phát triển thường lớn 50% So với nghiên cứu khác thực miền bắc miền trung Việt Nam, kết nghiên cứu thấp (42,2% so với 78,8%, 69,2%, 78%, 54,7%) (Bảng 4) Bảng 4: Tỉ lệ nhiễm H pylori số nghiên cứu nước Địa ñiểm Số mẩu Khoảng Tỉ lệ dương XN tuổi (%) Các nước khác Mỹ (5) 1000 17-50 25 Anh (20) 471 18-65 37 Đức (17) 6748 18-79 40 Úc (16) 500 39 32 Ý (14) 930 35-74 45 Brazil (18) 139 20-90 84,7 Algeria (12) 277 5-65 43-92 Nhật (7) 4361 19-69 30 Đài Loan (9) 823